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문제 정의
- 본 연구에서는 메탄생성반응기의 슬러지를 혐기성 반응기 에 식종하여 lab-scale의 ANAMMOX반응을 유도하고자 하 였으며 시간별로 미생물 변화를 분자생태학적 방법으로 분석하였다. 전 실험 기간에 걸쳐 NOf-N는 거의 100% 제거되 었고 NOj-Ne 1 mg/L 이하로 측정되었다.
제안 방법
- 유입수와 유출수 증 CODcr, TKN(total kjeldahl nitrogen), NHj-N 및 알칼리도를 Standard Methods的에 준하여 분석 하였으며 NCb'N과 NOj'-N 농도는 IC(Yong Lin Instrument, Water 432 Conductivity Detector, Korea)로 분석하였다. Head space에 생성된 gas 조성(CB, Ch, N2, CO2)은 GC-TCD(HP6890, Alltech Packed column CTR I, oven 50℃, injector 120℃, detector 210℃, He 25 mL/min)로 분석하였다.
- 추출한genomic DNA 는 16S universal primer(27F-5'AGAGTITGATCMTGGCTCAG3', 1492R-5' TACGGYTACCTTGTTACGACTTW를 사용하여 PCR (Polymerase Chain Reaction)로 증폭하였다. PCR증폭생성물 은 Winzard® SV Gel and PCR Clean-Up System(Promega, USA)으로 정제한 후 정제된 16S rDNA PCR 산물을 pGEM-T easy vector(Promega, USA)에 접합(ligation)시키고 숙주세 포 (host cell : E. coli XLl-Blue)로 형질전환(Transformation) 시켰다. X-Gal과 IPTG로 처리된 LB(Luria-Bertani) 배지에 형질전환된 세포를 배양하여 균주의 접합이 확인된 콜로니는 Winzard® Plus Minipreps DNA Purification System(Promega, USA)을 이용해 플라스미드를 회수하고 세균의 16S rDNA 염 기서열을 분석하였다.
- Petri dish에 배양된 200여 개의 콜로니 중 무작위로 선택 한 14개의 콜로니에 대하여 염기서열을 분석하였다. 그 결과 약 97% 이상 일치하는 종을 그룹화 하였다.
- Phase별 반응기 내 미생물 분석을 위하여 EBCT 300일(Phaw 1), EBCT 850일(Phase 2), EBCT 1000일(Phase 3)에서 각각 입상 슬러지를 채취하여 미생물 군집을 분석하였다. 분석결과 동정된 미생물의 대부분이 난배양성 미생물(Uncultumlable bac- terium)과 유사도가 높은(97% 이상)것으로 나타났다.
- 이와 같이 도출된 미생물 종 별 염기서열 정보를 근거로 CLUSTAL. W(http:// clustalw.genome.jp/) 및 MEGA 3.1 (Molecular Evolutionary Genetics Analysis, http://www.megasoftware.net)를 이용하여 관련 미생물에 대한 계통도를 작성하여 미생물 종 간 유근관계를 파악하였다.
- coli XLl-Blue)로 형질전환(Transformation) 시켰다. X-Gal과 IPTG로 처리된 LB(Luria-Bertani) 배지에 형질전환된 세포를 배양하여 균주의 접합이 확인된 콜로니는 Winzard® Plus Minipreps DNA Purification System(Promega, USA)을 이용해 플라스미드를 회수하고 세균의 16S rDNA 염 기서열을 분석하였다.9)
- 본 연구에서는 맥주공장의 폐수를 처리하는 메탄생성 반응 기의 입상 슬러지를 이용하여 혐기성 암모늄 산화반응을 유도하였다. 그 과정에서 실험 기간을 3개 구간(3 phases)으로 나누어 유입 질소농도에 따른 유출수 내의 질소농도 변화 및 생성 가스 조성을 관찰하였으며, 각 시점의 시료를 채취하여 세균의 16S rDNA의 염기서열을 분석하여 그 다양성을 확 인하고 미생물 종의 변화를 조사하였다.
- 5범위로 유지되었으나 아질산의 제거 에 저해작용은 발생되지 않았다. 그러나 반응의 최적화를 위해 Phase 3에서 유입되는 인공폐수의 KHCO3의 농도를 10 mg/L까지 감소시켜 pH가 8.3이하를 유지하도록 조절하였다.
