생체에서의 황화수소는 의약 분야와 발효 산업에 있어서 중요한 역할을 하고 있다. 본 연구에서는 Saccharomyces cerevisiae을 이용하여 기질인 L-cysteine과 $\beta$-mercaptoethanol로부터 $\beta$-replacement 반응에 인한 황화수소를 발생시킬 수 있는 효소를 간편하고 신속하게 동정하는 방법의 확립을 목적으로 하였다. 효소에 의해 발생된 황화수소와 Pb-acetate의 반응으로 생성된 Pb-S를 gel상에서 간편하게 확인한 후, 확인된 단백질들을 이온교환컬럼를 수행한 후 gel에서 추출하는 방법으로 MALDI-TOFMS의 시료를 간단히 얻을 수 있었다. PMF 방법과 MS/MS ion search 분석을 통해 간편하게 효모에서 황화수소를 형성할 가능성이 있는 세가지 단백질의 동정에 성공하였다. 이 세 가지 단백질은 CYS3, CYS4, MET17 유전자의 단백질로서 cystathionine $\gamma$-lyase, CBS, OASS 임이 밝혀졌다. 그리고 이 세 단백질들은 L-cysteine과 $\beta$-mercaptoethanol의 존재하에서 황화수소를 실제로 생성함을 확인하였다. 본 연구에서 표적의 물질을 생산하는 단백질들을 젤상에서의 활성측정과 MALDI-TOF MS를 이용하여 간단히 그리고 정확하게 동정하는 방법을 확립하였다.
생체에서의 황화수소는 의약 분야와 발효 산업에 있어서 중요한 역할을 하고 있다. 본 연구에서는 Saccharomyces cerevisiae을 이용하여 기질인 L-cysteine과 $\beta$-mercaptoethanol로부터 $\beta$-replacement 반응에 인한 황화수소를 발생시킬 수 있는 효소를 간편하고 신속하게 동정하는 방법의 확립을 목적으로 하였다. 효소에 의해 발생된 황화수소와 Pb-acetate의 반응으로 생성된 Pb-S를 gel상에서 간편하게 확인한 후, 확인된 단백질들을 이온교환컬럼를 수행한 후 gel에서 추출하는 방법으로 MALDI-TOFMS의 시료를 간단히 얻을 수 있었다. PMF 방법과 MS/MS ion search 분석을 통해 간편하게 효모에서 황화수소를 형성할 가능성이 있는 세가지 단백질의 동정에 성공하였다. 이 세 가지 단백질은 CYS3, CYS4, MET17 유전자의 단백질로서 cystathionine $\gamma$-lyase, CBS, OASS 임이 밝혀졌다. 그리고 이 세 단백질들은 L-cysteine과 $\beta$-mercaptoethanol의 존재하에서 황화수소를 실제로 생성함을 확인하였다. 본 연구에서 표적의 물질을 생산하는 단백질들을 젤상에서의 활성측정과 MALDI-TOF MS를 이용하여 간단히 그리고 정확하게 동정하는 방법을 확립하였다.
Hydrogen sulfide ($H_2S$) is a by-product of metabolism of amino acids including sulfur and alcoholic fermentation, it is generally thought of in terms of a poisonous gas. Though $H_2S$ can have a negative impact on the perceived quality of fermented drinks due to an undesirabl...
Hydrogen sulfide ($H_2S$) is a by-product of metabolism of amino acids including sulfur and alcoholic fermentation, it is generally thought of in terms of a poisonous gas. Though $H_2S$ can have a negative impact on the perceived quality of fermented drinks due to an undesirable aroma, it plays prominent roles as a neuromodulator in the mammalian brain as well as a smooth muscle relaxant. Nowadays studies on the proteins which produce $H_2S$ are carried out in various fields such as structure, function, and metabolism. Here we propose to develop a simple and rapid $H_2S$ forming assay method, which will lead to speed up preparing the $H_2S$ forming proteins for identification by MALDI-TOF MS analysis. We detected three kinds of proteins which produce $H_2S$ in the crude extract of Saccharomyces cerevisiae. Those proteins were cystathionie $\beta$-synthase, O-acetylserine sulfhydrylase, and cystathionine $\gamma$-lyase.
