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문제 정의
- 실정이다. 따라서 본 연구는 제주지역에서 자연 발생된 도축돼지의 경화소 발생률과 폐렴병변에서 M. hyo 항원에 대한 분포 및 백신접종에 따른 효능을 조사하고자 수행하였다.
- hyo는 돼지 호흡기복합증후군(porcine respiratory disease complex; PRDC)의 일차적인 원인체로 알려져 있다.본 연구는 2년에 걸쳐 제주지역 도축돼지 214두를 대상으로 M. hyo의 발생 분포를 조사하고자 수행하였다. 대상 동물의 폐장을 전복측과 후배측으로 나누어 육안검사를 통한 경화 소의 분포를 조사하였으며, 경화소의 병리조직학적 검사를 통하여 폐렴을 분류하였다.
제안 방법
- 면역반응이 끝난 조직은 3, 3'-diamino-benzidine tetrahydrochloride (DAB; Vector, SK-4100, USA)로 2-5분간 발색시킨 후, 증류수에서 면역반응을 중지시켰다. Mayer's hematoxylin으로핵 대조 여색 후, 광학현미경으로 관찰하여 세포질에 황갈색 반응이 나타난 부위를 양성 대조군과 비교 판독하였다. 음성대조군은 휴산태아의 폐장을 이용하였으며 양^대조군은 M.
- hyo의 발생 분포를 조사하고자 수행하였다. 대상 동물의 폐장을 전복측과 후배측으로 나누어 육안검사를 통한 경화 소의 분포를 조사하였으며, 경화소의 병리조직학적 검사를 통하여 폐렴을 분류하였다. 폐장에서 M.
- 파라핀을 제거한 후, 3%H2O27)- 첨가된 methanol에 30분간 반응시켰으며, proteinaseK로 3TC에서 30분간 처리하였다. 비특이 반응을 방지하기 위하여 10% normal goat serum으로 실온에서 30분간 반응시켰으며, avidin-biotin blocking kit(Vector SP-2001, Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA)를 실온에서 15분간 반응시킨 후, M. hyo 토끼 항혈청 (Theresa F. Young, Iowa State University)을 10% normal goat serum 에 1:10으로희석하여 조직 위에 적하하고, 4℃에서 12-24시간 반응시켰다. 이차항체로는 biotinylated goat anti-rabbit IgG(Vector, USA)로 37℃에서 60분간 반응시켰으며, avidin-biotin peroxidase complex(Vector, USA)로 37℃에서 30분간 반응시켰다.
- 대상 동물의 폐장을 전복측과 후배측으로 나누어 육안검사를 통한 경화 소의 분포를 조사하였으며, 경화소의 병리조직학적 검사를 통하여 폐렴을 분류하였다. 폐장에서 M. hyo에 대한 항원을 검출하기 위하여 면역조직화학적 검사와 함께 ELISA 기법을 이용하여 혈중 항체가를 조사하였다.
- 폐장의 경화소 분포율은 Straw 등'7의 방법에 따라, 각 폐엽의 실질적인 무게를 기준으로 전체 폐장을 100%로 한 후, 좌측 첨엽, 심엽 및 횡격막엽에 대해 각각 5%, 6%, 29%로 하였으며, 우측 첨엽, 심엽, 횡격막엽에 대해서는 각각 11%, 10%, 34%로 하고, 부엽은 5%로 구분하여 각 폐엽에 분포하는 경화소의 비율을 산정한 후, 이 수치들을 합하여 계측하였다 (Fig 1).
- 폐장의 조직학적 검사는 전복측엽(첨엽 및 심엽>과 후배측엽(횡격막엽)의 병변부위를 절취하여 10% 중성 포르말린에 고정한 다음 통상적인 조직처리 후 파라핀 포매 조직을 3-5 pm 두께로 절편하여 hematoxylin & eosin(H&E) 염색한다음 광학현미경으로 관찰하였고, Jubb 등6의 분류에 따라 기관지 간질성 폐렴, 간질성 폐렴, 화농성 기관지 폐렴 '및 섬유소성 기관지 폐렴으로 진단하였다.
대상 데이터
- 본 실험에 이용된 동물은 도내 5개 농장에서 도축장으로 출하된 2000년도 돼지 98두와 2001년도 돼지 116두 등 총 214두의 돼지를 대상으로 하였다. 이 중 M hyo bacterin을 사용한 백신접종군은 105두이었으며 비접종군은 109두이었다.
- 돼지를 대상으로 하였다. 이 중 M hyo bacterin을 사용한 백신접종군은 105두이었으며 비접종군은 109두이었다.
데이터처리
- 본 실험결과 중 백신접종에 따른 육안병변과 조직병리학적 병변은 pc-SAS package를 이용하여 t-test로 통계분석을실시하였다.
이론/모형
- M. hyo에 대한 혈청항체를 검사하기 위하여 ELISA를 이용하였다. M.
