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문제 정의
- 이에 본 연구자는 사육단계별 질병 감염이 의심되는 이유자돈, 비육 및 모돈의 폐 병변에서 PCV2, PRRS, 마이코프라즈마 검사를 실시하고 복합감염 상황을 조사하여 농가 사양 관리 지도 자료로 활용하고자 한다.
제안 방법
- 또한 마이코플라즈마는 94℃에서 5분 반응시켰고, 94℃, 55℃ 및 72℃에 각각 1분씩 30회 반복 반응시킨 후 최종 72℃에서 7분간 반응시켰다. PCR이 완료되면 반응액 8㎕와 loading dye 2㎕를 1.5% agarose gel (ethidium bromide 0.5"g/mC in DW) 에 100 bp DNA Mark와 같이 TAE buffer가 함유된 전기영동 tank에 gel을 침적시킨 후 100V/cm, 50분간 (Owl EasyCast Minigel system) 전기영동을 실시하여 자외선 하에서 특이 band 증폭 유무를 확인하였다’
- 폐 병변에서 유전자를 검출하기 위해 primer를 제작하여 검사를 실시하였으며 (Table 1) PCV2 검사는 추출한 nucleotides 5㎕와 각 primer (10 pmol) 를 PCR premix (Maxime PCR Premix, iNtRON)에 첨가하여 96℃에서 5분 반응시켰고, 94℃에 30초, 55℃ 에 30초 및 72℃에 40초씩 30회 반복 반응시킨 후 최종 72℃에서 5분간 반응시켰고, PR- RSV는 추출한 nucleotides와 primer를 one- step kit (Qiagen)에 첨가하여 45℃에 10분 반응시킨 후 94℃ 에 5분 반응시 키 고 94℃ 에 30 초, 54℃ 에 30초, 72℃에 40초씩 40회 반복 반응시킨 후 최 종적 으로 72℃ 에 5분 반응시 켰다. 또한 마이코플라즈마는 94℃에서 5분 반응시켰고, 94℃, 55℃ 및 72℃에 각각 1분씩 30회 반복 반응시킨 후 최종 72℃에서 7분간 반응시켰다. PCR이 완료되면 반응액 8㎕와 loading dye 2㎕를 1.
- 폐 및 폐 림프절을 균질화하여 5% PBS 부유액을 원심분리하고 상층액을 보관하면서 Viral Gene-spin Viral DNA/RNA Extraction kit(iNtRON)를 이용하여 DNA 및 RNA를 추출하였다. 폐 병변에서 유전자를 검출하기 위해 primer를 제작하여 검사를 실시하였으며 (Table 1) PCV2 검사는 추출한 nucleotides 5㎕와 각 primer (10 pmol) 를 PCR premix (Maxime PCR Premix, iNtRON)에 첨가하여 96℃에서 5분 반응시켰고, 94℃에 30초, 55℃ 에 30초 및 72℃에 40초씩 30회 반복 반응시킨 후 최종 72℃에서 5분간 반응시켰고, PR- RSV는 추출한 nucleotides와 primer를 one- step kit (Qiagen)에 첨가하여 45℃에 10분 반응시킨 후 94℃ 에 5분 반응시 키 고 94℃ 에 30 초, 54℃ 에 30초, 72℃에 40초씩 40회 반복 반응시킨 후 최 종적 으로 72℃ 에 5분 반응시 켰다.
- 폐 병변에서 유전자를 검출하기 위해 primer를 제작하여 검사를 실시하였으며 (Table 1) PCV2 검사는 추출한 nucleotides 5㎕와 각 primer (10 pmol) 를 PCR premix (Maxime PCR Premix, iNtRON)에 첨가하여 96℃에서 5분 반응시켰고, 94℃에 30초, 55℃ 에 30초 및 72℃에 40초씩 30회 반복 반응시킨 후 최종 72℃에서 5분간 반응시켰고, PR- RSV는 추출한 nucleotides와 primer를 one- step kit (Qiagen)에 첨가하여 45℃에 10분 반응시킨 후 94℃ 에 5분 반응시 키 고 94℃ 에 30 초, 54℃ 에 30초, 72℃에 40초씩 40회 반복 반응시킨 후 최 종적 으로 72℃ 에 5분 반응시 켰다. 또한 마이코플라즈마는 94℃에서 5분 반응시켰고, 94℃, 55℃ 및 72℃에 각각 1분씩 30회 반복 반응시킨 후 최종 72℃에서 7분간 반응시켰다.
- 호흡기 증상을 보인 이유자돈 60두 및 축산물작업장의 비육돈 58두 및 도태 모돈 56 두의 폐 및 폐 림프절에서 PCR을 이용하여 PCV2 는 501 bp, PRRS 는 312 bp 및 M hyopneumoniae는 837 bp에서 증폭산물을 확인하였다 (Fig 1-Fig 3).
