[논문]한우 송아지의 소바이러스성 설사바이러스 지속감염률 조사

배유찬; 김하영; 박중원; 윤순식; 우계형; 이오수; 강문일

한우 송아지의 소바이러스성 설사바이러스 지속감염률 조사
Prevalence for persistent infection with bovine viral diarrhea virus in Korean native calves 원문보기

大韓獸醫學會誌 = Korean journal of veterinary research, v.47 no.2=no.127, 2007년, pp.163 - 167

배유찬 (국립수의과학검역원) , 김하영 (국립수의과학검역원) , 박중원 (국립수의과학검역원) , 윤순식 (국립수의과학검역원) , 우계형 (국립수의과학검역원) , 이오수 (국립수의과학검역원) , 강문일 (국립수의과학검역원)

Abstract ▼ AI-Helper

Bovine viral diarrhea (BVD) is very important disease in cattle industry with a worldwide distribution. Detection and elimination of persistently infected calves with bovine viral diarrhea virus (BVDV) was valuable strategy for BVD eradication because those calves were main source for transmission. We surveyed persistent infection with BVDV by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and immunohistochemistry (IHC) using whole blood and skin. Five hundred thirty nine Korean native calves were tested. Four calves (0.7%) were positive for BVDV antigen for both tests. Those calves remained positive for follow-up by RT-PCR and IHC. Therefore they were identified as persistently infected with BVDV. We confirmed that immunohistochemistry using skin biopsy samples was very useful tool to detect persistently infected calves with BVDV. As far as we know, this would be first report on persistent infection with BVDV in Korea.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

[6, 8, 16], 그러나 국내에서는 BVD 지속감염률을 조사한 연구결과가 없는 실정이다. 따라서 본 연구에서는 농장에서 BVD에 의한 피해를 줄이기 위한 기초자료로 활용하기 위해 국내 송아지에서의 BVDV 지속감염률을 조사하였다 .
5% 비교적 높게 나타났는데 이는 검사 두수가 22두로서 적었기 때문으로 생각되며 보다 정확한 감염률을 파악하기 위해서는 더 많은 두수에 대한 검사가 필요하리라고 판단된다. 이번 연구 결과 지속감염우로 확인된 개체는 해당 목장에 통보하여 도태를 권유하여 다른 송아지에 전염되는 것을 차단하도록 하였다.

제안 방법

일차 항체는 Anti-BVDV monoclonal antibody(IDEXX Laboratories, USA)를 1 :1,000으로 희석하여 실온에서 30분간 반응시 킨 다음 LSAB 2 system-AP(Dako, Den- mark)를 반응시켰으며 Liquid Pemanent Red Cliro- mogen(Dako, Denmark)을 이용하여 발색시 켰다. Mayer's hematoxylin(Dako, Denmark)으로 대조염색 한 후 광학현미경으로 관찰하였다.
50℃ 에서 30분간 반응시켜 cDNA를 합성한 후 94℃에서 1 분, 55℃에서 1분, 72℃에서 1분씩 35회 반복 반응 시킨 다음 최종 72℃에서 10분간 반응 시켰다. PCR 반응이 완료된 후 각 반응액 10ul를 취하여 ethidium bromide 가 함유된 1.5% agarose gel에서 전기영동을 실시한 다음 자외선하에서 특이밴드 유무를 관찰하였다.
RNeasy mini kit(Qiagen, Germany)를 사용하여 제조사의 지시에 따라 전혈에서 RNA를 추출하였다. PCR primer는 Radwan 등이 사용한 것과 동일한 것을 사용하였다 [19].
국내 사육 중인 한우의 BVD 지속감염률을 조사하기 위해 IHC법과 RT-PCR을 이용하여 539두의 송아지 피부와 전혈을 검사하였다. 검사결과 4두(0.
채취 즉시 10% 중성완충포르말린에 고정하고 일반적인 조직 처리 과정을 거쳐 hematoxylin&eosm (H&E) 염색을 한 후 병리조직학적인 병변의 유무를 관찰하였고 일부는 IHC에 사용하였다. 또한 경정 맥에서 전혈을 채취하여 항응고제가 처리된 튜브에 넣은 후 RT- PCR에 사용하였다.
총 539두를 선정하였다. 시료채취는 2005년 8월부터 2006년 6월까지 실시하였으며 1차 역전사 중합 효소 연쇄반응(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR) 검사에서 양성반응을 보인 개체에 대해서는 IHC로 확인 검사하였고, 양성 개체에 대해서는 4주후 2 차 RT-PCR과 IHC를 실시하였다.
1).채취 즉시 10% 중성완충포르말린에 고정하고 일반적인 조직 처리 과정을 거쳐 hematoxylin&eosm (H&E) 염색을 한 후 병리조직학적인 병변의 유무를 관찰하였고 일부는 IHC에 사용하였다. 또한 경정 맥에서 전혈을 채취하여 항응고제가 처리된 튜브에 넣은 후 RT- PCR에 사용하였다.

