선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 따라서 본 실험은 난소 수송 온도를 7~i(rc, 11~17℃, 18-25℃ 그리고 control 그룹으로서 26℃ 이상 온도를 유지하여 실험실로 운반하여 난소로부터 난포란(COCs)을 회수하여 성숙 배양하였을 때 체외 성숙율, 수정율, 발달율 및 동결-융해 후의 생존율을 조사하여 난소 수송 온도가 체외수정란 발달 및 동결-융해 후 생존율에 미치는 영향을 조사하고자 실시되었다.
- 본 연구는 도축되는 소 난소의 효율적인 이용을 위해서 도축장으로부터 실험실로 운반되는 난소수송 온도에 따른 체외 수정란 생산 효율을 조사하고자 실시되었다. 도축장의 HACCP 적용으로 도축장 출입 이 불가능하므로 위 탁하여 난소를.
제안 방법
- 직경이 2~6 mm의 난포로부터 난포란을 난포액과 함께 19 gauge 주사침이 부착된 10 ml 주사기를 이용하여 흡입방법으로 IVF 100(IFP, Japan)을 이용하여 채취하였다. 체외성숙은 TCM199(Sigma, USA)을 기본 배양액으로 5% FBS(Gibco, USA), LH(10 "g/ml) 및 FSH(35 "g/ml)를 첨가하여 5% CO2 인큐베이터 내에서 22시간 동안 체외성숙을 유도하여 체외수정을 실시하였다. 핵형 분석을 위해서 체외성숙된 난 포란을 0.
- 특히 겨울철에는 더 많은 주의가 필요하다. 따라서 본 실험에서는 겨울철 난소수송 온도에 따라서 4처리 그룹, 즉 7~1CTC (Tl), 11~17℃(T2), 18~25℃(T3) 그리고 26℃ 이상인 경우를 control 그룹으로 구분하였다. 회수된 난포란 을 체외 성숙, 수정 및 배양을 실시하여 처리 그룹간 체외 성숙율, 분할율, 배반포 발달율 및 배반포의 세포수를 비교하였으며, 동결-융해한 배반포에 대해서도 생존성에 대하여 비교하였다.
- 배반포 생산율은 수정 후 168(7일) 및 192시간(8일)에 확인하였다. 배반포기배의 세포수 확인은 수정 후 168 및 192시간에 생산된 배반포 수정란을 Hoechst 33342 용액으로 염색하여 10분간 배양 후 광학현미경하에서 실시하였다.
- 운반하여 실험에 공시하였다. 본 실험의 조건에 맞춘 난소 수송 온도는 0.8% 생리식염수의 온도를 7~1O℃(T1 그룹), 11~17℃(T2 그룹), 18 ~25℃(T3 그룹) 및 26℃ 이상(control 그룹)으로서의 조건으로 맞추어 보온병에 담아 실험실로 2시간 이내로 운반하였다. 직경이 2~6 mm의 난포로부터 난포란을 난포액과 함께 19 gauge 주사침이 부착된 10 ml 주사기를 이용하여 흡입방법으로 IVF 100(IFP, Japan)을 이용하여 채취하였다.
- 3℃/분 속도로 동결시킨 후 액체 질소에 침지하였다. 수정란의생존성을 확인하기 위하여 동결 보존 후 스트로우를 보관고로부터 꺼내어 공기 중에 약 10초간 노출시킨 후 37℃로 가온된 온수에서 약 20초간 융해 후 체외 배 양액으로 옮겨 배 양 48시간 및 72시간 후 확장 및 부화 여부로 생존율을 판단하였다.
