A 3-year-old male lion at Gwangju Uchi Zoo presented for acute onset of haemorrhagic diarrhea and died. The lion showed reddening of the anus as the cause of haemorrhagic enteritis. Necropsy revealed a severe haemorrhagic colitis. Grossly, lesions included icterus, excess pericardial fluid. dark kid...
A 3-year-old male lion at Gwangju Uchi Zoo presented for acute onset of haemorrhagic diarrhea and died. The lion showed reddening of the anus as the cause of haemorrhagic enteritis. Necropsy revealed a severe haemorrhagic colitis. Grossly, lesions included icterus, excess pericardial fluid. dark kidneys, and an enlarged, friable liver. The intestines were flaccid, thin-walled, dilated, and 9as-filled. The spleen was enlarged and pulpy because of congestion. Most of organs were rapidly postmortem autolysis. Histopathologically, the intestines were edema and transient leukocyte infiltration of the lamina propria, followed by necrosis. Especially of the intestinal submucosa was edematous, haemorrhagic, or filled with leukocytes. The crypts remained intact or dilated. C perfringens was isolated from a lion at bloody feces, and identified C perfringens type A, confirming the presence of C perfringens $\alpha-toxin$ by PCR. These results were suggested that the case were diagnosed as enterotoxicosis in the lion. More studies are needed on lion enterotoxemia. especially of its etiopathogenesis, in order to develop more efficient prevention for this disease.
A 3-year-old male lion at Gwangju Uchi Zoo presented for acute onset of haemorrhagic diarrhea and died. The lion showed reddening of the anus as the cause of haemorrhagic enteritis. Necropsy revealed a severe haemorrhagic colitis. Grossly, lesions included icterus, excess pericardial fluid. dark kidneys, and an enlarged, friable liver. The intestines were flaccid, thin-walled, dilated, and 9as-filled. The spleen was enlarged and pulpy because of congestion. Most of organs were rapidly postmortem autolysis. Histopathologically, the intestines were edema and transient leukocyte infiltration of the lamina propria, followed by necrosis. Especially of the intestinal submucosa was edematous, haemorrhagic, or filled with leukocytes. The crypts remained intact or dilated. C perfringens was isolated from a lion at bloody feces, and identified C perfringens type A, confirming the presence of C perfringens $\alpha-toxin$ by PCR. These results were suggested that the case were diagnosed as enterotoxicosis in the lion. More studies are needed on lion enterotoxemia. especially of its etiopathogenesis, in order to develop more efficient prevention for this disease.
* AI 자동 식별 결과로 적합하지 않은 문장이 있을 수 있으니, 이용에 유의하시기 바랍니다.
문제 정의
또한 함께 동거사육 중이던 암컷 두 마리의 사자에서는 특이한 질병의 증후는 관찰할 수 없었다. 따라서 본 증례가 C perfringens A형균 a-toxin에 의한 장독혈증으로 확진됨에 따라 사람에서 식중독의 감염원이 식육을 통해서도 발병할 수 있는 점을 고려할 때, 주식으로 급여되는 닭고기를 통한 감염도 의심해볼 수 있다. 그러므로 이 질병의 보다 효과적인 예방을 위해 서는 사자 장독혈증의 병인론적 연구가 더 이루어져야 할 것으로 사료된다.
본 연구는 동물원에서 사육중인 사자의 폐사에 대한 질병진단을 실시한 결과 C perfringens A형균 a-toxiri에 의한 장독혈증 으로 판명되었기에 보고하는 바이다.
제안 방법
간, 비장, 장에서 균 분리를 시도하였다. 각각의 가검재료를 멸균된 면봉으로 닦아 5% 면양혈액배지와 증균배지에 접종한 후 배양하였다.
본 증례는 육안적 검사, 병리조직학적검사, 세균배양과 병원체에 대한 유전자 검사에 의하여 C perfringens A형 a-toxin에 의한 장독혈증으로 진단되었다. C perfringens A형균은 창상감염을 통해 사람의 가스괴저와 포유동물의 출혈성, 괴사성 장염을 일으키고 독혈증으로 급성 폐사에 이르게 하며, 이 질병에 의한 임상소견과 병리소견과 임상소견은 원인균이 생산하는 특이한 독소의 영향에 따라 크게 달라지고, 증상의 경과기 간에 의해서도 병변의 정도와 범위가 개체 별로 큰 변화가 있다2).
