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문제 정의
- 따라서 항균 능력이 있는 근관세척액 (NaOCl, CHX, EDTA) 과 Listerine을 근관감염균주인 Porphyromonas gingivalis(이하 P. gingivalis)와 Enterococcus fae~ calis(이하 E. faecalis)를 상대로 항균 효과를 비교하고 Listerine의 근관세척액으로 가능성을 확인하고자 본 연구를 시행하였다.
제안 방법
- 균주 10씩을 96 well plate에 옮기고, 실험 용액을 100/4씩 같은 96 well plate로 옮겨 담았다. 2차 증류수(DW)를 대조군으로 사용하였다.
- 배양하였다. 각각의 균주수는 Spectrophotometer (Hitachi U2800, Hitachi, Japan) 상에서 630 nm 파장에서 흡광도를 측정하여 계산하였으며 , OD (Optical density) 0.5를 5x107ml의 세균수로 규격화하여 사용하였다.
- 실험용액으로 포화된 disk를 균주가 도말된 한천배지 위로 옮겨 심었다. 도말된 한천배지를 혐기성 환경에서 48시간동안 배양한 후 성장저해구역의 지름을 vernier caliper를 이용하여 millimeter 단위로 측정하였다. 각각의 실험은 독립적으로 7번씩 시행되었다.
- , USA)에서 630 nm 파장을 이용하여 측정하였다. 모든 실험은 7번씩 독립적으로 시행하였다.
- 본 연구에서 CHXe 치주영역에서 사용하고 있는 0.1-0.2% CHX의 농도에서부터 현재 근관치료학에서 E. calis에 대한 효과가 보고된 2% 농도까지의 4가지 농도를 사용하였다. CHXe 2가지 실험균주에서 모두 효과적이었다.
- ecalis가 근관내 약제에 잘 반응하지 않음을 보여주는 이전의 연구들에 부합한다". 본 연구에서 NaOCle Dakin에 의해 제안된 NaOCl 사용 농도인 0.5%부터 , 현재 근관치료에서 임상적으로 사용되고 있는 5.25%농도까지 4가지 다른 농도를 사용하였다m. 본 연구에서의 NaOCl의 항균성 결과는 NaOCl이 균주와 직접적인 접촉이 있는 경우 희석된 농도에서도 항균성을 보여 준다고 한 D' Arcangelo 등의 결과와 부합한다.
대상 데이터
- P. gingivalis 도말을 위해 Hemin (10Ag/ml), Menadione (5"g/ml), DTT (O.lmM), gentamicin (50# g/ml) 이 추가된 혈액 한천배지를 준비하였다. E.
- 0.5%, 1%, 2.5%, 5.25% NaOCl과 0.1%, 0.2%, 1%, 2% Chlorhexidine(CHX) 그리고 0.5M EDTA와 Listerine의 원액을 준비하였다.
- 25% 농도로 희석하여 준비하였다. 0.5M EDTA (Sigma-Aldrich chemical Co., USA)오* Listerine (Fresh Burst Listerine antiseptic, Johnson & Johnson Healthcare Products Division of McNEIL-PPC, Inc, USA)은 원액으로 실험하였다. 대조군으로는 2차 증류수(DW)를 준비하였다.
- Chlorhexidine(CHX)은 5% 알파헥시딘 (알파헥시딘, 성광제약, 서울, 한국)을 0.1%, 0.2%, 1% 및 2% 농도로 희석하여 준비하였다. NaOCle 5.
- lmM), gentamicin (50# g/ml) 이 추가된 혈액 한천배지를 준비하였다. E. faecalis 도말을 위해서는 첨가물 없는 혈액 한천배지를 준비하였다. 2가지 균주 모두 1><1 농도에 맞추어 준비하였다.
- gingivalis 2가지 균주를 사용하였다. E. faecalis는 감염근관에서 완전히 제거하기 가장 어려운 균주이므로 선택하였다. E.
- 2%, 1% 및 2% 농도로 희석하여 준비하였다. NaOCle 5.25% NaOCl (Vipon, 유한양행, 서울, 한국)을 0.5%, 1%, 2.5%, 5.25% 농도로 희석하여 준비하였다. 0.
- Porphyromonas gingivalis ATCC 3327은 완전 혐 기성 균주로서 Tryptic soy broth (TSB) 배지에 Hemin (1C g/ml), Menadione (510eg/ml), DTT (O.lmM) 및 gentamicin (5010g/ml)등을 첨가하여 혐기성 환경에서 배양하였다.