- AG22그룹은 Geobactere 속하며 이들은 3가철 (Fe, *)을 환원하는 것으로 알려졌다.끼 또한 ANAMMOX미 생물로 분류되는 Planctomycetes문을 확인하였다. 즉 이때 이와 같은 ANAMMOX균의 존재로 인하여 암모늄(NHJ)의 제거율도 75%로 높았으며 아질산의 제거율도 100%로 나타나 질스가스의 생성이 가장 활발하였다.
- 2에 나타낸 바와 같이 분석하였다. 먼저 반응기의 입상 슬 러지를 각 phase 별로 EBCT 300, 850 및 1000일 째에 10 mL씩 채취한 후 FastDNA® SPIN Kit(Biol01 system, Q-Bio gene)을 사용하여 슬러지의 유전체(genomic DNA)를 FastPrep® Instrument(Q-Bio gene)로 추출하였다. 추출한genomic DNA 는 16S universal primer(27F-5'AGAGTITGATCMTGGCTCAG3', 1492R-5' TACGGYTACCTTGTTACGACTTW를 사용하여 PCR (Polymerase Chain Reaction)로 증폭하였다.
- 본 연구에서는 맥주공장의 폐수를 처리하는 메탄생성 반응 기의 입상 슬러지를 이용하여 혐기성 암모늄 산화반응을 유도하였다. 그 과정에서 실험 기간을 3개 구간(3 phases)으로 나누어 유입 질소농도에 따른 유출수 내의 질소농도 변화 및 생성 가스 조성을 관찰하였으며, 각 시점의 시료를 채취하여 세균의 16S rDNA의 염기서열을 분석하여 그 다양성을 확 인하고 미생물 종의 변화를 조사하였다.
- d의 부하로 운전하였다. 유입 수의 NH/-N과 NOy-N의 비는 항상 1:1을 유지하였으며 10-2000 mg/L의 KHCO3를 이용하여 반응기내 pH가 7.5에서 8.5를 유지되도록 하였다.
- 5일 간 격으로 2 L씩 주입하였다. 유입되는 질소농도에 따라 실험 기간을 세 단계로 나누었다. Phase 1에서는 암모니아성 질소 (NH」-N)와 아질산성 질소(NS-N)의 부하를 각각 1.
- 분석결과 동정된 미생물의 대부분이 난배양성 미생물(Uncultumlable bac- terium)과 유사도가 높은(97% 이상)것으로 나타났다. 이미 생물들의 계통분류학상의 위치를 확인함으로써 그 역할을 예 측하기 위해 각 염기서열을 ANAMM0X균, 탈질균, 메탄균 과 기타 근연종의 NCBI의 데이터 베이스와 비교하여 계통도 (Phylogenetic tree)를 도식화하였다.
- 총 21개의 콜로니를 선택하여 염기서열을 분석하였다. 염 기서열 분석결과에 따라 각 종은 14개의 그룹으로 구분되었 으며 이 가운데 AG22 및 AG23 그룹의 근연종이 확인되었다 (Fig.
- 먼저 반응기의 입상 슬 러지를 각 phase 별로 EBCT 300, 850 및 1000일 째에 10 mL씩 채취한 후 FastDNA® SPIN Kit(Biol01 system, Q-Bio gene)을 사용하여 슬러지의 유전체(genomic DNA)를 FastPrep® Instrument(Q-Bio gene)로 추출하였다. 추출한genomic DNA 는 16S universal primer(27F-5'AGAGTITGATCMTGGCTCAG3', 1492R-5' TACGGYTACCTTGTTACGACTTW를 사용하여 PCR (Polymerase Chain Reaction)로 증폭하였다. PCR증폭생성물 은 Winzard® SV Gel and PCR Clean-Up System(Promega, USA)으로 정제한 후 정제된 16S rDNA PCR 산물을 pGEM-T easy vector(Promega, USA)에 접합(ligation)시키고 숙주세 포 (host cell : E.
- 혐기성 암모늄 산화 반응을 다시 회복시키기 위해 Phase 3 에서는 인공폐수의 NHj-N 농도를 100 mg/L(질소부하 19.05 gN/m3 . d)로 감소시켜 운전하였다. 또한 반응기의 pH가 8.
