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문제 정의
- 따라서 이 연구에서는 수정란 생산을 위하여 과배란 처리를 하여 체내수정란을 생산한 후 신선 수정 란, 동결 수정 란, 쌍태생산을 위한 수정 란들을이식하여 젖소 및 한우에서 수정란이식에 의한 생산 결과를 알아보고자 하였다.
- 아울러 이 연구에서는 다른 연구에서는 시도된바 없는 채란방법으로서 한 개의 카테타를 이용하여 양쪽 자궁각을 관류하는 간이 채란 방법을 시도하고자 하였다.
- 1 %를 나타내었다. 이 결과와 직접 관련된 보고는 접하지 못해 비교하기 어려우며 이 연구의 결과를 하나의 자료로서만 제시하고자 한다. 한우와 젖소에서는 한우에서 전체 회수 수정란에 비해 이식 가능 수 정란율이 약간 높은 수치를 나타내었으나 전체 배반 포수에 비하여는 비슷한 율을 나타내었는데 이것은 샘플 크기에 따른 다소의 차이로 추측된다.
제안 방법
- One catheter method# 이용하여 두 개의 자궁을 관류하여 그 성공률을 조사하였다.
- 주입 기는 French casson gun을 사용하였으며 주입기에는 멸균된 비닐 테이프를 씌워 질내통과 후 자궁외구에서 비닐테이프를 찢고 나서 경관을 통과하는 방법을 사용하였다. 경관 통과 후 황체가 존재하는 난소측의 자궁각 상단에 수정란을 주입하였다.
- 공란우의 자궁 관류전 직장검사로 황체수를 확인하여 회수된 수정란 수와 비교하였다.
- 과배란 처리를 위한 성선자극 호르몬은 FSH(Follicle stimulating hormone, Schering)를 사용하였으며 4일간 매일 2회 12시간 간격으로 투여하였다. 과배란 처리 방법은 Table 1과 같다.
-
1) 과배란 처리 결과
과배란을 위한 호르몬 처리 후 2개 이상의 황체가 인정되거나 난자가 회수된 결과를 조사하였다.
- 관류작업전 공란우는 외음부 주변을 깨끗이 씻고 povidone iodine(Betadin) 으로 소독하였으며, 2% lidocaine 3~5ml로 경막외 마취를 실시하였다.
- 즉, 한쪽 자궁각을 관류한 후 balloon의 공기를 빼고 철심(steel bar)을 뺀 후 술자가 직장을 통해 확인하면서 카테타를 자궁체 부위까지 옮기고 나서 다시 철심을 카테타에 연결하였다. 그 후 관류가 안된 다른 한쪽 자궁각으로 카테타를 진입하여 자궁각간 인대에서 약 4~5cm 진행된 부위에서 다시 balloon을 형성하여 수정란 회수를 위한 관류를 하였다.
- 발정유도를 위한 PGF2a(Lutalyse, Upjohn) 투여는 젖소에 대하여는 체중에 따라 35~40mg, 한우에 대하여는 30~35mg을 투여하였고, 투여시기는 FSH 투여개시후 3일째 오후에 실시하였다.
- 수정 란 회수를 위한 관류액은 Dulbeccbs PBS에 FCS(fetal calf serum)을 5%가 되도록 첨가한 관류액을 사용하였으며 한쪽 자궁각에 약 400~500ml 의 관류액을 넣었고 1회 주입 량은 약 50ml씩을 주입하였다.
- 수정 란은 신선 수정란 또는 동결 수정 란을 이식하여 수태성적을 알아보았다.
- 수정란 회수율 조사는 회수전 직장검사를 통해 황체 수를 산정한 후 황체수에 대한 회수 수정란 수를 조사하였다.
- 수정란을 회수한 후 이식 가능 배반포 수를 전체회수 수정란과 전체 배반포수에 대해 조사하였다.
- 수정란이 이식된 계절에 따라 분만이 일어난 율을 조사하였다.
