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문제 정의
- 따라서 민간요법으로 쓰이는 약물에 대한 과학적인 접근이 요구된다. 본 연구에서는 B. sarmientie 제1형 당뇨모델에서의 혈중 지질개선 효과에 대해 조사하였다.
가설 설정
- 2) Values with different superscript within the same column are significantly different at p<0.05.
제안 방법
- 1 M citrate buffer를 당뇨 유발군과 같은 방법으로 주사 하였다. 당뇨 유발 확인은 STZ를 주사 24 시간 후에 꼬리 정맥으로부터 채취한 혈액을 혈당계(Acctrend GC, Boehringer Mannhein, Germany)로 측정하여 혈당이 300 mg/dl 이상인 것을 당뇨 쥐로 간주하였다 [L3]. 실험군은 평균체중이 유사하도록 6마리씩 정상군(Normal-Nondiabetic), 당뇨 대조군(Control-Diabetic), 당뇨시 험군(Diabetic-Water extract)으로 나누어 사육하였다.
- 당뇨 유발은 실험 동물을 16시간 절식시킨 후 췌장이 8-세포에만 특이적으로 작용하여 다른 기관에 영향을 미치지 않는다고 알려진 streptozotocin (STZ, S0130, Sigma Chemical Co., USA)을 0.1 M citrate buffer (pH 4.5)에 용해시켜 45㎎/㎏/bw 농도로 꼬리 정맥에 주사하여 당뇨를 유발하였다[12, 13]. 정상군은 0.
- 당뇨에 있어 혈당량 이외의 중요한 대사산물로 total cholesterol, triglyceridez low density lipoprotein cholesterol (LDL-cholesterol)/ high density lipoprotein cholesterol(HDL-cholesterol)측정하고, 시료 투여로 인한 간 및 신장기능에 미치는 영향을 알아 보기위해 간 기능 지표인 aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT)Z y-glutamine trans (g-GT)z creatinine을 측정하였다. Glucose 측정은 GOD-POD법에 의하여 제조된 kitz total Cholesterol 측정은 CHOD, Trinder 법, triglyceride는 Enzymatic-Trinder , LDL-cholesterob HDL-cholesterol eDirect method에 의해 제조된 kit (아산제약)를 사용하였다.
- 실험군은 평균체중이 유사하도록 6마리씩 정상군(Normal-Nondiabetic), 당뇨 대조군(Control-Diabetic), 당뇨시 험군(Diabetic-Water extract)으로 나누어 사육하였다. 당뇨유발 후 시료 투여와 함께 8주간 사육하면서 1주일 간격으로 체중을 측정하여 동물의 체중 변화 상태를 나타내었다.
- 식이 효율(Food efficiency ration, FER)은 실험 기간 동안 체중 증가량을 같은 기간의 식이 섭취량으로 나누어 환산하였다. 시료투여 8주 후 수분 섭취량을 측정하기 위해서 한 마리씩 대사 cage에 수용하여 충분한 양의 물을 제한 없이 급여하였다. 음수량 측정은 급여량과 잔량의 차이로 1일 평균 섭취량을 측정하였다[6, 7].
- 식이 섭취량은 급여량에서 잔량을 감하여 계산하였다. 식이 효율(Food efficiency ration, FER)은 실험 기간 동안 체중 증가량을 같은 기간의 식이 섭취량으로 나누어 환산하였다. 시료투여 8주 후 수분 섭취량을 측정하기 위해서 한 마리씩 대사 cage에 수용하여 충분한 양의 물을 제한 없이 급여하였다.
- 신장 기능을 평가하는 중요한 지표가 되는 creatinine과 간과 신장의 건강 유무를 가늠할 수 있는 혈청 총 단백 양의 변화를 관찰하였다. CTeatininee 정상군, 당뇨 대조군, 당뇨 실험군에서 유의적인 변화는 관찰되지 않았다.
- 실험 종료일에 16시간 절식시킨 후 ethyl ether로 마취하고 혈액을 복부 대동맥에서 채혈하였다. 채혈된 혈액은 실온에 30분간 응고시킨 후 3, 000 rpm에서 20분간 원심 분리한 혈청을 분석 시료로 사용하였다.
