비수리 지상부를 95% EtOH 용액으로 추출하고, 추출물을 n-hexane, $CH_2Cl_2$, EtOAc 및 $H_2O$로 용매 분획하였다. 이 중 EtOAc와 $H_2O$ 분획을 대상으로 Sephadex LH-20 column chromatography를 실시하여 4개의 화합물을 분리하였다. 화합물의 구조는 $^{1}H-NMR$, $^{13}C-NMR$, 2D-NMR 및 MS spectrum을 분석하여, quercetin (1), kaempferol (2), desmodin (3) 및 homoadonivernith (4)로 동정하였으며, 그 중 desmodin (3)과 homoadonivernith (4)는 비수리에서 처음으로 분리되었다.
비수리 지상부를 95% EtOH 용액으로 추출하고, 추출물을 n-hexane, $CH_2Cl_2$, EtOAc 및 $H_2O$로 용매 분획하였다. 이 중 EtOAc와 $H_2O$ 분획을 대상으로 Sephadex LH-20 column chromatography를 실시하여 4개의 화합물을 분리하였다. 화합물의 구조는 $^{1}H-NMR$, $^{13}C-NMR$, 2D-NMR 및 MS spectrum을 분석하여, quercetin (1), kaempferol (2), desmodin (3) 및 homoadonivernith (4)로 동정하였으며, 그 중 desmodin (3)과 homoadonivernith (4)는 비수리에서 처음으로 분리되었다.
The aerial parts of Lespedeza cuneata were collected, air-dried and extracted with 95% aqueous EtOH. Then it was successively partitioned with n-hexane, $CH_2Cl_2$, EtOAc and $H_2O$. Repeated Sephadex LH-20 column chromatography on the EtOAc- and $H_2O-soluble$ fract...
The aerial parts of Lespedeza cuneata were collected, air-dried and extracted with 95% aqueous EtOH. Then it was successively partitioned with n-hexane, $CH_2Cl_2$, EtOAc and $H_2O$. Repeated Sephadex LH-20 column chromatography on the EtOAc- and $H_2O-soluble$ fractions gave four compounds. Their structures were elucidated as quercetin (1), kaempferol (2), desmodin (3) and homoadonivernith (4) on the basis of spectroscopic evidences such as $^{1}H-NMR$, $^{13}C-NMR$, 2D-NMR and MS spectrum. Desmodin (3) and homoadonivernith (4) have not been reported from this plant so far.
The aerial parts of Lespedeza cuneata were collected, air-dried and extracted with 95% aqueous EtOH. Then it was successively partitioned with n-hexane, $CH_2Cl_2$, EtOAc and $H_2O$. Repeated Sephadex LH-20 column chromatography on the EtOAc- and $H_2O-soluble$ fractions gave four compounds. Their structures were elucidated as quercetin (1), kaempferol (2), desmodin (3) and homoadonivernith (4) on the basis of spectroscopic evidences such as $^{1}H-NMR$, $^{13}C-NMR$, 2D-NMR and MS spectrum. Desmodin (3) and homoadonivernith (4) have not been reported from this plant so far.
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제안 방법
2)로 여과하였다. 여액을 40, C에서 감압농축하고, 농축된 추출물을 물(2/)에 현틱시키고, ?7-hexane(0.5 IX 2), dichloromethangCHzCL, 1ZX3), ethyl acetate(EtOAc, lx 3) 순으로 극성에 따라 분획하였다. 각 분획물은 감압농축하여 유기용매를 제거한 후 동결 건 조하여 조추출물(20.
NMRe Bruker Avance DPX 400 MHz spectrometer (Germany)를 사용하여 'H(400 MHz), 13C-NMR(100 MHz) 및 2D-NMR(HMQC, COS% HMBC)을 측정하였으며, 분석용매로는 TMS를 첨가한 CDQD와 (CD3)2COi- 사용하였다. FAB- MS와 MALDI-TOF-MS 분석은 Micromass Autospec M363 (UK)과 Voyager-DE-STR spectrometer(USA)를 사용하여 positive ion mode에서 측정하였다. Column chromatography용 중진물질 은 lipophilic Sephadex LH-20(Sigma, Sweden), TLC plate는 DC-Plastikfolien Cellulose F(Merck, Germany)을 사용하였다.
Column chromatography용 중진물질 은 lipophilic Sephadex LH-20(Sigma, Sweden), TLC plate는 DC-Plastikfolien Cellulose F(Merck, Germany)을 사용하였다. TLC 전개용매는 TBAe-butanol: AcOH : H2O(3 : 1 :1, v/v/v)]와 6% AcOH를 사용하였고 vanillin 발색제 [vanillin : HC1: EtOH (4.8 :12 :480, w/v/v)]를 분무하여 TLC에 반응하는 색을 관찰 하였다. 용매 및 기타 시약은 일급 및 특급 시약을 사용하였다.
