[국내논문]된장 분획물의 항돌연변이 및 암세포 증식 억제효과와 interleukin-2 생성에 미치는 영향 Effect of Solvent Fractions from Doenjang on Antimutagenicity, Growth of Tumor Cells and Production of Interleukin-2원문보기
된장을 극성이 다른 유기용매로 분획하여 Ames test를 이용한 항돌연변이성 효과를 알아보고자 하였고 Yac-1과 sarcoma-180암세포들의 증식에 대한 된장 분획물의 효과를 측정함과 동시에 면역과정의 생물학적 작용과 대사적 변화를 유도하는 interleukin-2 (IL-2)의 생성에 대한 효과도 검토하였다. AFB$_1$에 대한 돌연변이 억제효과는 된장의 메탄을 추출물을 2.5 mg/plate 농도로 첨가했을 때 84%의 돌연변이 저해효과를 나타내었고 같은 첨가농도에서 메탄을 분획물들중 디클로로메탄 분획물과 에틸아세테이트 분획물은 각각 96%, 97%로 상당한 항돌연변이 효과를 나타내었다. 직접돌연변이원인 MNNG의 경우, AFBI에 비해 돌연변이 저해효과가 다소 떨어지지만 그 중에서도 에틸아세테이트 분획물이 75%로 가장 높은 항돌연변이 효과를 나타내었다. Sarcoma 180 cell 암세포 증식 억제효과 실험에서 디클로로메탄 분획물(첨가농도 15.6 ${\mu}$g/ml)은 60%의 저해효과를 나타내면서 농도 의존적으로 그 저해효과가 컸으며 250 ${\mu}$g/ml 농도에서는 80%의 저해효과를 관찰 할 수가 있었다. 에틸아세테이트분회물의 경우 디글로로메탄 분회물에 비해 다소 낮은 저해효과를 나타내었지만 250 ${\mu}$g/ml 농도에서 약 60%의 세포독성 효과를 나타내었다. 디클로로메탄 분획물과 에틸아세테이트 분획물에 의한 면역 활성 증진 효과를 검토한 결과, 디글로로메탄 분획물은 첨가농도 1 ${\mu}$g/ml에서 94%로 Yac-1표적세포를 사멸시켰으며 에틸아세테이트 분획물도 동일 농도에서 96%의 억제효과를 나타내었다. CTLL세포를 이용하여 이들 분획물들에 의한 interleuk된장을 극성이 다른 유기용매로 분획하여 Ames test를 이용한 항돌연변이성 효과를 알아보고자 하였고 Yac-1과 sarcoma-180암세포들의 증식에 대한 된장 분획물의 효과를 측정함과 동시에 면역과정의 생물학적 작용과 대사적 변화를 유도하는 interleukin-2 (IL-2)의 생성에 대한 효과도 검토하였다. AFB$_1$에 대한 돌연변이 억제효과는 된장의 메탄을 추출물을 2.5 mg/plate 농도로 첨가했을 때 84%의 돌연변이 저해효과를 나타내었고 같은 첨가농도에서 메탄을 분획물들중 디클로로메탄 분획물과 에틸아세테이트 분획물은 각각 96%, 97%로 상당한 항돌연변이 효과를 나타내었다. 직접돌연변이원인 MNNG의 경우, AFBI에 비해 돌연변이 저해효과가 다소 떨어지지만 그 중에서도 에틸아세테이트 분획물이 75%로 가장 높은 항돌연변이 효과를 나타내었다. Sarcoma 180 cell 암세포 증식 억제효과 실험에서 디클로로메탄 분획물(첨가농도 15.6 ${\mu}$g/ml)은 60%의 저해효과를 나타내면서 농도 의존적으로 그 저해효과가 컸으며 250 ${\mu}$g/ml 농도에서는 80%의 저해효과를 관찰 할 수가 있었다. 에틸아세테이트분회물의 경우 디글로로메탄 분회물에 비해 다소 낮은 저해효과를 나타내었지만 250 ${\mu}$g/ml 농도에서 약 60%의 세포독성 효과를 나타내었다. 디클로로메탄 분획물과 에틸아세테이트 분획물에 의한 면역 활성 증진 효과를 검토한 결과, 디글로로메탄 분획물은 첨가농도 1 ${\mu}$g/ml에서 94%로 Yac-1표적세포를 사멸시켰으며 에틸아세테이트 분획물도 동일 농도에서 96%의 억제효과를 나타내었다. CTLL세포를 이용하여 이들 분획물들에 의한 interleukin-2 (IL-2)의 활성 증진 효과를 살펴보았을 때 대조군의 OD가 0.16인데 비해 디클로로메탄 분획물과 에틸아세테이