- 당뇨 유발 확인은 STZ를 주사 24 시간 후에 꼬리 정맥으로부터 채취한 혈액을 혈당계(Acctrend GC, Boehringer Mannhein, Germany)로 측정하여 혈당이 300 mg/dl 이상인 것을 당뇨 쥐로 간주하였다 [L3]. 실험군은 평균체중이 유사하도록 6마리씩 정상군(Normal-Nondiabetic), 당뇨 대조군(Control-Diabetic), 당뇨시 험군(Diabetic-Water extract)으로 나누어 사육하였다. 당뇨유발 후 시료 투여와 함께 8주간 사육하면서 1주일 간격으로 체중을 측정하여 동물의 체중 변화 상태를 나타내었다.
- 5)에 용해시켜 45㎎/㎏/bw 농도로 꼬리 정맥에 주사하여 당뇨를 유발하였다[12, 13]. 정상군은 0.1 M citrate buffer를 당뇨 유발군과 같은 방법으로 주사 하였다. 당뇨 유발 확인은 STZ를 주사 24 시간 후에 꼬리 정맥으로부터 채취한 혈액을 혈당계(Acctrend GC, Boehringer Mannhein, Germany)로 측정하여 혈당이 300 mg/dl 이상인 것을 당뇨 쥐로 간주하였다 [L3].
- 측정하였다[2122]. 채취 후 채취 부위를 압박하여 지혈하였다.
- 체중 증가량 및 식이 섭취량은 실험 개시 일을 시작으로 충분한 양의 사료와 물을 급여하면서 일주일 간격으로 측정하였으며, 식이 섭취량은 급여량에서 잔량을 감하여 계산하였다. 식이 효율(Food efficiency ration, FER)은 실험 기간 동안 체중 증가량을 같은 기간의 식이 섭취량으로 나누어 환산하였다.
- 80 mg/ml(BW2)로 하였다. 투여기간은 당뇨 유발 후 8주 동안 자유 급이(ad libitum) 방식으로 섭취시키고 섭취량을 매일 측정하였다.
- 혈당은 자유롭게 물을 섭취토록 하면서 16시간 절식한 후 매주 같은 시간대에 꼬리 정맥혈에서 혈액을 채취하여 혈당계로 측정하였다[2122]. 채취 후 채취 부위를 압박하여 지혈하였다.
대상 데이터
- 실험 동물은 생후 7주령 수컷 흰쥐 (Sprague Dawley)를 (주)샘타코 바이오코리아(경기도 오산)로부터 구입하여 고형사료와 물을 공급하면서 일주일간 적응시킨 후 평균체중 281±10.3 g인 것을 사용하였다. 음수는 자외선으로 멸균된 물과 사료(pellet diet, 삼양사료 주식회사)를 자유롭게 섭취케 하였다μ5, 16].
- 실험에 사용된 B. sarmienti는 (주)럭키약품으로부터 건조된 가루형태로 공급받아 9 mg/ml (0.9%, w/v) 비율로 증류수를 가하여 압력식 추출기로 100℃에서 3시간 동안 추출 후filter paper (Whatman, No.2)로 여과하였다. 추출액의 투여농도는 0.
데이터처리
- 모든 실험결과에 대한 통계처리는 각 실험군 별로 평균차이가 있는가를 검증하기 위하여 분산분석(ANOVA 검증)을수행하였으며, 처리 군간 유의 성은 Dunncan test를 이용하여 검증하였다.
이론/모형
- Glucose 측정은 GOD-POD법에 의하여 제조된 kitz total Cholesterol 측정은 CHOD, Trinder 법, triglyceride는 Enzymatic-Trinder , LDL-cholesterob HDL-cholesterol eDirect method에 의해 제조된 kit (아산제약)를 사용하였다.AST, ALT는 modified IFCC without pyridoxal phosphate 법, g-GT는 IFCC 법, creatine 은 modifed jaff-1 reagent meth-od법에 의해 제조된 kit(아산제약)를 이용하여 생화학 자동분석기(KONELAB 20XT, Finland)를 이용하여 분석하였다.
