Aucuba japonica has variable pharmacological effects such as hepatoprotective, choleretic, hemodynamic, antimicrobial, and anti-inflammatory activities. This study was performed to investigate the effects of Aucuba japonica extract on oral wound healing. Aucubin was extracted from Aucuba japonica, a...
Aucuba japonica has variable pharmacological effects such as hepatoprotective, choleretic, hemodynamic, antimicrobial, and anti-inflammatory activities. This study was performed to investigate the effects of Aucuba japonica extract on oral wound healing. Aucubin was extracted from Aucuba japonica, and injected on either side of buccal mucosa of male mice. Artificial full thickness wounds were made on the site with 1.5 mm biopsy punch under sterile technique. The specimens had taken on day 1, 3, and 5 with 4 mm biopsy punch. Light microscopic examination and quantitative histologic analysis were performed for reepithelization, inflammatory cell infiltration. Reepithelization of the aucubin (0.1%) group was earlier than the control group. And the number of inflammatory cells of the aucubin group was lesser than the control group. In view of the results so far achieved, the aucubin extracted from Aucuba japonica may be useful for oral wound healing and it can be applied as a topical agent on the oral wound. Further research should be performed on the mechanism of aucubin on oral wound healing and proper formulation for effective topical agents.
Aucuba japonica has variable pharmacological effects such as hepatoprotective, choleretic, hemodynamic, antimicrobial, and anti-inflammatory activities. This study was performed to investigate the effects of Aucuba japonica extract on oral wound healing. Aucubin was extracted from Aucuba japonica, and injected on either side of buccal mucosa of male mice. Artificial full thickness wounds were made on the site with 1.5 mm biopsy punch under sterile technique. The specimens had taken on day 1, 3, and 5 with 4 mm biopsy punch. Light microscopic examination and quantitative histologic analysis were performed for reepithelization, inflammatory cell infiltration. Reepithelization of the aucubin (0.1%) group was earlier than the control group. And the number of inflammatory cells of the aucubin group was lesser than the control group. In view of the results so far achieved, the aucubin extracted from Aucuba japonica may be useful for oral wound healing and it can be applied as a topical agent on the oral wound. Further research should be performed on the mechanism of aucubin on oral wound healing and proper formulation for effective topical agents.
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문제 정의
본 연구에서는 식나무 잎으로부터 추출한 aucubin의 구강 점막 창상 치유 촉진 효과를 확인하기 위하여 창상부 면적과 염증세포 수를 조직학적으로 분석하였다. 그 결과 식나무잎에서 추출, 정제된 0.
그러나 치료효과를 검증하기 위해서는 in Wvo와 in 에서 aucubin에 의한 구강점막 창상 치유 기전을 규명해야한다. 이에 본 실험에서는 그 첫 단계로 식나무 잎에서 추출한 aucubin을 구강 점막에 주사하고 창상을 full thickness로 전 층 피부 창상(full thickness wound) 유도하여 창상부 면적과 창상부로 유입된 염증세포 분석을 통하여 조직 형태 계측 학적으로 창상 치유 촉진 효과를 보고자 하였다.
제안 방법
Aucubin의 염증 억제 효과를 평가하기 위해 치유중인 조직에서의 염증세포 분포를 관찰하였다. 창상부의 좌측, 중앙, 우측에서 염증세포의 수를 세었다.
포매된 조직은 microtome (Reichet-Jung 820)으로 6-7 ㎛ 두께의 절편을 제작한 다음 hematoxylin and eosin (H&E), Giemsa 염색을 통하여 조직변화를 확인하였다. 그리고 aucubin 투여군 과대조군 사이의 창상부 면적과 창상부로 유입된 염증세포를 영상분석 프로그램을 이용한 조직측정법으로 관측 및 비교하였다. 창상부 면적은 치유중인 상피와 결합조직의 변연부를 따라 창상 면적을 측정하였고, 염증세포의 수는 창상부의 좌측, 중앙, 우측에서 측정하였다.
창상부 면적은 치유중인 상피와 결합조직의 변연부를 따라 창상 면적을 측정하였고, 염증세포의 수는 창상부의 좌측, 중앙, 우측에서 측정하였다. 그리고 염색된 조직 절편들은 현미경에 부착된 디지털 카메라로 촬영 및 분석하였다.
