이온 통로 및 이온 농도의 변화는 수정 현상을 포함한 다양한 세포 기능에 중요한 역할을 한다. 그러나 이러한 이온의 변화가 포유동물 배의 발달과정에 어떻게 관여하는지에 대해서는 알려진 바가 적다. 본 연구에서는 생쥐난자가 수정 이후 배 발달 과정을 거치는 동안 나타나는 칼슘과 포타슘 이온의 변화를 전기생리학적 실험 기법과 공초점 현미경을 이용하여 조사하였다. 수정 시에 나타나는 일시적인 세포내 칼슘 농도 변화는 활성 전류(수정 전류)와 함께 동반되었다. 그러나 수정과 같은 극적인 현상이나 자극이 없는 시기에는 세포내 칼슘 농도가 배 발달 시기와 상관없이 일정한 수준으로 유지되었다. 이것은 세포내외의 칼슘 농도의 보상현상으로도 설명할 수 있을 것이다. 배 발달이 진행됨에 따라 난관액의 포타슘 농도는 계속 증가하여 8세포기 배에서는 난자보다 26% 증가하였다. 상실배, 포배기에서는 포타슘 농도가 감소하였다. 배 발달이 진행됨에 따라 주로 포타슘 이온에 의해 조절되는 막 전압은 탈분극되고, 칼슘 이온의 세포 안으로의 유입은 점점 감소하였다. 생쥐 난자에 5 mM의 칼슘을 처리하였을 때 막 전압은 일시적인 과분극 현상을 보이다가 회복되었다. 칼슘 유입에 따른 막 전압 변화에 관여하는 포타슘 통로를 확인하기 위하여 포타슘 통로 차단제를 전 처리한 후 칼슘을 처리한 결과, 칼슘만을 단독으로 처리한 결과와 유의한 차이를 보이지 않았다. 막 전압의 과분극 현상은 잘 알려진 포타슘 통로 차단제인 TEA에 억제되지 않았다. 그리고 small conductance $Ca^{2+}$-activated 포타슘 통로 차단제 인 apamin에 의해서도 억제되지 않았다. 따라서 생쥐 난자에서 과분극을 유발시키는 포타슘 통로는 TEA와 apamin에 억제되지 않는 다른 포타슘 통로로 생각된다. 이상의 결과로부터 배 발달 동안 변화되는 칼슘과 포타슘 이온은 수정 및 초기 배 발달에 중요한 인자로써 작용할 것으로 생각되며, two-pore domain 포타슘 통로가 난자의 막 전압 조절에 관여할 가능성을 제시한다.
이온 통로 및 이온 농도의 변화는 수정 현상을 포함한 다양한 세포 기능에 중요한 역할을 한다. 그러나 이러한 이온의 변화가 포유동물 배의 발달과정에 어떻게 관여하는지에 대해서는 알려진 바가 적다. 본 연구에서는 생쥐난자가 수정 이후 배 발달 과정을 거치는 동안 나타나는 칼슘과 포타슘 이온의 변화를 전기생리학적 실험 기법과 공초점 현미경을 이용하여 조사하였다. 수정 시에 나타나는 일시적인 세포내 칼슘 농도 변화는 활성 전류(수정 전류)와 함께 동반되었다. 그러나 수정과 같은 극적인 현상이나 자극이 없는 시기에는 세포내 칼슘 농도가 배 발달 시기와 상관없이 일정한 수준으로 유지되었다. 이것은 세포내외의 칼슘 농도의 보상현상으로도 설명할 수 있을 것이다. 배 발달이 진행됨에 따라 난관액의 포타슘 농도는 계속 증가하여 8세포기 배에서는 난자보다 26% 증가하였다. 상실배, 포배기에서는 포타슘 농도가 감소하였다. 배 발달이 진행됨에 따라 주로 포타슘 이온에 의해 조절되는 막 전압은 탈분극되고, 칼슘 이온의 세포 안으로의 유입은 점점 감소하였다. 생쥐 난자에 5 mM의 칼슘을 처리하였을 때 막 전압은 일시적인 과분극 현상을 보이다가 회복되었다. 칼슘 유입에 따른 막 전압 변화에 관여하는 포타슘 통로를 확인하기 위하여 포타슘 통로 차단제를 전 처리한 후 칼슘을 처리한 결과, 칼슘만을 단독으로 처리한 결과와 유의한 차이를 보이지 않았다. 막 전압의 과분극 현상은 잘 알려진 포타슘 통로 차단제인 TEA에 억제되지 않았다. 그리고 small conductance $Ca^{2+}$-activated 포타슘 통로 차단제 인 apamin에 의해서도 억제되지 않았다. 따라서 생쥐 난자에서 과분극을 유발시키는 포타슘 통로는 TEA와 apamin에 억제되지 않는 다른 포타슘 통로로 생각된다. 이상의 결과로부터 배 발달 동안 변화되는 칼슘과 포타슘 이온은 수정 및 초기 배 발달에 중요한 인자로써 작용할 것으로 생각되며, two-pore domain 포타슘 통로가 난자의 막 전압 조절에 관여할 가능성을 제시한다.