대상 데이터
- Phase 3의 경우 총 44개의 콜로니를 선택하여 염기서열을 분석하였다. 염기서열분석 결과 총 4개의 그룹이 97% 이상 일치하는 근연종이 확인되었다(Fig.
- 미생물 염기서열은 NCBI(National Center for Biotechnology Information : http://www.ncbi.nlm.nih.gov/) Gene Bank에 등 록된 데이터베이스와 비교, 결정하였다. 이와 같이 도출된 미생물 종 별 염기서열 정보를 근거로 CLUSTAL.
이론/모형
- 유입수와 유출수 증 CODcr, TKN(total kjeldahl nitrogen), NHj-N 및 알칼리도를 Standard Methods的에 준하여 분석 하였으며 NCb'N과 NOj'-N 농도는 IC(Yong Lin Instrument, Water 432 Conductivity Detector, Korea)로 분석하였다. Head space에 생성된 gas 조성(CB, Ch, N2, CO2)은 GC-TCD(HP6890, Alltech Packed column CTR I, oven 50℃, injector 120℃, detector 210℃, He 25 mL/min)로 분석하였다.
성능/효과
- 그 결과 약 97% 이상 일치하는 종을 그룹화 하였다.19)각 그룹을 NCBI 데이터 베이스와 비교한 결과 그 특성을 확인할 수 있는 미 생물 그룹은 3개로 나타났다(Fig. 9). 나머지 9개 그룹의 균 종은 기존에 알려진 균과의 유사성이 97% 이하인 난배양 성 미생물이었다.
- 9에서 보는 바와 같이 AG3 그룹에는 두 개의 콜로니가 포함되었으며, 이 그룹과 98% 유사성을 보 였던 Dechloromonas 속에는 탈질을 수행하는 미생물이 다수 포함되었다.20)1개의 콜로니가 속한 AG6 그룹도 Thwem속 에 포함되어 탈질 미생물로 분류되었다.21) 한편 AG9 그룹에는 3개의 콜로니가 포함되었으며 이들과 근연종인 toluenedegrading methanogenic consortium 은 메탄생성균으로 알려져 있다끄) Phase 1에서 수행된 종 분석 결과 ANAMM0X균 은 발견되지 않았으며, 종속영양탈질균과 메탄생성균이 우 점종으로 존재하고 있음을 확인할 수 있었다.
- 20)1개의 콜로니가 속한 AG6 그룹도 Thwem속 에 포함되어 탈질 미생물로 분류되었다.21) 한편 AG9 그룹에는 3개의 콜로니가 포함되었으며 이들과 근연종인 toluenedegrading methanogenic consortium 은 메탄생성균으로 알려져 있다끄) Phase 1에서 수행된 종 분석 결과 ANAMM0X균 은 발견되지 않았으며, 종속영양탈질균과 메탄생성균이 우 점종으로 존재하고 있음을 확인할 수 있었다. 메탄균에 속 하는 콜로니는 분석 콜로니 14개 중 3개가 존재함을 확인하 였고 이때 메탄가스의 발생도 확인할 수 있었다.
- 그러나 Phase 2에서 돌발 적인 외부 공기의 유입으로 인하여 Head space의 가스 조성 이 대기 중의 조성(N2 79%, O2 21%)과 동일하게 관찰되었 으나 이후 다시 그 조성은 N?가 97%, 6가 3%로 빠르게 회 복되었다. 250 mgN/L의 유입수 2 L를 주입하여 모두 제거 되었을 때(1회분, 3.5일)의 이론적 질소가스의 발생량은 0.44 L이며 아질산성 질소의 제거율이 100%이고 암모니아성 질 소의 제거율이 75%로 가장 높았던 Phase 2에서의 질소가스 발생량은 약 0.39 L로 제거된 질소가 모두 질소가스로 변 환되었다. Phase 3에서 유입수의 총 질소 농도가 200 mgN/L 였으며 제거율이 100%인 경우 이론적 질소가스 발생량은 0.
- 이 반응기는 30 ℃ 항온실 에서 혐기성 조건에서 운전되었으며 알려진 바와 같이 ANAM- MOX균의 배양을 최적화할 수 있는 연속회분식배양기(SBR : sequencing batch reactor)를 사용하였다.3) 유입 인공 폐수는 반응기 하단으로 주입하였으며 연속적으로 3Q의 유량으 로 내부 재순환했다. 작동일수는 공탑체류시간(EBCT : Empty Bed Contact Time)을 기준으로 산정하였으며, 실제 운전 일수는 450일(EBCT 930일)이었다.