된장을 극성이 다른 유기용매로 분획하여 Ames test를 이용한 항돌연변이성 효과를 알아보고자 하였고 Yac-1과 sarcoma-180암세포들의 증식에 대한 된장 분획물의 효과를 측정함과 동시에 면역과정의 생물학적 작용과 대사적 변화를 유도하는 interleukin-2 (IL-2)의 생성에 대한 효과도 검토하였다. AFB$_1$에 대한 돌연변이 억제효과는 된장의 메탄을 추출물을 2.5 mg/plate 농도로 첨가했을 때 84%의 돌연변이 저해효과를 나타내었고 같은 첨가농도에서 메탄을 분획물들중 디클로로메탄 분획물과 에틸아세테이트 분획물은 각각 96%, 97%로 상당한 항돌연변이 효과를 나타내었다. 직접돌연변이원인 MNNG의 경우, AFBI에 비해 돌연변이 저해효과가 다소 떨어지지만 그 중에서도 에틸아세테이트 분획물이 75%로 가장 높은 항돌연변이 효과를 나타내었다. Sarcoma 180 cell 암세포 증식 억제효과 실험에서 디클로로메탄 분획물(첨가농도 15.6 ${\mu}$g/ml)은 60%의 저해효과를 나타내면서 농도 의존적으로 그 저해효과가 컸으며 250 ${\mu}$g/ml 농도에서는 80%의 저해효과를 관찰 할 수가 있었다. 에틸아세테이트분회물의 경우 디글로로메탄 분회물에 비해 다소 낮은 저해효과를 나타내었지만 250 ${\mu}$g/ml 농도에서 약 60%의 세포독성 효과를 나타내었다. 디클로로메탄 분획물과 에틸아세테이트 분획물에 의한 면역 활성 증진 효과를 검토한 결과, 디글로로메탄 분획물은 첨가농도 1 ${\mu}$g/ml에서 94%로 Yac-1표적세포를 사멸시켰으며 에틸아세테이트 분획물도 동일 농도에서 96%의 억제효과를 나타내었다. CTLL세포를 이용하여 이들 분획물들에 의한 interleuk된장을 극성이 다른 유기용매로 분획하여 Ames test를 이용한 항돌연변이성 효과를 알아보고자 하였고 Yac-1과 sarcoma-180암세포들의 증식에 대한 된장 분획물의 효과를 측정함과 동시에 면역과정의 생물학적 작용과 대사적 변화를 유도하는 interleukin-2 (IL-2)의 생성에 대한 효과도 검토하였다. AFB$_1$에 대한 돌연변이 억제효과는 된장의 메탄을 추출물을 2.5 mg/plate 농도로 첨가했을 때 84%의 돌연변이 저해효과를 나타내었고 같은 첨가농도에서 메탄을 분획물들중 디클로로메탄 분획물과 에틸아세테이트 분획물은 각각 96%, 97%로 상당한 항돌연변이 효과를 나타내었다. 직접돌연변이원인 MNNG의 경우, AFBI에 비해 돌연변이 저해효과가 다소 떨어지지만 그 중에서도 에틸아세테이트 분획물이 75%로 가장 높은 항돌연변이 효과를 나타내었다. Sarcoma 180 cell 암세포 증식 억제효과 실험에서 디클로로메탄 분획물(첨가농도 15.6 ${\mu}$g/ml)은 60%의 저해효과를 나타내면서 농도 의존적으로 그 저해효과가 컸으며 250 ${\mu}$g/ml 농도에서는 80%의 저해효과를 관찰 할 수가 있었다. 에틸아세테이트분회물의 경우 디글로로메탄 분회물에 비해 다소 낮은 저해효과를 나타내었지만 250 ${\mu}$g/ml 농도에서 약 60%의 세포독성 효과를 나타내었다. 디클로로메탄 분획물과 에틸아세테이트 분획물에 의한 면역 활성 증진 효과를 검토한 결과, 디글로로메탄 분획물은 첨가농도 1 ${\mu}$g/ml에서 94%로 Yac-1표적세포를 사멸시켰으며 에틸아세테이트 분획물도 동일 농도에서 96%의 억제효과를 나타내었다. CTLL세포를 이용하여 이들 분획물들에 의한 interleukin-2 (IL-2)의 활성 증진 효과를 살펴보았을 때 대조군의 OD가 0.16인데 비해 디클로로메탄 분획물과 에틸아세테이
We studied the inhibitory effect of solvent fractions from doenjang on mutagenicity using Salmonella typhimurium TA100 in Ames test. We also investigated the effect of solvent fractions from doenjang on the growth of tumor cells and the production of interleukin-2 (IL-2). The treatment of dichlororm...