Ions play important roles in various cellular processes including fertilization and differentiation. However, it is little known whether how ions are regulated during early embryonic development in mammalian animals. In this study, we examined changes in $Ca^{2+}\;and\;K^+$ concentrations...
Ions play important roles in various cellular processes including fertilization and differentiation. However, it is little known whether how ions are regulated during early embryonic development in mammalian animals. In this study, we examined changes in $Ca^{2+}\;and\;K^+$ concentrations in embryos and oviduct during mouse early embryonic development using patch clamp technique and confocal laser scanning microscopy. The intracellular calcium concentration in each stage embryos did not markedly change. At 56h afier hCG injection when 8-cell embryos could be Isolated from oviduct, $K^+$ concentration in oviduct increased by 26% compared with that at 14h after injection of hCG During early embryonic development, membrane potential was depolarized (from -38 mV to -16 mV), and $Ca^{2+}$ currents decreased, indicating that some $K^+$ channel might control membrane potential in oocytes. To record the changes in membrane potential induced by influx of $Ca^{2+}$ in mouse oocytes, we applied 5 mM $Ca^{2+}$ to the bath solution. The membrane potential transiently hyperpolarized and then recovered. In order to classify $K^+$ channels that cause hyperpolarization, we first applied TEA and apamin, general $K^+$ channel blockers, to the bath solution. Interestingly, the hyperpolarization of membrane potential still appeared in oocytes pretreated with TEA and apamin. This result suggest that the $K^+$ channel that induces hyperpolarization could belong to another $K^+$ channel such as two-pore domain $K^+(K_{2P})$channel that a.e insensitive to TEA and apamin. From these results, we suggest that the changes in $Ca^{2+}\;and\;K^+$ concentrations play a critical role in cell proliferation, differentiation and reproduction as well as early embryonic development, and $K_{2P}$ channels could be involved in regulation of membrane potential in ovulated oocytes.