Hydrogen sulfide ($H_2S$) is a by-product of metabolism of amino acids including sulfur and alcoholic fermentation, it is generally thought of in terms of a poisonous gas. Though $H_2S$ can have a negative impact on the perceived quality of fermented drinks due to an undesirable aroma, it plays prominent roles as a neuromodulator in the mammalian brain as well as a smooth muscle relaxant. Nowadays studies on the proteins which produce $H_2S$ are carried out in various fields such as structure, function, and metabolism. Here we propose to develop a simple and rapid $H_2S$ forming assay method, which will lead to speed up preparing the $H_2S$ forming proteins for identification by MALDI-TOF MS analysis. We detected three kinds of proteins which produce $H_2S$ in the crude extract of Saccharomyces cerevisiae. Those proteins were cystathionie $\beta$-synthase, O-acetylserine sulfhydrylase, and cystathionine $\gamma$-lyase.
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문제 정의
따라서 본 연구는 황화수소를 생성할 수 있는 단백질만을 선별하여 분석하고자 하였고, 황화수소를 생성할 수 있는 단백질의 동정에 관한 연구를 알코올성 발효에 사용되고, 인간과 상동성이 높은 효모 (S. cerevisiae) 기원의 단백질들을 이용하여 수행하였다(18, 19). 효모에서 황화수소를 생성할 수 있는 단백질들은 주로 보효소로서 pyridoxal 5' phosphate (PLP, 비타민 B6)를 함유하고 있다(5).
또한 이와 더불어 황화수소를 생성할 수 있는 단백질 중 하나인 cystathionine γ-lyase (CYS3)도 동정 되어졌다. 본 연구에서 생체 내에서 중요한 역할을 하는 황화수소를 생성할 수 있는 단백질들을 신속하고 정확하게 동정하는 방법을 보고한다.
본 연구에서는 Saccharomyces cerevisiae을 이용하여 기질인 L-cysteine과 β-mercaptoethanol로 부터 β-replacement 반응에 인한 황화수소를 발생시킬 수 있는 효소를 간편하고 신속하게 동정하는 방법의 확립을 목적으로 하였다.
제안 방법
황화수소를 생성할 수 있는 단백질의 활성은 기질인 L-cysteine과 β-mercaptoethanol이 각각 10 mM을 포함한 KPB (최종농도 50 mM)에 0.4 mM의 Pb-acetate, 50 uM의 PLP를 포함한 조성의 용액에 효모의 crude extract와 반응시켰다.
이렇게 생성된 황화수소 기체는 Pb-acetate와 자발적인 반응을 통해 생성되는 검은 침전인 Pb-S (lead sulfide)를 형성 한다(4). 본 연구에서는 이러한 반응을 이용하여 효모에서 황화수소를 생성할 수 있는 단백질들만을 신속하고 간편하게 선별, 정제하였고, 이 단백질들을 MALDI-TOF MS 분석으로 확인하여 CBS와 OASS를 동정하였다. 또한 이와 더불어 황화수소를 생성할 수 있는 단백질 중 하나인 cystathionine γ-lyase (CYS3)도 동정 되어졌다.
효모의 파쇄는 Bertin precellys 24 (Bertin technology, France)를 사용하였다. UV-visible 흡수 스펙트럼은 Agilent 8453 (Agilent Technologies, USA)를 사용하였고, MS 분석은 ABI4700-TOF/TOF mass spectrometer (Applied Biosystems, Framington, MA, USA)을 사용하였다.
cerevisiae)로 BY4741(ATCC 201388)과 야생형의 효모에서 CBS의 유전자가 제거된 CYS4 (ATCC 4006696) 그리고 OASS의 유전자가 제거된 MET17 (ATCC 4005211)를 사용하였다. 야생형의 효모의 배양을 위한 배지로 복합 영양 배지인 YEPD (1% yeast extract, 2% bactopeptone, 2% dextrose)를 사용하였고, CYS4와 MET17은 L-glutathione의 결핍을 고려하여 YEPD에 filter로 여과한 L-glutathione을 30 ug/ml의 농도가 되도록 첨가하였다. 모든 효모의 배양 조건은 30℃, 250 rpm을 유지하여 15시간 진탕 배양 하였다.
단백질 정량은 Bradford 방법에 의해 UV-visible 흡수스펙트럼을 이용하여 595 nm에서 흡광도를 측정하였으며, 표준시료는 Bovine serum albumin (BSA)을 사용하였다(20). 그리고 이온교환 칼럼 분획은 280 nm에서의 흡광도를 측정하여 상대적인 단백질량을 측정 하였다. 황화수소를 생성할 수 있는 단백질의 활성은 기질인 L-cysteine과 β-mercaptoethanol이 각각 10 mM을 포함한 KPB (최종농도 50 mM)에 0.