We studied the inhibitory effect of solvent fractions from doenjang on mutagenicity using Salmonella typhimurium TA100 in Ames test. We also investigated the effect of solvent fractions from doenjang on the growth of tumor cells and the production of interleukin-2 (IL-2). The treatment of dichlorormethane and ethylacetate fractions (2.5 mg/assay) from doenjang to Ames test system inhibited aflatoxin B$_1$ (AFB$_1$) induced mutagenicity by 96% and 97%, respectively, and showed a higher antimutagenic effect than other solvent fractions. In case of N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguamidine (MNNG) induced mutagenicity, the ethylacetate fraction showed the highest inhibitory effect (by 75%) among the other sol-vent fractions, although the inhibitory effect was not stronger compared to AFB$_1$ induced mutagenicity. The treatment of dichloromethane and ethylacetate fractions markedly inhibited the growth of Yac-1 (by 80% and 94%, respectively) and sacroma-180 cancer cells (by 60% and 96%, respectively) after 4 days of incubation at 37${\circ}$C. To elucidate the immunological mechanism of antitumor activity of doenjang, spleen cells of Balb/c mouse were exposed to the dichloromethane and ethyl-acetate fractions for 24 hours at 37${\circ}$C . The culture supernatants following the treatment of djchloromethane and ethylacetate factions to spleen cells increased the production of IL-2. These results indicated that the anticarcinogenic effect of doenjang was mediated by the production of IL-2.
We studied the inhibitory effect of solvent fractions from doenjang on mutagenicity using Salmonella typhimurium TA100 in Ames test. We also investigated the effect of solvent fractions from doenjang on the growth of tumor cells and the production of interleukin-2 (IL-2). The treatment of dichlorormethane and ethylacetate fractions (2.5 mg/assay) from doenjang to Ames test system inhibited aflatoxin B$_1$ (AFB$_1$) induced mutagenicity by 96% and 97%, respectively, and showed a higher antimutagenic effect than other solvent fractions. In case of N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguamidine (MNNG) induced mutagenicity, the ethylacetate fraction showed the highest inhibitory effect (by 75%) among the other sol-vent fractions, although the inhibitory effect was not stronger compared to AFB$_1$ induced mutagenicity. The treatment of dichloromethane and ethylacetate fractions markedly inhibited the growth of Yac-1 (by 80% and 94%, respectively) and sacroma-180 cancer cells (by 60% and 96%, respectively) after 4 days of incubation at 37${\circ}$C. To elucidate the immunological mechanism of antitumor activity of doenjang, spleen cells of Balb/c mouse were exposed to the dichloromethane and ethyl-acetate fractions for 24 hours at 37${\circ}$C . The culture supernatants following the treatment of djchloromethane and ethylacetate factions to spleen cells increased the production of IL-2. These results indicated that the anticarcinogenic effect of doenjang was mediated by the production of IL-2.
* AI 자동 식별 결과로 적합하지 않은 문장이 있을 수 있으니, 이용에 유의하시기 바랍니다.
문제 정의
그 한 예로 lentinan, schisofilan, polysaccharide K, ginsan 등과 같은 식물체의 고분자 물질인 다당류는 면 역반응을 향상시키 기 위하여 면역조절계 의 하나 또는 그 이상의 구성요소를 간접적인 방법을 통해 조절시킨다고 보고되었다[1, 14, 19, 30, 33]. 따라서 본 연구에서는 된장을 극성이 다른 유기용매로 분획하여 Ames test에서 돌연변이원들에 대한 돌연변이 억제 효과를 알아보고자 하였고 마우스 림프종 세포주인 Yac-1과 복수암 세포인 sarcoma-180의 증식에 대한 된장 분획물의 효과를 측정함으로서 암세포의 증식에 대한 된장 분획물의 직접적인 효과를 검토하였다. 또한 된장에 의한 면역 기능 개선 효과에 대해서는 잘 알려져 있지 않으므로 면역과정의 생물학적 작용과 대사적 변화를 유도하는 interleukin-2 (IL-2)의 생성에 대한 영향도 검토하였다.
따라서 본 연구에서는 된장을 극성이 다른 유기용매로 분획하여 Ames test에서 돌연변이원들에 대한 돌연변이 억제 효과를 알아보고자 하였고 마우스 림프종 세포주인 Yac-1과 복수암 세포인 sarcoma-180의 증식에 대한 된장 분획물의 효과를 측정함으로서 암세포의 증식에 대한 된장 분획물의 직접적인 효과를 검토하였다. 또한 된장에 의한 면역 기능 개선 효과에 대해서는 잘 알려져 있지 않으므로 면역과정의 생물학적 작용과 대사적 변화를 유도하는 interleukin-2 (IL-2)의 생성에 대한 영향도 검토하였다.
