선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 작은 크기의 플라스미드를 가지고 있는 5개의 균주 중에서 3개의 플라스미드는 기능을 알 수 없는 cryptic 플라스미드로 동정 보고되었다.") 본 논문에서는 크기가 작은 플라스미드인 pKH16과 pKH17의 전체 염기서열과 특성 그리고 PCR을 통하여 큰 플라스미드에 대한 切K와 tetM 유전자의 존재 여부와 이를 통한 내성 기전을 보고하고자 한다.
- 본 연구에 사용된 15개의 lc 내성 균주 중에서 10개의 균주들이 크기가 큰 플라스미드를 가지고 있었으므로(Table II) 이 플라스미드들이 tetM 유전자를 가지고 있는지 알아보기 위하여 이 유전자들의 염기서열을 참고로 primer를 합성하고 PCR을 수행하여 반응 산물 생성 여부를 확인하였다. 그 결과 10 개의 플라스미드 모두에서 tetK^f tetM 유전자의 반응산물을 확인할 수 없었다.
제안 방법
- PCR 반응액(10이」M forward primer 2 pl, 100 pM revere primer 2 叫 PCRMix 4 叫 DNA template 1 叫 ddw 110)을 다음과 같이 반응시켰다. 95°C에서 5분 동안 전처리하고 주반응(94龙에서 1분, 5如에서 1분, 7和에서 1분)을 30회 반복한 다음 7和 에서 5분 처리하여 반응을 완결시키고 1% agarose 젤에서 전기영동 하여 PCR 반응 41물을 확인하였다.
- 사용하였다. PCR 반응을 위한 PCRMix를 제노텍에서구입하여 사용하였다.
- Tc 내성을 나타내는 15개의 S. 物次의 플라스미드를 분리하고 이 중에서 크기가 작은 플라스미드 pKH16(4, 442bp)과 pKU17(4, 441bp)의 염기서열을 결정하였다. 둘 다 pT181 및 pKH6 계열의 플라스미드로 확인되었으며 pKH16은 3 쌍의 염기가 삽입된 형태로, 반면에 pKH17은 여러 곳에서 염기쌍 치환과 삽입 및 결실이、나타나, 끝부분에서 몇 개의 아미노산이 결실된 Pre 단백질을 가지고 있었다.
- 이 중에서 3개의 균주가 가지고 있는 pKH12의 경우는 이미 cryptic 플라스미드로 보고되었으므로M)S. aureus JY10의 pKH16과 S. aureus JY22의 pKH17의 염기서열을 결정하고 NCBI의 BLAST 프로그램을 이용하여 분석하였다. 그 결과 4, 442 bp의 pKH16과 4, 441 bp의 pKH17은 Tc 내성을 매개하는 플라스미드로 확인되었으며 각각 플라스미드의 염기서열을 NCBI의 GenBank에 EU170347(pKH16)와 EU164802(pKH17)로 등록하였다.
- taK와 tetM 유전자를 확인하기 위하여 Table I에 나와 있는 oligonucleotide primer를 제노텍에 의뢰하여 합성하였다. PCR 반응액(10이」M forward primer 2 pl, 100 pM revere primer 2 叫 PCRMix 4 叫 DNA template 1 叫 ddw 110)을 다음과 같이 반응시켰다.
- 이전에 한국에서 분리된 S. aureus SA8의 경우 pKH6이 병합된 형태의 크기가 큰 pKHl을 가지있었으므로 Tablele II 의 큰 플라스미드들을 대상으로 합성 oligonucleotide# 이용한 PCR 법으로 tetK 유전자를 검색하였으며 아울러 奶M 유전자의 존재 여부도 검색하였다. 그 결과 S.
대상 데이터
- Phagemid인 pBkiescriptH KS+< 염기서열 결정 벡터로 사용하였으며 여러 가지 제한효소, T4 DNA li序se, 플라스미드 분리를 위한 Wizard™DNA purification systems을 Homega에서구입하여 사용하였다. PCR 반응을 위한 PCRMix를 제노텍에서구입하여 사용하였다.
- 부산 소재 위생병원에서 2005년 7월부터 2006년 12월 사이에 수집된 50종의 황색포도상구균 중에서 Tb 내성을 나타내는 15 종의 균주를 선별하여 사용하였다. 염기서열 결정을 위한 재조합 플라스미드의 클로닝 균주로는 E.
- 균주를 선별하여 사용하였다. 염기서열 결정을 위한 재조합 플라스미드의 클로닝 균주로는 E. coli JM83(ara, Aflac, proA, B), rps, strA, thi, ^80dlacZ M15(rk+, 璇+))을 사용하였다.
이론/모형
- Mn에 대한 MIC는 고체 배지 계열 희석법으로 결정하였다.18)
- lc 내성 매개 플라스미드 pKH16을 S. aureus JY10으로부터, pKH17< S. aureus JY22로부터 김⑸ 등의 방법에 의하여 분리하였으며 E. coli JM832] 플라스미드 분리는 alkaline lysis 방법을 사용하였다.©
- 염기서열을 결정한 다음 염기서열 및 ORF 분석은 NCBI의 BLAST를 이용하여 수행하였다.17)
성능/효과
- PCR 법을 이용하여 크기가 큰 10개의 플라스미드에서 奴K와 tetM를 조사하여 본 결과 두 유전자가 모두 존재히지 않음을 확인하였다. Mn 내성을 확인한 결과 12개의 균주가 Mn 내성을 나타내 부산에서 분리된 Tc 내성 S. 如g의 80%에서 염색체에 존재하는 倒f 유전자에 의한 lc 와 M註의 교차내성을 유추해 볼 수 있었다.