- 측정하였다. Glucose 측정은 GOD-POD법에 의하여 제조된 kitz total Cholesterol 측정은 CHOD, Trinder 법, triglyceride는 Enzymatic-Trinder , LDL-cholesterob HDL-cholesterol eDirect method에 의해 제조된 kit (아산제약)를 사용하였다.AST, ALT는 modified IFCC without pyridoxal phosphate 법, g-GT는 IFCC 법, creatine 은 modifed jaff-1 reagent meth-od법에 의해 제조된 kit(아산제약)를 이용하여 생화학 자동분석기(KONELAB 20XT, Finland)를 이용하여 분석하였다.
성능/효과
- ALT와 AST 활성도는 생체 내 아미노산을 형성하는 역할을 하는 효소로서 여러 장기세포에 존재하지만 그중 간에 가장 많은 양이 존재하며, 약물이나 외부적 스트레스에 의해 간조직이 손상을 받으면 혈중 이들 효소들의 활성도가 증가하게 된다. ALT활성 변화는 당뇨 유발로 인해 활성이 전반적으로 높게 나타났으나, B. sarmienti 열수 추출물 투여 후 당뇨 실험군에서 당뇨 대조군과 비교할 때 유의적인 감소현상을 나타내었다. AST활성 변화는 정상군143.
- 31 g으로 정 상군에 비해 당뇨 유발 군에서 유의적으로 감소하였다. B. sarmienti 열수 추출물 투여로 인한 당뇨 대조군과 당뇨 실험군에서 체중 변화는 나타나지 않았다. 식이 효율은 정상군 H.
- 관찰하였다. CTeatininee 정상군, 당뇨 대조군, 당뇨 실험군에서 유의적인 변화는 관찰되지 않았다. 그러나 총 단백의 양은 당뇨 대조군에서 당뇨 유발로 감소하였으나, 당뇨 실험군 BW2에서 유의적인 증가현상을 나타내었다.
- 2 mg/시로 당뇨 대조군에 비해 유의적인 감소현상을 나타내었다. HDL_cholesterol 농도 또한 당뇨 대조군 93.5±6.1 mg/dl로서 정상군의 69.8±5.0 mg/dl에 비해 유의적인 증가를 나타내었으며, BW0 75.9±7.3 mg/시, BW1 81.5±4.5 mg/dl, BW2 79.4±6.6 mg/비로 대조군에 비해유의적인 감소현상을 나타내었다. 일반적으로 당뇨 상태에서 혈중 HDLvholesterol 함량이 감소하는 것으로 알려져 있으나 당뇨 유발군이 정상군보다 더 높게 나타난 것은 흰쥐의혈중 cholesterol의 대부분이 HDL-cholesterol 분획 에 존재하기 때문인 것으로 알려져 있다[2이.
- CTeatininee 정상군, 당뇨 대조군, 당뇨 실험군에서 유의적인 변화는 관찰되지 않았다. 그러나 총 단백의 양은 당뇨 대조군에서 당뇨 유발로 감소하였으나, 당뇨 실험군 BW2에서 유의적인 증가현상을 나타내었다.
- 4에 제시하였다. 당뇨 대조군과 당뇨 실험군에서 정상군과 비교할 때 간, 췌장, 신장, 심장의 무게가 상대적으로 무겁게 나타났다. 전반적으로 당뇨 대조군 및 당뇨 실험군이정상굳에 비해 장기무게가 무겁게 나타난 것은 당뇨 유발로 인한 체중 감소 현상과 관련된 것으로 판단된다.
- 당뇨 유발 후 1일 평균 사료 섭취량은 정상군 30.8±236 g, 당뇨대조군 50.4±4.26 g, 당뇨 실험군인 BW0 49.4±1.95 g, BW1 47.7±2.56 g, BW2 54.1±4.73 g으로 당뇨 유발에 따라 사료 섭취량이 증가하였고, 체중 증가량은 정상군 3-50±033 g, 당뇨대조군 1.45±0.20 g, 당뇨 실험군인 BW0 1.07±0.45 g, BW1 0.75±0.19 g, BW2 1.20±0.31 g으로 정 상군에 비해 당뇨 유발 군에서 유의적으로 감소하였다. B.
