[논문]인체 피지선세포주(SZ95)에서 무화과 잎 추출물의 피지생성 억제 효과

박시준; 김영목; 임규상; 우원홍; 문연자

인체 피지선세포주(SZ95)에서 무화과 잎 추출물의 피지생성 억제 효과
Inhibitory Effect of Extract of Ficis Folium on the Sebum Synthesis in Human Sebocyte Cell Line (SZ95) 원문보기

동의생리병리학회지 = Journal of physiology & pathology in Korean Medicine, v.20 no.4, 2006년, pp.919 - 923

박시준 (원광대학교 한의학전문대학원 한약자원개발학과) , 김영목 (원광대학교 한의과대학 병리학교실) , 임규상 (원광대학교 한의과대학 안이비인후피부과교실) , 우원홍 (원광대학교 한의학전문대학원 한약자원개발학과) , 문연자 (원광대학교 한의학전문대학원 한약자원개발학과)

Abstract ▼ AI-Helper

Sebum is an oily substance produced by sebaceous glands in human skin. The differentiation of the sebaceous gland is remarkably species-specific and sebocytes may play crucial parts in the pathophysiologic processes and disorders of pilosebaceous unit. In this study, we investigated the inhibitory effect of Ficis folium on the lipid production using the human sebocyte cell line 5195. Our results showed that Ficis folium significantly inhibits synthesis of sebaceous lipids such as cholesterol esters, triglycerides, and total lipid. And Ficis folium supressed cytoplasmic lipid droplets. On the other hand, Ficis folium didn't effect on cell proliferation. These results suggest treatment with Ficis folium resulted in a lower lipid synthesis in SZ95 cells without cytotoxicity.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

여러가지 문제점을 안고 있다. I다라서 본 실험에서 사람 의정상 피지선세포의 특징을 지닌 SZ95세포에서 피지선의 활성을 조사하였다.
그러므로 본 연구에서는 인체 정상 피지선세포의 특징을 지닌 SZ95세포를 이용하여 무화과 잎 추출물의 피지생성 억제 효과를 조사하였다.
무화과 잎 추출물이 SZ95세포에서 생성되고 있는 지질의 pattern에 미치는 영향을 분석하기 위하여 cholesterol의 변화를 조사하였다. SZ95세포의 cholesterol 양은 0.
무화과 잎 추출물이 피지생성에 미치는 영향을 알아보기 위하여, 인체 정상 피지선세포의 특징을 지닌 SZ95세포에서 지질생성 억제효과를 조사하였다.

제안 방법

5% Oil red 용액(Sigma C이으로 염색하고 85% propylene glycol 용액을 처리하였다. 3차 증류수로 2회 씻은 후 Harris hematoxylin 염색하고 glycerin jelly로 봉입하여 광학현미경으로 SZ95 세포 내 지방소적(Lipid droplet)을 관찰하였다.
먼저 H₂SO₄로 산화 처리하여 keton body를 형성하고 이를 phospho-vanillin 시약으루 발색시켜 540 nm에서 측정하였다. Cholesterole total cholesterol kit(AM 202-K, 아산시약주식회사)를 사용하여 500 nm에서 측정하였고, triglyceridee triglycerides kit(GPO-PAP, 영동제약주식회사)를 이용하여 546 nm에서 측정하였다.
05% MTT용액으로 처리하고 상층액을 제거하였다. Formazan 침전물은 1ℓ DMSO에 약 15분간 실온에서 녹인 후 540nm의 파장에서 ELISA reader로 흡광도를 측정하였다.
SZ95 세포 틀 24well plate에 3xl0⁴ 개씩 분주하고 48시간동안 배양하여 부착시킨 후 무화과 잎 에탄올추출물을 농도별로 처리하고 3일 또는 5일 배양하였다. 배양이 끝난 후 2시간동안(37℃) 0.
SZ95세포를 10 cm dish(Nunc C이에 biff개씩 분주하고 48시간 안정화 시킨 후 시료를 처리하여 5일 동안 배양하였다. SZ95세포의 지질(lipid)은 Folch-Lees 주출법에 따라 추출하였다.
SZ95세포를 chamber slide(Nunc Co.)에 분주하고 48시간 후무화과 잎의 에탄올추출물을 농도별로 처리하고 5일 동안 배양하였다. 배양이 끝난 후 0.
SZ95세포에 대한 무화과 잎 에탄올 추출물의 세포독성 효과를 알아보기 위하여 시료를 100, 200 陽/畝 농도로 처리하고 3일, 5일 배양한 후 MTT 방법으로 세포생존율을 조사하였다. 무화과잎 에탄올 추출물 5일 처리군의 경우 100, 200 俸/I也 농도에서 각각 대조군의 107.
SZ95세포의 지질합성에 미치는 영향을 조사하기 위하여 무화과 잎 추출물을 5일 동안 처리한 후 총지질의 양을 측정하였다. SZ95세포는 총지질이 25.
따라서 피지선세포는 피부의 모피지선 단위(pilosebaceous unit)의 이상과 병태생리적 과정에 중요한 역할을 하고 있으나, 적절한 long-lasting culture model이 없어 주로 피부표면지질 분석을 통하여 간접적으로 피지선의 활동을 측정하였다^13-16).
무화과 잎 100g에 에탄올(EQH) 1/를 첨가하고 실온에서 6 시간 동안 sonication 하여 추출하였고, 추출액을 여과하여 Rotary evaporator로 감압 농축하고 동결 건조하여 무화과 잎 에탄올 추출물 14.78g(수득율 : 14.0%)을 얻었다. 무화과 잎 에탄올 주출물 시료는 DMSO에 녹인 후 실험에 사용하였다.
무화과 잎 추출물이 SZ95세포에서 생성되고 있는 지질의 pattern에 미치는 영향을 분석하기 위하여 triglyceride의 변화를 조사하였다. SZ95세표의 triglyceridee 0.

