46,XX 남성은 여성의 핵형을 가지나, 남성의 표현형을 나타내는 경우를 말한다. SRY 유전자는 Y 염색체(Yp 11.31)의 단완에 위치하며 인간에서 성을 결정하는 중요한 요인이다. 본 증례는 무정자증의 임상증상이 보이는 46,XX 남성의 정확한 원인분석을 위해 말초혈액분석에서 세포유전학적인 방법과 분자유전학적인 방법을 함께 병행한 보고이다. 남성 표현형과 비교하여 성에 불일치 소견이 보여, 그 원인을 찾기 위해 QF-PCR, FISH와 Multiplex PCR 분석 등의 분자유전학적 방법을 적용하였다. 그 결과, 여성의 성 염색체 XX를 가지되 SRY 유전자가 존재하여 남성 표현형을 보이면서 무정자증이 된 경우이다. 따라서, 일반적인 세포유전학 방법을 기초로 QF-PCR, FISH와 Multiplex PCR 분석 등과 같은 분자유전학적 방법을 병행하면 환자의 정보를 빠르고 정확하게 제공하는데 효과적이고 유용하다.
46,XX 남성은 여성의 핵형을 가지나, 남성의 표현형을 나타내는 경우를 말한다. SRY 유전자는 Y 염색체(Yp 11.31)의 단완에 위치하며 인간에서 성을 결정하는 중요한 요인이다. 본 증례는 무정자증의 임상증상이 보이는 46,XX 남성의 정확한 원인분석을 위해 말초혈액분석에서 세포유전학적인 방법과 분자유전학적인 방법을 함께 병행한 보고이다. 남성 표현형과 비교하여 성에 불일치 소견이 보여, 그 원인을 찾기 위해 QF-PCR, FISH와 Multiplex PCR 분석 등의 분자유전학적 방법을 적용하였다. 그 결과, 여성의 성 염색체 XX를 가지되 SRY 유전자가 존재하여 남성 표현형을 보이면서 무정자증이 된 경우이다. 따라서, 일반적인 세포유전학 방법을 기초로 QF-PCR, FISH와 Multiplex PCR 분석 등과 같은 분자유전학적 방법을 병행하면 환자의 정보를 빠르고 정확하게 제공하는데 효과적이고 유용하다.
46,XX male is a rare sex constitution characterized by the development of bilateral testis in persons who lack a Y chromosome. Manifestations of 46,XX males are usually hypogonadism, gynecomastia, azoospermia, and hyalinations of seminiferous tubules. The incidence of XX male reversal is approximate...
46,XX male is a rare sex constitution characterized by the development of bilateral testis in persons who lack a Y chromosome. Manifestations of 46,XX males are usually hypogonadism, gynecomastia, azoospermia, and hyalinations of seminiferous tubules. The incidence of XX male reversal is approximately 1 in 20,000 male neonates. The SRYgene is located at the short arm of the Y chromosome(Yp11.31) and codes for testis determining factor in humans. Here, the patient, who presented with a normal male phenotype, was referred for azoospermia. Conventional cytogenetic analysis showed a 46,XX karyotype. Quantitative fluorescent polymerase chain reaction(QF-PCR) and Multiplex PCR studies identified SRY gene. And, Fluorescence In Situ Hybridization(FISH) confirmed the SRY gene on the distal short arm of chromosome X. We identified the SRY gene on the distal short arm of chromosome X by molecular cytogenetic and molecular analyses. Therefore, molecular-cytogenetics and molecular studies were proved to be clinically useful adjunctive tool to conventional prenatal cytogenetic analysis.
46,XX male is a rare sex constitution characterized by the development of bilateral testis in persons who lack a Y chromosome. Manifestations of 46,XX males are usually hypogonadism, gynecomastia, azoospermia, and hyalinations of seminiferous tubules. The incidence of XX male reversal is approximately 1 in 20,000 male neonates. The SRYgene is located at the short arm of the Y chromosome(Yp11.31) and codes for testis determining factor in humans. Here, the patient, who presented with a normal male phenotype, was referred for azoospermia. Conventional cytogenetic analysis showed a 46,XX karyotype. Quantitative fluorescent polymerase chain reaction(QF-PCR) and Multiplex PCR studies identified SRY gene. And, Fluorescence In Situ Hybridization(FISH) confirmed the SRY gene on the distal short arm of chromosome X. We identified the SRY gene on the distal short arm of chromosome X by molecular cytogenetic and molecular analyses. Therefore, molecular-cytogenetics and molecular studies were proved to be clinically useful adjunctive tool to conventional prenatal cytogenetic analysis.
