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문제 정의
- 15 그러나 현재까지는 HPLC/UV 나 HPLC/MS를 이용하여 실데나필, 실데나필 및 대사물질, 또는 실데나필 · 바데나필 · 타다라필 및 호모실데나필등 일부 물질에 대한 분석방법이 보고되고 있다.4, 16-18이에 본 연구에서는 식품 중에서 검출되고 있는 발기부전치료성분 및 그 유사물질인 실데나필, 바데나필, 타다 라필, 호모실데나필, 하이드록시호모실데나필, 홍데나필 6종에 대해 각 식품시료의 특성에 따른 시료 전처리방법 및 HPLC/UV의 최적 분석조건을 확립하여 공정화 하고 국내 유통식품에 대해 분석한 결과를 보고하고자 한다.
제안 방법
- HPLC 및 photodiode array (PDA) 검출기는 Nanospace SI-2 (Shiseido Fine Chemicals, Yokohama, Japan)을 사용하였으며, C18 컬럼은 Type UG120 (Shiseido Fine Chemicals, Tokyo, Japan)을 사용하였다.
- 식품으로부터 대상물질을 효율적으로 추출하기 위하여 각 시료의 특성에 따라 적합한 방법을 적용하였는데 액체시료의 경우는 단순히 일정량을 취하고 고체시료의 경우는 균질화한 후 디클로로메탄으로 추출하여 여과 · 농축한 후 유기용매에 희석하여 시험용액으로 하였다. 우선적으로 분석방법의 효율을 재고하기 위하여 시중에 유통되는 인삼드링크, 홍삼정에 표준물질을 첨가하여 회수율을 측정하였다.
- 식품으로부터 대상물질을 효율적으로 추출하기 위하여 각 시료의 특성에 따라 적합한 방법을 적용하였는데 액체시료의 경우는 단순히 일정량을 취하고 고체시료의 경우는 균질화한 후 디클로로메탄으로 추출하여 여과 · 농축한 후 유기용매에 희석하여 시험용액으로 하였다. 우선적으로 분석방법의 효율을 재고하기 위하여 시중에 유통되는 인삼드링크, 홍삼정에 표준물질을 첨가하여 회수율을 측정하였다. Table 2에 나타난 바와 같이 회수 율은 95 ～ 109 %로 매우 만족한 결과를 얻었다.
- 환제, 캡슐제와 같은 고체시료의 경우 일정량 (1회 복용량)을 취해 막자사발을 이용하여 균질화하였으며 드링크제와 같은 액체시료의 경우 일정량 (～5 mL)을 취하여 물 (10 mL)과 메탄올 (70 mL)에 용해하고 진탕추출한 후 여과하였다. 여액을 디클로로메탄 (50 mL)으로 3회 반복추출하여 원심분리 (3,000 rpm, 3분간) 후 여과, 농축하고 메탄올로 희석하여 시험용액으로 하였다.
- 정보에 따라 의심이 되는 식품 총 10제품 (드링크제 3제품, 환제 1제품 및 캡슐제 6제품)의 시료를 대상으로 하였다. 회수율 측정을 위하여 국내 유통 중인 인삼 및 홍삼 6제품 (드링크제 3제품, 환제 1제품, 캡슐제 1제품및 정제 1제품)을 구매하여 anti-impotence drug-like compounds의 함유 여부를 확인 한 후 드링크제 1제품및 캡슐제 1제품을 선택하여 표준물질 일정량을 첨가하여 시료로 조제하였다.
대상 데이터
- HPLC 컬럼은 C18 (4.6 mm id, 250 mm, 5 μm)를 사용하였으며, 오븐 온도는 40 ℃이었다. 이동상으로는 0.
- 표준물질 실데나필 (Sildenafil: ViagraⓇ의 유효성분), 바데나필 (Vardenafil: LevitraⓇ의 유효성분) 및 타다라필 (Tadalafil: CialisⓇ의 유효성분)은 한국화이자, 바이엘 및 한국릴리에서 제공받았으며 호모실데나필 (Homosildenafil), 홍데 나필 (Hongdenafil) 및 하이드록시호모실데나필 (Hydroxy -homosildenafil)은 합성하여 사용하였다. 내부표준물질은 forchlorfenuron (Dr. Ehrenstorfer, Germany)를 사용하였다.
- 분석용 시약은 HPLC급 또는 잔류농약급을 J.T. Baker (Phillipsburg, NJ, USA) 및 Wako Pure Chemical Industries Inc. (Osaka, Japan)에서 구매하였다. 표준물질 실데나필 (Sildenafil: ViagraⓇ의 유효성분), 바데나필 (Vardenafil: LevitraⓇ의 유효성분) 및 타다라필 (Tadalafil: CialisⓇ의 유효성분)은 한국화이자, 바이엘 및 한국릴리에서 제공받았으며 호모실데나필 (Homosildenafil), 홍데 나필 (Hongdenafil) 및 하이드록시호모실데나필 (Hydroxy -homosildenafil)은 합성하여 사용하였다.
- 실데나필, 바데나필, 타다라필, 호모실데나필, 하이드록시호모실데나필, 홍데나필 6종을 대상으로 하였으며 구조식, 화학식 및 분자량은 Fig. 1과 같다.
