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진핵세포에서 DNA 상해에 반응하는 유전자 (UV150과 UV200) 기능연구 분리 및 특성 연구
Isolation and Characterization of UV-Inducible Gene UV150 and UV200 in Eukaryotic Cells 원문보기

환경독성학회지 = Journal of environmental toxicology, v.21 no.1 = no.52, 2006년, pp.21 - 26  

최인순 (신라대학교 생물과학과)

초록
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본 연구는 DNA 상해유도기작을 규명하기 위하여 하등 진핵생물인 분열형 효모 Schizosaccharomyces pombe로부터 subtraction hybridization방법을 이용하여 자외선 유도 유전자인 UV150과 UV200을 분리하고 그 유전자 구조와 발현양상을 조사하였다. 분리한 유전자의 발현양상을 Northern hybridization 방법으로 살펴본 결과 자외선 조사 1시간 후부터 발현이 증가되었다. 또한 알킬화제인 Methyl Methanesulfonate (MMS) 처리에 의해서도 발현이 증가되었다. 이 결과 다른 UV-inducible유전자와는 다르게 분리한 UV150유전자는 UV에 UV200유전자는 MMS에 의하여 발현이 증가됨을 알 수 있었다. 유전자의 기능을 알기 위하여 URA4 유전자를 이용하여 null-mutant 세포주를 제조하여 그 특성을 살펴본 결과 분리한 UV150 유전자는 세포의 성장에 필수적인 유전자임을 알 수 있었다.

주제어

#UV150   #UV-inducible gene   #DNA repair   #cell viability   #MMS  

AI 본문요약
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제안 방법

  • Compared to the message levels of control, the levels of maximal increase were approximately 3 folds to UV-irradiation. In order to investigation whether the increase of UV150 trascripts was a specific results of UV-irradiation, UVI50 transcript levels were examined after treating the cells to methylmethane sulfonate (MMS). As shown in figure 3, the transcripts of UV200 was induced by treatment of 0.

이론/모형

  • The DNA fragment was labeled with [a-32P] dCTP (3, 000 Ci/mmole) by random primed DNA labeling method (Feinberg and Vogelstein, 1984). The labeling reaction was carried out in 20 μL of the standard random priming buffer containing 50 ng of DNA, 30 μCi of [a-32P] dCTP, dATP, dGTP, dTTP and 2 unit of Klenow enzyme for 1 hr at 37℃.
  • The isolation of UV-inducible genes from S. pombe was accomplished using subtraction hybridization method. For the induction of UV-inducible transcripts, S.
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