효모균체 2 g/ml (0.1 M KPB, pH 7.0) 0.5 ml와 glass bead(직경 0.5 mm) 를 1：1 (부피비) 로 하여 bead beater로 5분간 효모 파쇄를 하였고, 원심 분리기를 이용하여 glass bead를 제거한 효모의 crude extract를 조제하였다. Buffer A로 평형화 시킨 DEAE-Sephacel 컬럼에 crude extract를 흘려 흡착시킨 후, buffer A를 이용하여 컬럼을 세척한 후, buffer B 와의 비를 높이면서, 즉 NaCl의 농도를 0 M에서 1 M까지 점진적으로 증가시키면서 단백질을 분리 용출시켰다.
5 mm) 를 1：1 (부피비) 로 하여 bead beater로 5분간 효모 파쇄를 하였고, 원심 분리기를 이용하여 glass bead를 제거한 효모의 crude extract를 조제하였다. Buffer A로 평형화 시킨 DEAE-Sephacel 컬럼에 crude extract를 흘려 흡착시킨 후, buffer A를 이용하여 컬럼을 세척한 후, buffer B 와의 비를 높이면서, 즉 NaCl의 농도를 0 M에서 1 M까지 점진적으로 증가시키면서 단백질을 분리 용출시켰다. Pb-S 침전을 생성하는 분획을 확인한 후, 투석과 농축을 하여, 10% native PAGE를 실시하였다.
Buffer A로 평형화 시킨 DEAE-Sephacel 컬럼에 crude extract를 흘려 흡착시킨 후, buffer A를 이용하여 컬럼을 세척한 후, buffer B 와의 비를 높이면서, 즉 NaCl의 농도를 0 M에서 1 M까지 점진적으로 증가시키면서 단백질을 분리 용출시켰다. Pb-S 침전을 생성하는 분획을 확인한 후, 투석과 농축을 하여, 10% native PAGE를 실시하였다. Native PAGE gel 상에서 효소 활성에 의해 생성된 황화수소가 활성측정 용액에 포함된 Pb-acetate 용액과의 반응으로 생성된 침전인 Pb-S로 검게 염색된 부분을 확인할 수 있었다.
잘라 낸 조각은 다시 12.5% SDS-PAGE로 분리하여 MALDI-TOFMS 분석 시료로 사용하였다
본 단백질은 L-cysteine과 β-mercaptoethanol의 반응에서 β-replacement 반응이 가능한 효소인 CBS와 OASS로 추측이 되었고, 이를 확인하기 위해 각 효소가 제거된 CYS4와 MET17 효모들을 이용하여 동일한 실험을 수행 하였다.
015 ug/ml이 포함된 50 mM ammonium bicarbonate 용액에서 37℃에서 12시간 in-gel digest 과정을 거치고, Zip-tip을 이용하여 여과된 시료를 준비하였다. MALDI-TOF를 이용하여 peptide mass fingerprinting (PMF)과 MS/MS ion search 방식의 분석을 통해 얻은 아미노산 서열 분석 자료를 NCBI non-redundant database의 Mascot (Matrix Science) software를 이용하여 황화수소 형성 단백질과 일치하는 단백질의 종류를 확인하였다(21).
2, lane 3). 앞으로의 실험은 두 효소의 간섭을 피하고, 정제의 편의를 도모하기 위해 CYS4와 MET17 효모들을 사용하기로 하였다.
MET17과 CYS4 효모의 crude extracts (각각 50 mg과 81 mg)를 DEAE Sephacel column chromatography를 이용하여 정제 하였다. MET17 효모의 crude extract의 column 용출액은 5 ml씩 분취하였으며 각 용출액은 96 well에 분취하여 황화수소형성 반응액과 혼합하여 검은 침전의 형성을 확인하였다(Fig.
Column 분획 중, Pb-S의 생성으로 용액의 색이 변한 MET17의 12에서 14번 분획(Fig. 3A)과 CYS4의 29-30번 분획(Fig. 3B)들의 용액은 합쳐서, 투석으로 염을 제거하고, centricon tube(Millipore, 10 kDa molecular weight cut-off)를 사용하여 농축 하였다. 농축한 분획 (8 mg/ml)들은 native PAGE를 사용하여 분획 내의 단백질들을 분리한 후, Pb-acetate를 사용한 H2S의 측정방법으로 native PAGE gel 상의 CYS4 단백질과 MET17의 단백질 활성으로 만들어진 Pb-S 띠로 위치를 확인하였다.