- 신선 수정란, 동결 수정란, 쌍태 수정란을 이식한 후 분만 결과에 따른 수태율을 조사하였다.
- 신선수정란을 회수 당일 이식시키기 위한 수란 우의 성주기 동기화를 위하여 성주기 9~14일 기간중의 소를 대상으로 하였고, 공란우에 PGFg처리 1일전 수란우에게 PGFm을 주사하여 발정을 유도하였다.
- 이식 방법은 2% lidocaine 3~5ml를 사용하여 수란우에 경막외 마취를 실시 후 비외과적으로 실시하였다. 주입 기는 French casson gun을 사용하였으며 주입기에는 멸균된 비닐 테이프를 씌워 질내통과 후 자궁외구에서 비닐테이프를 찢고 나서 경관을 통과하는 방법을 사용하였다.
- 인공수정은 PGF2a 투여후 2일째 오후에 개시하여 발정 발현이 보이는 소에게 0.5ml 동결정액 straw 2~3개를 융해하여 인공수정하였으며, 12시간 후 동량을 주입하였다.
- 이식 방법은 2% lidocaine 3~5ml를 사용하여 수란우에 경막외 마취를 실시 후 비외과적으로 실시하였다. 주입 기는 French casson gun을 사용하였으며 주입기에는 멸균된 비닐 테이프를 씌워 질내통과 후 자궁외구에서 비닐테이프를 찢고 나서 경관을 통과하는 방법을 사용하였다. 경관 통과 후 황체가 존재하는 난소측의 자궁각 상단에 수정란을 주입하였다.
- 즉, A+(Excellent), A(Good), B(Fair), C(Poor), D(Degenerated), UF(Un-fErtilized)로 구분하였으며, 동결 및 이식에 이용된 수정란은 B급 이상이었다.
- 시도하였다. 즉, 한쪽 자궁각을 관류한 후 balloon의 공기를 빼고 철심(steel bar)을 뺀 후 술자가 직장을 통해 확인하면서 카테타를 자궁체 부위까지 옮기고 나서 다시 철심을 카테타에 연결하였다. 그 후 관류가 안된 다른 한쪽 자궁각으로 카테타를 진입하여 자궁각간 인대에서 약 4~5cm 진행된 부위에서 다시 balloon을 형성하여 수정란 회수를 위한 관류를 하였다.
대상 데이터
- 공란우는 임상 검사상 질병이 없는 젖소 및 한우를 대상으로 하였고, 분만한 소는 분만후 60일이경과된 소를 대상으로 하였다. 또한 1~2회 이상의 정상 성주기를 경과한 소로서 성주기 9~14일 기간중 직장검사를 통해 황체가 잘 발달되고 자궁각 및 자궁경 등 생식기의 상태가 정상소견을 보이는 소를 선택하였다.
- 소를 대상으로 하였다. 또한 1~2회 이상의 정상 성주기를 경과한 소로서 성주기 9~14일 기간중 직장검사를 통해 황체가 잘 발달되고 자궁각 및 자궁경 등 생식기의 상태가 정상소견을 보이는 소를 선택하였다.
- 또한 젖소 9두와 한우 4두, 총 13두는 두당 2개의 신선 또는 동결 수정란 이식 후 쌍태생산율을 조사하기 위한 수란우로 사용하였다.
- 젖소 18두와 한우 18두, 총 36두를 공란우로 선발하여 과배란 처리를 하였고 젖소 14두와 한우 11두, 총 25두를 체내 신선 수정란 이식을 위한 수탄우로 사용하였으며, 젖소 10두와 한우 7두, 총 17두를 동결 수정란 이식을 위한 수란우로 사용하였다. 또한 젖소 9두와 한우 4두, 총 13두는 두당 2개의 신선 또는 동결 수정란 이식 후 쌍태생산율을 조사하기 위한 수란우로 사용하였다.
