선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 위장관에서도 점막상피세포 증식 조절에 중요한 역할을 하며, 상피세포의 보호와 위궤양의 발생과도 관련이 있는 것으로 알려져 있다. 이러한 세포증식에서의 도파민의 역할에 대해 본 연구에서는 도파민의 세포증식 조절 효과를 알아보기 위해 도파민 수용체의 발현 양상이 다른 두 종류의 위암세포주를 대상으로 도파민을 투여하였으나 각 세포주 간의 세포증식 조절 효과에 대한 유의한 차이가 없었다. 이는.
제안 방법
- 이용한 GAPDH의 primer는 GeneBank의 mRNA 서 열(Assession number BC 001601)을 대상으로 Primer 3 website를 이용하여 결정하였다. PCR 반응 혼합액의 조성은 1XPCR buffer, 각각 200/zM dNTP mix, 1 U Taq DNA polymerase (KOMA Biotech, 서울), primer 0.20 “M로 역전사 산물 0.5 “1을 넣고 증류수로 전체 양이 10“1가 되도록 하여, 95℃에서 5분간 초기 변성시킨 후 95℃ 30초, 일정온도(Table 1)에서 30초, 72℃ 30초의 조건으로 25회(GAPDH)와 35회 (도파민수용체 DI, D2L과 D2S) 반복하였다. PCR 산물은 3% agarose gel에서 전기영동하고 ethidium bromide (EtBr)로 염 색하고, Gel Document System (BioRad, Hercules, CA) 을 이용하여 디지털영상을 얻었다.
- 5 “1을 넣고 증류수로 전체 양이 10“1가 되도록 하여, 95℃에서 5분간 초기 변성시킨 후 95℃ 30초, 일정온도(Table 1)에서 30초, 72℃ 30초의 조건으로 25회(GAPDH)와 35회 (도파민수용체 DI, D2L과 D2S) 반복하였다. PCR 산물은 3% agarose gel에서 전기영동하고 ethidium bromide (EtBr)로 염 색하고, Gel Document System (BioRad, Hercules, CA) 을 이용하여 디지털영상을 얻었다. 전기영동 상의 각 띠의 농도를 Scion Image analysis system (버전 beta 4.
- 하였다. cDNA 합성은 분리된 RNA 4從을 oligo dT (16 mer)를 사용하여 20의 용량으로 역전사(reverse transcrip- tion)< 시행하였다. 반응 혼합액의 조성은 RNA 4“g, 5 mM MgCb, I X PCR buffer, 각각 1 mM dNTP, 1 U//zl RNase inhibitor, 2.
- 각 세포주의 세포들을 각각 5 X IO, 개씩 24 well plate에 분주하여 48시간 동안 10% FBS가 함유된 DMEM과 F12 배지에 배양한 후 FBS가 2% 되도록 섞어준 DMEM와 F12 배지로 바꾸어 다시 48시간 동안 안정 화시킨 후 약물을 처 리하였다. 처리한 약물로는 도파민과 D1 수용체의 대항제(antagonist) 인 SCH 23390과 D2 수용체 대항제 인 raclopride를 사용하였다.
- 우선 SCH 23390과 raclopride 각각을 최종농도가 10 이 되도록 30분간 처리한 후 도파민을 각각 1“M과 10〃M 의 농도로 처리하였다. 그리고 24시간마다 같은 농도의 도파민으로 바꾸어 주고 48시간 후와 72시간 후의 살아있는 세포의 수를 측정하였다. 세포 수의 측정은 acridine orange와 ethidium bromide (EtBr), Hoechst (bisbenzimide H 33258)를 각각 0.
- 도파민 수용체 D1과 D2L과 D2S 유전자 mRNA의 상대적인 발현정도는 측정된 농도 값을 GAPDH의 농도 값으로 나누어 결정하였다. KCU-C2 세포주는 이들 세 종류의 mRNA 모두 높은 발현을 보였지만 SNU601 세포주에는 KCU-C2 와 비교해서 이들 mRNA의 발현이 모두 낮은 수준이었으며, 특히 D2L mRNA는 발현되고 있지 않았다(Fig.