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문제 정의
또한, 상용화되어 있는 Y chromosome deletion detection kit (Y Chromosome Deletion Detection System, Version 2.0, Promega, USA)를 이용하여 Y 염색체의 결실 정도를 확인하고자 하였다. 말초 혈액의 DNA는 Puregene DNA isolation kit (Gentra Systems Inc.
또한, 상용화되어 있는 Y chromosome deletion detection system을 이용하여 Y 염색체의 결실 부분을 찾고자 하였다. 20개의 STS markers를 사용하였고, SRY STS marker에서만 band를 확인할 수 있었다(Fig.
본 증례에서는 표현형과 비교하여 성에 불일치 소견이 보이는 환자의 염색체 분석을 위해 분자유전학적 방법인 quantitative fluorescent polymerase chain reaction (QF-PCR), fluorescence In Situ Hybridization (FISH)과 Multiplex PCR 방법 등을 이용하여 X 염색체의 단완 말단 부위에서 SRY 유전자가 존재하고 있음을 확인하였다. 염색체는 여성의 핵형을 가지되 SRY 유전자가 존재하여 남성의 표현형을 보이면서 무정자증이 된 증례를 보고하는 바이다.
핵형분석결과를 재확인하기 위한 재검 시 빠른 결과를 위해 QF-PCR을 이용하여 환자의 성을 확인하고자 하였다. 본 검사에서 6개의 STR marker를 사용하였으며(Table 1), AMEL marker의 경우 염색체 X에 해당하는 하나의 peak을 나타냈으며, XHPRT, DXS6854, DXS6803, X22의 4개의 markers 에서는 서로 다른 size의 heterozygous한 1:1의 2개 peaks가 관찰되어 X 염색체가 두 개로 확인되었으며, SRY marker에서는 하나의 peak가 확인되어 XX 남성의 원인을 확인할 수 있었다(Fig.
제안 방법
QF-PCR 분석과 핵형분석 결과를 토대로 SRY 유전자의 위치를 확인하기 위해서 LSI SRY/CEP X dual probe를 이용하여 FISH를 시행하였다. LSI SRY에 해당하는 spectrum orange signal을 X 염색체의 단완 말단 부위에서 1개 관찰하였고, CEP X 에 해당하는 spectrum green의 signal을 2개 확인하였다(Fig. 3). 이는 X 염색체에 단완 말단 부위에 SRY 유전자를 포함하는 경우로, 비교적 46,XX 남성에서 흔하게 관찰되는 원인 중 하나이다.
QF-PCR 분석과 핵형분석 결과를 토대로 SRY 유전자의 위치를 확인하기 위해서 LSI SRY/CEP X dual probe를 이용하여 FISH를 시행하였다. LSI SRY에 해당하는 spectrum orange signal을 X 염색체의 단완 말단 부위에서 1개 관찰하였고, CEP X 에 해당하는 spectrum green의 signal을 2개 확인하였다(Fig.
SRY 유전자 여부를 확인하기 위해 QF-PCR 분석을 실시하였다. QF-PCR 분석을 위해서는 말초혈액의 DNA는 instaGene matrix (BIO-RAD Laboratories, Hercules, CA., USA)를 이용하여 cell pellets과 배양세포로부터 추출하였고, PCR은 Chromoquant kit (Cybergene AB, Sweden)를 사용하였다. 염색체 X와 Y의 확인을 위해 6개의 short tandem repeats (STR) markers를 사용하였다(Table 1).
SRY 유전자 여부를 확인하기 위해 QF-PCR 분석을 실시하였다. QF-PCR 분석을 위해서는 말초혈액의 DNA는 instaGene matrix (BIO-RAD Laboratories, Hercules, CA.
SRY 유전자의 위치를 확인하기 위해 FISH 분석을 시행하였다. 간기세포와 중기세포에서 시행되었으며7), 검사를 위한 probe는 LSI SRY (spectrum orange)/CEP X (spectrum green) dual probe (Vysis, IL, USA)를 사용하여 orange의 signal을 X 염색체의 단완 말단 부위에서 1개, spectrum green의 signal을 2개 확인하였다(Fig.