3B)들의 용액은 합쳐서, 투석으로 염을 제거하고, centricon tube(Millipore, 10 kDa molecular weight cut-off)를 사용하여 농축 하였다. 농축한 분획 (8 mg/ml)들은 native PAGE를 사용하여 분획 내의 단백질들을 분리한 후, Pb-acetate를 사용한 H2S의 측정방법으로 native PAGE gel 상의 CYS4 단백질과 MET17의 단백질 활성으로 만들어진 Pb-S 띠로 위치를 확인하였다. 그리고 Coomassie Brilliant Blue (CBB) 용액으로 native PAGE gel을 염색하였고(Fig.
5B). 이렇게 native PAGE gel 상에 Pb-S로 염색된 CBS와 OASS를 포함한 부위만을 잘라낸 후, 5 X SDS sample 처리 buffer와 100℃에서 5분간 boiling 후, SDS PAGE를 수행하였다. 결과 native PAGE gel 상의 400 kDa 정도의 분자량을 가졌던 MET17 단백질은 SDS PAGE gel 상에서 55 kDa과 40 kDa의 분자량을 보였고, CBS외의 다른 단백질이 포함 되어 있을 가능성을 확인하였다(Fig.
6B). 이렇게 얻어진 SDS PAGE의 단백질 띠에서 단백질을 분리하여, MALDI-TOF MS 분석 시료로 사용하였다.
6 a and b)과 CYS4 단백질(Fig. 6, c)이 포함된 부분을 잘라 단백질을 추출하여 MALDI-TOF MS 분석을 하였다. CYS4 로부터 얻어진 단백질은 (Fig.
6, c) 일반적이고 간편한 PMF (peptide mass fingerprinting) 방법으로 분석 하였다. Trypsin 처리로 K (lysine)과 R (arginine)의 C 말단 결합 부위를 끊어 얻어진 펩티드들의 분자량으로부터 가능한 아미노산 서열을 분석하고, OASS의 아미노산 서열과 일치하는 아미노산 서열 부분을 나타내었다(Fig. 7, C). OASS는 O-acetyl-L-serine과 황화수소 이온 (HS-)을 기질로 사용하여 β-replacement 반응을 통하여 acetate와 L-cysteine의 형성을 촉매 하는 효소로 알려져 있고(23), 본 실험의 결과 OASS는 L-cysteine과 β-mercaptoethanol의 β-replacement 반응도 촉매하여 황화수소를 생성할 수 있음을 확인하였다.
3, A), Pb-S의 형성이 활성그래프와 일치하는 점, 즉 침전형성 강도가 두 부분으로 나뉘지 않은 점으로 보아 native 상태에서는 cysteine 형성 pathway에 있는 연관성이 높은 두 단백질이 효소복합체를 형성하고 있을 가능성이 큰 것으로 생각된다. MET17 효모에서 얻어진 두 단백질의 분석에서는 정확한 아미노산 서열분석이 가능한 MS/MS ion search에 의한 MALDI-TOF MS 분석을 하였다(Table 1). 결과와 일치하는 아미노산 서열을 갖는 단백질을 Mascot로 동정한 결과 Fig.
그리고 이 세 단백질들은 L-cysteine과 β-mercaptoethanol의 존재하에서 황화수소를 실제로 생성함을 확인하였다. 본 연구에서 표적의 물질을 생산하는 단백질들을 젤상에서의 활성측정과 MALDI-TOF MS를 이용하여 간단히 그리고 정확하게 동정하는 방법을 확립하였다.
L-cysteine, β-mercaptoethanol, PLP는 Sigma (USA)에서 구입하였다. Ion-exchange resin인 DEAE (diethylaminoethyl) Sephacel은 GE Healthcare (UK)에서 구입하였다. Buffer A는 50 mM potassium phosphate buffer (+0.