Ions play important roles in various cellular processes including fertilization and differentiation. However, it is little known whether how ions are regulated during early embryonic development in mammalian animals. In this study, we examined changes in $Ca^{2+}\;and\;K^+$ concentrations in embryos and oviduct during mouse early embryonic development using patch clamp technique and confocal laser scanning microscopy. The intracellular calcium concentration in each stage embryos did not markedly change. At 56h afier hCG injection when 8-cell embryos could be Isolated from oviduct, $K^+$ concentration in oviduct increased by 26% compared with that at 14h after injection of hCG During early embryonic development, membrane potential was depolarized (from -38 mV to -16 mV), and $Ca^{2+}$ currents decreased, indicating that some $K^+$ channel might control membrane potential in oocytes. To record the changes in membrane potential induced by influx of $Ca^{2+}$ in mouse oocytes, we applied 5 mM $Ca^{2+}$ to the bath solution. The membrane potential transiently hyperpolarized and then recovered. In order to classify $K^+$ channels that cause hyperpolarization, we first applied TEA and apamin, general $K^+$ channel blockers, to the bath solution. Interestingly, the hyperpolarization of membrane potential still appeared in oocytes pretreated with TEA and apamin. This result suggest that the $K^+$ channel that induces hyperpolarization could belong to another $K^+$ channel such as two-pore domain $K^+(K_{2P})$channel that a.e insensitive to TEA and apamin. From these results, we suggest that the changes in $Ca^{2+}\;and\;K^+$ concentrations play a critical role in cell proliferation, differentiation and reproduction as well as early embryonic development, and $K_{2P}$ channels could be involved in regulation of membrane potential in ovulated oocytes.
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문제 정의
지표로 작용할 수 있음을 시사한다. 그리고 본연구에서는 난자의 막 전압 조절에 two-pore domain 포타슘(K:2P)통로가 칼슘 통로와 함께 관여할 수 있음을 처음으로 제시한다.
이러한 일시적인 과분극 현상은 포타슘 통로에 의해 나타나는 것으로 알려져 있다. 본 연구에서는 어떠한 포타슘 통로가 막전압의 과분극 현상을 유발하는 지를 조사하고자 잘 알려진 포타슘 통로 차단제인 TEA를 처리하였다. 그리고 TEA에 의해 억제되지 않는 포타슘 통로(칼슘에 의해 활성화되는 small conductance 포타슘 통로)의 차단제 인 apamin을함께 처리하였다.
그러나 k2P 통로는 대표적인 포타슘 통로 개 방 억제제인 TEA(1 mM), Ba2+(1 mM)에 의해 통로 활성도가 억제되지 않고, 칼슘 의존성 포타슘 통로(Kca, SK)의 개방 억제제(apamin)에 의해서도 영향을 받지 않는 약리학적 특징을 보인다. 본 연구에서는 칼슘에 의해 유도되는 막전압의 과분 극 현상에 TEA와 apamin이 영향을 주지 못한다는데 근거하여 막전압 변화에 K2P 통로가 관여할 수 있음을 제시하였다. K2P 통로는 16종이 알려져 있으며(Kim, 2005), 그 중 TWIK-related spinal cord K* 통로(TRESK) 그룹은 세포 내 칼슘 농도의 증가에 의해 활성화되는 포타슘 통로이다 (Cziijak 등, 2004).
그러나 배발달에 따른 난관액내칼슘, 농도는 유의한 변화를 보이지 않았다. 이러한 결과는 난관 내 포타슘 농도가 배 발달에 중요하게 작용할 가능성을 제시한다. 난관 내 포타슘 농도의 변화가 난자의 안정막 전압에 관여할 것으로 생각되어, 난자 및 수정란에서 전류 고정법을 이용하여 막 전압을 기록하였다.
가설 설정
Representative Ca2+ oscillations during fertilization and activation current in mouse oocytes. A. Ca저 oscillation appeared by spermatozoa. The mouse oocytes were exposed to mouse spermatozoa for 30 min.
Ca2+ images in oocytes and embryos. B. Fluorescence intensity of Ca2+ changes. Each bar is the mean±SD, and the numbers inside the bar represent the number of eggs used.
Ca2+ hyperpolarized membrane potential of mouse oocytes. C. Effect of TEA on hyperpolarizaton of membrane potential in mouse oocytes. D.
제안 방법
실험용액은 1 ml/min의 속도로 관류시키며, 실온에서 실험을 진행하였다. Patch clamp 증폭기(CEZ-2100, Nihon Kohden, Japan)와 pClamp(V6.01, Axon, USA) 및 A/D & D/A converter(TL-1-125, Axon, USA)를 사용하여 막 전압 고정과 test pulse를 적용하였다. 막 전압은 -80 mV로 유지하고 -50 mV 부터 10 mV 간격으로 50 mV까지 250 ms의 탈분극 자극을 15초마다 한번씩 가하여 전류를 기록하였다.