- 8% 생리식염수의 온도를 7~1O℃(T1 그룹), 11~17℃(T2 그룹), 18 ~25℃(T3 그룹) 및 26℃ 이상(control 그룹)으로서의 조건으로 맞추어 보온병에 담아 실험실로 2시간 이내로 운반하였다. 직경이 2~6 mm의 난포로부터 난포란을 난포액과 함께 19 gauge 주사침이 부착된 10 ml 주사기를 이용하여 흡입방법으로 IVF 100(IFP, Japan)을 이용하여 채취하였다. 체외성숙은 TCM199(Sigma, USA)을 기본 배양액으로 5% FBS(Gibco, USA), LH(10 "g/ml) 및 FSH(35 "g/ml)를 첨가하여 5% CO2 인큐베이터 내에서 22시간 동안 체외성숙을 유도하여 체외수정을 실시하였다.
- 사용된 정액의 최종 농도는 2xl0%nl 였다. 체외성숙된 난포란의 난구 세포 일부를 제거하기 위해서 0.1% PVA(polyvinyl alcohol)/]- 첨가된 D-PBS(Sigma) 배양액에서 약 10초간 vortexing 후 수정을 실시하기 위해서 수정 배양액 인 50 ul IVF 100(IFP, Japan) 미 소적 에 20개의 체외성숙된 난포란과 정자를 공동 배양하여 체외수정을 유도하였다. 체외수정은 6시간 동안 CO2 인큐베이터 내에서 실시하였다.
- 체외수정 후 48시간에 분할율을 확인하였으며, 72시간(3일)과 120시간(5일)에 신선한 배양액으로 배양액 교환을 실시하였다. 배반포 생산율은 수정 후 168(7일) 및 192시간(8일)에 확인하였다.
- 1% PVA(polyvinyl alcohol)/]- 첨가된 D-PBS(Sigma) 배양액에서 약 10초간 vortexing 후 수정을 실시하기 위해서 수정 배양액 인 50 ul IVF 100(IFP, Japan) 미 소적 에 20개의 체외성숙된 난포란과 정자를 공동 배양하여 체외수정을 유도하였다. 체외수정은 6시간 동안 CO2 인큐베이터 내에서 실시하였다.
- 체외성숙은 TCM199(Sigma, USA)을 기본 배양액으로 5% FBS(Gibco, USA), LH(10 "g/ml) 및 FSH(35 "g/ml)를 첨가하여 5% CO2 인큐베이터 내에서 22시간 동안 체외성숙을 유도하여 체외수정을 실시하였다. 핵형 분석을 위해서 체외성숙된 난 포란을 0.5% Hyaluronidase 용액을 이용하여 난구 세포를 제거하고, acetic acid(l) : ethanol(3) 용액에 30 초간 고정한 후 3% basic Fuchsin으로 염색하여 200배의 광학 현미경하에서 핵형을 관찰하였다.
- 따라서 본 실험에서는 겨울철 난소수송 온도에 따라서 4처리 그룹, 즉 7~1CTC (Tl), 11~17℃(T2), 18~25℃(T3) 그리고 26℃ 이상인 경우를 control 그룹으로 구분하였다. 회수된 난포란 을 체외 성숙, 수정 및 배양을 실시하여 처리 그룹간 체외 성숙율, 분할율, 배반포 발달율 및 배반포의 세포수를 비교하였으며, 동결-융해한 배반포에 대해서도 생존성에 대하여 비교하였다. 실험 결과를 요약하면 다음과 같다.
대상 데이터
- 수정란 동결을 위한 동결 보호제로서는 1.8M ethylene glycol(IFP, Japan)을 사용하였다. 수정란의 동결은 autocomputer programmable 동결기(CL 863, U.
- 체외수정에 사용된 정액은 동결 정액(KPN, 농협)을 이용하였으며, 정자분리는 BO medium을 이용하여 1, 800 rpm에서 5분 동안 2회 원심분리 후 체외수정에 사용하였다. 사용된 정액의 최종 농도는 2xl0%nl 였다.
- 한우 도축 암소로부터 적출된 난소를 회수하여 실험실로 운반하여 실험에 공시하였다. 본 실험의 조건에 맞춘 난소 수송 온도는 0.