본 실험에서는 야생형의 효모 (S. cerevisiae)로 BY4741(ATCC 201388)과 야생형의 효모에서 CBS의 유전자가 제거된 CYS4 (ATCC 4006696) 그리고 OASS의 유전자가 제거된 MET17 (ATCC 4005211)를 사용하였다. 야생형의 효모의 배양을 위한 배지로 복합 영양 배지인 YEPD (1% yeast extract, 2% bactopeptone, 2% dextrose)를 사용하였고, CYS4와 MET17은 L-glutathione의 결핍을 고려하여 YEPD에 filter로 여과한 L-glutathione을 30 ug/ml의 농도가 되도록 첨가하였다.
이론/모형
단백질 정량은 Bradford 방법에 의해 UV-visible 흡수스펙트럼을 이용하여 595 nm에서 흡광도를 측정하였으며, 표준시료는 Bovine serum albumin (BSA)을 사용하였다(20). 그리고 이온교환 칼럼 분획은 280 nm에서의 흡광도를 측정하여 상대적인 단백질량을 측정 하였다.
CYS4 로부터 얻어진 단백질은 (Fig. 6, c) 일반적이고 간편한 PMF (peptide mass fingerprinting) 방법으로 분석 하였다. Trypsin 처리로 K (lysine)과 R (arginine)의 C 말단 결합 부위를 끊어 얻어진 펩티드들의 분자량으로부터 가능한 아미노산 서열을 분석하고, OASS의 아미노산 서열과 일치하는 아미노산 서열 부분을 나타내었다(Fig.
성능/효과
Pb-S 침전을 생성하는 분획을 확인한 후, 투석과 농축을 하여, 10% native PAGE를 실시하였다. Native PAGE gel 상에서 효소 활성에 의해 생성된 황화수소가 활성측정 용액에 포함된 Pb-acetate 용액과의 반응으로 생성된 침전인 Pb-S로 검게 염색된 부분을 확인할 수 있었다. 검은 색으로 염색된 부분과 동일의 위치의 gel을 잘라내었다.
이는 wild type native PAGE gel상의 상단에서 첫 번째 띠는 CBS에 의한 것을 의미한다. CYS4 효모의 native PAGE 결과, wild type native PAGE gel상의 상단 첫 번째 띠가 관찰되지 않았다. 나타난 두 번째 띠는 OASS에 의해 생성된 것으로 생각된다(Fig.
4A). MET17 효모의 crude extract에서 활성분획은 NaCl의 농도가 0.3-0.4 M에서 용출되어 결과적으로 12-14번 분획에 포함되어 있음을 확인할 수 있었다.
4B). CYS4 효모의 crude extract에서 활성분획은 NaCl의 농도가 0.4-0.5 M에서 용출되었고, 29-31번 분획에 포함되어 있음을 확인할 수 있었다.
OASS는 O-acetyl-L-serine과 황화수소 이온 (HS-)을 기질로 사용하여 β-replacement 반응을 통하여 acetate와 L-cysteine의 형성을 촉매 하는 효소로 알려져 있고(23), 본 실험의 결과 OASS는 L-cysteine과 β-mercaptoethanol의 β-replacement 반응도 촉매하여 황화수소를 생성할 수 있음을 확인하였다.
5), High molecular weight (HMW) marker(Amersham Biosciences, UK)와의 비교로 변성되지 않은 단백질의 대략의 분자량을 짐작할 수 있었다. 결과 MET17에서 얻어진 단백질은 400 kDa (Fig. 5A, lane 1), CYS4에서 얻어진 단백질은 100 kDa 정도의 분자량으로 확인이 되었다(Fig. 5B, lane 1). CBS의 경우 octamer (400 kDa), tetramer (220 kDa), 그리고 C말단인 잘린 truncated dimer (78 kDa)등 여러 형태가 보고되었고(17), 본 실험에서는 octamer 구조를 하고 있을 확률이 높았으나(Fig.
이렇게 native PAGE gel 상에 Pb-S로 염색된 CBS와 OASS를 포함한 부위만을 잘라낸 후, 5 X SDS sample 처리 buffer와 100℃에서 5분간 boiling 후, SDS PAGE를 수행하였다. 결과 native PAGE gel 상의 400 kDa 정도의 분자량을 가졌던 MET17 단백질은 SDS PAGE gel 상에서 55 kDa과 40 kDa의 분자량을 보였고, CBS외의 다른 단백질이 포함 되어 있을 가능성을 확인하였다(Fig. 6A). 100 kDa 정도의 분자량을 보였던 CYS4 효모 유래 단백질은 45 kDa의 분자량을 보였다(Fig.