- , USA)오* Listerine (Fresh Burst Listerine antiseptic, Johnson & Johnson Healthcare Products Division of McNEIL-PPC, Inc, USA)은 원액으로 실험하였다. 대조군으로는 2차 증류수(DW)를 준비하였다.
- 본 연구에는 한국 미생물 협회로부터 분양 받은 표준균주 Porphyromonas gingivalis ATCC 3327과 Enterococcus faecalis ATCC 29212를 사용하였다.
- 본 연구에서는 E. ecalis와 P. gingivalis 2가지 균주를 사용하였다. E.
- 후 흡광도를 측정하였다. 흡광도는 multiwell spectrophotometer (ELX 800UV, Bio-Tek Instrument, Inc., USA)에서 630 nm 파장을 이용하여 측정하였다. 모든 실험은 7번씩 독립적으로 시행하였다.
데이터처리
- 실험의 결과는 one way ANOVA와 Bonferroni test로 사후 검정하여 항균력을 비교하였다(p<0.05).
이론/모형
- 본 연구에서는 Listerine과 NaOCl, Chlorhexidine, EDTA간의 항균성을 비교하고자 in vitro model만 이용한 표준적인 미생물학적 방법인 혼탁도 비교와 한천 확산법을 이용하였다";'.
- 근관세척액과 Listerine1간의 항균성 비교는 액체배지에서의 혼탁도와 한천 확산법으로 시 행하였다.
성능/효과
- 0.1% CHX는 0.5% NaOCl과 Listerine을 제외한 다른 군과 비교시 통계적으로 유의하게 높은 흡광도를 보여 낮은 항균성을 나타냈다(p<0.05). 2% CHX를 다른 농도의 CHX과 비교시 0.
- 1. 모든 실험군은 대조군과 비교시 근관내 균주에 항균성을 나타냈다 (p<0.05).
- 05). 2% CHX를 다른 농도의 CHX과 비교시 0.1% CHX만 통계적으로 유의성 있는 차이를 보였으며, 2% CHX이 더 낮은 흡광도를 나타냈다 (p<0, 05).
- 2. 액체배지상에서, E. faecalis에 대한 CHX의 농도에 따른 항균력을 비교시 모든 농도에서 대조군에 비해 유의한 항균효과를 나타냈으며(p<0.001), 2% CHX는 0.1%에 비해 통계적으로 유의한 높은 항균효과를 나타냈다(p<0.05). 또한 P.
- 3. 액체배지상에서 , 2가지 균주 모두에 대한 NaOCl의 항균력을 비교시 5.25% NaOCl이 저농도의 NaOCl에 비해 유의성 있게 높았다(p<0.05).
- 4. 한천 확산법을 이용한 항균력 비교시, CHXe 2가지 균주 모두에서 농도에 따른 항균효과의 차이는 없었다. 반면에 NaOCl에서는 2.
- 5. EDTA는 모든 실험에서 5.25% NaOCl과 유사한 정도로 높은 항균력을 나타냈다.
- 5.25% NaOCle 다른 저농도의 NaOCl에 비해 통계적으로 유의한 낮은 흡광도를 나타냈다(p<0.05).
- 5.25% NaOCl과 EDTA에서 가장 넓은 억제대를 보였으며, 이는 0.1% CHX, 0.2% CHX 그리고 Listerine과 유의성 있는 차이를 보였다(p<0.05). CHX와 NaOCe 농도가 커짐에 따라 넓은 억제대를 형성하는 양상을 보였으나, 농도간의 유의성 있는 차이는 나타나지 않았다(Table 2, A, Figure 2, A).
- 6. Listerine은 모든 실험에서 대조군을 제외한 다른 군들에 비해 낮은 항균력을 나타냈다(p<0.05).
- calis에 대한 효과가 보고된 2% 농도까지의 4가지 농도를 사용하였다. CHXe 2가지 실험균주에서 모두 효과적이었다. 이러한 CHX의 항균력은 양이온 분자로써 균주의 세포질 막의 연속성을 파괴하여 세포 내 성분의 누출을 유발함으로써 발휘된다고 여겨진다, .
- 001). CHXe 농도가 증가함에 따라 넓은 면적의 억제대를 형성하는 경향을 보였다. 2% CHX 은 01% CHX, 0.
- 05). CHX와 NaOCe 농도가 커짐에 따라 넓은 억제대를 형성하는 양상을 보였으나, 농도간의 유의성 있는 차이는 나타나지 않았다(Table 2, A, Figure 2, A).