- 6 mm id, 250 mm, 5 μm)를 사용하였으며, 오븐 온도는 40 ℃이었다. 이동상으로는 0.1% sodium-1-hexane-sulfonate를 함유하는 0.1% H3PO4: ace- tonitrile 27:73 (v/v) 혼합용액을 사용하였다. 시료는 10 μL를 주입하였으며 유속은 1.
- 정보에 따라 의심이 되는 식품 총 10제품 (드링크제 3제품, 환제 1제품 및 캡슐제 6제품)의 시료를 대상으로 하였다. 회수율 측정을 위하여 국내 유통 중인 인삼 및 홍삼 6제품 (드링크제 3제품, 환제 1제품, 캡슐제 1제품및 정제 1제품)을 구매하여 anti-impotence drug-like compounds의 함유 여부를 확인 한 후 드링크제 1제품및 캡슐제 1제품을 선택하여 표준물질 일정량을 첨가하여 시료로 조제하였다.
- (Osaka, Japan)에서 구매하였다. 표준물질 실데나필 (Sildenafil: ViagraⓇ의 유효성분), 바데나필 (Vardenafil: LevitraⓇ의 유효성분) 및 타다라필 (Tadalafil: CialisⓇ의 유효성분)은 한국화이자, 바이엘 및 한국릴리에서 제공받았으며 호모실데나필 (Homosildenafil), 홍데 나필 (Hongdenafil) 및 하이드록시호모실데나필 (Hydroxy -homosildenafil)은 합성하여 사용하였다. 내부표준물질은 forchlorfenuron (Dr.
데이터처리
- 분석결과 머무름 시간에 의해 정성 확인을 하였으며 피 이크 면적법에 의해 정량을 하였다. 정성 및 정량의 모든 결과는 HPLC 운영 프로그램인 EZChrom을 이용하여 산출하였다.
이론/모형
- 0 mL/min이었다. 분석결과 머무름 시간에 의해 정성 확인을 하였으며 피 이크 면적법에 의해 정량을 하였다. 정성 및 정량의 모든 결과는 HPLC 운영 프로그램인 EZChrom을 이용하여 산출하였다.
성능/효과
- 검량선을 표준물질 3개 농도범위에서 측정 · 분석한결과 상관계수 r2는 바데나필 0.9972, 홍데나필 0.9962, 하이드록시호모실데나필 0.9947, 실데나필 0.9955, 호모실데나필 0.9974 및 타다라필 0.9964로 매우 만족할 만한 수준이었으며 검출한계는 각각의 물질마다 약간의 차이는 있으나 신호대 잡음비 3이상에서 대략 0.04 mg/kg이었다. (Table 1)
- 이와 같이 최적화한 분석방법을 식품시료에 적용한결과 발기부전치료성분은 최소 11 mg (타다라필)에서 최대 63 mg (타다라필)/1회 복용량이 검출되었으며 발기부전치료유사성분은 최소 1.7 mg (홍데나필)에서 최대 38 mg (하이드록시호모실데나필)/1회 복용량이 검출되 었다. (Table 3) 이러한 검출량은 의사의 처방에 따른 정상적인 복용량을 초과할 뿐 만 아니라 호모실데나필, 하이드록시호모실데나필 및 홍데나필과 같은 발기부전 치료유사성분의 경우는 안전성이 입증되지 않았으므로 인체에 매우 치명적일 수 있다.
- 2와 같으며 바데나필, 홍데나필, 하이드록시호모실데나필, 실데나필, 호모실데나필, 타다라필의 순으로 용리되었다. 정성분석을 위하여 PDA 스펙트럼에서 최대흡수파장을 확인한 결과 바데나필의 경우 216 nm, 홍데나필의 경우 233 및 282 nm, 하이드록시호모실데나필, 실데나필 및 호모실데나필의 경우 222 및 293 nm, 그리고 타다라필의 경우 284 nm이었다. (Fig.
후속연구
- 본 연구는 식품 중 발기부전 치료성분 및 그 유사물질 6종을 동시에 분석하는 방법에 관한 내용으로 부정 식품의 유통을 사전에 방지하고 식품안전을 제고하여 국민보건을 향상하기 위하여 계속해서 이용할 수 있을뿐 만 아니라, 향후 실데나필, 바데나필, 타다라필, 호 모실데나필, 하이드로시호모실데나필, 홍데나필 6종 이외의 보고되지 않은 발기부전치료유사물질의 검출에도 적용할 수 있으리라 사료된다. 또한 분석방법이 식품공전에 등재되므로 모든 식품분석기관에서 식품 중 발기부전치료성분 및 그 유사물질 분석 시 동일한 방법을 사용할 수 있으리라 기대된다.
- 본 연구는 식품 중 발기부전 치료성분 및 그 유사물질 6종을 동시에 분석하는 방법에 관한 내용으로 부정 식품의 유통을 사전에 방지하고 식품안전을 제고하여 국민보건을 향상하기 위하여 계속해서 이용할 수 있을뿐 만 아니라, 향후 실데나필, 바데나필, 타다라필, 호 모실데나필, 하이드로시호모실데나필, 홍데나필 6종 이외의 보고되지 않은 발기부전치료유사물질의 검출에도 적용할 수 있으리라 사료된다. 또한 분석방법이 식품공전에 등재되므로 모든 식품분석기관에서 식품 중 발기부전치료성분 및 그 유사물질 분석 시 동일한 방법을 사용할 수 있으리라 기대된다.
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