[논문]PCR을 이용한 우리나라에서 발견되는 얼룩날개모기속 모기의 종 동정

용태순; 이한일; 이인용; 이종원; 황의욱

PCR을 이용한 우리나라에서 발견되는 얼룩날개모기속 모기의 종 동정
Species identification of the Anopheles kyrcanus complex found in Korea using PCR 원문보기

For identification of four sibling species of the Anopheles hyrcanus complex found in Korea, the 5.8 rDNA-ITS2-28S rDNA region of each species was sequenced and the species-specific primers wee designed The amplified PCR products obtained from each species were analyzed by agarose gel electrophoresis. The result showed a single species- specific band, I.e. 559bp, 432bp, 322bp and 192bp for An. sinensis, An. sp., An. lesteri and An. pullus, respectively. In conclusion, the species-specific PCR primers designed from ITS2 variable regions functioned successfully and specifically, and can be applied as a useful tool for identifying species of the Anopheles hyrcanus complex found in Korea.

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문제 정의

본 실험에서는 Hyrcanus그룹에 속하는 이들 4가지 모기에 대한 종특이 primer 를 제작하고 이를 사용한 PCR을 통하여 이러한 종들을 정확하게 밝혀내고자 하였다. An.

제안 방법

5.8S rDNA-ITS2-28S rDNA 부위의 염기서열을 밝히고 비교하였다.(Fig.
, 1997). Hyrcanus 그룹에 속하는 모기들을 구분하기 위해 종간에 존재하는 상이한 염기서열을 기초로 종특이 PCR primer를 고안하였다.
8S rDNA-ITS2-28S rDNA 부분을 primer 687(5'-ACCCTGGACGGTGG ATCACTYGG-3')과 - CS250(5, -GTTAGTT TCTTTCCTC-3')를 久傷方K겨 辛■였다. 증폭된 PCR 산물을 PCR product purification system(Qiagen Co.)을 사용하여 분리하고, pGEM-T easy vector system(Promega Co.) 에 클로닝하고 Escherichia coll XL1 에 형질 전환하였다. 클론의 선별은 X-gal 과 IPTG를 이용하여 blue/white 선별하였다.
) 에 클로닝하고 Escherichia coll XL1 에 형질 전환하였다. 클론의 선별은 X-gal 과 IPTG를 이용하여 blue/white 선별하였다. Plasmid DNA 는 Qiaprep spin miniprep purification kit (Qiagen Co.

대상 데이터

)을 사용하여 각종의 충체로부터 추출하였다. Hyrcanus 그룹의 유전자 중 많은 변동성을 가진 5.8S rDNA-ITS2-28S rDNA 부분을 primer 687(5'-ACCCTGGACGGTGG ATCACTYGG-3')과 - CS250(5, -GTTAGTT TCTTTCCTC-3')를 久傷方K겨 辛■였다. 증폭된 PCR 산물을 PCR product purification system(Qiagen Co.
클론의 선별은 X-gal 과 IPTG를 이용하여 blue/white 선별하였다. Plasmid DNA 는 Qiaprep spin miniprep purification kit (Qiagen Co.) 을 사용하여 분리하였고, 염기서열 확인은 Perkin Elmer 9600 PCR machine을 사용하였다. 최종 얻어진 염기 서열의 분석은 Gene Jockey II (BIOSOFT Co.

데이터처리

) 을 사용하여 분리하였고, 염기서열 확인은 Perkin Elmer 9600 PCR machine을 사용하였다. 최종 얻어진 염기 서열의 분석은 Gene Jockey II (BIOSOFT Co.)를 사용하여 정렬하고 비교하였다. 다중염기서열정렬를 위하여 Qustal X8를 사용하였고, 염기서열정렬과 조작을 위하여 MacClade ver 3.

이론/모형

)를 사용하여 정렬하고 비교하였다. 다중염기서열정렬를 위하여 Qustal X8를 사용하였고, 염기서열정렬과 조작을 위하여 MacClade ver 3.0을 사용하였다 (Thompson et al., 1997). Hyrcanus 그룹에 속하는 모기들을 구분하기 위해 종간에 존재하는 상이한 염기서열을 기초로 종특이 PCR primer를 고안하였다.

성능/효과

(Fig. 1) 우리나라에서 발견되는 Hyrcanus그룹에 속하는 4가지 종을 동정하기 위하여, Hyrcanus 그룹 중제일 많은 변동성을 가진 염기서열을 기초로 687와 Sin-S(/比. sinensis), Ant-S와 CS250G4〃. lesteri), 689와 Pul-S {An.
(Fig. 2) 또한 각기 PCR로 생성된 종특이 밴드는 특이하여 다른 종의 primer로는 결코 PCR 산물이 생성되지 않았다.
5.8S rDNA-ITS2-28S rDNA의 염기서열 비교를 통해 이제까지 알려지지 않은 한 개의 뚜렷이 다른 종이 Hyrcamis그룹 중에 존재함을 알 수 있었다. 유전자의 차이는 An.

후속연구

가 발견되었는데 형태로는 거의 구분이 되지 않았다(imp냐blished). 잘 알려지지 않은 모기종의 분류연구뿐 아니라 이들의 생물학적 행태 및 말라리아 매개 종의 효율에 대한 연구가 향후 필요하다.

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