막 전압은 -80 mV로 유지하고 -50 mV 부터 10 mV 간격으로 50 mV까지 250 ms의 탈분극 자극을 15초마다 한번씩 가하여 전류를 기록하였다. Patch clamp 증폭기를 통해서 나온 전류와 전압 신호는 digital oscilloscope(TDS 220, Tektronix, USA) 와 pen recorder (Harvard, England)로 관찰하고, 결과의 기록은 컴퓨터의 하드디스크에 저장하였다.
난자에 약물을 처리할 때는 난자가 움직이지 않도록 stock 용액을 이용하여 소량씩 점적하였다. Scanning 후에는 Fluoview(version 2.0, Olympus, Japan)를 이용하여 영상을 분석하였다.
hCG 처리 및 교미 후 난자, 접합자, 2세포기, 4 세포기, 8세포기, 상실배 및 포배가 회수될 수 있는 시기에 난관으로부터 배양액으로 세척된 난관 액을 채취하였다. hCG 처리 후 56시간(난관에서 8 세포기가 회수되는 시기) 까지는 포타슘 농도가 상승하다가 이미 수정란이 자궁으로 이동하였을 것으로 예상되는 시기(hCG 처리 후 64시간과 72시간)의 난관에서는 포타슘 농도가 감소하는 것을 볼 수 있다(Fig.
적출된 난관을 기본 배양액(M2)으로 세척한 다음 radiometer(ABL 505, Copenhagen)를 이용하여 세척용액에서 포타슘 농도를 측정하였다. hCG 호르몬을 처리한 후 14시간, hCG 처리와 동시에 교미를 시킨 후 20 시간, 24 시간, 33시간, 48시간, 64시간 그리고 72시간 후에 생쥐의 난관을 절단하여 포타슘 농도를 측정하였다.
과배란을 유도하기 위하여 암컷 생쥐(6주령)에5 IU의 PMSG(Denka Pharmaceutical Co., Kawasaki, Japan)를 복강 내 주사한 후 48시 간째 에 5 IU 의 hCG(Yuhan Co., Korea)를 역시 복강 내 주사하였다. 난자는 hCG 주사 후 14 시간째에 채란하였으며, 회수된 난자는 0.
TEA와 함께 small conductance 포타슘 통로의 억제제, apatnin을 처리한 결과 과분극의 정도가 다소 감소하는 경향을 보였다. 그러나 그 결과가 연속적인 칼슘 처리의 오차인지 실제적으로 apamin에 의한 영향인지를 확인하기 위하여 apamin 만을 단독으로 처리하였다. Apamin을 처리하였을 때 과분극의 정도에는 특별한 변화를 보이지 않았치만 apamin 처리 전의 막 전압으로 회복하는데 있어 다소 시간의 지연을 볼 수 있었다(Fig.
본 연구에서는 어떠한 포타슘 통로가 막전압의 과분극 현상을 유발하는 지를 조사하고자 잘 알려진 포타슘 통로 차단제인 TEA를 처리하였다. 그리고 TEA에 의해 억제되지 않는 포타슘 통로(칼슘에 의해 활성화되는 small conductance 포타슘 통로)의 차단제 인 apamin을함께 처리하였다. 그러나 난자에서 나타나는 칼슘 유입에 의해 유도된 막 전압의 과분극 현상은 TEA 와 apamin에 의해 억제되지 않았다.
배반포에서는 ~16±4 mV를 나타내었다. 그리고 배발달이 진행됨에 따라 칼슘의 세포 내로 유입 정도를 whole cell mode에서 확인하였다 (Fig. 3C). 1.