창상을 유도하고 black margin marker (StatLab Medical Products, Lewisville, TX)를 이용하여 창상 유도부를 표시하였다. 대조군은 어떠한 처치도 하지 않은 상태에서 양쪽 볼 점 막에 1.5 mm biopsy punch로 창상을 유도한 후, black margin marker로 표시하였다. 창상 유도 후 1, 3 및 5일에 4 mm biopsy punch를 이용하여 창상부의 조직을 채취하였다.
본 실험은 식나무 잎에서 추출한 0.1% aucubin을 구강 점막에 주사하고 상처를 full thickness로 전층피부창상을 유도한 후 1, 3 및 5일째에 조직을 채취하여 재상피화 면적과 창상 부위로 유입된 염증세포 분석을 통하여 조직학적 상처 회복 촉진 효과를 평가하였다.
본 연구에서 사용된 잎은 전남대학교 보길도 연습림에서 자생하는 식나무#로부터 채집하였고, 전남대학교 생명과학기술학부 생물공학 전공 실험실에서 Chang 등(6)의 방법을 응용하여 aucubin을 추출, 정제하였다. 추출된 aucubin sample이 authentic sample (Fluka, Switzerland)과 일치함을 TLC 상에서 검증하였다(Fig 1).
실험군과 대조군은 다시 창상 유도 후 희생시키는 시기를 기준으로 1, 3 및 5일군(n=6)으로 나누었다. 예비사육 및 실험 전 기간동안 사육환경을 온도 23±2℃, 상대습도 50±10% 로 유지하고 12시간의 명암주기가 유지되는 실내에서 사료와 식수를 자유로이 공급하였다.
실험군과 대조군은 다시 창상 유도 후 희생시키는 시기를 기준으로 1, 3 및 5일군(n=6)으로 나누었다. 예비사육 및 실험 전 기간동안 사육환경을 온도 23±2℃, 상대습도 50±10% 로 유지하고 12시간의 명암주기가 유지되는 실내에서 사료와 식수를 자유로이 공급하였다.
5 mm biopsy punch로 창상을 유도한 후, black margin marker로 표시하였다. 창상 유도 후 1, 3 및 5일에 4 mm biopsy punch를 이용하여 창상부의 조직을 채취하였다. 채취된 조직의 모양이 흐트러지지 않도록 주의하여 10% formaldehyde에 고정시켰다.
창상 치유율을 평가하기 위해 치유중인 상피와 결합조직의 변연부를 따라 창상부의 면적을 측정하였다. 그 결과 1일 째에 대조군은 4.
그리고 aucubin 투여군 과대조군 사이의 창상부 면적과 창상부로 유입된 염증세포를 영상분석 프로그램을 이용한 조직측정법으로 관측 및 비교하였다. 창상부 면적은 치유중인 상피와 결합조직의 변연부를 따라 창상 면적을 측정하였고, 염증세포의 수는 창상부의 좌측, 중앙, 우측에서 측정하였다. 그리고 염색된 조직 절편들은 현미경에 부착된 디지털 카메라로 촬영 및 분석하였다.
5 mm biopsy punchS. 창상을 유도하고 black margin marker (StatLab Medical Products, Lewisville, TX)를 이용하여 창상 유도부를 표시하였다. 대조군은 어떠한 처치도 하지 않은 상태에서 양쪽 볼 점 막에 1.
체중 30 g 내외의 건강한 7주령의 ICR 수컷 마우스를 실험환경에 적응시키기 위하여 1주일의 적응기를 거친 후, aucubin이 구강점막 창상 치유에 미치는 효과를 보기 위하여 실험동물을 실험군(n=18)과 대조군(n=18)으로 나누었다. 실험군과 대조군은 다시 창상 유도 후 희생시키는 시기를 기준으로 1, 3 및 5일군(n=6)으로 나누었다.
방법을 응용하여 aucubin을 추출, 정제하였다. 추출된 aucubin sample이 authentic sample (Fluka, Switzerland)과 일치함을 TLC 상에서 검증하였다(Fig 1).
