액상 정액의 보존 기간이 정자 기능 및 정자염색질 구조 분석에 미치는 영향과 인공수정 분만율과의 상관관계 Effect of Storage Times on Sperm Function, Sperm Chromatin Structure Assay (SCSA) and Correlations Between Fertility and SCSA in Boars원문보기
본 연구는 인공수정 센터에서 이용되고 있는 종모돈의 인공수정 분만율의 차이를 기준으로 하여 정액의 보존 일에 따른 정자의 생존율, CASA, HOST, IVP 및 SCSA를 조사하여 이들 정자의 분석법들과 인공수정 분만율과의 상관관계를 조사하여 종모돈의 수정 능력을 예측할 수 있는 정액 평가법을 개발하고자 실시하였다. 종모돈의 액상정액을 대상으로 CASA, HOST, IVP 및 SCSA 기법을 적용한 정액의 평가 결과는 다음과 같았다. 정액의 보존 일별 HOST 결과는 보존 일이 경과함에 따라 유의적으로 감소하였고(P<0.05), IVP 결과 난자 당 침투 정자 수는 보존 3일째에 유의적으로 감소하였다(P<0.05). 보존 0일과 6일에 HOST는 분만율이 80% 이상인 종모돈 군이 70% 미만인 종모돈 군 보다 유의적으로 높았고, 3일에서는 80% 이상인 종모돈 군이 다른 종모돈 군에 비하여 높았다(P<0.05). IVP는 보존 0일에 분만율이 80% 이상인 종모돈 군이 70% 미만인 종모돈 군보다 난자당 침투 정자 수가 유의적으로 많았다(P<0.05). %Red는 보존 0일과 3일에는 분만율이 80% 이상과 70% 미만인 종모돈 군 간에 유의적인 차이를 보였으나 보존 6일에서는 모든 종모돈 군간에 유의적인 차이가 있었다(P<0.05). %Red(r=0.79, P<0.01 ; r=0.86, P<0.01 ; r=0.88, P<0.01)는 정액의 보존 일이 증가함에 따라 분만율과의 부의 상관 계수가 증가하였다. 이상의 결과를 종합해 보면 SCSA는 정액의 수정 능력을 평가하는데 있어서 매우 유용한 방법이며, 정액의 보존 일은 여러 가지 정자 기능과 SCSA 결과에 크게 영향을 주는 것으로 나타났다. 정액의 수정 능력을 평가함에 있어서 정액의 보존 일령을 고려하고 정자 기능 검사와 SCSA를 병행하여 실시할 경우 종모돈의 수정 능력 평가 시 정확성을 더욱 높일 수 있는 유용한 방법이 될 수 있을 것으로 사료된다.
본 연구는 인공수정 센터에서 이용되고 있는 종모돈의 인공수정 분만율의 차이를 기준으로 하여 정액의 보존 일에 따른 정자의 생존율, CASA, HOST, IVP 및 SCSA를 조사하여 이들 정자의 분석법들과 인공수정 분만율과의 상관관계를 조사하여 종모돈의 수정 능력을 예측할 수 있는 정액 평가법을 개발하고자 실시하였다. 종모돈의 액상정액을 대상으로 CASA, HOST, IVP 및 SCSA 기법을 적용한 정액의 평가 결과는 다음과 같았다. 정액의 보존 일별 HOST 결과는 보존 일이 경과함에 따라 유의적으로 감소하였고(P<0.05), IVP 결과 난자 당 침투 정자 수는 보존 3일째에 유의적으로 감소하였다(P<0.05). 보존 0일과 6일에 HOST는 분만율이 80% 이상인 종모돈 군이 70% 미만인 종모돈 군 보다 유의적으로 높았고, 3일에서는 80% 이상인 종모돈 군이 다른 종모돈 군에 비하여 높았다(P<0.05). IVP는 보존 0일에 분만율이 80% 이상인 종모돈 군이 70% 미만인 종모돈 군보다 난자당 침투 정자 수가 유의적으로 많았다(P<0.05). %Red는 보존 0일과 3일에는 분만율이 80% 이상과 70% 미만인 종모돈 군 간에 유의적인 차이를 보였으나 보존 6일에서는 모든 종모돈 군간에 유의적인 차이가 있었다(P<0.05). %Red(r=0.79, P<0.01 ; r=0.86, P<0.01 ; r=0.88, P<0.01)는 정액의 보존 일이 증가함에 따라 분만율과의 부의 상관 계수가 증가하였다. 이상의 결과를 종합해 보면 SCSA는 정액의 수정 능력을 평가하는데 있어서 매우 유용한 방법이며, 정액의 보존 일은 여러 가지 정자 기능과 SCSA 결과에 크게 영향을 주는 것으로 나타났다. 정액의 수정 능력을 평가함에 있어서 정액의 보존 일령을 고려하고 정자 기능 검사와 SCSA를 병행하여 실시할 경우 종모돈의 수정 능력 평가 시 정확성을 더욱 높일 수 있는 유용한 방법이 될 수 있을 것으로 사료된다.