이론/모형
- 동결속도는 여러 연구자들에 의해 일반적으로 제시되고 있는 동결속도를 이용하였다. 즉, 실온(20C)으로부터 식빙온도인 -5.
- 동결에 이용된 straw는 0.25ml의 straw였으며 Kanagawa의 방법9에 준해 straw에 수정란을 장착하였다.
- 특히 자궁경 통과가 어려운 개체들에 대하여 기존의 수정란 회수시 양쪽 자궁각에 대해 각각의 카테타를 주입하는 대신, 1개의 관류카테타를 이용한 간이 채란 방법(one-catheter method)을 시도하였다. 즉, 한쪽 자궁각을 관류한 후 balloon의 공기를 빼고 철심(steel bar)을 뺀 후 술자가 직장을 통해 확인하면서 카테타를 자궁체 부위까지 옮기고 나서 다시 철심을 카테타에 연결하였다.
- 회수한 수정란을 실체현미경 또는 도립현미경을 이용하여 평가하였으며 일령판정은 Dorn과 Kraemer의 방법'에 준하였으며, 수정란의 등급판정은 Shimohira19 및 Donaldson%^] 방법에 준하였다. 즉, A+(Excellent), A(Good), B(Fair), C(Poor), D(Degenerated), UF(Un-fErtilized)로 구분하였으며, 동결 및 이식에 이용된 수정란은 B급 이상이었다.
성능/효과
- Tabel 5에서와 같이 한 개의 카테타를 이용한 수정란 회수 결과는 젖소에서 71.4%, 한우에서 80.0%로 한우에서 약간 높은 수치를 나타내 었으며전체적으로는 75.0%의 성공율을 나타내었다.
- 확인하였다. 그 결과 쌍태 수태율은 신선 수정란 이식시 28.6%, 동결수정란 이식시 16.7%로 나타났다.
- 2로서 젖소가 더 많은 황체수를 나타내었다. 난소별 황체수는 젖소와 한우에서 오른쪽 난소의 황체 수가 총황체 수중 56.6%로서 왼쪽 난소보다 더 높게 나타났다. 황체수와 비교된 수정란 회수율은 전체평균 92.
- 6%의 이 식 가능 배 반포율을 나타내 었다. 또한 회수된 전체 배반포중 이식 가능한 배 반포율은 젖소에서 71.2%, 한우에서 75.6%를 나타내었고 전체적으로는 73.1%의 이식 가능 배 반포율을 나타내었다.
- 이 연구에서 동결된 체내 수정란을 융해후 이식하여 분만된 율은 젖소 한우 전체 17두에서 35.3% 의 수태율을 나타내었다. 이 결과는 황 등(2004)이 동결된 체외 수정란을 융해후 이식한 수태 결과 36.
- 이 연구에서 수정란 이식후 분만된 산자의 성별 조사에서 젖소, 한우 모두 수컷이 암컷보다 더 많이 분만되어 그 비율은 56.3%이었다. 이에 대한 원인은 이 결과만으로는 판단하기 어려우며 앞으로도 이와 같은 경향이 보인다면 그 원인이 규명되어야 할 것이다.
- 이 연구에서 시도된 one catheter method에 의한 양 자궁각에 대한 성공적인 관류율은 전체 75%로서 상당히 이용 가능할 수 있는 방법으로 판단되었다. 특히, 수정란 회수과정중 카테타의 경관 통과과정이 가장 어렵고 시간이 많이 소요되는 시술의 하나이므로 경관 통과가 어려운 개체에 대하여는 이 방법을 먼저 시도하는 것이 바람직 할 것으로 보인다.
- 이 연구에서 신선 체내 수정란을 수란우에 이식한 결과 수태율은 한우에서 63.6%, 홀스타인에서 57.1%로서 한우가 다소 높은 수치를 나타내었고 전체적으로는 60%의 수태율을 나타내었다. 이것은 황 등(2004)의 신선 체외수정란 이식후 수태율 70.