이러한 결과는 난관 내 포타슘 농도가 배 발달에 중요하게 작용할 가능성을 제시한다. 난관 내 포타슘 농도의 변화가 난자의 안정막 전압에 관여할 것으로 생각되어, 난자 및 수정란에서 전류 고정법을 이용하여 막 전압을 기록하였다. Fig.
피펫으로 난자의 움직임을 확인한 후, 움직임이 없을 때 공초점 현미경(IX 70 Fluoview, Olympus, Japan)을 이용하여 10 분 동안 5초 간격으로 scanning하였다. 난자에 약물을 처리할 때는 난자가 움직이지 않도록 stock 용액을 이용하여 소량씩 점적하였다. Scanning 후에는 Fluoview(version 2.
막 전압은 3M KC1 을 채운 유리 미세 전극(30 MQ)을 이용하여 난자 및 수정란의 투명대를 통과시킨 후 세포막내에 삽입하여 기록되었다 막 전압은 oscilloscope(CS-8010, Kenwood, Tokyo, Japan) 와 pen recorder(Harvard, England), digital multi meter 등을 통하여 관찰 기록되었다.
세포 내외 용액의 삼투압은 모두 280 mOsm 로 조정하였다. 본 실험에 이용한 whole cell recording 기법 상 세포막의 안정과 gigaseal 형성을 촉진하기 위하여 칼슘 농도는 생리적 수준보다 높여 10 mM으로 사용하였다. 칼슘 전류 측정 외 배양 실험 및 세포 내 칼슘 농도 측정은 M2 배양액을 사용하였으며, 실험 목적에 따라 0.
본 실험에서는 지금까지 잘 알려진 수정 시에 나타나는 이온 변화를 공초점 현미경을 이용하여 기록하였다. 세포 내 칼슘 이온은 정자에 의해 주기적으로 변화되었다(Fig.
수정과정에서 난자와 정자가 결합할 때 막 전압은 큰 과분극과 연이은 탈분극 현상을 보인다(Tosti와 Boni, 2004). 본 연구에서 칼슘 유입에 따른 막 전압의 변화는 수정과정에서 나타나는 현상과 동일하게 일시적인 과분극 현상을 유발한 후 탈분극 현상을 보여 주었다(Fig. 4). 이러한 일시적인 과분극 현상은 포타슘 통로에 의해 나타나는 것으로 알려져 있다.
본 연구에서는 전기 생리학적 실험 기법 및 공초점 현미경을 이용하여 생쥐 난자 및 수정란에서 칼슘 및 포타슘 이온 변화를 관찰하였다.
생쥐 수정 란의 배 발달 동안 나타나는 세포 내 칼슘 변화를 조사하기 위하여 Fluo 3-AM이 처리된 난자를 실온에서 45분간 배양한 후 공초점 현미경을 사용하여 5초 간격으로 스캔하였다. 난자와 수정란에서 세포 내 칼슘 농도 변화를 조사한 결과 배 발달에 따른 세포 내 칼슘 농도 변화가 난자와 비교하였을 때 유의한 변화를 보이지 않았다 (p>0.
자궁 접합부를 묶은 후 조심스럽게 난관을 적출하였다. 적출된 난관을 기본 배양액(M2)으로 세척한 다음 radiometer(ABL 505, Copenhagen)를 이용하여 세척용액에서 포타슘 농도를 측정하였다. hCG 호르몬을 처리한 후 14시간, hCG 처리와 동시에 교미를 시킨 후 20 시간, 24 시간, 33시간, 48시간, 64시간 그리고 72시간 후에 생쥐의 난관을 절단하여 포타슘 농도를 측정하였다.
본 실험에 이용한 whole cell recording 기법 상 세포막의 안정과 gigaseal 형성을 촉진하기 위하여 칼슘 농도는 생리적 수준보다 높여 10 mM으로 사용하였다. 칼슘 전류 측정 외 배양 실험 및 세포 내 칼슘 농도 측정은 M2 배양액을 사용하였으며, 실험 목적에 따라 0.4% bovine serum albumin(BSA)의 첨가 유무를 결정하였다.