This study was designed to evaluate the changes in sperm motility, viability, HOST(hypo-osmotic swelling test), IVP(in vitro penetration), SCSA(sperm chromatin structure assay) during storage of liquid semen collected from boars with different farrowing rates using AI, and to find the relationship b...
This study was designed to evaluate the changes in sperm motility, viability, HOST(hypo-osmotic swelling test), IVP(in vitro penetration), SCSA(sperm chromatin structure assay) during storage of liquid semen collected from boars with different farrowing rates using AI, and to find the relationship between boar fertility through AI and sperm diagnostic parameters during semen storage. The results of HOST were significantly decreased according to the increasing of in semen storage days and the results of IVP were significantly decreased at 3 days of semen storage (P80%, 7080% and <70% farrowing rate group at semen storage day 6(P<0.05). The correlation coefficients between the %Red and farrowing rate were increased according to the semen storage. In conclusion, these results suggest that the sperm parameters evaluated in these studies may be useful indicators to predict the fertility of AI and evaluate the semen quality in boars.
This study was designed to evaluate the changes in sperm motility, viability, HOST(hypo-osmotic swelling test), IVP(in vitro penetration), SCSA(sperm chromatin structure assay) during storage of liquid semen collected from boars with different farrowing rates using AI, and to find the relationship between boar fertility through AI and sperm diagnostic parameters during semen storage. The results of HOST were significantly decreased according to the increasing of in semen storage days and the results of IVP were significantly decreased at 3 days of semen storage (P80%, 7080% and <70% farrowing rate group at semen storage day 6(P<0.05). The correlation coefficients between the %Red and farrowing rate were increased according to the semen storage. In conclusion, these results suggest that the sperm parameters evaluated in these studies may be useful indicators to predict the fertility of AI and evaluate the semen quality in boars.
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문제 정의
본 연구는 인공수정 센터에서 이용되고 있는 종모돈의 인공수정 분만율의 차이를 기준으로 하여 정액의 보존 일에 따른 정자의 생존율, CASA, HOST, IVP 및 SCSA를 조사하여 이들 정자의 분석법들과 인공수정 분만율과의 상관관계를 조사하여 종모돈의 수정 능력을 예측할 수 있는 정액 평가법을 개발하고자 실시하였다. 종모돈의 액상정액을 대상으로 CASA, HOST, IVP 및 SCSA 기법을 적용한 정액의 평가 결과는 다음과 같았다.
최근에는 SCSA를 이용한 연구를 통하여 가축에서 정자 염색질의 안정성과 수태율과의 높은 상관성이 보고되고 있으며, 번식 저해 물질들의 동물 독성 시험 및 정액 보존법 개발 등의 분야에서 SCSA가 유용한 방법으로 활발히이용되고 있다(Evenson 등, 1991, 1994, 2002 ; Spana 등, 1998 ; Love 등, 2002 ; Angelopous, 1998). 본 연구는 인공수정에 사용되는 종모돈의 액상 정액을 대상으로 보존 일에 따라 정자의 운동성, 생존율, HOST, 미성숙 난자 침투능력(IVP) 및 SCSA를 시행하여 인공수정에 이용된 정액의 분만율에 대한 예측도를 비교 분석하고 상관관계를 규명함으로써, 각 검사법간의 상호 보완성 여부와 인공수정 시 수태율 향상을 위한 기술 개발에 유용성을 알아보기 위하여 시행하였다.