- 이 연구에서 한우와 홀스타인에 과배란 처리하여 2개 이상의 황체형성 및 수정란이 회수된 결과는 한우가 83.3%, 홀스타인이 66.7%> 나타내어 한우에서 과배란 처리시 과배란 처리되는 두수가 더 많은 것으로 인정되었다. 한편, 과배란 처리 시 호르몬 처리에 반응을 보이지 않는 소가 전체적으로 25%를 나타냈는데 이와 직접 관련된 자료를 접하기 어려우나 Newcomb 등(1978)이 비외과적 회수 시 55.
- 이 연구에서, 체내 수정란을 회수한 후 수정란을 평가한 결과 수정란 전체수 140개에 대해 이식 가능한 배 반포수는 68개로서 48.6%를 나타내 었고, 전체 배반포수 93개에 대하여는 73.1 %를 나타내었다. 이 결과와 직접 관련된 보고는 접하지 못해 비교하기 어려우며 이 연구의 결과를 하나의 자료로서만 제시하고자 한다.
- 4%였다. 전체 회수된 수정란중 이식 가능한 배반포율은 젖소에서 44.7%, 한우에서 56.5%를 나타내었고 전체적으로는 48.6%의 이 식 가능 배 반포율을 나타내 었다. 또한 회수된 전체 배반포중 이식 가능한 배 반포율은 젖소에서 71.
- 7%보다 높은 수치를 나타내었다. 전체적으로는 75.1% 의과 배란 율을 나타내었다.
- Table 9와 같다. 젖소와 한우에서 숫송아지생산율은 각각 55.6%, 57.1%였으며 전체적인 숫송아지 의 생산율은 56.3%로 암송아지 보다 약간 많은 생산율을 보였다.
- 평균황체수는 홀스타인이 8.7개, 한우가 3.2개로서 한우가 과배란 수가 더 적은 것으로 나타났다. 이것은 Kanagawa(1981), Saumande 등(1978), Scanlon (1974), Sreenan(1969)의 연구에서 과배란 처리시 품종간 배란 난자수가 차이가 있음을 보고한 것과 관련이 있다고 보이나, 이에 대해서는 젖소와 한우 양품 종에 대해 동일 조건에서 과배란 처리하는 연구가 더욱 수행되어야 할 것으로 보인다.
- 이것은 Kanagawa(1981), Saumande 등(1978), Scanlon (1974), Sreenan(1969)의 연구에서 과배란 처리시 품종간 배란 난자수가 차이가 있음을 보고한 것과 관련이 있다고 보이나, 이에 대해서는 젖소와 한우 양품 종에 대해 동일 조건에서 과배란 처리하는 연구가 더욱 수행되어야 할 것으로 보인다. 한편, 황체 수는 오른쪽 난소에서 더 많은 황체 수(56.6%)를 보임으로써 오른쪽 난소가 소에서는 더 기능이 활발한 것을 확인할 수 있었다.
후속연구
- 7%로서 단태 생산의 경우보다쌍태 생산율이 떨어지는 것을 알 수 있으나, 생산 가능성이 있음을 동시에 뜻한다고 하겠다. 그러나 한편, 수란우가 전체 13두에 지나지 않아 이에 대하여는 보다 더 많은 연구가 수행되어야 할 것이다.
- 2개로서 한우가 과배란 수가 더 적은 것으로 나타났다. 이것은 Kanagawa(1981), Saumande 등(1978), Scanlon (1974), Sreenan(1969)의 연구에서 과배란 처리시 품종간 배란 난자수가 차이가 있음을 보고한 것과 관련이 있다고 보이나, 이에 대해서는 젖소와 한우 양품 종에 대해 동일 조건에서 과배란 처리하는 연구가 더욱 수행되어야 할 것으로 보인다. 한편, 황체 수는 오른쪽 난소에서 더 많은 황체 수(56.
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