저자들은 sulforhodamine assay에 의한 저해 실험 [15] 및 DNA 합성저해 실험[18]에서 된장 메탄올 추출물들로부터 얻어진 분획물들에 의한 인체 위암, 간암 및 결장암 세포들의 증식 억제 효과를 살펴 본 결과, 디클로로메탄 분획물(CH2CI2)과 에틸아세테이트 분획물(EtOAc)에 의한 증식 억제효과가 가장 컸음을 보고하였다. 따라서 분획물들 중 특히 항돌연변이 및 인체 암세포 증식 억제 효과가 높았던 디클로로메탄 분획물 (CH2CI2)과 에틸아세테이트 분획물(EtOAc)을 중심으로 이들 분획물들에 의한 암세포 증식 억제효과를 검토하였다. 디클로로메탄 분획물(CH2CI2)의 경우, 첨가농도 15.
기대하는 면역화학 요법이 시도되고 있다. 따라서 본연구에서는 된장 메탄올 추출물로부터 얻어진 분획물들 중 앞서 항돌연변이 효과 실험에서 특히 활성이 높았던 디클로로메탄 분획물(CH2CI2)과 에틸아세테이트 분획물(EtOAc)에 의한 면역 활성 증진 효과를 검토하였다. CTLL-2 세포를 이용하여 이들 분획물들에 의한 IL-2의 생성에 대한 영향을 살펴보았을 때 대조군의 OD가 0.
제안 방법
된장을 극성이 다른 유기용매로 분획하여 Ames test를 이용한 항돌연변이성 효과를 알아보고자 하였고 Yac-1과 sarcoma-180 암세포들의 증식에 대한 된장 분획물의 효과를 측정함과 동시에 면역과정의 생물학적 작용과 대사적 변화를 유도하는 interleukin-2 (IL-2)의 생성에 대한 효과도 검토하였다. AFBi에 대한 돌연변이 억제효과는 된장의 메탄올 추출물을 2.
분리된 세포를 PBS에 다시 부유시켜 원심분리하고 상등액을 제거한 후 lxlO6 cells/ml의 sarcoma-180 세포 부유액을 만들어 1 ml씩 복강 주사하여 이식 보존하였다. 암세포에 대한 증식 억제 효과를 알아보기 위하여 IxlO6 cells/ml의 농도로 실험동물에 복강 주사하여 10일 후 그들의 복강으로부터 채취한 sarcoma-180 세포를 각각 10% fetal calf serum (FCS), 2 mM glutamine 및 penicillinstreptomycin0] 함유된 RPMI 1640 배지에서 1x10, cells/ml 이 되도록 세포수를 조정한 후 96 well plate에 seeding하고 24시간 배양한 후 시료 추출물을 첨가한 후 370, 5% CO2 incubator에서 배 양하였다. 배 양 4일 후에 3-(4, 5-dimethylth- iazol)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) 10 μ1를 첨 가하고 4시간 동안 발색시켰다.
배 양 4일 후에 3-(4, 5-dimethylth- iazol)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) 10 μ1를 첨 가하고 4시간 동안 발색시켰다. 다시 0.02 N의 HC1 용액에 10%의 농도로 녹인 sodium dodecyl sulfate (SDS) 용액 250 μ1를 첨가하여 실온에서 하룻밤 방치한 후 microplate reader (Model 550 microplate reader, Bio-Rad, USA)를 이용하여 540 nm에서 흡광도값(OD)을 대조군과 비교하였다[24].
분리하였다. 즉, 실험동물로부터 무균적으로 비장을 적출하여 Hank's balanced salt solution (HBSS) 용액으로 2번 세척하여 조직 배양용 접시에 옮긴 후 다시 신선한 HBSS 용액을 가하여 핀셋으로 가볍게 문질러 비장세포를 유리시켰다. 세포 부유액을 15분 동안 방치한 후 그 상층액을 HBSS 용액으로 다시 세척한 다음 증류수와 PBS를 이용하여 적혈구를 제거하고 10% FCS가 함유된 RPMI 1640 배지로 부유 시켜 사용하였다.
즉, 실험동물로부터 무균적으로 비장을 적출하여 Hank's balanced salt solution (HBSS) 용액으로 2번 세척하여 조직 배양용 접시에 옮긴 후 다시 신선한 HBSS 용액을 가하여 핀셋으로 가볍게 문질러 비장세포를 유리시켰다. 세포 부유액을 15분 동안 방치한 후 그 상층액을 HBSS 용액으로 다시 세척한 다음 증류수와 PBS를 이용하여 적혈구를 제거하고 10% FCS가 함유된 RPMI 1640 배지로 부유 시켜 사용하였다.