- 둘 다 pT181 및 pKH6 계열의 플라스미드로 확인되었으며 pKH16은 3 쌍의 염기가 삽입된 형태로, 반면에 pKH17은 여러 곳에서 염기쌍 치환과 삽입 및 결실이、나타나, 끝부분에서 몇 개의 아미노산이 결실된 Pre 단백질을 가지고 있었다. PCR 법을 이용하여 크기가 큰 10개의 플라스미드에서 奴K와 tetM를 조사하여 본 결과 두 유전자가 모두 존재히지 않음을 확인하였다. Mn 내성을 확인한 결과 12개의 균주가 Mn 내성을 나타내 부산에서 분리된 Tc 내성 S.
- Tc 내성 균주들이 가지고 있는 작은 플라스미드 2개의 염기서열을 결정하고 분석한 결과 이 플라스미드들은 pT181 및 pKH6 계열임을 확인할 수 있었다. 그중에서 pKH16은 단지 3개의 염기가 삽입된 형태로 기존의 플라스미드들과 큰 변화가 없었으나 (Fig.
- lc 내성을 매개하는 pKH16과 pKH17의 염기서열을 비교한 결과 전체적으로는 두 개 모두 pT1814'6) 및 pKH69)와 유사한 서열을 가지고 있었다. pKH16은 pKH6 보다 단지 3 bp를 더 가지고 있었으나(Fig.
- 본 연구에 사용된 15개의 lc 내성 균주 중에서 10개의 균주들이 크기가 큰 플라스미드를 가지고 있었으므로(Table II) 이 플라스미드들이 tetM 유전자를 가지고 있는지 알아보기 위하여 이 유전자들의 염기서열을 참고로 primer를 합성하고 PCR을 수행하여 반응 산물 생성 여부를 확인하였다. 그 결과 10 개의 플라스미드 모두에서 tetK^f tetM 유전자의 반응산물을 확인할 수 없었다.
- aureus JY22의 pKH17의 염기서열을 결정하고 NCBI의 BLAST 프로그램을 이용하여 분석하였다. 그 결과 4, 442 bp의 pKH16과 4, 441 bp의 pKH17은 Tc 내성을 매개하는 플라스미드로 확인되었으며 각각 플라스미드의 염기서열을 NCBI의 GenBank에 EU170347(pKH16)와 EU164802(pKH17)로 등록하였다.
- 物次의 플라스미드를 분리하고 이 중에서 크기가 작은 플라스미드 pKH16(4, 442bp)과 pKU17(4, 441bp)의 염기서열을 결정하였다. 둘 다 pT181 및 pKH6 계열의 플라스미드로 확인되었으며 pKH16은 3 쌍의 염기가 삽입된 형태로, 반면에 pKH17은 여러 곳에서 염기쌍 치환과 삽입 및 결실이、나타나, 끝부분에서 몇 개의 아미노산이 결실된 Pre 단백질을 가지고 있었다. PCR 법을 이용하여 크기가 큰 10개의 플라스미드에서 奴K와 tetM를 조사하여 본 결과 두 유전자가 모두 존재히지 않음을 확인하였다.
- 56 卩以m2 이상의 균주에서 tetM 유전자를 확인하였으며 한국으로부터 분양된 5개의 균주는 모두 tetM 유전자만 가지고 있음을 보고하였다. 따라서 MIC 값이 8 Hg/m/ 이상인 12개의 균주는 Mn 내성과 함께 tetM을 가지고 있음을 유추할 수 있었다. S.
- 염색체에서 발견되는 tetM 유전자는 R 와 Mn 내성을 모두 매개하는 것으로 알려져 있으므로京2)염색체에 의한 내성 여부를 확인하기 위하여 Mn에 대한 MIC 값을 결정하였으며 그 결과 12 개의 균주에서 MIC 값이 8 |ig/m/ 이상으로 나타났다(Eble IH). 한편 Warsa19) 등은 아시아 여러 나라에서 215개의 Staphylococcus aureust- 분양받아 Mn에 대한 MIC 값과 tetM 유전자와 연관성을 조사하였는데 MIC 값 1.
- 이상의 연구 결과로부터 한국에서 발견되는 Tc 내성균은 염색체에 tetM을 가지고 있어 R 와 Mn에 모두 내성을 나타내는 균주가 다수를 차지하고 있음을 유추할 수 있었으며 두개의 균주에서 pT181 계열의 플라스미드를 가지고 있음을 확인할 수 있었는데 그 중에 하나에서 많은 염기서열 변화를 볼 수 있었다.
- 2). 한국에서 동시대에 분리된 pKH16과 pKH17의 서열 분석 결과 pT181 계열의 플라스미드가 한국에서 유전적으로 변이되고 있음을 확인할 수 있었다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.