- 이를 통해 도파민 D1 수용체를 통한 도파민의 신호는 세포증식을 억제함을 알 수 있었다. 둘째, 위암세포증식에 D2 수용체의 역할을 알아보기 위해 SCH 23390으로 D1 수용체를 차단하고 도파민의 효과를 보았다. KCU-C2의 경우 D2 수용체를 통한 도파민이 세포증식을 유도하고 있음을 보여 주었고 SNU 601의 경우 D2 수용체로 도파민 신호가 전달되고 있음에도 KCU-C2와는 상반되게 세포증식이 억제되었다.
- cDNA 합성은 분리된 RNA 4從을 oligo dT (16 mer)를 사용하여 20의 용량으로 역전사(reverse transcrip- tion)< 시행하였다. 반응 혼합액의 조성은 RNA 4“g, 5 mM MgCb, I X PCR buffer, 각각 1 mM dNTP, 1 U//zl RNase inhibitor, 2.5 U/ [A MuLV reverse transcriptase, 2.5 “M oligo d(T)i6로, 반응 조건은 실온에서 10분, 42℃ 60분, 99℃ 5분, 4℃ 5분으로 하였다. 이렇게 만들어진 cDNA를 이용하여 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH)와 도파민 수용체 DI, D2L과 D2S 각각에 대한 primer로 PCR을 시행하였다.
- 세포 수의 측정은 A/H/E 염색을 하여 측정하였다. 도파민이 세포의 증식에 어떠한 영향을 주는지 알아보기 위해서 도파민만을 처 리하였을 때, D2L 수용체가 발현되지 않는 SNU 601 의 경우 도파민을 처리한 후 48시간과 72시간에서 처리한 농도에 비례하여 세포의 증식이 통계적으로 유의하게 억제되었다(P<0.
- 그리고 24시간마다 같은 농도의 도파민으로 바꾸어 주고 48시간 후와 72시간 후의 살아있는 세포의 수를 측정하였다. 세포 수의 측정은 acridine orange와 ethidium bromide (EtBr), Hoechst (bisbenzimide H 33258)를 각각 0.001%가 되도록 넣어 염색한 후 각각의 well을 9구획으로 나누어 5군데를 디지털카메라로 찍어 형광현미경상(365 mn 파장)에서 살아있는 세포와 죽은 세포를 구분하여 측정하였으며 동일하게 3번 반복 실험하였다.
- 4). 세포의 증식에 D2 수용체를 통한 도파민의 효과를 알아보기 위해 D1 수용체의 대항제인 SCH 23390으로 D1 수용체를 차단한 후 도파민을 처리하여 생존 세포의 수를 분석하였다. SNU 601 세포는 위의 두 경우에서처럼 각 조건에서 세포의 증식이 억제되었다(P<0.
- 세포주의 세포에서 도파민 수용체 D1과 D2의 발현 정도를 알아보기 위해 추출한 전체 RNA를 대상으로 RNA PCR core kit (Applied Biosystems, Foster City, CA)를 이용하여 RT-PCR 을 하였다. cDNA 합성은 분리된 RNA 4從을 oligo dT (16 mer)를 사용하여 20의 용량으로 역전사(reverse transcrip- tion)< 시행하였다.
- 처리한 약물로는 도파민과 D1 수용체의 대항제(antagonist) 인 SCH 23390과 D2 수용체 대항제 인 raclopride를 사용하였다. 우선 SCH 23390과 raclopride 각각을 최종농도가 10 이 되도록 30분간 처리한 후 도파민을 각각 1“M과 10〃M 의 농도로 처리하였다. 그리고 24시간마다 같은 농도의 도파민으로 바꾸어 주고 48시간 후와 72시간 후의 살아있는 세포의 수를 측정하였다.
