본 연구는 염소 액상 정액의 활용에 적합한 희석액을 검토하여, 국내 염소 인공수정 실용화를 위한 기초 자료를 확보하기 위하여 실시되었다. 두 마리의 흑염소 수컷으로부터 전기 자극법으로 정액을 채취하였다. 채취된 정액은 BTS로 희석하여 500g에서 5분간 원심분리하여 정장을 제거하고, BTS, Modena, Triladyl$^{(R)}$로 희석하여 $4^{\circ}C$ 냉장고나 $17^{\circ}C$ 온장고에서 8일간 보관되었다. BTS와 Modena로 희석된 정자의 운동성은 하루 만에 소멸되었으며, BTS로 희석된 정액을 $17^{\circ}C$에 보관하였을 때 2일째에 30$\sim$45%로 떨어졌으며, Modena에서는 3일째까지 인공수정에 가능한 활력을 유지하였다. 한편 Triladyl$^{(R)}$로 희석하여 $4^{\circ}C$나 $17^{\circ}C$에서 보관한 경우에는 좀더 좋은 생존성을 나타내었으며, 4일까지도 인공수정이 가능한 운동성을 보여주었다.
본 연구는 염소 액상 정액의 활용에 적합한 희석액을 검토하여, 국내 염소 인공수정 실용화를 위한 기초 자료를 확보하기 위하여 실시되었다. 두 마리의 흑염소 수컷으로부터 전기 자극법으로 정액을 채취하였다. 채취된 정액은 BTS로 희석하여 500g에서 5분간 원심분리하여 정장을 제거하고, BTS, Modena, Triladyl$^{(R)}$로 희석하여 $4^{\circ}C$ 냉장고나 $17^{\circ}C$ 온장고에서 8일간 보관되었다. BTS와 Modena로 희석된 정자의 운동성은 하루 만에 소멸되었으며, BTS로 희석된 정액을 $17^{\circ}C$에 보관하였을 때 2일째에 30$\sim$45%로 떨어졌으며, Modena에서는 3일째까지 인공수정에 가능한 활력을 유지하였다. 한편 Triladyl$^{(R)}$로 희석하여 $4^{\circ}C$나 $17^{\circ}C$에서 보관한 경우에는 좀더 좋은 생존성을 나타내었으며, 4일까지도 인공수정이 가능한 운동성을 보여주었다.
This study was to investigate the optimal short-term storage diluents for goat spermatozoa. Semen was collected with electro-ejaculation from two goats. The collected semen was diluted in BTS and centrifuged at 500 g for 5 minutes. The supernatant was discarded and diluted with BTS, Modena or Trilad...
This study was to investigate the optimal short-term storage diluents for goat spermatozoa. Semen was collected with electro-ejaculation from two goats. The collected semen was diluted in BTS and centrifuged at 500 g for 5 minutes. The supernatant was discarded and diluted with BTS, Modena or Triladyl$^{(R)}$ and stored at 4 or $17^{\circ}C$ for 8 days. The motility of spermatozoa in BTS and Modena stored at $4^{\circ}C$ was rapidly decreased at day 1. The motility of spermatozoa in BTS at $17^{\circ}C$ was decreased to 30$\sim$45% at day 2. In Modena at $17^{\circ}C$, the inappropriate motility fur artificial insemination (AI) was reached at day 4. The spermatozoa stored in Triladyl$^{(R)}$ at 4 or $17^{\circ}C$ were more viable and higher motility up to day 4. In conclusion, liquid storage of goat spermatozoa in Triladyl$^{(R)}$ at 4 or $17^{\circ}C$ for 4 days showed permissible viability for AI.
This study was to investigate the optimal short-term storage diluents for goat spermatozoa. Semen was collected with electro-ejaculation from two goats. The collected semen was diluted in BTS and centrifuged at 500 g for 5 minutes. The supernatant was discarded and diluted with BTS, Modena or Triladyl$^{(R)}$ and stored at 4 or $17^{\circ}C$ for 8 days. The motility of spermatozoa in BTS and Modena stored at $4^{\circ}C$ was rapidly decreased at day 1. The motility of spermatozoa in BTS at $17^{\circ}C$ was decreased to 30$\sim$45% at day 2. In Modena at $17^{\circ}C$, the inappropriate motility fur artificial insemination (AI) was reached at day 4. The spermatozoa stored in Triladyl$^{(R)}$ at 4 or $17^{\circ}C$ were more viable and higher motility up to day 4. In conclusion, liquid storage of goat spermatozoa in Triladyl$^{(R)}$ at 4 or $17^{\circ}C$ for 4 days showed permissible viability for AI.