성능/효과
- ELISA에 의한 혈청항체검사 결과, 양성을 보인 돼지는 214두 중 154두로 72.0%의 양성률을 나타내었다. 백신 접종 여부에 따른 양성률은 백신접종군이 60%, 비접종군이 83.
- M. hyo에 대한 면역조직화학 염색 시 양성 반응을 보인 폐 조직을 폐렴의 형태에 따라 구분하여 살펴본 결과 기관지 간질성 폐렴이 88.5%로 가장 많은 분포를 보였으며 정상인 폐장은 6.3%를 나타내었다. 음성으로 나타난 폐 조직에서는 기관지 간질성 폐렴이 35%, 간질성 폐렴이 32.
- MPS의 특징적인 병리조직학적 소견인 기관지와 세기관지 주위 및 혈관주위성의 림프구계열 세포의 증식 및 결절 형성 정도는 전체 평균 3.1 점이었으며, 백신접종군 및 비접종군이각각 3.0 및 3.3점으로 나타나 백신접종군에서 세포침윤의 정도가 다소 미약하게 관찰되었다(Table 3, Fig 2 및 3).
- 7%인 192두에서 관찰된었다. 그 중 기관지 간질성 폐렴이 168두(78.5%)에서 관찰토어 가장 많았고 간질성 폐렴은 13두(6.1%), 화농성 기관지 폐렴은 11두(5.1%)에서 각각관찰되었다. 백신접종에 따른 폐렴 발생률을 비교하였을 경우, 백신접종군은 84.
- 7%)에서 관찰되었다. 그 중 기관지간질성 폐렴이 168두 (78.5%)로 가장 많았으며, 대부분의 폐조직에서 MPS의 특징적인 병리조직소견인 기관지, 세기관지 및 혈관주위성 림프구 계열 세포의 침윤뿐만 아니라, 간질조직의 비후도 관찰되었다. 이 중 더욱 진행된 병변으로 기관지, 세기관지 및 폐 포강에서 화농성 삼출물을 함유하고 있는 폐장은 72두(37.
- 7%)에서 관찰되었다. 그중 백신접종군은 49두(46.7%), 비접종군은 68두(62.4%)로판명되어 백신접종으로 인해 림프구계열 세포의 증식이 상당히 억제되는 것으로 나타났다. .
- 2%로 보고한 바 ;있다. 따라서 육안 검사를 토대로 제주지역에서의 도축돼지의 폐렴은 다른 지역에서 보고된 발생률과 비교하여 볼 때 유사한 수준에서 발생되고 있음을 알 수 있었다.
- 3%의 분포율을 보인 비접종군보다 유의성 있게 감소하였다. 또한 기관지, 세기관지 및 혈관주위성 림프구 계열 세포의 침윤 등 병리조직학적 병변을 토대로 비교하였을 경우에도 백신접종군에서 평균 3.0점의 병변점수를 보인 반면 비접종군은 평균 3.3점으로 다소 높게 나타났다. 가장 심한 4점의 병변은 총 117두(54.
- 5%로 가장 많이 관찰되었다. 면역조직화학 염색 결과 174두(81.3%)의 돼지에서 항원 양성 반응을 나타내었고, 혈중 항체는 154두(72.0%)에서 양성으로 나타났다.
- 0%였다. 백 신접 종군은 105두 중 74두에서 경화소가 발생하여 70.4%의 발생률을 보인 반면, 비접종군은 109두 중 99두에서 경화 소가 발생하여 81.6%의 높은 발생률을 나타내었다. 백 신접 종군의 경화소 분포율은 평균 4.
- 6%의 높은 발생률을 나타내었다. 백 신접 종군의 경화소 분포율은 평균 4.7%를 보인 반면, 비접종군은 평균 7.3%로 나타나 백신접종군에서 유의성(P<0.05) 있게 감소하였다(Table I).
- 0%의 양성률을 나타내었다. 백신 접종 여부에 따른 양성률은 백신접종군이 60%, 비접종군이 83.5% 의 양성률을 보여 백신접종군에서 항체 양성률이 낮게 나타났다(Table6).
- 본 연구를 통하여 제주지역에서 MPS가 상재화되어 있음을 간접적으로 확인할 수 있었다. 일부 양돈장에서 M.
- hyo와 Mycoplasma hyorhinis의 교차반응을 최소화한 새로운 혈청검사 방법이 소개되기도 하였다's. 본 연구에서 ELISA에 의한 M. hyo 항체 검사 결과, 전체 214두 중 154두가 80배 이상의 혈청희석배수에서 양성으로 나타나 72.0%의 항체 양성률을 보였다. 이는 100배 이상의 혈청희석배수에서 항체 양성률이 70.
- 폐렴 발생을 감소시켜 나가고 있다. 본 연구에서 백신 접종에 따른 효능을 비교한 결과 경화소 발생률은 백 신접 종군이 70.4%, 비접종군이 81.6%로 나타나 백신접종 효과가 어느 정도 있었으며, 특히 폐장 경화소의 분포율은 백 신접 종군이 4.7%로, 7.3%의 분포율을 보인 비접종군보다 유의성 있게 감소하였다. 또한 기관지, 세기관지 및 혈관주위성 림프구 계열 세포의 침윤 등 병리조직학적 병변을 토대로 비교하였을 경우에도 백신접종군에서 평균 3.