대상 데이터

Table 1과 같이 충남 서산, 강원 춘천, 경기 이천, 경기 안성 소재 4개 한우 농장에서 3일에서 6개월령의 송아지 총 539두를 선정하였다. 시료채취는 2005년 8월부터 2006년 6월까지 실시하였으며 1차 역전사 중합 효소 연쇄반응(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR) 검사에서 양성반응을 보인 개체에 대해서는 IHC로 확인 검사하였고, 양성 개체에 대해서는 4주후 2 차 RT-PCR과 IHC를 실시하였다.
“V”자 형의 샘플채쥐기 (ear notcher)를 이용하여 송아지 귓바퀴의 끝 부분에서 약 3 X 4mm의 피부를 채취하였다(Fig. 1).채취 즉시 10% 중성완충포르말린에 고정하고 일반적인 조직 처리 과정을 거쳐 hematoxylin&eosm (H&E) 염색을 한 후 병리조직학적인 병변의 유무를 관찰하였고 일부는 IHC에 사용하였다.
BVDV 지속감염우의 경우 호흡기, 소화기 증상이나 위축을 보이는 개체도 있으나 일부 개체들은 임상 증상이나 병리조직학적 병변이 관찰되지 않은 개체도 있으므로 임상증상이나 조직학적 병변만으로 지속감염우 여부를 판별하는 것은 곤란하다 [1, 2]. 이번 연구 결과 지속감염우로 판명된 4두의 송아지도 특이한 임상 증상이 없었고 피부에 대한 병리조직검사결과 특이한 병변이 관찰되지 않았으나 1차 및 2차 RT-PCR법과 IHC에서 양성으로 판명된 사례들이다. 따라서 외관적으로 건강한 송아지라 할지라도 BVD 지속감염우를 색출하기 위한 검사에 반드시 포함되어야 할 것으로 판단된다.

성능/효과

전혈을 검사하였다. 검사결과 4두(0.74%)가 BVD 지속감염우로 판명되어 해당 농장에 도태를 권유하여 이 질병으로 인한 피해를 줄이도록 하였다. ]HC법은 향후 국내에서 BVD 지속감염우 진단에 유용하게 활용될 수 있을 것으로 사료된다.
2와 같이 4두가 246 bp의 BVDV 특이 유전자가 증폭되어 양성으로 판정되었다.또한 양성 개체에 대해서는 4주 후 RT-PCR을 실시했을 때도 양성으로 확인 되어 지속감염률은 0.7%로 확인되었다.
비교적 큰 편차를 보였다. 즉, 북미의 경우 0.1% 이하로 조사된 우군으로부터 1.8%의 감염률을 보인 우군까지 다양하게 나타났으며 유럽의 경우 0.4%부터 1.4% 까지 다양하게 나타났다. 이처럼 지역별로 우군별로 감염률의 차이가 나타나는 점은 우군의 구성, 우사의 구조, 백신 프로그램 및 사양관리가 다르기 때문으로 추정하고 있다.
검사와 4주 후 2차 검사에서 양성반응을 보였다. 지속감염우로 판명된 4두의 귀 피부에 대한 병리조직검사 결과 특이한 병변이 관찰되지 않았으며 (Fig. 3), 면역조직화학염색 결과 BVDV 항원은 표피층의 각질세포와 모낭의 상피세포에서 확인되었다(Fig. 4).
지속감염우로 확인된 4 두는 면역조직화학염색법에서 1차 검사와 4주 후 2차 검사에서 양성반응을 보였다. 지속감염우로 판명된 4두의 귀 피부에 대한 병리조직검사 결과 특이한 병변이 관찰되지 않았으며 (Fig.
총 4개 농장 539두의 한우 전혈에 대한 RT-PCR 결과 Fig. 2와 같이 4두가 246 bp의 BVDV 특이 유전자가 증폭되어 양성으로 판정되었다.또한 양성 개체에 대해서는 4주 후 RT-PCR을 실시했을 때도 양성으로 확인 되어 지속감염률은 0.

후속연구

그러나 BVD 급성 감염우에 대한 IHC결과도 지속감염 우의 항원 분포 부위와 일치하므로 항원 분포만으로 지속감염 우와 급성 감염우를 판별하는 것은 어려운 실정이다 [7, 16]. IHC법은 이번 연구에서 RT-PCR법과 검사 결과가 모두 일치하여 BVD 지속감염우의 진단에 효과적인 진단법임을 확인하였기 때문에 향후 국내에서도 활발하게 사용될 것으로 보인다. 또한 이번 한우의 BVD 지속감염률 조사를 계기로 향후 홀스타인도 감염률 조사를 통해 지속감염우를 도태하여 이 질병으로 인한 피해를 줄이는 것이 필요하리라 생각한다.
74%)가 BVD 지속감염우로 판명되어 해당 농장에 도태를 권유하여 이 질병으로 인한 피해를 줄이도록 하였다. ]HC법은 향후 국내에서 BVD 지속감염우 진단에 유용하게 활용될 수 있을 것으로 사료된다.
이번 연구 결과 지속감염우로 판명된 4두의 송아지도 특이한 임상 증상이 없었고 피부에 대한 병리조직검사결과 특이한 병변이 관찰되지 않았으나 1차 및 2차 RT-PCR법과 IHC에서 양성으로 판명된 사례들이다. 따라서 외관적으로 건강한 송아지라 할지라도 BVD 지속감염우를 색출하기 위한 검사에 반드시 포함되어야 할 것으로 판단된다.
IHC법은 이번 연구에서 RT-PCR법과 검사 결과가 모두 일치하여 BVD 지속감염우의 진단에 효과적인 진단법임을 확인하였기 때문에 향후 국내에서도 활발하게 사용될 것으로 보인다. 또한 이번 한우의 BVD 지속감염률 조사를 계기로 향후 홀스타인도 감염률 조사를 통해 지속감염우를 도태하여 이 질병으로 인한 피해를 줄이는 것이 필요하리라 생각한다.

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표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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