- ANAMMOX반응에서 탄소원으로서 HCO3- 소모가 기대되 지만 유출수의 평균 알칼리도는 Phase 2와 3에서 각각 3,000 mgCaCOa/L 및 1,000 mgCaCCh/L로 측정되어 유입수보다 각각 1.5배 및 1.2배 높은 농도를 나타내었다(Fig. 6). 이러한 결과는 혐기성의 순응과정에서 미생물의 우열관계에 따라 사 멸된 미생물로부터 공급된 유기물질이 종속영양탈질에 의하여 전자공여체로 이용되어 생성된 알칼리도에 기인한 것으로 판단된다.
- nhAn의 제거 효율이 감소하는 동안에도 NO2'-N 의 제거는 지속적으로 일어났으며, 반응기 내 유기물이 존재 하였으므로 그 기간 동안 아질산 탈질이 발생했음을 확인할 수 있었다. Head space의 가스 조성 분석 결과 생성된 가 스는 95% 이상의 질소와 약 5% 이하의 산소로 구성되어 있음을 확인하였다. 미생물 분석 결과 Phase 1에서는 메탄 생성균과 탈질균이 확인되었으며, 순응이 진행됨에 따라 Phase 2에서는 ANAMMOX균의 존재를 확인하였다.
- 이는 NO3--N가 ANAMMOX반응에 따라 생성되었으나 탈 질균에 의해 일부 제거된 것으로 판단된다. Phase 2 후반 반응기 내로 외부 공기가 유입되어 ANAMMOX 반응이 순 간적으로 억제되고 유입된 산소에 의해 질산화되어 NOz'-N 및 NOJ-N의 유출 농도가 갑자기 증가하기도 하였다. 그러나 그 농도는 0.
- 39 L로 제거된 질소가 모두 질소가스로 변 환되었다. Phase 3에서 유입수의 총 질소 농도가 200 mgN/L 였으며 제거율이 100%인 경우 이론적 질소가스 발생량은 0.352 L이며 아질산성 질소는 모두 제거되고 암모니아성 질 소도 일부 제거되어 1회분에 평균 0.25 L의 질소가스가 발생하였다.
- Phase 2에 이르 러 NHJ-Ne 최대 75%까지 제거 되었으나 급작스런 외부 공기 유입으로 인하여 유출수 중 NH4+-N의 농도는 다시 증 가하였다. nhAn의 제거 효율이 감소하는 동안에도 NO2'-N 의 제거는 지속적으로 일어났으며, 반응기 내 유기물이 존재 하였으므로 그 기간 동안 아질산 탈질이 발생했음을 확인할 수 있었다. Head space의 가스 조성 분석 결과 생성된 가 스는 95% 이상의 질소와 약 5% 이하의 산소로 구성되어 있음을 확인하였다.
- Petri dish에 배양된 200여 개의 콜로니 중 무작위로 선택 한 14개의 콜로니에 대하여 염기서열을 분석하였다. 그 결과 약 97% 이상 일치하는 종을 그룹화 하였다.19)각 그룹을 NCBI 데이터 베이스와 비교한 결과 그 특성을 확인할 수 있는 미 생물 그룹은 3개로 나타났다(Fig.
- 5 이상으로 증가하여 적정 운전 pH를 벗어나 인공폐수의 알 칼리도를 60 mgCaCOVL까지 감소시켜 pH를 적정범위로 낮 추었다. 그러나 ANAMMOX반응은 그 이전에 비하여 더디게 회복되었으며, 그 결과 NH:-N의 제거율은 약 5% 범위 로 매우 낮게 유지되었다. 이를 통하여 반응기 내로 산소가 단순 유입되더라도 ANAMMOX 미생물에 큰 영향을 미쳐 처 리효율을 감소시킨다는 것을 알 수 있었다.
- 9). 나머지 9개 그룹의 균 종은 기존에 알려진 균과의 유사성이 97% 이하인 난배양 성 미생물이었다. Fig.