- Listerine은 대조군을 제외한 모든 군에서 통계적으로 유의한 높은 흡광도를 나타내어 낮은 항균성을 보였다 (p<0.05). EDTA는 5.
- Listerine은 이번 연구에서 대조군과 비교시에는 높은 항균성을 보여주었으나, 다른 근관세척액에 비해서는 낮은 항균성을 보여줌으로써 항균성만을 평가하였을 때 근관세척 액으로써 사용이 적 합하지 않음을 보여 주었다.
- 각 군에서 가장 높은 농도인 2% CHX과 5.25% NaOCl 을 비교시 2% CHX에서 통계적으로 유의성 있는 낮은 흡광도를 나타냈다(p<0.05).
- 05). 또한 P. gingivalis에 대한 항균력에서도 대조군에 비해 유의한 차이를 나타냈으며 (p<0.001), 농도간에는 유의한 차이를 나타내지 않았다.
- 모든 근관세척액은 대조군에 비해 유의하게 낮은 흡광도를 나타내어 높은 항균성을 보였다(p<0.001).
- 구연산(citric acid)의 항균성이 보고되었다"". 본 연구에서 EDTA의 항균성이 매우 높게 나타났다. 이전의 연구들은 17% 이하의 EDTA를 사용한 것에 비해, 본 연구에서는 높은 농도의 EDTA를 사용함으로써 이러한 결과가 초래된 것으로 여겨진다.
- 이러한 CHX의 항균력은 양이온 분자로써 균주의 세포질 막의 연속성을 파괴하여 세포 내 성분의 누출을 유발함으로써 발휘된다고 여겨진다, . 본 연구에서 액체배지 상에서 항균력 평가 결과, 0.2% CHX 이상의 농도에서는 유의할 만한 차이가 없었고, 한천 확산법을 이용한 항균력 평가 시에는 농도간의 유의한 차이가 없었으므로, 이는 근관 내에 사용 시 현재 사용되고 있는 2% CHX 보다 더 낮은 농도 의사용이 가능함을 보여주었다.
- 본 연구에서는 액체배지상에서는 고농도의 CHX가 고농도의 NaOCl이나 EDTA보다 높은 항균력을 보였으나, 한천 확산법에서는 그 반대의 결과를 보여주었다. 이는 이러한 한천 확산법의 결과에 영향을 미치는 용액의 확산 도나 용해도 등에 영향을 받은 결과라 여겨진다.
- 이싱, 의 결과는 Listerine이 E. faecalise}- P. gingivalis 에 대해 항균성을 보이나, 일반적으로 사용되는 근관세척액에 비해서는 현저히 낮은 항균성을 나타냄으로 근관세척액으로 사용은 적합하지 않음을 나타냈다. Listerine은 저농도의 Essential oil 복합용액이므로, 향후 고농도의 식물성 용액을 이용한 식물성 성분의 근관세척액으로 사용 가능성에 대한 다양한 연구가 필요하리 라 여겨진다.
- 한천 확산법을 이용한 각각의 근관세척액의 항균효과는 E.ecalis에서 보다 P. gingiva에서 더 넓은 면적의 억제대를 나타냈다.
후속연구
- gingivalis 에 대해 항균성을 보이나, 일반적으로 사용되는 근관세척액에 비해서는 현저히 낮은 항균성을 나타냄으로 근관세척액으로 사용은 적합하지 않음을 나타냈다. Listerine은 저농도의 Essential oil 복합용액이므로, 향후 고농도의 식물성 용액을 이용한 식물성 성분의 근관세척액으로 사용 가능성에 대한 다양한 연구가 필요하리 라 여겨진다.
- 본 연구에서의 NaOCl의 항균성 결과는 NaOCl이 균주와 직접적인 접촉이 있는 경우 희석된 농도에서도 항균성을 보여 준다고 한 D' Arcangelo 등의 결과와 부합한다. 그러 나 5.25% 농도에서는 다른 농도군에 비해 유의하게 높은 항균성을 보여줌으로써 저농도 NaOCl의 근관내 사용을 위해서는 더 많은 임상적 연구가 필요하리 라 여겨진다.
- nucleatum 등을 완전하게 제거하였음을 보여주었다. 그러므로 향후 고농도의 essential oil을 이용한 항균성 연구를 통해 essential oil이 근관세척액으로 이용될 수 있을지에 관한 더 많은 연구가 필요하리 라 여겨진다.
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