- 위암 세포의 성장조절에 도파민과 도파민 수용체들이 어떤 역할을 할 것인지를 도파민과 D1과 D2 수용체 각각의대항제와 도파민을 위암 세포주에 처리하고 살아있는 세포 수를 측정함으로서 세포의 증식 양상을 알아보았다. 세포 수의 측정은 A/H/E 염색을 하여 측정하였다.
- (2, 3) 도파민의 기능은 막 수용체인 도파민 수용체 (dopamine receptor)와 결합하여 이루어지게 되는데 특히 도파민의 세포증식 조절 신호를 매개함에 있어서는 수용체의 종류와 분포하는 세포에 따라 다른 효과를 나타낸다. 위암에서 도파민이 위 점막 상피의 증식을 조절할 수 있고 위암 조직에서 정상과 비교해서 D2 수용체의 농도가 감소되어 있다(4)는 보고를 통해 위암의 발생과 진행에도 도파민과 도파민 수용체가 관여할 것으로 생각되며 이를 이용하여 저자들은 위암세포주를 대상으로 도파민 수용체의 발현 양상을 파악하고, 도파민과 도파민 이과 D2 수용체가 이들 세포들의 증식에 어떻게 관여 할 것인지를 알아보았다.
- 5 “M oligo d(T)i6로, 반응 조건은 실온에서 10분, 42℃ 60분, 99℃ 5분, 4℃ 5분으로 하였다. 이렇게 만들어진 cDNA를 이용하여 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH)와 도파민 수용체 DI, D2L과 D2S 각각에 대한 primer로 PCR을 시행하였다. 도파민수용체의 상대적 발현 정도를 비교하기 위 한 internal controls.
- PCR 산물은 3% agarose gel에서 전기영동하고 ethidium bromide (EtBr)로 염 색하고, Gel Document System (BioRad, Hercules, CA) 을 이용하여 디지털영상을 얻었다. 전기영동 상의 각 띠의 농도를 Scion Image analysis system (버전 beta 4.02, Scion Image, Frederick, MD)을 이용하여 측정하고, DI, D2L과 D2S 수용체 유전자의 상대적인 발현 정도는 측정된 농도 값을 GAPDH의 농도 값으로 나누어 결정하였다.
대상 데이터
- 도파민수용체의 상대적 발현 정도를 비교하기 위 한 internal controls. 이용한 GAPDH의 primer는 GeneBank의 mRNA 서 열(Assession number BC 001601)을 대상으로 Primer 3 website를 이용하여 결정하였다. PCR 반응 혼합액의 조성은 1XPCR buffer, 각각 200/zM dNTP mix, 1 U Taq DNA polymerase (KOMA Biotech, 서울), primer 0.
- 리하였다. 처리한 약물로는 도파민과 D1 수용체의 대항제(antagonist) 인 SCH 23390과 D2 수용체 대항제 인 raclopride를 사용하였다. 우선 SCH 23390과 raclopride 각각을 최종농도가 10 이 되도록 30분간 처리한 후 도파민을 각각 1“M과 10〃M 의 농도로 처리하였다.
- 한국세포주은행에서 분양받은 반지세포암종 (singet ring cell carcinoma)을 가진 34세 한국 남자 환자의 복수로부터 채취한 세포에서 유래한 세포주인 SNU 601과 58세 한국 남자 위암환자에서 림프절로 전이된 선암(adenocarcinoma) 세포로부터 유래한 세포주인 KCU-C2를 각각을 10% fetal bovine serum이 든 DMEM과 F12 배양액으로 37℃, 5% CO2 배양기에서 배양하였다.
데이터처리
- 5판을 사용하였다. 각각의 세포주에서 세포의 증식은 one-way AN0VA로 분석하였다. 각각의 경우 유의수준은 0.