- 본 연구에서 ANAMMOX반응은 그 발현에 오랜 기간이 걸리며 무 산소 조건에 의한 안정적인 운전이 선행되어야 함을 알 수 있었다. 따라서 이와 같은 안정적인 조건이 확보된다면 외부 유기 탄소원의 주입 없이도 아질산성 질소와 암모니아성 질소를 효율적으로 제거 할 수 있음을 확인하였다. 또한 분 자생물학적 방법이 반응조의 미생물학적 변동성을 효율적으로 모니터링 하는 것에 유용하게 사용될 수 있음을 알 수 있었다.
- d)까지 증가시킨 Phase 2의 경우 초기에는 NH/-N 이온이 효율적으로 처리되지 못하고 반응기내 축 적되었다. 또한 EBCT 60일 경 질소부하에 적응하지 못한 미 생물이 사멸하여 암모니아성 질소의 농도를 증가시켰을 것으로 여겨지며 이에 따라 유출 CDD도 증가했다(Fig. 7). 그러나 반응 시간이 경과하면서 질소 제거율은 다시 75%까지 증가하였다.
- 따라서 이와 같은 안정적인 조건이 확보된다면 외부 유기 탄소원의 주입 없이도 아질산성 질소와 암모니아성 질소를 효율적으로 제거 할 수 있음을 확인하였다. 또한 분 자생물학적 방법이 반응조의 미생물학적 변동성을 효율적으로 모니터링 하는 것에 유용하게 사용될 수 있음을 알 수 있었다.
- 그리고 Phase 2 후반에 발생된 외부 공기 유입에도 불구하고 Phase 3에서는 여전히 ANAMMOX균의 존재를 확인하였고 부분적으 로 아질산의 산화에 관여하는 질산화 세균도 발견하였다. 또한 종속영양성 탈질균도 발견되어 반응기 내에서 부분적으로 아질산의 탈질이 일어나고 있음을 알 수 있었다. 본 연구에서 ANAMMOX반응은 그 발현에 오랜 기간이 걸리며 무 산소 조건에 의한 안정적인 운전이 선행되어야 함을 알 수 있었다.
- 21) 한편 AG9 그룹에는 3개의 콜로니가 포함되었으며 이들과 근연종인 toluenedegrading methanogenic consortium 은 메탄생성균으로 알려져 있다끄) Phase 1에서 수행된 종 분석 결과 ANAMM0X균 은 발견되지 않았으며, 종속영양탈질균과 메탄생성균이 우 점종으로 존재하고 있음을 확인할 수 있었다. 메탄균에 속 하는 콜로니는 분석 콜로니 14개 중 3개가 존재함을 확인하 였고 이때 메탄가스의 발생도 확인할 수 있었다.
- Head space의 가스 조성 분석 결과 생성된 가 스는 95% 이상의 질소와 약 5% 이하의 산소로 구성되어 있음을 확인하였다. 미생물 분석 결과 Phase 1에서는 메탄 생성균과 탈질균이 확인되었으며, 순응이 진행됨에 따라 Phase 2에서는 ANAMMOX균의 존재를 확인하였다. 그리고 Phase 2 후반에 발생된 외부 공기 유입에도 불구하고 Phase 3에서는 여전히 ANAMMOX균의 존재를 확인하였고 부분적으 로 아질산의 산화에 관여하는 질산화 세균도 발견하였다.
- 3범위에서 효율적으로 발 생한다고 알려져 있다. 본 실험의 경우 Phase 1의 운전 초반 에는 pH가 7.3 ~ 7.5로 유지되었으나 부분적 탈질 반응에 의한 알칼리도의 상승으로 인하여pH가 점차 증가하여 Phase 1 후반에는 pH가 8.3까지 증가하였다(Fig. 5). 그 이후 Phase 2 에서도 pH는 8.
- 또한 종속영양성 탈질균도 발견되어 반응기 내에서 부분적으로 아질산의 탈질이 일어나고 있음을 알 수 있었다. 본 연구에서 ANAMMOX반응은 그 발현에 오랜 기간이 걸리며 무 산소 조건에 의한 안정적인 운전이 선행되어야 함을 알 수 있었다. 따라서 이와 같은 안정적인 조건이 확보된다면 외부 유기 탄소원의 주입 없이도 아질산성 질소와 암모니아성 질소를 효율적으로 제거 할 수 있음을 확인하였다.