SRY 유전자의 위치를 확인하기 위해 FISH 분석을 시행하였다. 간기세포와 중기세포에서 시행되었으며7), 검사를 위한 probe는 LSI SRY (spectrum orange)/CEP X (spectrum green) dual probe (Vysis, IL, USA)를 사용하여 orange의 signal을 X 염색체의 단완 말단 부위에서 1개, spectrum green의 signal을 2개 확인하였다(Fig. 3).
1), 이는 환자의 표현형과 비교하여 성에 불일치 소견을 보였다. 따라서 이에 대한 원인을 확인하고자 QF-PCR, FISH와 Multiplex PCR 분석 등과 같은 분자유전학적 방법을 시행하였다.
0, Promega, USA)를 이용하여 Y 염색체의 결실 정도를 확인하고자 하였다. 말초 혈액의 DNA는 Puregene DNA isolation kit (Gentra Systems Inc., Minneapolis, MN, USA)를 사용하였으며, Y chromosome deletion detection kit에서 제공하는 메뉴얼에 따라 multiplex matrix mix A, B, C, D, E의 5가지를 실시하였다. 이때 사용된 sequence-tagged sites (STS) markers는 20개이며(Fig.
상기 환자는 무정자증으로 내원하였으며, 세포유전학적 결과 46,XX 로 정상 여성의 핵형분석을 보였다. 이는 환자의 표현형에서 성의 불일치로 환자의 동의를 얻어 재검을 시행하였다. 재검에 의한 핵형분석의 결과도 46,XX 였으며(Fig.
이는 환자의 표현형에서 성의 불일치로 환자의 동의를 얻어 재검을 시행하였다. 재검에 의한 핵형분석의 결과도 46,XX 였으며(Fig. 1), 성역전(sex reversal)의 원인을 알아보기 위해 QF-PCR, FISH와 Multiplex PCR 분석 등의 분자유전학적 방법을 적용하였다. 검체에 따라서는, 일반적인 염색체 분석법만으로는 정확한 정보를 제공하기 어려우므로 QF-PCR, FISH, Multiplex PCR 분석 등의 분자유전학적 방법이 보조적인 수단으로 반드시 필요하며 매우 유용하다.
대상 데이터
또한, 상용화되어 있는 Y chromosome deletion detection system을 이용하여 Y 염색체의 결실 부분을 찾고자 하였다. 20개의 STS markers를 사용하였고, SRY STS marker에서만 band를 확인할 수 있었다(Fig. 4, 5).
29세의 성인남성으로 무정자증을 주소로 내원하였으며, 말초혈액을 이용한 염색체 분석이 의뢰되었다. 일반적인 세포 유전학분석을 위해 21개의 중기세포에서 trypsin-Giemsa's stain method (GTG) 염색법을 이용하여 550 bands의 해상도로 분석하였다7, 8).
Y chromosome deletion analysis. The amplification products from the Multiplex A Master Mix, Multiplex B Master Mix, Multiplex C Master Mix, Multiplex D Master Mix, and Multiplex E Master Mix are shown. Lane 1, male genomic DNA control; Lane 2, sample male DNA; Lane 3, DW.
상기 환자는 무정자증으로 내원하였으며, 세포유전학적 결과 46,XX 로 정상 여성의 핵형분석을 보였다. 이는 환자의 표현형에서 성의 불일치로 환자의 동의를 얻어 재검을 시행하였다.
, USA)를 이용하여 cell pellets과 배양세포로부터 추출하였고, PCR은 Chromoquant kit (Cybergene AB, Sweden)를 사용하였다. 염색체 X와 Y의 확인을 위해 6개의 short tandem repeats (STR) markers를 사용하였다(Table 1). Amelogenin(AMEL)에서는 1개의 peak를 보였으며, XHPRT, DXS6854, DXS6803, X22 marker에서 X 염색체가 2개로 판단되는 peak을 확인할 수 있었으며, SRY marker에서는 하나의 peak을 확인하였다(Fig.
이론/모형
일반적인 세포 유전학분석을 위해 21개의 중기세포에서 trypsin-Giemsa's stain method (GTG) 염색법을 이용하여 550 bands의 해상도로 분석하였다7, 8).