이들을 300 g에서 10분간, 10, 000 g에서 30분간 원심분리 시킨 후 그 상층액을 취하여 -70℃ 냉동기에 보관하면서 IL-2 assay에 사용하였다. IL-2 의존성 세포주인 CTLL-2 세포를 이용한 방법【11]을 변형하여 IL-2 활성을 측정하였다. 한국 세포주 은행으로부터 분양받은 CTLL-2 세포는 10% FCS와 20 llJ/ml 의 IL-2가 함유된 RPMI 1640 배지에서 3일간 배양한 후 trypan blue 염색액으로 세포의 생존율을 확인하고 lxlO"1 2 cells/ml 세포의 농도로 계대배양하면서 실험에 사용하였다.
한국 세포주 은행으로부터 분양받은 CTLL-2 세포는 10% FCS와 20 llJ/ml 의 IL-2가 함유된 RPMI 1640 배지에서 3일간 배양한 후 trypan blue 염색액으로 세포의 생존율을 확인하고 lxlO"1 2 cells/ml 세포의 농도로 계대배양하면서 실험에 사용하였다. 10% FCS가 함유된 PRMI 1640 배지에서 CTLL-2 세포 (IxlO5 cells/md)가 부유된 세포액 50 μ1를 96 well plate에 가한 후 다시 비장세포 배양 상층액 50 μ1를 첨가하여 37℃, 5% CO2 incubator에서 18시간 배 양시 킨 다음 MTT assay로 IL-2를 측정하였다.
5 mg/plate)에 대한 독성실험을 한 결과 독성이 나타나지 않았다. 된장을 먼저 헥산(Hex)으로 지방을 제거한 후 메탄올로 추출한 추출물에서 항돌연변이성 물질을 분리하기 위해 극성이 다른 용매인 디클로로메탄(CH2CI2), 에틸아세테이트(EQAC), 부탄올(BuOH)로 분획하여 각 분획물의 항돌연변이 효과를 검토해 보았다. Table 1에서 나타나는 것과 같이 간접돌연변이원인 AFBi에 대한 돌연변이 억제 효과는 된장의 메탄올 추출물(MeOH)을 2.
대상 데이터
된장은 화영식품(주)으로부터 구입하여 동결 건조한 후 분말(4080 g)로 만들었고 헥산으로 3회 추출하고 잔사물(3975 g)을 2배의 메탄올로 95C에서 환류냉각기를 사용하여 3회 추출(836 g)하였다. 회전식 진공 농축기(Buchi, Switzerland) 를 이용하여 농축한 후, 다시 디클로로메탄(dichloromethane, CH2CI2), 에틸아세테이트(ethylacetate, EtOAc) 및 부탄올 (Butanol, BuOH) 순서로 분획깔때기를 이용하여 분획한 후회전식 진공 농축기로 용매를 제거하고 각각 디클로로메탄분획물(104 g), 에틸아세테이트 분획물(27 g), 부탄올 분획물 (91 g) 및 물 분획물(614 g)을 얻었다.
Salmonella typhimurium TA100은 S. typhimurium LT-2의 histidine auxotroph로서 미국 California 대학의 B.N. Ames 박사로부터 제공받아 정기적으로 histidine 요구성, deep rough (rfd) 돌연변이, uvrB 돌연변이, R factor 등의 유전형질을 확인하면서 실험에 사용하였다. 간접 돌연변이 유발물질인 alflatoxin (AF&)은 Sigma Chemical Co.
복수암 세포인 sarcoma-180 세포는 실험동물의 복강 내에서 1주일 간격으로 계대 배양하여 보존하면서 실험에 사용하였다. 즉 실험동물의 복강 내에서 1 주일간 배양된 sarco- ma-180 세포를 복수와 함께 취하고 PBS로 현탁한 후 원심분리하여 분리하였다.
마우스 비장 세포(4xl06 cells/ml)를 96 well에 부유시킨 다음 표적세포인 Yac-1 (IxlO4 cells/ml)을 첨가하고 시료 추출물(1 ug/ml)을처리하여 37℃, 5% CO2 incubator에서 배양하였다. 배지는 RPMI 1640이었으며 FCS 10% 추가하여 사용하였다. 4일 배양시킨 후 MIT assay로 세포생존율을 결정하여 아래의 식에 따라 dead cell (%)로 표시하였다.
IL-2 의존성 세포주인 CTLL-2 세포를 이용한 방법【11]을 변형하여 IL-2 활성을 측정하였다. 한국 세포주 은행으로부터 분양받은 CTLL-2 세포는 10% FCS와 20 llJ/ml 의 IL-2가 함유된 RPMI 1640 배지에서 3일간 배양한 후 trypan blue 염색액으로 세포의 생존율을 확인하고 lxlO"1 2 cells/ml 세포의 농도로 계대배양하면서 실험에 사용하였다. 10% FCS가 함유된 PRMI 1640 배지에서 CTLL-2 세포 (IxlO5 cells/md)가 부유된 세포액 50 μ1를 96 well plate에 가한 후 다시 비장세포 배양 상층액 50 μ1를 첨가하여 37℃, 5% CO2 incubator에서 18시간 배 양시 킨 다음 MTT assay로 IL-2를 측정하였다.