- Phase별 반응기 내 미생물 분석을 위하여 EBCT 300일(Phaw 1), EBCT 850일(Phase 2), EBCT 1000일(Phase 3)에서 각각 입상 슬러지를 채취하여 미생물 군집을 분석하였다. 분석결과 동정된 미생물의 대부분이 난배양성 미생물(Uncultumlable bac- terium)과 유사도가 높은(97% 이상)것으로 나타났다. 이미 생물들의 계통분류학상의 위치를 확인함으로써 그 역할을 예 측하기 위해 각 염기서열을 ANAMM0X균, 탈질균, 메탄균 과 기타 근연종의 NCBI의 데이터 베이스와 비교하여 계통도 (Phylogenetic tree)를 도식화하였다.
- 총 21개의 콜로니를 선택하여 염기서열을 분석하였다. 염 기서열 분석결과에 따라 각 종은 14개의 그룹으로 구분되었 으며 이 가운데 AG22 및 AG23 그룹의 근연종이 확인되었다 (Fig. 10). AG22그룹은 Geobactere 속하며 이들은 3가철 (Fe, *)을 환원하는 것으로 알려졌다.
- Phase 3의 경우 총 44개의 콜로니를 선택하여 염기서열을 분석하였다. 염기서열분석 결과 총 4개의 그룹이 97% 이상 일치하는 근연종이 확인되었다(Fig. 11). AG26 그룹의 경우 1개의 콜로니가 이에 속하였으며 탈질균으로 널리 알려진24) Thiobacillus denitrijlccins와 99% 일치하였다.
- 유출수 중 NOJ-N와 NO3--N 농도를 분석한 결과 전기간 (Phase 1~3) 걸쳐 NOf-N는 검출되지 않았고 NOj-N는 1 mg/L 이하의 낮은 농도로 관찰되었다(Fig. 4). 즉 NOaN는 모두 질소가스로 환원되어 제거되었으며, NOj-N는 총괄 양론식 (1)에 따라 ANAMMOX반응에 의해 발생되었으나 양 론식을 이용하여 계산된 양에 비해서는 80% 가량 적었다.
- 그러나 ANAMMOX반응은 그 이전에 비하여 더디게 회복되었으며, 그 결과 NH:-N의 제거율은 약 5% 범위 로 매우 낮게 유지되었다. 이를 통하여 반응기 내로 산소가 단순 유입되더라도 ANAMMOX 미생물에 큰 영향을 미쳐 처 리효율을 감소시킨다는 것을 알 수 있었다.
- 4). 즉 NOaN는 모두 질소가스로 환원되어 제거되었으며, NOj-N는 총괄 양론식 (1)에 따라 ANAMMOX반응에 의해 발생되었으나 양 론식을 이용하여 계산된 양에 비해서는 80% 가량 적었다. 이는 NO3--N가 ANAMMOX반응에 따라 생성되었으나 탈 질균에 의해 일부 제거된 것으로 판단된다.
- 끼 또한 ANAMMOX미 생물로 분류되는 Planctomycetes문을 확인하였다. 즉 이때 이와 같은 ANAMMOX균의 존재로 인하여 암모늄(NHJ)의 제거율도 75%로 높았으며 아질산의 제거율도 100%로 나타나 질스가스의 생성이 가장 활발하였다.
- 25) 이는 Phase 후반에 일시적으로 유입된 외부 공기로 인하여 Phase 3의 ANAM- MOX반응이 부분적으로 지체되는 동안 반응기에 유입된 질 소가 산화될 수 있음을 의미하는 것이다. 한편 1개의 콜로 니는 ANAMMOX미생물로 분류되는 Planctomycetes문에 속 하는 것으로 분석되었으며, 반응기내 공기 유입으로 미생물 이 사멸한 이후에 EBCT 200일 가량이 지난 후에 분석한 결 과로서 Phase 2 후기에 발생된 반응기 내부 공기 유입에 의한 미생물 증 변화의 영향이 감소되어 ANAMMOX반응이 다시 회복되고 있음을 입증하였다.
- 8). 한편 메탄균의 활성이 감소하고 ANAMMOX균 또는 탈질균이 우점화되어 질소가스의 발생 비율은 점점 증가하여 전체 가스량의 95% 이상을 차지하였다. 이산화탄소는 전혀 생성되지 않았으며 산소는 1~4% 정도로 존재하는 것으로 나타났다.
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