- hyo$] 감염이 지속적으로 이루어지고 있음이 밝혀졌다18 그러나 예방접종을 실시한 농장에서는 주령에 따른 항체 양성률의 변화폭이 큰 유의성을 나타내고 있지 않아 예방접종에 의한 효과를 제대로 보고 있지 않음이 밝혀진 바 있다. 본 연구에서도 백신접종군이 백신비접종군에 비하여 항체 양성률은 낮고, 폐장 조직내 항원 양성률은 높게 검출되었다. 이와 같은 결과는 일반적으로 우리나라 양돈장에서 M.
- hyo 항원을 증명하기 위한 방법 중에서 immunoperoxidase기법이 간접면역형광항체 법보다 정확성이 있다고 보고하였다. 본 조사에서 제주지역 도축돼지의 폐장에서 M. hyo 항원을 검출하기 위한 immunoperoxidase 기법을 실시한 결과, 2000년도 채취 폐장에서는 70.4%, 2001년에는 90.5%로 평균 81.3%의 양^률을 나타내었다. 이와 같은 결과는 제주지역에서 본 질병의 감염이 더욱 확산되어 가고 있음을 시사한다.
- 이는 Halbur 등'이 보고한 돼지 호흡기복합 증후군처럼 제주도 돼지의 호흡기 질병이 심하고 복합적인 양상으로 발생하고 있음을 말해준다. 본 조사에서는 특징적인 섬유소성폐렴과 기생충성 폐렴은 관찰되지 않았다. 이는 섬유소성 폐렴에 걸린 돼지들은 대부분 도축 전에 폐사되거나 도태처리가 되고 있고 기생충에 대한 구제가 올바르게 시행되고 있기 때문이라고 사료된다.
- of pigs examined (%).서 양성반응을 보였으며 이 중 백신접종군은 83.8%, 비접 종군은 78.9%의 양성률을 나타내었다(Table 4). M.
- 림프구계열 세포의 침윤이 나타난다. 시간이 경과함에 따라 기관지와 세기관지 주위 및 혈관주위성 림프구 계열 세포의 증식이 뚜렷해지고, 회혹기에는 림프구계열 세포의 증식소견은 주위 조직과 경계가 명확해지며 보다 광범위하게 나타난다% 본 연구에서 병변 부위 또는 육안적으로 병변이 나타나지 않았을 경우 전복측 폐장을 채취하여 병리 조직학적 폐렴의 양상을 검사한 결과, 폐렴은 214두 중 192두 (89.7%)에서 관찰되었다. 그 중 기관지간질성 폐렴이 168두 (78.
- 3%를 나타내었다. 음성으로 나타난 폐 조직에서는 기관지 간질성 폐렴이 35%, 간질성 폐렴이 32.5%, 화농성 기관지 폐렴이 7.5%, 그리고 정상인 폐조직이 25%로 다양한 분포를 보였다(Table 5).
- 5%)로 가장 많았으며, 대부분의 폐조직에서 MPS의 특징적인 병리조직소견인 기관지, 세기관지 및 혈관주위성 림프구 계열 세포의 침윤뿐만 아니라, 간질조직의 비후도 관찰되었다. 이 중 더욱 진행된 병변으로 기관지, 세기관지 및 폐 포강에서 화농성 삼출물을 함유하고 있는 폐장은 72두(37.5%), 폐포벽에 Type II cell의 증생을 보인 것은 73두 (38%)로 나타나 M. hyo가 일차적으로 감염된 후 다른 이차적인 병원체들이 혼합 감염되는 병변의 양상으로 추정되었다. 이는 Halbur 등'이 보고한 돼지 호흡기복합 증후군처럼 제주도 돼지의 호흡기 질병이 심하고 복합적인 양상으로 발생하고 있음을 말해준다.
후속연구
- hyo 백신 접종을 함으로써 육안적 및 병리조직학적 폐렴 병변의 발생을 감소시키는 만족스런 결과를 가져왔으나, 농장별로 돼지 사육체계에 맞는 백신 접종 프로그램의 개발이 절실하다는 문제점 또한 노출시켰다. 따라서 제주지역의 양돈산업에 많은 경제적 손실을 일으키는 돼지 마이코플라즈마 폐렴과 다른 호흡기 질병이 혼합감염되어 나타나는 돼지 호흡기 복합증후군을 효과적으로 예방하기 위한 대책 마련과 체계적인 백신접종의 기초 자료로 본 연구가 활용될 수 있을 것으로 기대된다.
- 본 연구를 통하여 제주지역 도축돼지에서 폐렴 발생 양상, M. 의 감염율 및 항체 양성률이 확인되었으며, 이를 토대로 돼지 마이코플라즈마 폐렴과 돼지 호흡기복합증후군의 예방 관리에 기초 자료로 활용될 수 있을 것으로 기대된다.
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