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문제 정의
본 연구는 염소 액상 정액의 활용에 적합한 희석액을 검토하여, 국내 염소 인공수정 실용화를 위한 기초 자료를 확보하기 위하여 실시되었다. 두 마리의 흑염소 수컷으로부터 전기 자극법으로 정액을 채취하였다.
등, 2006). 본 연구에서는 정장을 제거하고 BTS, Modena, 난황이 첨가되지 않은 Triladyl® 희석액으로 액상 정액을 보존하여 보존 가능 기간에 대하여 검토하였다.
제안 방법
정자들이 소용돌이치며 움직이고, 꼬리나 두부에 이상이 없음을 확인하여 두 개체 모두활력을 90% 이상으로 평가하였다. BTS 희석액으로 채취 정액과 1:1 희석하여 500 g로 5분간 원심분리하여 상층액을 제거하고 침전 부분을 6개의 튜브에 나누어 담고 BTS, Modena, Triladyl® 3종의 희석액 중 하나를 사용하여 희석하여 최종 농도가 ml 당 1억 개가 되게 희석하였다. 희석된 정액은 활력이 85%였으며, 이들을 처리별로 4℃ 냉장고와 17 ℃ 온장고 보관하면서 활력의 변화를 관찰하였다.
혈구 계산판의 격자 2군데를 2명이 관찰하여 생존 정자 비율을 퍼센트로 나타내었다. 관찰되는 거의 모든 정자들이 소용돌이치며 활발하게 움직이는 것을 90% 이상으로, 생존 정자들 이 격자별로 100개 가량을 관찰하여 활발하게 움직이는 정자들이 80% 이상일 때 80%로, 70% 이상일 때 70% 등으로 보고, 50% 이하는 움직이는정도가 전진 운동 혹은 느리게 전진 운동하는 수준이며, 20% 이하는 느리게 전진 운동하거나 진자운동 혹은 미동하는 수준으로 평가하였다.
정액 채취는 충전식 전기 자극기(Model 66000-D, Nasco, 미국)의 염소 프로브에 소 직장 검사용 윤활제로 윤활시켜 직장에 삽입하여 부생식선 위 부분으로 추정되는 위치에 전극선이 위치되게 한 후 서서히 전압을 올려 5초간 유지하다 다시 전압을 0 상태로낮추는 작업을 사정할 때까지 전압의 강도를 높여가며 반복하여 정액을 채취하였다. 보통 3회 이내에 정액을 사출하였으며, 사출된 정액은 음경 말단부에 50 ml 튜브를 사전에 위치시켜 사출 정액을회수하였으며, 회수된 정액은 요의 미혼입 여부를육안으로 확인하여 우유빛 색깔과 운무상으로 평가하였다.
월 3~4회 정액을 채취하였다. 정액 채취는 충전식 전기 자극기(Model 66000-D, Nasco, 미국)의 염소 프로브에 소 직장 검사용 윤활제로 윤활시켜 직장에 삽입하여 부생식선 위 부분으로 추정되는 위치에 전극선이 위치되게 한 후 서서히 전압을 올려 5초간 유지하다 다시 전압을 0 상태로낮추는 작업을 사정할 때까지 전압의 강도를 높여가며 반복하여 정액을 채취하였다. 보통 3회 이내에 정액을 사출하였으며, 사출된 정액은 음경 말단부에 50 ml 튜브를 사전에 위치시켜 사출 정액을회수하였으며, 회수된 정액은 요의 미혼입 여부를육안으로 확인하여 우유빛 색깔과 운무상으로 평가하였다.
정액의품질은 현미경으로 운동성과 정자 형태에 의해 평가하였다. 정자들이 소용돌이치며 움직이고, 꼬리나 두부에 이상이 없음을 확인하여 두 개체 모두활력을 90% 이상으로 평가하였다.
정자의 활력은 채취 일부터 8일 동안 관찰하였으며, 4℃ 냉장고와 17℃ 온장고에서 꺼내어 일부를 분리하여 가온판에서 37℃까지 5분간 가온 후 광학 현미 경상에서 정자 운동성을 평가하였다. 혈구 계산 판에 5 의 정액을 놓고 커버글라스를 덮은 후 100배율에서 정자의 운동성을 평가하고 200배율에서 삼투압 충격 이 나 저온 충격으로 발생할 수 있는 정자 꼬리 꺾임 등의 기형 변화가 발생되었는지 확인하였다.