4B). 칼슘 처리시 나타나는 막 전압의 변화가 칼슘에 의해 활성화되는 포타슘 통로에 기인한 것으로 추정되어 포타슘 통로 억제제를 처리하였다. Fig.
투명대를 제거한 난자를 도립현미경 위에 설치된 용기로 옮긴 후 미세조정기(WR-88, Narishige, Japan)를 이용하여 tip 저항이 4 — 8 MQ인 유리전극을 난자의 세포막에 접근시키고 10~20 cmH20 정도의 음압을 가하여 giga seal(seal resistance > 1GQ)을 형성시킨 후 순간적으로 음압을 높여 세포막을 파열시켜 whole cell patch를 형성하였다. 실험용액은 1 ml/min의 속도로 관류시키며, 실온에서 실험을 진행하였다.
그리고 난자의 움직임을 막기 위해 Cell Tak(Colla-borative Biomedical Products, Bedford, MA)으로 미리 코팅시켜 놓은 용기(chamber)를 BSA가 첨가되지 않은 M2 배양액 50 로 먼저 채운 다음 난자를 살며시 올려놓았다. 피펫으로 난자의 움직임을 확인한 후, 움직임이 없을 때 공초점 현미경(IX 70 Fluoview, Olympus, Japan)을 이용하여 10 분 동안 5초 간격으로 scanning하였다. 난자에 약물을 처리할 때는 난자가 움직이지 않도록 stock 용액을 이용하여 소량씩 점적하였다.
대상 데이터
5%의 protease (Type XXIV, Sigma, USA)에 30초 동안 노출시킨후 피펫(pipette)으로 부드럽게 세척하여 제거하였다. Protease에 의한 추가적인 세포막 손상을 줄이기 위하여 투명대가 소실되는 즉시 HEPES-buffered cultured medium (M2)으로 3번 이상 세척하여 실험에 이용하였다.
본 실험에 사용된 실험 동물은 유한양행으로부터 분양 받은 4주령의 암컷 생쥐(ICR)를 경상대학교 의과대학 실험 동물 사육장에서 점등 시간 14시간, 온도 20~24℃ 및 환풍 조절 하에서 2주 정도 적응시킨 후 사용하였다. 실험 전에 각 우리(cage)에 분리하여 사육하였으며 사료와 물은 자유로이 급식하였다.
01% hyaluronidase(Type I-S, Sigma, USA) 용액에 30초간 노출시킨 후 실온에서 반복 pipetting흐}.여 난구세포를 제거하고, 제 1 극체가 명확하며 세포질이 균일하고 충실한 것만을 선택하여 사용하였다. 수정 란은 hCG 주사와 동시에 수컷 생쥐와 교미시킨 후 배발달 시기에 맞추어 채란하였다 칼슘 전류를 기록하기 위해서는난자의 투명대(zona pellucida)# 0.
데이터처리
실험 결과의 통계학적 분석은 Student's f-test를 이용하여 처리구 간의 유의성을 검정하였다.
성능/효과
3C). 1.7 mM과 10 mM의 칼슘 농도에서 배 발달에 따른 칼슘 전류 변화 양상을 비교해 보았을 때 두 농도에서 모두 세포내로의 칼슘 유입이 감소하는 것을 확인하였다.
05). TEA와 함께 small conductance 포타슘 통로의 억제제, apatnin을 처리한 결과 과분극의 정도가 다소 감소하는 경향을 보였다. 그러나 그 결과가 연속적인 칼슘 처리의 오차인지 실제적으로 apamin에 의한 영향인지를 확인하기 위하여 apamin 만을 단독으로 처리하였다.
칼슘 파형(wave)이 시작되는 시간이 다른 것은 각 난자마다 정자의 수정능 획득 시간이 다르기 때문으로 생각된다. Whole cell mode에서 정자로부터 추출한 sperm factor를 난자가 놓여있는 실험용액(bath solution)에 처 리하였을 때 sperm factor에 의해 활성화되는 활성전류(activation current) 를 확인할 수 있었다(Fig. IB).