성능/효과
- 또한 위장관에서 도파민은 점막상피세포 증식 조절에 중요한 역할을 하며, (1) 상피세포의 보호와 위궤양의 발생과도 관련이 있는 것으로 알려져 있다.(2, 3) 도파민의 기능은 막 수용체인 도파민 수용체 (dopamine receptor)와 결합하여 이루어지게 되는데 특히 도파민의 세포증식 조절 신호를 매개함에 있어서는 수용체의 종류와 분포하는 세포에 따라 다른 효과를 나타낸다. 위암에서 도파민이 위 점막 상피의 증식을 조절할 수 있고 위암 조직에서 정상과 비교해서 D2 수용체의 농도가 감소되어 있다(4)는 보고를 통해 위암의 발생과 진행에도 도파민과 도파민 수용체가 관여할 것으로 생각되며 이를 이용하여 저자들은 위암세포주를 대상으로 도파민 수용체의 발현 양상을 파악하고, 도파민과 도파민 이과 D2 수용체가 이들 세포들의 증식에 어떻게 관여 할 것인지를 알아보았다.
- 둘째, 위암세포증식에 D2 수용체의 역할을 알아보기 위해 SCH 23390으로 D1 수용체를 차단하고 도파민의 효과를 보았다. KCU-C2의 경우 D2 수용체를 통한 도파민이 세포증식을 유도하고 있음을 보여 주었고 SNU 601의 경우 D2 수용체로 도파민 신호가 전달되고 있음에도 KCU-C2와는 상반되게 세포증식이 억제되었다. SNU 601은 D2 수용체의 두 isoform 중에서 D2S 만 발현되고 D2Le 발현되지 않는다는 점에서 D2S 수용체를 통한 도파민의 신호는 세포를 억제하는 쪽으로 작용했다는 것을 의미하며, D2S와 D2L 모두 발현되는 KCU-C2에서 세포증식이 유도된 것은 D2S보다는 D2L에 의한 것으로 생각된다.
- 이는. 도파민수용체들은 모두 도파민과 결합할 수 있지만, 대상 세포의 도파민 수용체 발현양상에 따라 세포증식 조절 효과가 다르며 수용체의 종류에 따라 그 기능이 다를 수 있음을 알 수 있었다. 따라서 도파민의 세포증식 효과에 있어 대상 세포의 도파민 수용체 발현양상과 수용체의 종류가 도파민 효과와 매우 밀접하게 관계함을 알 수 있었고 위암세포기원에 따라 도파민의 세포증식 효과가 다르다는 것을 알 수 있었다.
- 세포 수의 측정은 A/H/E 염색을 하여 측정하였다. 도파민이 세포의 증식에 어떠한 영향을 주는지 알아보기 위해서 도파민만을 처 리하였을 때, D2L 수용체가 발현되지 않는 SNU 601 의 경우 도파민을 처리한 후 48시간과 72시간에서 처리한 농도에 비례하여 세포의 증식이 통계적으로 유의하게 억제되었다(P<0.05)(Fig. 3). 이과 D2 수용체의 발현이 높은 KCU- C2의 경우 48시간에서는 세포의 증식이 억제되는 양상을 보였으나, 72시간에는 증식이 유도되는 양상을 보였는데, 두 경우 모두 통계적으로 유의하지는 않았다(Fig.
- 도파민수용체들은 모두 도파민과 결합할 수 있지만, 대상 세포의 도파민 수용체 발현양상에 따라 세포증식 조절 효과가 다르며 수용체의 종류에 따라 그 기능이 다를 수 있음을 알 수 있었다. 따라서 도파민의 세포증식 효과에 있어 대상 세포의 도파민 수용체 발현양상과 수용체의 종류가 도파민 효과와 매우 밀접하게 관계함을 알 수 있었고 위암세포기원에 따라 도파민의 세포증식 효과가 다르다는 것을 알 수 있었다.