제안 방법
5ml eppendorp tube에 담아 500ug 에서 5분간 원심 분리하여 상층액을 버리고 삼투압 75mOsm/kg으로 제조된 용액 1ml과 정액 10ul를 혼합하여 37 의 항온수조 내에서 5분간 배양시켰다. 10ul를 slide glass에 놓고 위상차 현미경하에서 200개 이상의 정자를 정자 미부가 변화된 정자의 비율은 판독한 후 정자의 총수에서 미부가 swelling된 비율로 계산하였다 (Jeyendran 등, 1984).
7ul와 PI 2ul를 넣어 혼합하였다. 37 의 heating block에 15분간 배양시킨 후 미리 3 6 로 배양된 D-PBS(Gibco, BRL USA)로 2 번 세척을 한 다음 10ul를 slide에 취하여 slide당 최소 200개 이상의 정자를 형광 현미경 (H600 AFL 50/100 ; Hund Wetzlar, Germany) 에서 관찰하였다.
Parameter는 Forward Scatter, Side Scatter를 이용하여 초기 설정을 조절 하였고 Fluorescence 는 525 BP filter(green) 및 675 BP filter(red)와 550 DL을 이용하여 측정하였고, 분석 자료는 List mode file로 저장하였다.
at histogram(Fig. 2a)에서는 COMP a t(at기준치 값의 주 집단으로부터 벗어난 high red fluorescence를 갖는 정자 비율)와 SD at(전체 at 기준치로 계산된 at 기준치의 표준 편차)를 계산하였고, red fluorescence histogram (Fig. 2b)에서는 % Red (red fluorescence 상에서 주 집단으로부터 벋어난 정자의 비율)와 % PeakR(peak channel로 부터 high red fluorescence를 갖는 정자의 비율)을 계산하였다(Bochenek 등, 2001).
54mM glucose)로 3 4회 세척하여 준비하였다. 보존 일령에 따른 액상 정액을 대상으로 modified M199(12% FCS, 0.91mM sodium pyruvate, 3.05mM glucose, 2.92mM calcium lactate, 50IU/ml penicillin G and 30ug/ml streptomycin sulphate, pH 7.8)로 희석하여 50u g에서 3분간 원심 분리하고 상층에 있는 운동성 정자를 분리한 후 200ug에서 3분간 원심분리하여 정자 괴를 2u107cell/ml 농도로 재 부유하였다. 체외수정은 2u107cell/ml 농도의 정액에 well당 15개의 미성숙 난포란을 넣고 16-18시간 동안 39 , 100% 습도, 95% 공기, 5% CO2 배양기에서 배양하였다(Martinez 등, 1996).
액상 정액은 17 보관고에 담아 실험실로 운반하였고 17 에서 6일간 보존하면서 제조 당일, 3일 및 6일에 정액 성상 및 정자의 기능검사를 실시하였다. SCSA를 위한 정액 sample 은 각 보존일 별로 정액의 일부를 0.
자료 분석 전에 정자를 제외한 기타 세포들은 Red-green fluorescence cytogram에서 Fig. 1과 같이 제거하였고 구조적 이상을 갖는 Chromatin 의 비율은 분석된 각각의 정자들로부터 얻어진 at 값[red(denatured DNA)/[green (native DNA)- red fluorescence]에 기초하여 계산하였다. 각각의 시료로부터 얻은 List mode filee WinList 5.
염색되는 것으로 구분하였다. 정자 생존율은 총 관찰된 정자 중 SYBR-14로 염색된 정자의 비율로 계산하였다.
정자 운동성 양상 분석(CASA ; computerassisted sperm analysis)은 정액 1.5ml을 취하여 37 수조에서 30분간 배양시키고 37 로 예열된 Makler counting chamber(Sefi-Medical, Israel) 위에 정액 10ul을 떨어뜨린 후 CCD 카메라 (Toshiba, Japan)가 부착된 광학 현미경(Olympus, Japan)에 연결된 SAIS system(Medical Supply Co., Ltd., Korea)을 이용하여 분석하였다. 본 연구에서 사용된 CASA의 초기 설정은 Zeng 등 (2001)의 방법에 준하여 실시하였다.
종모돈을 인공수정 후 분만율에 따라 3개의 종모돈 군( 80% 이상, 80-70% 및 70% 미만)으로 나누어 정액의 운동성 양상 분석(CASA), 정자 기능 검사 및 염색질 구조 분석(SCSA) 결과는 Table 1과 2와 같다. 분만율에 따른 종모돈 군에서 운동성은 각각 83.