혈구 계산 판에 5 의 정액을 놓고 커버글라스를 덮은 후 100배율에서 정자의 운동성을 평가하고 200배율에서 삼투압 충격 이 나 저온 충격으로 발생할 수 있는 정자 꼬리 꺾임 등의 기형 변화가 발생되었는지 확인하였다. 혈구 계산판의 격자 2군데를 2명이 관찰하여 생존 정자 비율을 퍼센트로 나타내었다.
혈구 계산 판에 5 의 정액을 놓고 커버글라스를 덮은 후 100배율에서 정자의 운동성을 평가하고 200배율에서 삼투압 충격 이 나 저온 충격으로 발생할 수 있는 정자 꼬리 꺾임 등의 기형 변화가 발생되었는지 확인하였다. 혈구 계산판의 격자 2군데를 2명이 관찰하여 생존 정자 비율을 퍼센트로 나타내었다. 관찰되는 거의 모든 정자들이 소용돌이치며 활발하게 움직이는 것을 90% 이상으로, 생존 정자들 이 격자별로 100개 가량을 관찰하여 활발하게 움직이는 정자들이 80% 이상일 때 80%로, 70% 이상일 때 70% 등으로 보고, 50% 이하는 움직이는정도가 전진 운동 혹은 느리게 전진 운동하는 수준이며, 20% 이하는 느리게 전진 운동하거나 진자운동 혹은 미동하는 수준으로 평가하였다.
BTS 희석액으로 채취 정액과 1:1 희석하여 500 g로 5분간 원심분리하여 상층액을 제거하고 침전 부분을 6개의 튜브에 나누어 담고 BTS, Modena, Triladyl® 3종의 희석액 중 하나를 사용하여 희석하여 최종 농도가 ml 당 1억 개가 되게 희석하였다. 희석된 정액은 활력이 85%였으며, 이들을 처리별로 4℃ 냉장고와 17 ℃ 온장고 보관하면서 활력의 변화를 관찰하였다.
대상 데이터
두 마리의 흑염소 수컷으로부터 전기 자극법으로 정액을 채취하였다. 채취된 정액은 BTS로 희석하여 500 g에서 5분간 원심분리하여 정장을 제거하고, BTS, Modena, Triladyl®로 희석하여 4℃ 냉장고나 17℃ 온장고에서 8일간 보관되었다.
시험축은 2살 이상된 재래 흑염소 수컷 2두를선별하여 별도 공간에서 자유 급식하여 사육하였으며, 월 3~4회 정액을 채취하였다. 정액 채취는 충전식 전기 자극기(Model 66000-D, Nasco, 미국)의 염소 프로브에 소 직장 검사용 윤활제로 윤활시켜 직장에 삽입하여 부생식선 위 부분으로 추정되는 위치에 전극선이 위치되게 한 후 서서히 전압을 올려 5초간 유지하다 다시 전압을 0 상태로낮추는 작업을 사정할 때까지 전압의 강도를 높여가며 반복하여 정액을 채취하였다.
희석액은 BTS, Modena, Triladyl® 3종을 Mini-tub(독일)에서 구입하여 사용하였으며, 희석액은 사용 설명서에 따라 제조하였으며, 단, Triladyl® 희석액은 설명서와 달리 난황을 첨가하지 않았다. 간단히 설명하면 BTS와 Modena는 1리터 단위 파우더 상태로 구입하였으며, 700 ml 가량의 이차 증류수에 파우더를 완전히 부어서 녹인 후 최종 1리터로 맞춰 필터 후 보관하며 사용하였으며, Triladyl® 희석액은 액상 상태로 구입하여 2차 증류수 30 ml 에 Triladyl® 10 ml를 부어 섞은 후 사용하였다.
성능/효과
채취된 정액은 BTS로 희석하여 500 g에서 5분간 원심분리하여 정장을 제거하고, BTS, Modena, Triladyl®로 희석하여 4℃ 냉장고나 17℃ 온장고에서 8일간 보관되었다. BTS와 Modena로 희석된 정자의 운동성은 하루 만에 소멸되었으며, BTS로 희석된 정액을 17℃에 보관하였을 때 2일째에 30~45%로 떨어졌으며, Modena에서는 3일째까지 인공수정에 가능한 활력을 유지하였다. 한편 Triladyl®로 희석하여 4 ℃ 나 17 ℃ 에서 보관한경우에는 좀더 좋은 생존성을 나타내었으며, 4일까지도 인공수정이 가능한 운동성을 보여주었다.