- 따라서 당뇨 유발로 인한 ALT, AST, g-GT, T-protein 모두 급격한 증가현상을 나타내었다. 그러나 B.
- 따라서 당뇨 유발로 인한 혈중 total-cholesterol, HDL- 아lolesterol, LDL-cholesterol이 정상군에 비해 상대적으로 증가하였으며 B. sarmienti 열수 추출물 투여농도와 관계없이 정상군에 가까운 혈중 농도를 나타내었다.
- sarmienti 열수 추출물 투여로 인한 장기무게의 유의적인 변화는 관찰할 수 없었다. 본 실험에서는 B. sarmienti 열수 추출물 투여가 장관 기능에는 아무런 영향이 없는 것으로 판단되며, 이는 B. sar- mienti 열수 추출물의 생체 내 안전성과도 관련될 것으로 사료된다.
- sarmienti 열수 추출물 투여로 인한 당뇨 대조군과 당뇨 실험군에서 체중 변화는 나타나지 않았다. 식이 효율은 정상군 H.35±0.63%, 당뇨 대조군2.971070%, 당뇨 실험군인 BW0 2.12±0.90%z BW1 1.52+0.50%, BW2 2.17±0.45%로 나타났다, 당뇨 유발로 인한 식이 효율의 유의적인 감소 현상이 나타났으나, B. sarmienti열수 추출물 투여로 인한 개선 효과는 관찰되지 않았다.
- 주로 심장, 간장, 췌장, 혈구 등에 분포하며 신장에는 고농도로 분포하게 된다. 신장에 이상이 있으면 혈액중으로 유출되어 이상치가 나오는 g-GT의 경우 당뇨 유발군에서 급격히 증가하는 현상을 나타내었으나, B. sarmienti 열수 추출물 투여로 당뇨 대조군과 비교할 때 고농도 투여군인 BW2에서 감소하는 경향을 나타내었다.
- 하여 질병 치유에 많이 이용되어 왔다. 현재 B. sar-mienti에서 추출된 guaiacwood oil이 미국에서 상품화되어 향수 등으로 판매되고 있으며 LD50가 5,000 ㎎/㎏ 이상으로독성이 거의 없는 것으로 확인되었다. 민간요법은 과거의 개인적 경험에서 효과가 구전되어 지는 것으로 대부분 과학적 근거가 희박하며 과량 섭취로 인한 독성이나 제조 공정 및 보관상의 오염, 변질의 위험성을 가지고 있다.
- 혈중 내 가lolesterol 수준은 모든 당뇨 대조군 및 당뇨 실험군이 정상군보다 높은 수치를 보이며 당뇨시 cholesterol이 증가한다는 다른 연구 결과와 일치하였다[7,18]. 혈중 to-tal-cholesterol 수준은 당뇨 대조군 123.2±16.8 mg/dl로서 정상군의 85.5±12.53 mg/비에 비해 유의적인 증가를 나타내었으며, 당뇨 실험군 BW0 86.3±10.02 mg/dl, BW1 97.2±6.3 mg/dl, BW2 89.1±3.2 mg/시로 당뇨 대조군에 비해 유의적인 감소현상을 나타내었다. HDL_cholesterol 농도 또한 당뇨 대조군 93.
- 중성지방은 체내에 존재하는 지방으로 몸의 주요 에너지원인 포도당이 부족 시 간장이나 지방에 비축된 중성지방을 에너지원으로 이용하게 된다[7]. 혈중중성지방의 농도는 BW0 37.6±3.5 mg/dl, BW1 29.1±5.3 mg/dl, BW2 30.9±3.1 mg/dl로 정상군과 대조군에 비해 B. sarmienti 열수 추출물 투여농도와 관계없이 모두 유의적인 감소 현상을 나타내었다.
- 2에 나타내었다. 혈청 glucose 함량은모든 당뇨 유발군이 정상군에 비하여 유의적으로 높게 나타났으나, B. sarmienti 열수 추출물 투여로 인한 혈중 glucose함량 변화에는 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다.
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