대상 데이터
- 전북지역 내 양돈장에서 2006년 3월부터 2007 년 10월까지 호흡기 증상으로 병성감정 의뢰된 이유자돈과 2007년 9월에서 11월까지 축산물작업장에 도축 의뢰된 비육돈 및 도태 모돈에서 육안적 폐 병변 소견이 보이는 개체의 폐 및 폐 림프절을 채취하여 냉동 보관하면서 실험에 사용하였다.
성능/효과
- PCV2, PRRS 및 M hyopneumoniae를 검사한 결과 총 174두에서 PCV2는 166두 (95.4 %), PRRS는 55두 (31.6%), M hyopneuma- niae는 35두 (20.1%) 양성 이었으며, 이유자돈에서는 59두 (98.3%), 35두 (58.3%), 15두 (25.2 %) 각각 양성 이 고, 비육돈은 57두 (98.3%), 11 두(19.0%), 16두(37.6%), 모돈은 50두 (89.2 %), 9두 (16.1%), 4두 (7.2%)의 결과로 나타났다 (Table 2).
- 5%. PCV2, PRRS, M hyopneumoniae-^: 5.7% 로 나타났으며 이 유자돈에서 감염 율이 가장 높게 조사되었다.
- 2%로 높게 조사되어 이제는 양돈농장에 상재 질병이 되어버린 것도 같아 PCV2의 병원성에 대한 연구가 절실히 요구되며 차단방역에 대한 대책과 아울러 효과 있는 백신개발에 많은 연구와 노력이 필요할 것으로 사료된다. PRRS 는 58.3%, 19.2%, 16.1%, M hyopneumoniae는 25.2%, 27.6%, 7.2%로 확인되었으며, 또한 중복감염율을 보면 이유 및 모돈은 PCV2와 PRRS의 중복감염이 58.3%, 12.5%, 이유 및 육성돈은 PCV2 와 M hyopneumoniae 의 감염이 25.2%, 25.8%로 조사되어 폐사 발생이 많은 이유자 돈에서의 PCV2와 PRRS의 호흡기 복합감염에 대한 예방책이 최우선으로 실시되어야 할 것이다. 임 등比이 조사한 PCV2와 PRRS 복합감염은 1998년 12.
- 또한, 174두의 복합감염 결과는 PCV2 + PRRS 는 53두 (30.4%), PCV2 + M hyopneur men吳는 34두(19.5%), PCV2 + PRRS + M hyo~ pneumoniae는 10두 (5.7%)로 조사되 었고 이유자 돈에서의 복합감염이 높은 결과를 보였다 (Table 3).
- 특히 PRRS는 국내에서 1993 년 발생이 확인된 이후 1996년부터 백신이 도입되었고 현재 생독 및 사독백신이 혼합 사용되고 있으나 양돈장에서의 백신에 대한 정확한 지침이 전무한 상태일 것이라 말 할 수 있을 것이다. 본 조사결과에서 PCV2의 양성은 이유자돈, 육성돈, 모돈에서 98.3%, 98.3%, 89.2%로 높게 조사되어 이제는 양돈농장에 상재 질병이 되어버린 것도 같아 PCV2의 병원성에 대한 연구가 절실히 요구되며 차단방역에 대한 대책과 아울러 효과 있는 백신개발에 많은 연구와 노력이 필요할 것으로 사료된다. PRRS 는 58.
- 전북지역 양돈장에서 병성감정 의뢰된 이유자돈 60두, 축산물작업장에 도축 의뢰되어 폐 병변 소견을 보이는 비육돈 58두, 도태 모돈 56두의 폐 및 폐 림프절에서 PCR을 이용하여 PCV2, PRRS, M hyopneumoniae 항원검사를 실시한 결과 95.4%, 31.6%, 20.1%의 양성을 확인하였다. 또한 중복감염은 PCV2와 PRRS 30.
후속연구
- PRRS의 경우 백신을 실시한지 10년이 경과하였으나 아직도 PRRS을 박멸하는 것은 불가능하며 양돈장에서 백신에 대한 정답을 찾지 못하는 실정이다. 그러므로 백신 실시 전 혈청검사 및 이환 축에 대한 정밀진단을 바탕으로 백신 시점과 방법을 결정하여야 하며 지역별, 사육단계별 바이러스의 변이에 대한 연구가 이루어져야 할 것이다. 또한 국가 방역기관에서는 PCV2, PRRS 질병에 대한 지속적인 모니터링이 이루어져야 하며 주요 질병 진단을 위한 신속하고 편리한 효소면역법적 혈청검사 킷트 개발 및 보급과 환축 발생시 즉시 방역 기관에 질병 검사를 의뢰하여 원인규명에 따른 농장컨설팅 수의사와 협조하여 항생제 및 백신 프로그램의 조절에 대한 체계적인 관리 등이 이루어진다면 일시적인 농장의 소득증대 효과는 어렵겠지만 양돈산업의 미래를 위해 근본적인 문제에 대한 점검과 해결방법의 도출이 가능하여 결국 양돈농가 생산성 향상으로 이어질 것으로 확신한다.
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