보고 있다. 된장 유기용매 추출물에서 종양세포에 대한 직접적인 세포 살해효과를 알아보기 위하여 sarcoma 180 복수암 세포와 Yac-1 림프종 세포를 이용하였다. 저자들은 sulforhodamine assay에 의한 저해 실험 [15] 및 DNA 합성저해 실험[18]에서 된장 메탄올 추출물들로부터 얻어진 분획물들에 의한 인체 위암, 간암 및 결장암 세포들의 증식 억제 효과를 살펴 본 결과, 디클로로메탄 분획물(CH2CI2)과 에틸아세테이트 분획물(EtOAc)에 의한 증식 억제효과가 가장 컸음을 보고하였다.
데이터처리
대조군과 각 시료로부터 얻은 실험 자료로부터 ANOVA 를 구한 후 Duncan's mutiple range test를 이용하여 통계 분석하였다.
are mean+SD. a dMeans with the different letters are significantly different at the 0.05 level of significances as determined by Duncan's multiple range test.
이론/모형
마우스로부터 비장세포는 Mishell과 Shiigi의 방법 [23] 에의해 분리하였다. 즉, 실험동물로부터 무균적으로 비장을 적출하여 Hank's balanced salt solution (HBSS) 용액으로 2번 세척하여 조직 배양용 접시에 옮긴 후 다시 신선한 HBSS 용액을 가하여 핀셋으로 가볍게 문질러 비장세포를 유리시켰다.
비장세포 배양 상층액은 Weir 등[31]의 방법에 의해 준비하였다. 준비된 비장세포를 10% FCS를 포함한 RPMI 1640 배지로 4xl06 cells/ml의 농도로 조절하고 시료추출물을 가하여 37℃, 5% CO2 incubator에서 24시간 배양하였다.
준비된 비장세포를 10% FCS를 포함한 RPMI 1640 배지로 4xl06 cells/ml의 농도로 조절하고 시료추출물을 가하여 37℃, 5% CO2 incubator에서 24시간 배양하였다. 이들을 300 g에서 10분간, 10, 000 g에서 30분간 원심분리 시킨 후 그 상층액을 취하여 -70℃ 냉동기에 보관하면서 IL-2 assay에 사용하였다. IL-2 의존성 세포주인 CTLL-2 세포를 이용한 방법【11]을 변형하여 IL-2 활성을 측정하였다.
성능/효과
된장을 먼저 헥산(Hex)으로 지방을 제거한 후 메탄올로 추출한 추출물에서 항돌연변이성 물질을 분리하기 위해 극성이 다른 용매인 디클로로메탄(CH2CI2), 에틸아세테이트(EQAC), 부탄올(BuOH)로 분획하여 각 분획물의 항돌연변이 효과를 검토해 보았다. Table 1에서 나타나는 것과 같이 간접돌연변이원인 AFBi에 대한 돌연변이 억제 효과는 된장의 메탄올 추출물(MeOH)을 2.5 mg/plate 농도로 첨가했을 때 84%의 돌연변이 저해효과를 나타내었고 같은 첨가농도에서 메탄올 분획물들 중 디클로로메탄 분획물(CH2CI2)과 에틸아세테이트 분획물(EtOAc)은 각각 96%, 97%로 상당히 높은 항돌연변이 효과를 나타내었다. 헥산 (Hex) 추출물과 부탄올(BuOH) 분획물의 경우도 각각 87%, 82%로 항돌연변이 효과를 나타내었다.
이 밖에도 natural killer 세포증식 및 B 세포의 항체 합성을 증가시키며 동물에서 암의 전이 과정을 예방한다고 알려져 있다[8]. 이상의 결과들로부터 된장 분획물들 중 특히 디클로로메탄 분획물과 에틸아세테이트 분회 물은 림프종 세포와 복수암 세포의 증식 억제나 생존력을 감소시키는데 작용할 뿐만 아니라 면역세포에서 IL-2 cy- tokine의 생성을 증가시켜 면역 활성 증진 효과를 나타내었고 돌연변이원에 대해서도 강한 저해 효과를 나타내어 암을 예방하는 것으로 사료된다.
AFBi에 대한 돌연변이 억제효과는 된장의 메탄올 추출물을 2.5 mg/plate 농도로 첨가했을 때 84%의 돌연변이 저해 효과를 나타내었고 같은 첨가농도에서 메탄올 분획물들 중 디클로로메탄 분획물과 에틸아세테이트 분획물은 각각 96%, 97%로 상당한 항돌연변이 효과를 나타내었다. 직접 돌연변이 원인 MNNG의 경우, AFBi에 비해 돌연변이 저해 효과가 다소 떨어지지만 그 중에서도 에틸아세테이트 분획물이 75%로 가장 높은 항돌연변이 효과를 나타내었다.