체외수정이 종료된 난포란은 난구세포와 투명 대 표면에 부착된 정자를 제거하고 slide glass 위에서 ethanol : acetic acid (3:1 v/v) 용액에서 24시간 이상 고정한 후 1% lacmoid 용액으로 염색하여 phase contrast microscope 위에서 400 배율로 검경하여 난자 내에 침투한 정자의 수를 조사하였다.
대상 데이터
공시 종모돈은 돼지 인공수정 센터 2곳에서 보유하고 있는 15개월령 이상의 종모돈중 인공수정 수태 성적이 존재하는 개체 38 두(듀록 6두, 요크셔 2두, 랜드레이스 30두) 를 공시하였고, AI센터로부터 채취 당일 BTS 희석액으로 제조된 시판용 액상정액을 공시하였다.
5g/ 의 sodium chloride, pencillin 또는 hostacillin을 첨가한 생리 식염수에 담아 실험실로 운반하였다. 미성숙 난포란은 18-gauge 주사기로 난소의 난포 직경이 2 6mm인 포상 난포에서 난포 액과 함께 채취하였고, 난소로부터 채취한 난포란은 modified PBS(4mg/ml BSA, 0.34mM pyruvate, 5.54mM glucose)로 3 4회 세척하여 준비하였다. 보존 일령에 따른 액상 정액을 대상으로 modified M199(12% FCS, 0.
살아있는 정자는 SYBR-14 염색에서 녹색으로 보이는 것, 죽은 정자는 PI 염색에서 붉은색으로 염색되는 것으로 구분하였다. 정자 생존율은 총 관찰된 정자 중 SYBR-14로 염색된 정자의 비율로 계산하였다.
데이터처리
얻어진 결과에 대한 통계적 분석은 SAS의 GLM(General Linear Model)을 이용하여 분석하였고, 각 항목간의 상관은 Pearson's Correlation Test를 실시하였고, 각 처리 구간의 유의성 검정은 Duncan's multiple range test를 실시하였다.
이론/모형
HOST는 17 정액 보관고에 저장된 액상정액을 대상으로 제조 당일, 3일, 6일에 Jeyendran (1984) 등의 방법에 준하여 실시하였다. 저 삼투압 용액은 BTS를 증류수와 1 : 3으로 희석하여 삼투압이 75mOsm/kg 되게 용액을 제조하였다(Perez-Llano 등, 2001).
SCSA를 위한 정자 처리와 염색은 Evenson (1990)의 방법에 준하여 실시하였다.
, Korea)을 이용하여 분석하였다. 본 연구에서 사용된 CASA의 초기 설정은 Zeng 등 (2001)의 방법에 준하여 실시하였다.
4. 정자의 생존율 측정
정자의 생존율은 Live/dead Sperm Viability Kit(Molecular Probes, USA)를 이용하여 Garner 와 Johnson(1995)의 방법에 준하여 실시하였다.
성능/효과
05). %Red 값은 종모돈군별로 각각 0.9, 2.5 및 5.3으로 분만율이 낮아짐에 따라 변성된 DNA의 비율이 증가하였고, 분만율이 가장 낮은 종모돈 군과 높은 군 간에는 유의적 차이가 있었으나(P<0.05), 분만율이 70- 80%인 종모돈 군은 다른 군과 유의적 차이가 없었다. %Peak red 값은 각각 64.
05). %Red는 보존 0일과 3일에는 분만율이 80% 이상과 70% 미만인 종모돈 군 간에 유의적인 차이를 보였으나 보존 6일에서는 모든 종모돈 군간에 유의적인 차이가 있었다(P<0.05). %Red(r=00.
HOST 결과 swelling된 정자는 각각 74.5%, 67.8% 및 55.0%로 분만율이 낮아짐에 따라 swelling된 정자의 비율도 낮아졌고, 분만율이 가장 낮은 종모돈 군(70% 미만)과 높은 종모돈군( 80% 이상)간에는 유의적 차이가 있었으나 (P<0.05) 70-80%인 종모돈 군은 다른 종모돈군과의 유의성은 없었다(P<0.05). 미성숙 난포란 침투 검사(IVP)를 실시한 결과 난자당 침투정자 수는 16.