Louis) 에 포매하였다. 포매된 조직은 microtome (Reichet-Jung 820)으로 6-7 ㎛ 두께의 절편을 제작한 다음 hematoxylin and eosin (H&E), Giemsa 염색을 통하여 조직변화를 확인하였다. 그리고 aucubin 투여군 과대조군 사이의 창상부 면적과 창상부로 유입된 염증세포를 영상분석 프로그램을 이용한 조직측정법으로 관측 및 비교하였다.
대상 데이터
1 %로 하였다(18, 29). 실험동물은 ether를 이용하여 흡입마취 하였다. 실험군은 양쪽 볼 점막에 0.
데이터처리
각 군의 창상치유 면적과 염증세포의 수에 대한 평균과 표준편차를 구한 후, 이에 대한 유의성은 Student's t-test로 검정하였다.
성능/효과
염증세포 수를 조직학적으로 분석하였다. 그 결과 식나무잎에서 추출, 정제된 0.1% aucubin solution 투여군에서 창상부 면적과 염증세포 수가 현저히 감소하였다. 이상의 결과를 통해 식나무의 잎으로부터 추출한 0.
1% aucubin 용액이 구강 점막 상처의 염증을 억제하였고, 초기 재상피화와 기질 합성을 촉진시킴을 확인하였다. 이 결과는 기존에 시행된 대부분의 연구 결과들과 유사한 경향을 보였으며, aucubin의 국소 제제로의 유용 가능성을 확인시켜 주었다. 그러나 aucubin이 초기재상피화와 기질 합성을 촉진시키는 기전에 대해서는 아직 보고된 바 없다.
이상의 결과를 통하여 0.1% aucubin 용액이 구강 점막 상처의 염증을 억제하였고, 초기 재상피화와 기질 합성을 촉진시킴을 확인하였다. 이 결과는 기존에 시행된 대부분의 연구 결과들과 유사한 경향을 보였으며, aucubin의 국소 제제로의 유용 가능성을 확인시켜 주었다.
재상피화 면적을 측정한 결과 1일과 3일째에 aucubin 투여군이 대조군에 비해 창상부 면적이 현저히 감소되었으나, 5일째에는 별다른 차이를 보이지 않았다. 그러나 1일과 5일째를 비교한 결과 aucubin 투여군은 창상부가 유의성 있게 감소하였으나, 대조군에서는 유의성이 없었다.
치유중인 조직에서의 염증세포를 관찰한 결과 전반적으로 aucubin 투여군이 대조군에 비해 그 수가 적고, 특히 3일과 5일째에 염증세포 수의 현저한 감소를 관찰할 수 있었는데, 이는 aucubin의 항염 작용과 항균 작용에 기인한 것으로 보인다. 특히 Bermejo 등(2)에 의하면, aucubine iridoid glycosides 중에서도 arachidonic acid 대사과정 중 LTC4 분비 억제 효과가 뛰어나고, ibuprofen과 거의 비슷한 TXB2 분비 억제 효과를 갖고 있어 뛰어난 항염 효과를 나타낸다
후속연구
통해 형태와 증식, 이주 경향을 분석함으로써 세포 수준에서 aucubin의 효과를 확인하고자 한다. 그리고 aucubin 의 국소나 전신 제제로의 응용 여부는 aucubin이 생체에 미치는 영향의 기전적 연구가 선행된 후에 가능할 것으로 사료된다.
1% aucubin solution 투여군에서 창상부 면적과 염증세포 수가 현저히 감소하였다. 이상의 결과를 통해 식나무의 잎으로부터 추출한 0.1% aucubine 구강 점막 창상의 치유를 촉진시키는 효과를 가지고 있음을 확인할 수 있었으며, aucubin의 국소나 전신 제제로의 응용 여부는 aucubin이 생체에 미치는 영향의 기전적 연구가 선행된 후에 가능할 것으로 사료된다.
추후 본 연구를 바탕으로 aucubin이 재상피화와 혈관신생, MMP 활성에 미치는 영향을 연구하고 섬유아세포 초대 배양을 통해 형태와 증식, 이주 경향을 분석함으로써 세포 수준에서 aucubin의 효과를 확인하고자 한다. 그리고 aucubin 의 국소나 전신 제제로의 응용 여부는 aucubin이 생체에 미치는 영향의 기전적 연구가 선행된 후에 가능할 것으로 사료된다.
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