직접 돌연변이 원인 MNNG의 경우, AFBi에 비해 돌연변이 저해 효과가 다소 떨어지지만 그 중에서도 에틸아세테이트 분획물이 75%로 가장 높은 항돌연변이 효과를 나타내었다. Sarcoma 180 cell 암세포 증식 억제효과 실험에서 디클로로메탄 분획물(첨가농도 15.6 ug/ml)은 60%의 저해효과를 나타내면서 농도 의존적으로 그 저해효과가 컸으며 250 ng/ml 농도에서는 80%의 저해효과를 관찰할 수가 있었다. 에틸아세테이트 분획물의 경우 디클로로메탄 분획물에 비해 다소 낮은 저해 효과를 나타내었지만 250 ng/ml 농도에서 약 60%의 세포독성 효과를 나타내었다.
에틸아세테이트 분획물의 경우 디클로로메탄 분획물에 비해 다소 낮은 저해 효과를 나타내었지만 250 ng/ml 농도에서 약 60%의 세포독성 효과를 나타내었다. 디클로로메탄 분획물과 에틸아세테이트 분획물에 의한 면역 활성 증진 효과를 검토한 결과, 디클로로메탄 분획물은 첨가농도 1 ug/ml에서 94%로 Yac-1 표적세포를 사멸시켰으며 에틸아세테이트 분획물도 동일 농도에서 96%의 억제효과를 나타내었다. CTLL 세포를 이용하여 이들 분획물들에 의한 interleukin-2 (IL-2)의 활성 증진 효과를 살펴보았을 때 대조군의 OD가 0.
디클로로메탄 분획물과 에틸아세테이트 분획물에 의한 면역 활성 증진 효과를 검토한 결과, 디클로로메탄 분획물은 첨가농도 1 ug/ml에서 94%로 Yac-1 표적세포를 사멸시켰으며 에틸아세테이트 분획물도 동일 농도에서 96%의 억제효과를 나타내었다. CTLL 세포를 이용하여 이들 분획물들에 의한 interleukin-2 (IL-2)의 활성 증진 효과를 살펴보았을 때 대조군의 OD가 0.16인데 비해 디클로로메탄 분획물과 에틸아세테이트 분획물은 첨가농도 1 pg/ml 에서 각각 0.30과 0.24를 나타내어 면역 활성 증진효과를 나타내었다. 따라서 된장에 의한 암세포 증식 억제효과는 Ⅱ.
참고문헌 (33)
Akiyama, J., T. Kawamura, E. Gotohda, Y. Yamada, M. Hosokawa, T. Kodama and H. Kobayashi. 1977. Immunotheraphy of transplated KMT-17 tumor in rats by combination of cyclo-phosphamide and immunostimulatory protein- bound polysaccharide isolated from basidiomycetes. Cancer Res. 37, 3042-3045
Ames, B. N., J. McGann and E. Yamasaki. 1975. Method for detecting carcinogens and mutagens with the Salmonella /mammalian-microsome mutagenicity test. Muta. Res. 31, 347-364
Amirghofran, Z., M. Azadbarkht and M. H. Karimi. 2002. Evaluation of the immunomodulatory effects of five herbal plants. J. Ethnopharmacol. 72, 167-172
Chihara G., T. Suga, J. Hamuro, N. Takasuka, Y. Y. Maeda, T. Sasaki and T. Shiio. 1987. Antitumor and metastasis inhibitory activities of lentinan as an immunomodulator. Cancer Detection and Prevention (Suppl.) 21, 423-443
Choi, G. S., S. Y. Lim and J. S. Choi. 1998. Antioxidant and nitrile scavenging effect of soybean, meju and doenjang. Kor. J. Life Sci. 8, 473-478
Choi, S. Y., M. J. Cheigh, J. J. Lee, H. J. Kim, S. S. Hong, K. S. Chung and B. K. Lee. 1999. Growth suppression effect of traditional fermented soybean paste on various tumor cells. J. Kor. Soc. Food Sci. Nutr. 28, 458-463
Cui, C. B., E. Y. Lee, D. S. Lee and S. S. Ham. 2002. Antimutagenic and anticancer effects of ethanol extract from Korean traditional doenjang added sea tangle. J. Kor. Soc. Food Sci. Nutr. 31, 322-328
Devi, M. A. and N. P. Das. 1994. Antiproliferative effect polyunsaturated fatty acids and interleukin-2 on normal and abnormal human lymphocytes. Experietia. 50, 489-492
Fischer, S. M., J. Leyton, M. L. Lee, M. Loeniskar, M. A. Belury and R. E. Maldve. 1992. Differential effects of dietary linoleic acid on mouse skin-tumor promotion and mammary carcinogenesis. Cancer Res. (Suupl) 52, 2049s- 2054s
Gilis, S., M. M. Ferm, W. Ou and K. A. Smith. 1978. T cell growth factor: Parameters of production and a quantitative microassay for activity. J. Immunol. 120, 2027-2032
Hwang, K. M., S. H. Oh and K. Y. Park. 2007. Increased antimutagenic and in vitro anticancer effects by adding green tea extract and bamboo salt during doenjang fermentation. J. Kor. Soc. Food Sci. Nutr. 36, 1-7