대상 데이터

0%)을 얻었다. 무화과 잎 에탄올 주출물 시료는 DMSO에 녹인 후 실험에 사용하였다.
본 실험에 사용한 약재는 무화과 잎(Ficis folium)으로 시중 건재 약국에서 구입하여 정선하여 사용하였으며, 원광대학교 한의학전문대학원 약재 보관 냉동고에 보관하여 사용하였다.
사람의 피지선세포주(human immortalized sebocytes)인 SZ95세포는 CO₂ 배양기(37℃, 5% CO₂)에서 10% fetal bovine serum(FBS/ Gibco BRL Co.) 이 첨가된 sebocyte basal medium(Biochrom Ag Co. Germany) 배지에 배양하였고 72시간 주기로 배양액을 교체하여 주었다.

이론/모형

배양하였다. SZ95세포의 지질(lipid)은 Folch-Lees 주출법에 따라 추출하였다. 배양이 끝난 SZ95 세포를 수집하여 초음파로 분쇄하고 Cholroform:Methanol(2:l) 용액을 첨가하여 지질을 용해시킨 후 원심분리(2000rpm, 15분)하였다.
세포생존율은 Mosmann의 방법¹⁸⁾으로 측정하였다. SZ95 세포 틀 24well plate에 3xl0⁴ 개씩 분주하고 48시간동안 배양하여 부착시킨 후 무화과 잎 에탄올추출물을 농도별로 처리하고 3일 또는 5일 배양하였다.
Protein assay kit 로 단백질을 정량하고 용매에 녹인 후 실험에 사용하였다. 총지질(total lipid)은 sulfo-phospho-vanillin 발색법을 이용한 총지질즉정용시약(국제시약, 일본)으로 측정하였다. 먼저 H₂SO₄로 산화 처리하여 keton body를 형성하고 이를 phospho-vanillin 시약으루 발색시켜 540 nm에서 측정하였다.

성능/효과

4). 그러나 무화과 잎 추출물 처리군은 정상 SZ95세포에 비해 지방소적이 감소하였으며, 200 陽/戒 처리군에서 현저히 감소하였다(Fig. 5).
SZ95세포는 세포 내 지방소적 (lipid droplets)을 다수 함유하고 있었으나, 무화과 잎 추출물 처리군에서는 세포 내 지방소적이 현저히 감소되었다. 또한 무화과 잎 추출물 처리군은 대조군에 비하여 총지질힙성이 현저히 감소되었으며, cholesterol과 triglyceride의 합성도 유의하게 감소되었다.
본 실험에서 지질생성에 미치는 무화과 잎 추출물의 영향을 조사한 결과, SZ95세포의 증식을 억제하지 않는 농도에서 지질의 생성을 억제한 것으로 나타났으며(Fi응. 1 & 3), 지질의 구성성분 중 cholesterol 과 tri glyceride 의 생성도 억제하였으며' 특히 triglyceride가 가lolesterol보다 현저히 감소하였다.
본 실험에서 표피를 주로 구성하고 있는 각질형성세포주인 HaCaT세포는 세포 내 지방소적이 관찰되지 않았으나, SZ95 세포는 피지선의 일차적인 특징인 지방소적을 많이 함유하고 있었으며(Fig. 3 & 4), 이전의 연구결과에서 SZ95세포의 총지질 함유량은 버aCaT세포의 약 4배에 달하였다”).
한편 Oil red 염색으로 세포 내 지방소적 (lipid droplets)의 변화를 관찰한 결과, SZ95세포는 세포질 내에 다수의 지방소적이관찰되어 전형적인 피지선세포주의 특징을 나타냈으며, 모낭의각질화세 포주인 HaCaT 세포에서는 지방소적이 관찰되지 않았다 (Fig. 4). 그러나 무화과 잎 추출물 처리군은 정상 SZ95세포에 비해 지방소적이 감소하였으며, 200 陽/戒 처리군에서 현저히 감소하였다(Fig.

후속연구

현재 여드름 치료에 부작용 없이 효과적인 단일 치료 방법은 없으며 주로 병원성 인자를 억제하는 것으로 국소 도포제 사용에서부터 항생제 혹은 retinoids, azelaic acid, 및 각질 용해제 등이 사용되고 있다. 따라서 과분비 혹은 과억제된 피지를 조절할 수 있는 한약제나 천연물이 개발된다면 피지분비에 관련된 피부질환을 개선하고 치료하는데 도움이 될 것이다.
이상의 결과 무화과 잎 추출물은 SZ95세포의 지질생성을 억제하였고, 세포증식을 억제하거나 세포독성은 없었으며 향후 피지의 과잉 분비에 따른 여드름 개선에 활용될 수 있을 것으로 사료된다.
이상의 결과, 무화과 잎 추출물은 SZ95세포의 지질 합성을 억제하였으므로 향후 여드름 등 피지의 과잉 분비에 의한 질환에 활용될 수 있을 것으로 생각된다.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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