성능/효과
염색체 X와 Y의 확인을 위해 6개의 short tandem repeats (STR) markers를 사용하였다(Table 1). Amelogenin(AMEL)에서는 1개의 peak를 보였으며, XHPRT, DXS6854, DXS6803, X22 marker에서 X 염색체가 2개로 판단되는 peak을 확인할 수 있었으며, SRY marker에서는 하나의 peak을 확인하였다(Fig. 2).
따라서, 상기 환자는 X 염색체의 단완 말단부위에 SRY 유전자가 존재하고 있음을 재확인하였고, 이는 여성의 성염색체 XX를 가지되 SRY 유전자가 존재하여 남성 표현형을 보이면서 무정자증의 임상 증상을 나타내는 경우와 일치하였다.
핵형분석결과를 재확인하기 위한 재검 시 빠른 결과를 위해 QF-PCR을 이용하여 환자의 성을 확인하고자 하였다. 본 검사에서 6개의 STR marker를 사용하였으며(Table 1), AMEL marker의 경우 염색체 X에 해당하는 하나의 peak을 나타냈으며, XHPRT, DXS6854, DXS6803, X22의 4개의 markers 에서는 서로 다른 size의 heterozygous한 1:1의 2개 peaks가 관찰되어 X 염색체가 두 개로 확인되었으며, SRY marker에서는 하나의 peak가 확인되어 XX 남성의 원인을 확인할 수 있었다(Fig. 2).
본 증례에서는 표현형과 비교하여 성에 불일치 소견이 보이는 환자의 염색체 분석을 위해 분자유전학적 방법인 quantitative fluorescent polymerase chain reaction (QF-PCR), fluorescence In Situ Hybridization (FISH)과 Multiplex PCR 방법 등을 이용하여 X 염색체의 단완 말단 부위에서 SRY 유전자가 존재하고 있음을 확인하였다. 염색체는 여성의 핵형을 가지되 SRY 유전자가 존재하여 남성의 표현형을 보이면서 무정자증이 된 증례를 보고하는 바이다.
일반적인 세포 유전학분석을 위해 21개의 중기세포에서 trypsin-Giemsa's stain method (GTG) 염색법을 이용하여 550 bands의 해상도로 분석하였다7, 8). 염색체 분석결과는 46,XX 이였으며(Fig. 1), 이는 환자의 표현형과 비교하여 성에 불일치 소견을 보였다. 따라서 이에 대한 원인을 확인하고자 QF-PCR, FISH와 Multiplex PCR 분석 등과 같은 분자유전학적 방법을 시행하였다.
5). 즉 X 염색체의 단완 말단 부위에서 SRY 유전자 부위가 존재하고 있음을 재확인할 수 있었다.
후속연구
결론적으로, 일반적인 세포유전학 방법을 기초로 하고 QF-PCR, FISH와 Multiplex PCR 분석 등과 같은 분자유전학적 방법을 적절하게 병행하는 것이 육안으로 관찰되는 핵형 분석 만으로 제공할 수 없는 많은 정보를 빠르고 정확하게 제공하여 임상진단 시, 정확한 진단의 결정적인 역할을 하리라 사료된다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
Y 염색체는 어떤 유전자를 가지는가?
대부분은 정상적인 신체발달 및 지능을 가진다. Y 염색체는 성적인 발달과 정자 형성의 기능을 하는 유전자를 가지고 있으며, 특히 SRY 유전자는 Y 염색체(Yp 11.31)의 단완에 위치하며 인간의 성을 결정하는 요소이다1, 2).
46,XX 남성의 대부분은 신체와 지능에 어떠한 특징을 가지는가?
46,XX 남성은 성염색체에 대하여 2개의 X 염색체를 가지고, Y 염색체가 없는 사람에서 남성의 표현형을 나타내는 경우를 말한다. 대부분은 정상적인 신체발달 및 지능을 가진다. Y 염색체는 성적인 발달과 정자 형성의 기능을 하는 유전자를 가지고 있으며, 특히 SRY 유전자는 Y 염색체(Yp 11.
46,XX 남성은 어떤 경우를 말하는가?
46,XX 남성은 성염색체에 대하여 2개의 X 염색체를 가지고, Y 염색체가 없는 사람에서 남성의 표현형을 나타내는 경우를 말한다. 대부분은 정상적인 신체발달 및 지능을 가진다.
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