Kim, K. H., Y. S. Lee, I. S. Jung, S. Y. Park, H. Y. Chung, I. R. Lee and Y. S. Yun. 1998. Acidic polysaccharide from Panax ginseng, ginsan, induces Th1 cell and macrophage cytokines and generates LAK cells in synergy with rIL-2. Planta Med. 64, 110-115
Lim, S. Y., K. Y. Park and S. H. Rhee. 1999. Anticancer effects of doenjang in in vitro sulforhodamine B (SRB) assay. J. Kor. Soc. Food Sci. Nutr. 28, 240-245
Lim, S. Y., K. Y. Park and S. H. Rhee. 2004. Inhibitory effect of methanol extracts and solvent fractions from doenjang on mutagenicity using in vitro SOS chromotest and in vivo Drosophila mutagenic system. J. Kor. Soc. Food Sci. Nutr. 33, 1432-1438
Lim, S. Y., S. H. Rhee. and K. Y. Park. 2004. Inhibitory effect of methanol extract of doenjang on growth and DNA synthesis of human cancer cells. J. Kor. Soc. Food Sci. Nutr. 33, 936-940
Lim, S. Y., S. H. Rhee and K. Y. Park. 2005. Effect of solvent fractions from methanol extract of doenjang on inhibition of growth and DNA synthesis of human cancer cells. Kor. J. Life Sci. 15, 685-691
Maeda, Y. Y., S. T. Watanabe, G. Chihara and M. Rokutanda. 1984. T-cell mediated vascular dilatation and hemorrhage induced by antitumor polysaccharide. Intl. J. Immunopharmacol. 6, 493-501
Mishell, B. B. and S. M. Shiigi. 1980. Selected methods in cellular immunology. 1st ed. Wh Freeman Co. San Francisco, p 4
Mosmann, T. 1983. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: Application to proliferation and cytotoxicity assays. J. Immunol. Methods 65, 55-63
Ohta, T., N. Nakamura, M. Moriya, T. Shirai and T. Kada 1984. The SOS function-inducing activity of chemical mutagens in Escherichia coli. Muta. Res. 131, 101-109
Park, K. Y., S. H. Moon, H. S. Baik and H. S. Cheigh. 1990. Antimutagenic effect of doenjang (Korean fermented soy paste) toward aflatoxin $B_1$ . J. Kor. Sco. Food Nutr. 19, 156-162
Phinney, S. D., R. S. Odin, S. B. Johnson and R. T. Holman. 1990. Reduced arachidonate in serum phospholipids and cholesteryl esters associated with vegetarian diets in humans. Am. J. Clin. Nutr. 51, 385-392
Rueff, J. A., L. H. Borba, T. Chaveca, M. I. Gomes and M. Halpern. 1986. Genetic toxicology of flavonoids: The role of metabolic conditions in the induction of reverse mutation. SOS function and sister-chromatid exchages. Mutagenesis 1, 179-183
Song, S. K., K. H. Kim and H. S. Kim. 2001. Cytotoxic effects and compounds of lipid fractions from soybean products on cancer cells. J. Kor. Soc. Food Sci. Nutr. 30, 1266-1271
Tsuru, S. and K. Nomoto. 1983. Effect of PSK on specific tumor immunity to syngeneic tumor cells. J. Clin. Lab. Immunol. 4, 215-219
Weir, D. W., L. A. Herzenberg and C. Blackwell. 1986. Handbook of experimental immunology. 4th ed. Blackwell Scientific Publications, Boston, p 60
Yoon. K. D., D. J. Kwon, S. S. Hong, S. I. Kim and K. S. Chung. 1996. Inhibition of soybean and fermented soybean products on the chemically induced mutagenesis. Kor. J. Appl. Microbiol. Biotechnol. 24, 525-528
Yun Y. S., Y. S. Lee, S. K. Jo and I. S. Jung. 1993. Inhibition of autochthonous tumor by ethanol insoluble fraction from Panax ginseng as an immunomodulator. Planta Med. 59, 521-524
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.