Cystathionine γ-lyase는 CBS와 함께 L-serine으로부터 L-cysteine의 합성 경로에 관여하는 효소로서 포유동물의 뇌와 신경조직에서 CBS와 동일한 방법으로 황화수소를 생성하는 효소로 알려져 있다(15, 24). 이상의 결과들을 종합하면, 본 연구에서, 효모에서 황화수소를 생성하는 단백질들을 간편하고 정확하게 동정할 수 있는 방법을 확립하였다.
본 연구에서는 Saccharomyces cerevisiae을 이용하여 기질인 L-cysteine과 β-mercaptoethanol로 부터 β-replacement 반응에 인한 황화수소를 발생시킬 수 있는 효소를 간편하고 신속하게 동정하는 방법의 확립을 목적으로 하였다. 효소에 의해 발생된 황화수소와 Pb-acetate의 반응으로 생성된 Pb-S를 gel상에서 간편하게 확인한 후, 확인된 단백질들을 이온 교환컬럼를 수행한 후 gel에서 추출하는 방법으로 MALDI-TOF MS의 시료를 간단히 얻을 수 있었다. PMF 방법과 MS/MS ion search 분석을 통해 간편하게 효모에서 황화수소를 형성할 가능성이 있는 세가지 단백질의 동정에 성공하였다.
이 세 가지 단백질은 CYS3, CYS4, MET17 유전자의 단백질로서 cystathionine γ-lyase, CBS, OASS 임이 밝혀졌다. 그리고 이 세 단백질들은 L-cysteine과 β-mercaptoethanol의 존재하에서 황화수소를 실제로 생성함을 확인하였다. 본 연구에서 표적의 물질을 생산하는 단백질들을 젤상에서의 활성측정과 MALDI-TOF MS를 이용하여 간단히 그리고 정확하게 동정하는 방법을 확립하였다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
황화수소는 포유류의 뇌에서 어떻게 생성되는가?
황화수소 (H2S)는 주로 포유동물의 뇌에서, L-methionine에서 L-cysteine의 대사경로에서 cystathionie β-synthase (CBS)에 의해 L-cystathionine과 함께 생성되는 대사산물이며 비록 썩은 달걀 냄새를 내는 독성의 기체이지만, 포유동물의 뇌에서 신경조절 물질로서의 중요한 기능을 한다(1, 2). 또한 평활근의 이완제로서 기능을 하며, 포유동물의 뇌에서 황화수소의 낮은 농도와 몇몇 질병과의 연관성이 밝혀졌고, 특히 Alzheimer's disease 환자들의 뇌에서는 정상인들의 뇌에 비해서 낮은 수준의 황화수소가 발견되어지고, 이것이 병의 원인이 될 수 있다는 연구결과가 발표되면서 황화수소를 생성할 수 있는 단백질의 발견과 조절이 주목을 받고 있다(3).
황화수소를 생성할 수 있는 단백질들의 기존의 분석방법은?
이와 같이 의약 분야와 발효 산업에 있어서 중요한 역할을 하고 있는 황화수소를 생성할 수 있는 단백질들의 동정과 선별 그리고 조절에 관한 다양한 연구가 이루어지고 있다. 이러한 단백질들의 기존의 분석방법은 2-dimensional 전기영동 분석을 통해 분리된 단백질의 spot들을 각각 MS분석을 하여 단백질들을 동정하였다. 이 분석방법은 관련 효소 외의 단백질 모두를 분석해야 하는 단점을 가지고 있다.
O-acetylserine sulfhydrylase는 어떤 효소인가?
또는 생화학적 접근 방법을 이용하여 황화수소를 생성할 수 있는 단백질들이 발견되어지고 있고(12), 이 중 많은 연구가 진행된 효소로 유전자 CYS4가 만드는 CBS와 유전자 MET17의 산물인 O-acetylserine sulfhydrylase (OASS)가 있다(13, 14). OASS는 O-acetylserine과 hydrosulfide ions (HS－)로부터 cysteine합성을 촉매하는 효소이며(15), 발효과정에서 황화수소 생성에 중요한 역할을 하는 효소로 알려져 왔다(7). 현재 이들 효소간의 상보성에 관한 연구와 효소 억제에 관한 연구, 그리고 유전자 조절 또는 변이를 통한 효소의 생성자체를 차단하거나 발현되는 효소양의 감소 또는 활성을 억제하는 연구들이 활발히 진행되고 있다(16, 17).
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