하지만 C perfringens A형균의 경우 건강한 동물의 소장에서도 존재하므로 질병이 발생한 동물의 소장병변부의 내용물에서 균수를 즉정하는 것이 매우 중 요하다1). 본 증례에서는 C perfringens의 균 수가 장내용물에서 2xl07cFU/g으로 검출되어 장내에서 돌연적으로 이상 증식하여 괴사성장염을 일으켰고, 이 균이 산생한 균체 외독소가 혈류에 들어가 수시간내에 폐사한 것으로 추정된다.
부검 시 확인된 각종 실질장기를 채취하여 10% 중성포르말린 용액에 고정시킨 다음 파라핀 처리 후 4㎛ 두께의 조직 절편을 만들고 H&E 염색하여 광학현미경으로 관찰하였다. 병리조직학적으로 전신 장기는 심한 충·출혈 소견을 보였으며, 사후변화에 의한 자가융해가 많이 진행되어 관찰되었다.
특히 장 내용물에 대해서는 C perfringens의 증균배 지인 Cooked Meat Medium의 배지 아랫부분에 접종하여 35℃에서 18~24시간 혐기배양을 하였다. 증균배지에서 자란 균액은 Clostridium perfringens Agar(OPSP, Oxoid,)에 도말하여 37℃ 혐기 배양하여 확인하고, 균수 측정을 OPSP agar에 서 병행하였다. 최확수(MPN) 법에 의한 C perfringens의 균수를 측정한 결과 장 내용물에서 2xl07cFU/g 으로 검출되었다 (Fig 4).
대상 데이터
2004년 4월 21일 광주광역시 우치동물에 서 사육중인 세 마리의 사자 중 한 마리 (수컷, 3세)가 항문과 꼬리부위의 혈변 양상외 에 외부의 특이증상 없이 급사하여, 광주보건환경연구원 가축위생연구부에 부검의뢰 되었다. 나머지 두 마리 (암컷)의 사자는 특 이한 증상이 없었다.
이론/모형
부검 시 채취한 분변에 대하여 일반적인 기생충란검사 방법인 침전법과 부유법을 실시 하였다. 검 사결과 사자회충란 ( Toxascaris leonina) 이 경감염되어 있음을 확인하였다.
분리된 C perfringens의 균 독소형을 확인하기 위해 상업용으로 판매되는 C perfringens의 Pathogenic PCR Kit (RapiGEN®)을 이용하여 중합효소연쇄반응(PCR)법을 실시하였다. DNA의 분리를 위해 증균배지에서 균액 1 ml를 시험관에 옮긴 후 12,000xg에서 3분간 원심분리 후, 상층액을 버리고 멸균증류수로 500 μl로 현탁 시키고 다시 12,000xg에서 3분간 원심분리하였다.
성능/효과
부검 시 채취한 분변에 대하여 일반적인 기생충란검사 방법인 침전법과 부유법을 실시 하였다. 검 사결과 사자회충란 ( Toxascaris leonina) 이 경감염되어 있음을 확인하였다.
또한 분리 균주의 독소형 파악을 위해서 C perfringens A형 균의 cpz와 cpe 독소유 전자를 동시에 분자생물학적 진단방법을 활용함이 매우 유용하다는 보고에 따라15~19) 본 증례에 적용한 결과 PCR 검사에서 431 bp크기의 특이적인 증폭산물을 검출하여 a -toxin에 의한 장독혈증임을 확진하였다.
C perfringens A형균은 창상감염을 통해 사람의 가스괴저와 포유동물의 출혈성, 괴사성 장염을 일으키고 독혈증으로 급성 폐사에 이르게 하며, 이 질병에 의한 임상소견과 병리소견과 임상소견은 원인균이 생산하는 특이한 독소의 영향에 따라 크게 달라지고, 증상의 경과기 간에 의해서도 병변의 정도와 범위가 개체 별로 큰 변화가 있다2). 본 발생 예에서는 부 검시 육안적으로 천연공의 출혈과 내부 장기의 가스분출과 장의 충출혈로 인한 암적색의 출혈성 변성괴사가 특징적으로 관찰되었다.
C perfringens는 사자의 장내용물에서 Clostridium perfringens agar 상에서 2xlO7CFU/g 분리되었다. 분리된 C perfringens는 분자생 물학적 진단법인 PCR 검사에서 431 bp크기의 특이적인 증폭 산물을 검출되어 a-toxin에 의한 장독혈증임을 확인하였다.