정액의 보존에 따른 정자 기능 검사와 SCSA 변화는 Table 4와 같다. HOST 결과는 액상 정액 제조 후 0, 3 및 6일에 65.3%, 49.7% 및 31.9%로 보존 일이 증가함에따라 유의적으로 감소하였다(P<0.05). IVP 결과에서 난자당 침투 정자 수는 제조 당일에 1 1.
HOST 결과는 정액 보존 0일과 6일에는 분만율이 80% 이상인 종모돈 군과 70% 미만인 군 간에 유의적 차이를 보였고, 보존 후 3일에서는 80% 이상인 종모돈 군이 다른 군에 비해 유의적으로 높았다(P<0.05).
IV.P 결과는 종모돈 군에서 각각 보존 0일에는 16.3, 11.2 및 5.9로 분만율이 80% 이상인군과 70-80%인 군이 70% 미만인 군과 비교해 유의적으로 높았다(P<0.05). 그러나 보존 후 3 일과 6일에는 처리군 간에 유의적인 차이는 없었다.
05). IV.P 는 보존 0일에 분만율이 80% 이상인 종모돈군이 70% 미만인 종모돈 군보다 난자당 침투정자 수가 유의적으로 많았다(P<0.05). %Red는 보존 0일과 3일에는 분만율이 80% 이상과 70% 미만인 종모돈 군 간에 유의적인 차이를 보였으나 보존 6일에서는 모든 종모돈 군간에 유의적인 차이가 있었다(P<0.
05). IVP 결과에서 난자당 침투 정자 수는 제조 당일에 1 1.3, 3일 6.5 및 6일 3.8로 보존 후 3일째에 유의적으로 감소하였고(P<0.05), 제조 후 3일과 6일의 정액에서는 유의적인 차이는 인정되지 않았다. SCSA 결과는 보존 일이 증가함에 따라 % Red 값(3.
05), 제조 후 3일과 6일의 정액에서는 유의적인 차이는 인정되지 않았다. SCSA 결과는 보존 일이 증가함에 따라 % Red 값(3.6, 3.7 및 4.7)은 증가하는 경향을 보였으나 통계적 유의성은 인정되지 않았다. %Peak red 값도 제조 당일, 3일 및 6일에 65.
본 연구에서 분만율에 따른 정자의 운동성을 분석한 결과 분만율에 따른 종모돈 군간에는 유의적인 차이는 없었다. 그러나 HOST 결과 팽창된 정자의 비율은 분만율이 높았던 종모돈 군에서 분만율이 낮았던 군과 비교하여 유의적으로 높았으며, 정액의 보존 일이 증가함에 따라 팽창된 정자의 비율이 유의적으로 감소되는 결과를 나타냈다. 이와 같은 결과는 Gadea(1998) 등이 수태율을상, 중, 하로 나누어 실시한 결과 종모돈 간의차이가 있었다는 연구 결과와 Perez-Llano 등 (2001)이 288마리의 암퇘지에 인공수정을 실시하여 얻은 종모돈의 수태율을 HOST 결과와 비교한 연구에서 팽창된 정자의 비율이 수태율과 높은 상관관계가 있었다는 보고와 유사한 결과였다.
05). 그러나 보존후 6일에는 3개 종모돈 군에서 각각 1.8, 4.0, 8.3으로 분만율이 낮아짐에 따라 %Red 값은 높아졌고, 모든 종모돈 군간에 유의적인 차이를 나타냈다(P<0.05). 정액의 보존에 따른 정자기능 검사 및 SCSA 결과와 분만율 간의 상관을 살펴본 결과는 Table 6과 같다.
또한 신선 정액과 15 에서 보존하였을때에 HOST는 보존 일이 증가하면 유의적으로 떨어진다는 보고와도 일치하는 결과 이었다(Van 등, 1986). 그러나 본 연구에서 HOST 결과를 통하여 분만율에 근거한 상, 중, 하 종모돈 군중 분만율이 가장 높았던 군과 가장 낮았던군에서 차이가 관찰되었으며 분만율이 중간이었던 종모돈 군과의 차이는 관찰되지 않았다. 따라서 HOST 단일 분석법만을 사용할 경우 종모돈의 수정 능력을 정밀하게 분석하는 데는 정확도가 다소 저하되는 것으로 사료되었으며, 정자의 기능적인 측면을 좀 더 보완할수 있는 방법의 추가가 필요함을 알 수 있었다.