- 함을 알 수 있었다. 또한 도파민은 위암세포의 증식을 조절할 수 있으며, 도파민의 위암세포증식조절 효과는 도파민이 신호가 어느 수용체를 통해 전달되 었느냐에 따라 다르다는 것을 알 수 있었다. 요컨대 위암세포에서 도파민과 도파민 수용체의 발현이 위암 진행에 대한 예측 인자로서의 사용가능성과 각 수용체의 발현조절이 치료의한 분야로서 사용될 수 있을 것으로 생각되며 이를 임상적으로 이용되기 위해서는 더욱 많은 연구가 필요할 것으로 생각된다.
- 본 연구에 사용한 세포주인 SNU 601은 KCU-C2와 비교해서 이과 D2 수용체의 발현이 대체적으로 낮았으며, 특히 D2L의 발현은 없었고, D2S는 발현되고 있었다. 이에 비해 KCU-C2는 이과 D2L, D2S 모두 높은 발현 양상을 보였다.
- 3). 세포의 증식에 D1 수용체를 통한 도파민의 효과를 알아보기 위해 D2 수용체의 대항제인 raclopride으로 D2 수용체를 차단한 후 도파민을 처리한 경우 SNU 601은 도파민만을 처리한 경우에서처럼 48시간과 72시간에 처리한 도파민의 농도에 비례하여 세포의 증식이 억제되었다(P<0.05)(Fig. 4). 하지만 KCU- C2의 경우 48시간과 72시간 모두에서 세포의 증식이 증가되는 양상을 보였으나 통계적으로 유의하지는 않았다(Fig.
- 위암 세포주를 대상으로 한 본 연구를 통하여 도파민의 세포증식 조절 효과에 있어 대상 세포의 도파민수용체 발현양상과 수용체의 종류가 세포증식에 있어 매우 중요한 역할을 함을 알 수 있었다. 또한 도파민은 위암세포의 증식을 조절할 수 있으며, 도파민의 위암세포증식조절 효과는 도파민이 신호가 어느 수용체를 통해 전달되 었느냐에 따라 다르다는 것을 알 수 있었다.
- 이에 비해 KCU-C2는 이과 D2L, D2S 모두 높은 발현 양상을 보였다. 위암세포증식에 있어 도파민 수용체 각각의 기능을 알아보기 위한 방법으로 첫째, 도파민 D1 수용체의 기능을 구체적으로 알아보기 위해 D2 수용체의 대항제인 raclopride로 D2 수용체를 차단한 후 도파민을 처리하였는데 SNU 601에서 도파민만을 처리한 경우에서처럼 세포의 증식이 억제되었다. 이를 통해 도파민 D1 수용체를 통한 도파민의 신호는 세포증식을 억제함을 알 수 있었다.
- 위암세포증식에 있어 도파민 수용체 각각의 기능을 알아보기 위한 방법으로 첫째, 도파민 D1 수용체의 기능을 구체적으로 알아보기 위해 D2 수용체의 대항제인 raclopride로 D2 수용체를 차단한 후 도파민을 처리하였는데 SNU 601에서 도파민만을 처리한 경우에서처럼 세포의 증식이 억제되었다. 이를 통해 도파민 D1 수용체를 통한 도파민의 신호는 세포증식을 억제함을 알 수 있었다. 둘째, 위암세포증식에 D2 수용체의 역할을 알아보기 위해 SCH 23390으로 D1 수용체를 차단하고 도파민의 효과를 보았다.
후속연구
- 또한 도파민은 위암세포의 증식을 조절할 수 있으며, 도파민의 위암세포증식조절 효과는 도파민이 신호가 어느 수용체를 통해 전달되 었느냐에 따라 다르다는 것을 알 수 있었다. 요컨대 위암세포에서 도파민과 도파민 수용체의 발현이 위암 진행에 대한 예측 인자로서의 사용가능성과 각 수용체의 발현조절이 치료의한 분야로서 사용될 수 있을 것으로 생각되며 이를 임상적으로 이용되기 위해서는 더욱 많은 연구가 필요할 것으로 생각된다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.