난관의 생리학적 특징을 잘 알고 있다면 난자 및 초기 배의 성숙 및 배발달이 체외에서 이루어지더라도 체내배양과 동일한 결과를 얻을 수 있을 것이다. 본 연구에서도 8세포기 배가 회수되는 시기의 난관 액과 난자 회수 시 얻어지는 난관액을 비교해 보았을 때 8세포기 배를 회수하는 시기에 포타슘 농도가 1.5 mM 정도 높게 나타났다. 이와 같은 결과들은 포타슘 농도가 배발달에 직접적인 영향을 보일 수 있다는 가능성을 암시한다.
생쥐난자 및 수정란에서 막 전압을 기록하였을 때 배 발달이 진행됨에 따라 막 전압이 탈분극 되는 것을 본 연구에서 확인하였다(Fig. 3B). 그러나 막 전압의 탈분극 현상은 배 발달이 진행되면서 나타나는 포타슘 이온과 칼슘 이온의 변화로 설명할 수 있다(Day 등, 1993).
세포 바깥의 칼슘 농도에 의해 변화되는 통로는 TASK-3 통로를 들 수 있고, 아직 논쟁 중에는 있지만 TREK-1과 TREK-2 통로도 세포 내 칼슘 농도에 따라 변화되는 것으로 알려져 있다. 역전사효소 중합 연쇄 반응과 면역 세포 화학 염색법을 이용하여 생쥐 난소에서 여러 종류의 K2P 통로가 존재함을 확인하였다(data not shown). 따라서 생쥐 난자에서 K2P 통로는 세포 내외 칼슘 변화와 함께 난자의 막 전압 조절에 관여할 것으로 예상되며, 배 발달 동안 변화되는 칼슘과 포타슘 이온은 수정 및 초기 배 발달에 중요한 인자로써 작용할 것이다.
4A). 연속적인 칼슘의 처리에도 과분극 현상은 동일하게 관찰되었으나 과분극 정도는 처음 처리보다 반복 처리 시작게 나타났다(Fig. 4B). 칼슘 처리시 나타나는 막 전압의 변화가 칼슘에 의해 활성화되는 포타슘 통로에 기인한 것으로 추정되어 포타슘 통로 억제제를 처리하였다.
4D). 이상의 결과로부터 일시적인 과분극 현상을 유발시키는 포타슘 통로는 TEA와 apamin에 억제되지 않는 포타슘 통로일 것으로 생각된다. 그리고 smallconductance 포타슘 통로도 부분적으로 안정막 전압 유지에 관여할 것으로 보인다.
후속연구
이러한 결과는 칼슘 유입의 감소에 따른 보상 현상으로 세포 안의 칼슘 저 장고로부터 칼슘 분비 가 증가하는 것으로 보여진다. 그러나 본 연구에서 기록된 전압 의존성 칼슘 통로를 제외한 다른 칼슘 유입 통로 및 수송체에 의한 칼슘 유입 가능성도 고려해야 할 것이다. 수정과정에서 난자와 정자가 결합할 때 막 전압은 큰 과분극과 연이은 탈분극 현상을 보인다(Tosti와 Boni, 2004).
생쥐 난관의 삼투압은 290~300 mOsm/ kg을 나타내 었다(Collins와 Baltz, 1999). 난관의 생리학적 특징을 잘 알고 있다면 난자 및 초기 배의 성숙 및 배발달이 체외에서 이루어지더라도 체내배양과 동일한 결과를 얻을 수 있을 것이다. 본 연구에서도 8세포기 배가 회수되는 시기의 난관 액과 난자 회수 시 얻어지는 난관액을 비교해 보았을 때 8세포기 배를 회수하는 시기에 포타슘 농도가 1.
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