05). 미성숙 난포란 침투 검사(IVP)를 실시한 결과 난자당 침투정자 수는 16.3, 11.8 및 5.9로 분만율이 70% 미만인 종모돈이 다른 종모돈 군들에 비해 유의적으로 낮았다(P<0.05). %Red 값은 종모돈군별로 각각 0.
05). 보존 0일과 6일에 HOST는 분만율이 80% 이상인 종모돈군이 70% 미만인 종모돈 군 보다 유의적으로 높았고, 3일에서는 80% 이상인 종모돈 군이다른 종모돈 군에 비하여 높았다(P<0.05). IV.
IVP를 이용한 정자의 수정능력 평가시 난자 내 정자의 침투율과 난자당평균 침투 정자 수를 검사할 수 있으며, 이와같은 분석 결과들과 수정 능력 간에 높은 상관관계가 있음이 보고되었다(Gadea 등, 1998, 2000). 본 연구에서 IVP 결과는 인공수정 후분만율이 높은 종모돈 군과 낮은 종모돈 군에서 유의적인 차이를 보였고, 분만율과 유의한 상관관계를 나타냄에 따라 IVP 결과와 종모돈의 수정 능력 간에 밀접한 상관성이 있음을 알수 있었다. 본 연구의 결과는 소와 돼지에서 IVP 결과와 비재발정율(non-return rates) 간에높은 상관성(r=0.
매우 중요하다. 본 연구에서 분만율에 따른 정자의 운동성을 분석한 결과 분만율에 따른 종모돈 군간에는 유의적인 차이는 없었다. 그러나 HOST 결과 팽창된 정자의 비율은 분만율이 높았던 종모돈 군에서 분만율이 낮았던 군과 비교하여 유의적으로 높았으며, 정액의 보존 일이 증가함에 따라 팽창된 정자의 비율이 유의적으로 감소되는 결과를 나타냈다.
Table 1과 2와 같다. 분만율에 따른 종모돈 군에서 운동성은 각각 83.5%, 81.9% 및 79%로 분만율이 낮아짐에 따라 정액의 운동성도 낮아졌으나 처리군 간에 유의적인 차이는 나타나지 않았다.
72)이 있었다는 보고들과 유사하였다. 분만율이 다른 종모돈 군의 정액보존 일별 SCSA 결과는 보존 일이 증가함에 따라 % Red 값이 증가하는 경향을 나타냈고, 분만율과의 상관관계는 보존 일이 길어짐에 따라 부의 상관관계가 높아졌다. 또한 보존 6일에는 % Red 값이 분만율이 높았던 군에서 낮았던 군 순으로 유의적으로 증가되는 결과를 보였다.
이상의 결과를 종합해 보면 HOST, IVP 및 SCSA의 분석 결과들은 종모돈의 수정 능력과 밀접한 상관성이 있었으며 각각의 방법을 이용한 정액 분석 시 정액의 보존 일에 따라 결과의 민감도에 있어서 차이가 나타남을 확인할수 있었다. 본 연구에서 적용된 기법들은 추후종모돈의 수정 능력을 평가하고 정액 보존을 위한 방법 개발에 유용한 평가 방법으로 사용될 수 있을 것으로 사료되었다.
이상의 결과를 종합해 보면 SCSA는 정액의 수정 능력을 평가하는데 있어서 매우 유용한 방법이며, 정액의 보존 일은 여러가지 정자기능과 SCSA 결과에 크게 영향을 주는 것으로 나타났다. 정액의 수정 능력을 평가함에 있어서 정액의 보존 일령을 고려하고 정자 기능 검사와 SCSA를 병행하여 실시할 경우 종모돈의 수정 능력 평가 시 정확성을 더욱 높일 수 있는 유용한 방법이 될 수 있을 것으로 사료된다.
또한 보존 6일에는 % Red 값이 분만율이 높았던 군에서 낮았던 군 순으로 유의적으로 증가되는 결과를 보였다. 이와 같은 결과를 토대로 정자의 DNA 가 외부 환경의 영향에 의해 손상을 입고, 보존 일이 증가함에 따라 DNA 손상 정도가 증가되며, 분만율이 낮았던 종모돈의 정액이 분만율이 높았던 종모돈의 정액과 비교하여 외부환경 요인에 더 큰 영향을 받을 수 있음을 알수 있었다. 이것은 Ellington 등(1998, 1999)이 염색질의 변성은 온도에 의존적으로 일어나지 않으며 난관 세포와 38.
