1997년과 1998년 광주와 광명의 상추 재배 온실에서 새로운 병해가 발견되었다. 처음에는 잎에 병반이 불규칙적이고 작은 연녹색이었다가 점점 커져 지름이 2$\sim$5 mm 정도인 수침상의 검은색 병반이 형성되었다. 잎의 아래쪽에서 엽맥을 따라 검은색의 줄무늬 병반이 형성되기도 하고 심해지면 잎이 시들어 말라 죽었다. YDC 배지에서 병원세균을 순수 분리하였을 때 Xanthomonas속 세균의 전형적인 특징인 노란색 색소를 띤 세균이 형성되었다. 분리된 세균을 $10^8$ cfu/ml로 현탁한 후 상추의 엽맥에 주사 접종하여 병원성을 확인하였다. 지방산 조성 및 함량과 다양한 탄소원 이용정도를 이용하여 분리세균 SL0246과 SL1352를 X. campestris pv. vitians로 동정하였으며 이 병을 상추의 세균성점무의병으로 명명하였다.
1997년과 1998년 광주와 광명의 상추 재배 온실에서 새로운 병해가 발견되었다. 처음에는 잎에 병반이 불규칙적이고 작은 연녹색이었다가 점점 커져 지름이 2$\sim$5 mm 정도인 수침상의 검은색 병반이 형성되었다. 잎의 아래쪽에서 엽맥을 따라 검은색의 줄무늬 병반이 형성되기도 하고 심해지면 잎이 시들어 말라 죽었다. YDC 배지에서 병원세균을 순수 분리하였을 때 Xanthomonas속 세균의 전형적인 특징인 노란색 색소를 띤 세균이 형성되었다. 분리된 세균을 $10^8$ cfu/ml로 현탁한 후 상추의 엽맥에 주사 접종하여 병원성을 확인하였다. 지방산 조성 및 함량과 다양한 탄소원 이용정도를 이용하여 분리세균 SL0246과 SL1352를 X. campestris pv. vitians로 동정하였으며 이 병을 상추의 세균성점무의병으로 명명하였다.
During 1997 and 1998, a new disease of lettuce (Lactuca sativa) was observed on greenhouse-grown plants in Kwangju and Kwangmyung. Lesions on leaves were irregular, small, pale green to black, water-soaked, and 2 to 5 mm in diameter, Coalescing lesions sometimes caused defoliation of older leaves. I...
During 1997 and 1998, a new disease of lettuce (Lactuca sativa) was observed on greenhouse-grown plants in Kwangju and Kwangmyung. Lesions on leaves were irregular, small, pale green to black, water-soaked, and 2 to 5 mm in diameter, Coalescing lesions sometimes caused defoliation of older leaves. Isolations made from diseased leaves on yeast extract dextrose calcium carbonate agar yielded nearly pure cultures of a yellow pigmented bacterium typical of a xanthomonad. Two bacterial strains (SL0246 and SL1352) were purified and used for further tests. Pathogenicity of strains was confirmed on 5-week-old lettuce plants injected with bacterial suspensions containing $10^8$ cfu/ml of phosphate buffered saline. The representative Xanthomonas strains isolated from lettuce were compared with a reference strain X. campestris pv, vitians for fatty acid profiles and metabolic fingerprints using GN2 microplate, showing that all outcomes were indistinguishable between the representative and reference strains. This is the first report of bacterial leaf spot and dry rot of lettuce in Korea.
During 1997 and 1998, a new disease of lettuce (Lactuca sativa) was observed on greenhouse-grown plants in Kwangju and Kwangmyung. Lesions on leaves were irregular, small, pale green to black, water-soaked, and 2 to 5 mm in diameter, Coalescing lesions sometimes caused defoliation of older leaves. Isolations made from diseased leaves on yeast extract dextrose calcium carbonate agar yielded nearly pure cultures of a yellow pigmented bacterium typical of a xanthomonad. Two bacterial strains (SL0246 and SL1352) were purified and used for further tests. Pathogenicity of strains was confirmed on 5-week-old lettuce plants injected with bacterial suspensions containing $10^8$ cfu/ml of phosphate buffered saline. The representative Xanthomonas strains isolated from lettuce were compared with a reference strain X. campestris pv, vitians for fatty acid profiles and metabolic fingerprints using GN2 microplate, showing that all outcomes were indistinguishable between the representative and reference strains. This is the first report of bacterial leaf spot and dry rot of lettuce in Korea.
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문제 정의
저자 둥은 1997년과 1998년에 광주, 광명의 상추 재배 온실에서 기존의 보고된 것과 다른 특이한 병반이 발견되어 원인을 구명하고자 하였다. 처음에는 잎에 병반이 불규칙적이고 작은 연녹색이었다가 점점 커져 지름이 2〜5 mm 정도인 수침상의 검은색 병반이 형성되었다.
제안 방법
campestris pv. vitians로 동정하였으며 이 병을 상추의 세균성 점무늬병으로 명명할 것을 제안한다.
'서광') 잎에 3반복으로 주입하여 48시간 이내에 과민성반응 여부를 조사하였다. 둘째, 세균 현탁액을 주사기를 이용하여 상추(적상추와 청상추)의 줄기 및엽맥에 접종한 후 습실상(온도, 25C; 상대습도, 100%)에서 24시간 배양 후 온실로 옮겼다. 온실 조건은 자연광 아래에서 온도를 24〜30C로 유지하였다.