데이터처리
- 실험 결과의 통계 분석은 SAS package(version 6, 12)를 이용하여 실시하였으며, GLM(General Linear Model) procedure를 사용하여 각 요인의 Least square means를 구하여 요인간의 유의성을 검정하였다. p<0.
성능/효과
- 1. 회수된 난포란을 22시간 동안 체외 성숙시 켰을 때 수정 적기인 제2감수분열 중기에 도달한 비율은 T1-T3 그룹에서 60.0~68.2%의비율로 나타났으나, control 그룹에서는 81.8% 로 다른 처리군에 비해서 유의적으로3<0.05) 높은 결과를 보였다.
- 2. 체외 수정 후 48시간에 확인한 분할율은 control 그룹이 83.6%로서 T3 그룹과는 유의적인 차이가 없었으나, Tl(52.6%) 또는 T2 그룹(54.5 %)에 비해서 유의적인(p<0.05) 차이를 보였다. 수정 후 168시간과 192시간까지의 배반포 생산율은 처리군간 유의적인 차이를 보이지 않았다.
- 3. 생산된 blastocysts를 동결-융해하여 수정란의생존성을 확인한 결과, T1 그룹이 46.2% 로서다른 처리군(68.8~73.1%)에 비해서 유의적으로 3<0.05) 낮은 생존율을 나타내었다.
- 본 실험 결과에 있어서 GV, GVBD, MI까지의 단계는 각 처리군간 유의적인 차이를 보이지 않았으나, MII 단계까지 도달한 것은 26 ℃ 이상에서 수송된 그룹에서 다른 처리구에 비해서 유의적으로 (p<0.05) 높은 결과를 보였다. 또한 난자의 체외성숙 시 감수분열과 연관하여 저온의 영향으로서는 25 ℃ 이하에서 보다 4℃ 이하에서는 Microtu- bule의 해체 효과가 더 광범위하게 나타나며 이러한 현상은 소뿐만 아니라 다른 종에서도 관찰되는 현상이 기도 하다(Aman와 Parks, 1994).
- 배발달율에 있어서 수송 온도에 관계없이 성숙이 완료된 난자는 배반포까지 정상적으로 발달할 수 있는 것으로 생각된다. 본 실험에서 생산된 배반포의 세포수를 확인한 결과 총세포수는 처리군별로 각각 85±3.2(T1), 71±6.6(T2) 및 102±7.4개 (T3)였으며, control 군은 117±4.0개로 유의적인 차이를 보이지 않았으나 저온으로 수송된 경우에 총세포수가 다소 낮은 경향을 나타내었다.
- 05) 차이를 보였다. 수정 후 168시간과 192시간까지의 배반포 생산율은 처리군간 유의적인 차이를 보이지 않았다.
- 조사한 결과를 나타낸 것이다. 체외 배양 22 시간 후 핵형 조사 결과를 살펴보면 정상적인 체외성숙이 이루어져 수정적기인 Metaphase II 까지 이른 비율은 control 그룹에서 81.8%로서 다른 처리 구에 비해서 유의적(p<0Q5)으로 높은 결과를 나타내었다. Pollard 등(1996) 등은 체외수정란 생산에 영향을 미치는 많은 요인들 중에서 난자가 노출되는 온도는 실험실에 따라 다르며, 이는 난자의 체외 발달에 다양한 변화를 가져올 수도 있다고 보고하였다.
후속연구
- 따라서 본 실험의 연구결과를 살펴볼 때 도축되는 소 난소의 수송 온도는 26℃ 이상을 온도를 유지하는 것이 저온에 의한 난포란 손상을 최소화하여 체외 발달율 및 동결-융해 후 생존율을 높여, 궁극적으로 수정란이식 산업과 생명 공학 분야의 실험의 효율을 증진시키는데 기여할 수 있을 것으로 사료된다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.