22로 나타났다. 인공수정 분만율과 HOST 결과 (r=0.69, P<0.05 ; r=0.80, P<0.01 ; r=0.55, P<0.05)와의 상관 계수는 보존 3일에서 가장 높게 나타났고, IVP (r=0.79, P<0.01 ; r=0.51, P<0.05 ; r= 0.38, P<0.05)와의 상관은 보존 일이 경과함에 따라 상관 계수가 감소하였다. 그러나 인공수정 분만율과 %Red(r=0.
정액의 보존에 따른 정자기능 검사 및 SCSA 결과와 분만율 간의 상관을 살펴본 결과는 Table 6과 같다. 인공수정을 통한 분만율과 운동성과의 상관은 보존 후 0 일, 3일, 6일에서 각각 0.36, 0.04, 0.22로 나타났다. 인공수정 분만율과 HOST 결과 (r=0.
정액의 보존 일별 HOST 결과는 보존 일이 경과함에 따라 유의적으로 감소하였고(P<0.05), IVP 결과 난자 당 침투 정자 수는 보존 3일째에 유의적으로 감소하였다(P<0.05). 보존 0일과 6일에 HOST는 분만율이 80% 이상인 종모돈군이 70% 미만인 종모돈 군 보다 유의적으로 높았고, 3일에서는 80% 이상인 종모돈 군이다른 종모돈 군에 비하여 높았다(P<0.
정액의 보존 일에 따른 운동성과 생존율을 측정한 결과는 Table 3에서 보는 바와 같이 운동성은 보존 일이 0, 3, 6일일 때에 81.7%, 73.0% 및 58.9%로서 유의적으로 감소하였다 (P<0.05). VCL, VSL, VAP, LIN, ALH는 보존일이 경과함에 따라 감소하였으나 통계적 유의성은 인정되지 않았다.
VCL, VSL, VAP, LIN, ALH는 보존일이 경과함에 따라 감소하였으나 통계적 유의성은 인정되지 않았다. 정액의 생존율은 제조당일 87.7%에서 3일 79.3% 및 6일 69.3%로 정액의 보존 일이 증가함에 따라 유의적으로 감소하였다(P<0.05). 정액의 보존에 따른 정자 기능 검사와 SCSA 변화는 Table 4와 같다.
정자의 운동성은 보존 일에 따른 종모돈 군간의 유의적 차이는 없었다. 정자의 생존율은 보존 0일 및 3일에서 분만율에 따른 종모돈 군간에 유의적인 차이는 없었으나, 보존 후 6일에서 분만율이 80% 이상, 80-70% 및 70% 미만인 종모돈 군에서 각각 79.3%, 67.6% 및 59.0%로 분만율이 80% 이상인 종모돈 군과 70% 미만인 종모돈 군간에 유의적 차이를 보였다(P<0.05).
후속연구
그러나 본 연구에서 HOST 결과를 통하여 분만율에 근거한 상, 중, 하 종모돈 군중 분만율이 가장 높았던 군과 가장 낮았던군에서 차이가 관찰되었으며 분만율이 중간이었던 종모돈 군과의 차이는 관찰되지 않았다. 따라서 HOST 단일 분석법만을 사용할 경우 종모돈의 수정 능력을 정밀하게 분석하는 데는 정확도가 다소 저하되는 것으로 사료되었으며, 정자의 기능적인 측면을 좀 더 보완할수 있는 방법의 추가가 필요함을 알 수 있었다. 체외수정은 수정 과정의 여러 단계를 검사할 수 있는 방법이며 정자의 수정 능과 관련된 많은 정보를 얻는데 유용한 방법으로 알려져있다(Ivanova 등, 1993).
있었다. 본 연구에서 적용된 기법들은 추후종모돈의 수정 능력을 평가하고 정액 보존을 위한 방법 개발에 유용한 평가 방법으로 사용될 수 있을 것으로 사료되었다.
정액의 수정 능력을 평가함에 있어서 정액의 보존 일령을 고려하고 정자 기능 검사와 SCSA를 병행하여 실시할 경우 종모돈의 수정 능력 평가 시 정확성을 더욱 높일 수 있는 유용한 방법이 될 수 있을 것으로 사료된다.
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