이상의 결과로 볼 때 본 증례는 C perfringens A형 a-toxini 의한 장독혈증으로 최종 진단되었다.
이상의 결과를 종합해볼 때 질병진단이 의뢰된 동물원은 사자에게 닭고기를 주식으로 급여하고 있었으며, 사육 환경은 다른 일반 우리와 같았다. 또한 함께 동거사육 중이던 암컷 두 마리의 사자에서는 특이한 질병의 증후는 관찰할 수 없었다.
PCR 반응 조건은 95℃에서 3분간 predenaturation시킨 후, 94 ℃ 에서 20초, 63 ℃ 에서 25초, 72 ℃ 에서 45초간의 반응을 40회 반복한 후 최종적으로 72℃에서 51분간 더 반응시켰다. 증폭산물을 확인하기 위해 PCR 산물을 2.5% agarose gel에서 전기영동한 후 증폭여부를 확인한 결과 C perfringens A형 균의 cpa독 소유전자에 해당하는 band가 431 bp크기에서 검출되었다 (Fig 5).
증균배지에서 자란 균액은 Clostridium perfringens Agar(OPSP, Oxoid,)에 도말하여 37℃ 혐기 배양하여 확인하고, 균수 측정을 OPSP agar에 서 병행하였다. 최확수(MPN) 법에 의한 C perfringens의 균수를 측정한 결과 장 내용물에서 2xl07cFU/g 으로 검출되었다 (Fig 4).
후속연구
따라서 본 증례가 C perfringens A형균 a-toxin에 의한 장독혈증으로 확진됨에 따라 사람에서 식중독의 감염원이 식육을 통해서도 발병할 수 있는 점을 고려할 때, 주식으로 급여되는 닭고기를 통한 감염도 의심해볼 수 있다. 그러므로 이 질병의 보다 효과적인 예방을 위해 서는 사자 장독혈증의 병인론적 연구가 더 이루어져야 할 것으로 사료된다.
참고문헌 (18)
최원필, 송희종, 김순재. 1994. 수의전염병학. 경북대학교출판부, 대구:275-277
이청산, 한성태, 곽학구 등. 2002. 꽃사슴의 Clostridium perfringens A형에 의한 장독혈증 발생 보고. 한가위지 25(2):127-133
Neiffer DL. 2001. Clostridium perfringens enterotoxicosis in two Amur leopards(Panthera pardus orientalis). J Zoo Wild Med 32(1):134-135
Petit L, Gibert M, Popoff MR. 1999. Clostridium perfringens: toxintype and genotype. Treds Microbiol 7:104-110
Alouf JE. 1988. Purification of alphatoxin from Clostridium perfringens. Methods Enzymol 165:91-94
Taylor DN. 1987. Enteritis necroticans among Khmer children at an evacuation site in Thailand. Lancet ii : 496-500.
Lawrence G, Brown R, Bates J, et al.. 1984. An affinity technique for the isolation of Clostridium perfringens type C from man and pigs in Papua New Guinea. J Appl Bacteriol 57(2):333-338
Batty I, Bullen JJ. 1956. The effect of Clostridium welchii type D culture filtrates on the permeability of the mouse intestine. J Pathol Bacteriol 71(2):311-323
Hunter SE, Clarke IN, Kelly DC, et al. 1992. Cloning and nucleotide sequencing of the Clostridium perfringens epsilon-toxin gene and its expression in Escherichia coli. Infect Immun 60(1):102-110
Lawrence G, Cooke R. 1980. Experimental pigbel: the production and pathology of necrotizing enteritis due to Clostridium welchii type C in the guinea-pig. Br J Exp Pathol 61(3):261-271
Wen Q, McClane BA. 2004. Detection of enterotoxigenic Clostridium perfringens type A isolates in American retail foods. Appl Environ Microbiol 70(5):2685-2691
Augustynowicz E, Gzyl A, Slusarczyk J. 2000. Molecular epidemiology survey of toxinogenic Clostridium perfringens strain types by multiplex PCR. Scand J Infect Dis 32(6):637-641
Kanakaraj R, Harris DL, Songer JG, et al. 1998. Multiplex PCR assay for detection of Clostridium perfringens in feces and intestinal contents of pigs and in swine feed. Vet Microbiol 63(1):29-38
Baums CG, Schotte U, Amtsberg G, et al. 2004. Diagnostic multiplex PCR for toxin genotyping of Clostridium perfringens isolates. Vet Microbiol 100(1-2):11-16
AI-Helper
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.