양의 정액을 액상 보존한 연구들에서는 정장을 제거하지 않고 사용하였다. 본실험에서는 염소 정액의 액상 보존에 난황을 첨가하지 않은 Triladyl®를 사용하여 4일 동안 인공수정이 가능한 활력을 유지할 수 있었다.
상업적으로 판매되는 제품의 특성상 조성은 정확하게 알려져 있지 않으나, 동해 방지를 위해 비침투성 동해 방지제로 lactose가 들어있으며, 침투성 동해 방지제로 glycerol이 첨가되 어있고, pH buffer로 Tris와 citric acid와 tylosin, spec- tinomycin, gentamycin, lincomycin의 네가지 항생제가 포함된 것으로 알려져 있다(Garde 등, 2003). 이 동결 보존액에 난황을 첨가하지 않고 액상 정액의 희석액으로 활용한 보고는 아직까지 없으나, 본 실험에서 난황을 첨가하지 않고 사용하여 4℃ 와 17℃ 보존에 활용한 결과, 우수한 액상 정액 보존성이 확인되었으며, 이 희석액은 정자 운동성을4일 동안 60~70% 수준으로 유지하였다. De Pauw 등(2003)은 소의 정액을 Triladyl® 희석액에 20% 난황과 6.
정액의품질은 현미경으로 운동성과 정자 형태에 의해 평가하였다. 정자들이 소용돌이치며 움직이고, 꼬리나 두부에 이상이 없음을 확인하여 두 개체 모두활력을 90% 이상으로 평가하였다. BTS 희석액으로 채취 정액과 1:1 희석하여 500 g로 5분간 원심분리하여 상층액을 제거하고 침전 부분을 6개의 튜브에 나누어 담고 BTS, Modena, Triladyl® 3종의 희석액 중 하나를 사용하여 희석하여 최종 농도가 ml 당 1억 개가 되게 희석하였다.
있다. 최종 희석 후 활력은 85%였으며, BTS 희석액을 이용한 처리구에서 4℃ 냉장고에서 1일간 보관하였을 때 운동성이 완전히 소멸되었으며, 17 ℃ 온장고에서 보관하였을 때 1일째는 70%의 활력을 유지하였으나, 2일째에는 급격히 30~45%로감소되어 6일째에는 완전히 소멸되었다. Modena 희석액을 이용한 처리구에서는 4℃ 냉장고에서 1 일간 보관하여 35~45%로 활력이 급격히 감소되었으며, 17℃ 온장고에서 보관하였을 때는 3일째에 개체에 따라 45~75%의 운동성으로 개체 간 보존성의 차이를 보였다.
이 희석액은 단순한 구성물들로 이루어져 있으나 돼지 정액을 보존하는데 우수한 희석액으로알려져 있다. 하지만, 염소 정액 보존에 이용할 때 4℃에서 보존하는 것은 적합하지 않았으며, 17℃ 에 보존하였을 때에도 하루 정도 인공수정에 적합한 활력을 유지할 수 있었다. 이 결과는 김 등(2002) 의 돼지 정액을 17℃에서 7일간 보존하여 46.
BTS와 Modena로 희석된 정자의 운동성은 하루 만에 소멸되었으며, BTS로 희석된 정액을 17℃에 보관하였을 때 2일째에 30~45%로 떨어졌으며, Modena에서는 3일째까지 인공수정에 가능한 활력을 유지하였다. 한편 Triladyl®로 희석하여 4 ℃ 나 17 ℃ 에서 보관한경우에는 좀더 좋은 생존성을 나타내었으며, 4일까지도 인공수정이 가능한 운동성을 보여주었다.
후속연구
염소의 인공수정이 활성화 되고 있는노르웨이에서는 수컷의 공유에 따른 질병 전파를억제하기 위해 인공수정을 통한 번식을 유도하고있는데, 지역 민간 인공수정센터를 활성화시켜 액상 정액 상태로 이용하고 있다(Paulenz 등, 2005). 반면 미국이나 호주 등에서는 우수 유산양을 선발하여 이들 정액을 동결보존하여 판매 및 인공수정에활용하고 있어, 앞으로 우리나라의 염소 인공수정산업의 방향이 어떤 방식으로 진행하는 것이 유리한지는 추후 검토가 필요할 것으로 생각된다. 현재국내에서는 염소의 인공수정 기술 개발에 대한 연구가 상당히 미진한 상태로 기존의 흑염소의 개량과 앞으로 확대가 예상되는 유산양 산업에 이들기술의 개발 및 보급이 필요하다고 하겠다.
참고문헌 (19)
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