1). 병에 걸린 기주의 잎의 병환부와 건전부의 경계에서 작은 조각을 잘라 1% 차아염소산나트륨(NaOCl)으로 표면 살균한 후 살균수로 2회 씻고 표면 살균된 조각을 1 ml의 살균수가 들어 있는 Eppendorf tube에 넣고 1시 간 정도 상온에서 방치한 다음 현탁액을 Yeast extract-Dextrose -Calcium carbonate(YDC) 배지에 streaking하고 28C에서 3〜4일 배양하여 콜로니의 형태, 색상, 빈도를 기준으로 단 콜로니를 순수 분리하였다. 순수 분리된 균은 20% 글리세롤액에 현탁하여 -70C 저온냉동고에 장기보존하고, 계속 사용하는 균은 살균수에 현탁하여 냉장고에 보존하면서 실험에 사용하였다.
YDC 배지에서 병원 세균을 순수 분리하였을 때 Xanthomonas^ 세균의 전형적인 특징인 노란색 색소를 띤 세균이 형성되었다. 분리된 세균을 Ibcfb/m/로 현탁한 후 상추의 엽맥에 주사 접종하여 병원성을 확인하였다. 지방산 조성 및 함량과 다양한 탄소원 .
. 생화학적 특성을 조사하였다. 세균의 속명을 동정하기 위하여 그람 염색, 호기적 생장, MS 배지에서의 생장, YDC 배지에서의 색소 생성 여부를 조사하였을 때 분리된 병원 세균 SL0246과 SL1352 모두 YDC 배지에서 전형적인 Xanthomonas속 세균의 특징인 노란색의 색소를 형성하였다.
세균을 Bacto™ Tiyptic Soy Broth Agar(TSBA, BD211825) 배지에 접종하여 28~30C에서 24〜48시간 배양한 후 신선한 균총을 면봉으로 채취하여 GN/GP-IF(0.40% sodium chloride, 0.03% pluronic F-68, 0.01% gellan gum) 용액에 3X 108cfli/mZ 농도로 현탁시킨 후 각각 GN2 microplate (BIOLOG GN2 MicroPlateW) 의 96 well 에 eight-channel pipett으로 150 μl씩 분주하여 28~30C에서 배양하였다. 배 양 후 24시 간과 48시 간에 MicroLog™ 3 - Automated Microstation system을 이용하여 탄소원 이용여부를 조사하고, MicroLog Gram-negative database(Version 4.
생화학적 특성을 조사하였다. 세균의 속명을 동정하기 위하여 그람 염색, 호기적 생장, MS 배지에서의 생장, YDC 배지에서의 색소 생성 여부를 조사하였을 때 분리된 병원 세균 SL0246과 SL1352 모두 YDC 배지에서 전형적인 Xanthomonas속 세균의 특징인 노란색의 색소를 형성하였다. 또한 그람음성세균이며, 호기성 생장을 하였으며, MS 배지에서는 자라지 못했다(Fig.
순수 분리된 노란색을 띠는 세균을 두 가지 방법으로 병원성을 검정하였다. 첫째, 고체배지에서 48시간 배양한 세균을 PBS(phosphate buffered saline, pH6.
검정하였다. 첫째, 고체배지에서 48시간 배양한 세균을 PBS(phosphate buffered saline, pH6.8)에 현탁 하여 농도를 lX108cfu/m/S 맞춘 다음 잎이 완전히 전개된 담배(Nicotiana tabacum cv. 'Samsun')와 토마토(Lycopersicon esculentumcv. '서광') 잎에 3반복으로 주입하여 48시간 이내에 과민성반응 여부를 조사하였다. 둘째, 세균 현탁액을 주사기를 이용하여 상추(적상추와 청상추)의 줄기 및엽맥에 접종한 후 습실상(온도, 25C; 상대습도, 100%)에서 24시간 배양 후 온실로 옮겼다.
대상 데이터
병에 걸린 기주의 잎의 병환부와 건전부의 경계에서 작은 조각을 잘라 1% 차아염소산나트륨(NaOCl)으로 표면 살균한 후 살균수로 2회 씻고 표면 살균된 조각을 1 ml의 살균수가 들어 있는 Eppendorf tube에 넣고 1시 간 정도 상온에서 방치한 다음 현탁액을 Yeast extract-Dextrose -Calcium carbonate(YDC) 배지에 streaking하고 28C에서 3〜4일 배양하여 콜로니의 형태, 색상, 빈도를 기준으로 단 콜로니를 순수 분리하였다. 순수 분리된 균은 20% 글리세롤액에 현탁하여 -70C 저온냉동고에 장기보존하고, 계속 사용하는 균은 살균수에 현탁하여 냉장고에 보존하면서 실험에 사용하였다.
이론/모형
분리된 세균은 Schaad 등(2001)의 방법에 따라 생리 . 생화학적 특성을 조사하였다.
이상과 같이 본 실험에서 분리한 병원세균 SL0246과 SL1352는 YDC 배지에서의 colony 형태, 탄소원 이용 정도, 지방산 조성 및 함량에 근거하여 Xanthomonas^-, 상추에서 병원성에 근거하여 최종적으로 X. campestris pv. vitians로 동정하였으며 이 병을 상추의 세균성 점무늬병으로 명명할 것을 제안한다.
참고문헌 (10)
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