5 IX 2), dichloromethangCHzCL, 1ZX3), ethyl acetate(EtOAc, lx 3) 순으로 극성에 따라 분획하였다. 각 분획물은 감압농축하여 유기용매를 제거한 후 동결 건 조하여 조추출물(20.9 g, LCC), n-hexane 분획 (0.01g, LCHe), CH2C12 분획(13.8 g, LCD), EtOAc 분획(8.1 g, LCE) 및 H2O 분획(128.8 g, LCH)을 얻었다.
95% EtOH으로 추출한 후 용매의 극성에 따라 분 획을 실시하여 동결 건조하였다. 그 중 EtOAc 분획과 H2O 분 획에 대한 Sephadex LH-20 column chromatography를 반복적 으로 실시하여 2개의 flavonol 화합물과 2개의 flavone glycoside 화합물을 분리하고 NMR을 이용하여 그 구조를 규명 하였다 (Fig. 1).
따라서 본 연구에서는 추출성분에 대한 연구가 미진한 비수리 지상부의 EtOAc와 H2O 분획을 대상으로 column chromatography 를 이용하여 2개의 flavonol 화합물과 비수리에서 처음 분리된 2개의 flavone glycoside 화합물을 NMR 등의 분광학적 기기분석을 이용하여 구조를 동정하였다.
사용기기. NMRe Bruker Avance DPX 400 MHz spectrometer (Germany)를 사용하여 'H(400 MHz), 13C-NMR(100 MHz) 및 2D-NMR(HMQC, COS% HMBC)을 측정하였으며, 분석용매로는 TMS를 첨가한 CDQD와 (CD3)2COi- 사용하였다. FAB- MS와 MALDI-TOF-MS 분석은 Micromass Autospec M363 (UK)과 Voyager-DE-STR spectrometer(USA)를 사용하여 positive ion mode에서 측정하였다.
실험재료. 본 실험에 사용한 비수리(Zespedeza cuneata)^ 2005년 8월 인제군 한계리에서 채취하여 실험실에서 기건 시 킨 후 분쇄하여 추출용 시료로 사용하였으며, 표품은 강원대학 교 목재천연물실험실(LCE-0508-WNL)에 보관되어 있다.
성능/효과
MALDI-TOF-MS (positive) spectrum에서 분자 ion peak는 m/z 565 [M+H]+, 587 [M+Na]+에서 나타났다. 1H-NMR spectrum에서 5 6.59 (1H, s, H-3) signal과 l3C-NMR spectrum 의 5 164.67 (C-2)와 3 102.32 (C-3), carbonyl 탄소의 signal 이 5 182.49에서 관측되는 것으로 보아 flavone 구조임을 알 수 있었다. 1H-NMR spectrum의 S 7.
47에서 singlet signal로 관측된다. 5 4.95와 8 4.29의 signale glucose와 xylose의 anomeric proton於로 J값이 각각 9.8 Hz와6.6 Hz인 것으로 보아D-glucose와 B-D-xylose임을 알 수 있 었고, 나머지 당의 수소들이 8 2.76-3.89 사이에서 복잡한 signal로 나타났다. l3C-NMR spectrum에서 C-2', 6, 과 C-3', 5'의 대칭 signale 5 127.
89 사이에서 복잡한 signal로 나타났다. l3C-NMR spectrum에서 C-2', 6, 과 C-3', 5'의 대칭 signale 5 127.94와 5 115.55에서 관측되며, C-6은 a이ycone인 apigenin의 C-6과 비교할 때 저자장으로 shift되어 5107.57에서 signal이 나타나며, glucose의 anomeric carbone 572.03에서 signal이 관측되는 것으로 보아 C-glycoside 임을 추 정할 수 있었다. 일반적으로 flavonoid C-glycoside의 경우 딩과 C-C 결합을 하고 있는 탄소의 chemical shifte 저자장으로 약 5 10 정도 shift 되지만 주위에 다른 탄소들의 chemical shift에 는 상대적으로 영향을 미치지 않는다고 보고된바 있다Xylose 의 anomeric carbone 8 105.
화합물 1과 화합물 2는 대표적인 flavonol 화합물로 TLC에 전개하고, vanillin 발색제에 노란색으로 발색되었다. 화합물 1의 1H-NMR spectrum에서 catechol ring의 signal이 5 7.02,7.70, 7.80에서 나타나며, 13C-NMR spectrum에서 C-ring의 이 중결합 탄소인 C-2, 3이 6 147.89와 8 137.04, carbonyl 탄소 가 5 177.03에서 signal이 관찰되는 것으로 보아 flavonol skeleton 임을 알 수 있었으며, 기존의 문헌을 비교하여 화합물 1은 quercetinW로 동정하였다. 화합물 2의 NMR spectrume 화합물 1과 거의 유사하나 1H-NMR spectrum에서 5 8.
참고문헌 (16)
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