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문제 정의
- 半枝蓮과 Cisplatin의 단독투여와 병용투여가 HeLa cells의 cell cycle pattern에 미치는 영향을 알아보기 위해서 cell cycle analysis를 수행하였다. 40배 희석된 半枝蓮과 25 μM Cisplatin의 단독투여와 병용투여된 HeLa cells의 cell cycle pattern을 비교 분석한 결과, 세포 주기 중에서 apoptotic portion을 나타내는 sub G1기를 살펴보면 25 μM Cisplatin만을 투여 시 18.
- 반지련과 cisplatin 각각을 사용하였을 때보다 반지련과 cisplatin 병용 투여 시 HeLa cell에 대한 항암작용이 보다 우세하여짐을 보여주는 실험 관찰 결과를 얻어 이에 보고하는 바입니다.
- 이 연구는 이와 같은 일련의 선행 연구를 참고하여 半枝蓮과 항암제를 병용 투여하였을 때 암세포의 성장저해를 증강시키는 효과가 있는지 확인하기 위해 기획되었다.
- 하지만 선행된 연구 결과를 통해 半枝蓮이 다양한 cancer cell type에 세포사멸을 유도하는 것을 알 수 있다. 이에 선행된 연구를 바탕으로 HeLa cell에 암세포의 apoptosis를 증가시키는 cytotoxicity mechanism을 관찰하였다.
제안 방법
- Centrifugation (5000 ×g/30 min/2회)실시하고, 동결건조 후 cell culture grade water와 1.8×PBS에 녹여 1 M NaOH(200 ㎕)를 이용하여 pH를 중성 (pH 6~8)으로 보정하였다.
- HeLa cells에 0, 5, 10, 25, 50 μM Cisplatin과 0, ×80, ×40, ×20, ×10 dilution factor 半枝蓮 MeOH extract를 각각 24시간 처리한 후, MTT assay를 통해 농도 의존적으로 cell viability가 감소하는 것을 확인하였다(Fig. 1A, B).
- HeLa cells을 89% DMEM, 10% fetal bovine serum 그리고 1% antibiotics가 포함된 배지로 37℃, 95% air/ 5% CO2가 유지되는 incubator에서 이틀마다 배지를 바꿔주며 배양하고 약물 처리한 후 cell viability를 살펴보았다.
- HeLa cell을 6-well plates에 분주하고, 각각 25 μM Cisplatin, ×40 半枝蓮의 MeOH extract, 복합처리를 24시간 하였다.
- protein 수준에서 半枝蓮 MeOH extract와 Cisplatin 병용투여가 대표적인 apoptotic maker인 Poly ADP ribose polymerase (PARP)의 cleavage에 주는 영향을 알아보기 위해 western blot analysis로 관찰 분석하였다. 대조군에서는 116kd의 PARP만 존재한다.
- 半枝蓮 extracts와 Cisplatin을 HeLa cells에 병용투여한 후 viability를 살펴보았다. 즉 25μM의 Cisplatin과 0, ×80, ×40, ×20, ×10 dilution 半枝蓮 물중탕 추출한 것과 MeOH 추출한 것을 각각 24시간 처리한 후 cell viability를 측정하였다.
- 半枝蓮 extracts와 Cisplatin을 HeLa cell에 병용투여한 후 MTT assay로 cell viability를 살펴보았다. 半枝蓮 MeOH extracts와 Cisplatin 각각 처리 시 농도 의존적으로 생존율이 감소하는 것을 확인하고 그 정도를 비교하여 半枝蓮 물중탕 extracts과 MeOH extracts와 Cisplatin의 상호작용에 의해 세포독성의 효과가 더 커지는 것을 알 수 있었다.
- 半枝蓮 추출물과 Cisplatin을 HeLa cell에 처리순서, 농도별, 추출용매(물, MeOH)를 달리하여 병용 투여 시 半枝蓮의 항암작용의 증강효과를 다각도로 분석하여 다음과 같은 결과를 얻었다.
- 半枝蓮 whole plant 84g을 methanol(MeOH) 320 ㎖에 넣고 추출하였다. 半枝蓮 추출물을 거름종이 (Lot. No 2)에 거른 후, Centrifuge tube에 담고 Centrifugation(5000rpm, 30min, 4℃)을 2번 해주었다. Centrifugation한 추출물을 동결건조 (-50℃, 8기압)시켰다.
- 半枝蓮, Cisplatin, 半枝蓮과 Cisplatin병용 투여에 의한 HeLa cell의 DNA 분절현상을 확인하기 위해 DAPI staining을 이용하여 핵을 염색하여 형광현미경으로 관찰하였다. Cell morphological assessment 결과 모두 DNA 분절현상의 apoptosis 형태가 관찰되었고, 半枝蓮과 Cisplatin 병용 투여 시 분절현상이 조금 더 진행된 것으로 관찰되었다.
- 半枝蓮과 Cisplatin 병용투여와 단독처리에 의한 각각의 항암작용을 apoptotic analysis를 통해 직접 비교분석하였다. 이는 Annexin V-FITC와 propidium iodide(PI) 염색을 통해 세포의 early apoptosis (Annexin V 양성 및 PI 음성), late apoptosis (Annexin V 양성 및 PI 양성) necrosis (Annexin V 음성 및 PI 양성)와 생존세포(Annexin V 음성 및 PI 음성)를 감별 측정하는 것이다.
- primary antibody와 반응시킨 membrane을 secondary antibody와 45분 반응시킨 후TBS-T로 15분 세척(5분, 3회) 하였다. 각각의 단백질은 enhanced chemilumine-scence (ECL)로 발색시키고 X-ray film에 감광하여 분석하였다.
- 그리고 apoptotic hallmark인 DNA fragmentation과 nuclear condensation의 변화를 DAPI stainning을 이용하여 핵을 염색하여 형광현미경으로 관찰하였다. 대조군에서는 apoptosis가 일어나지 않은 균질한 타원형 형광염색된 핵을 관찰하였고, 나머지 그룹에서는 DNA fragmentation과 nuclear condensation을 띄는 apoptosis 형태가 관찰되었고, 40배 희석 半枝蓮과 25μM Cisplatin을 병용투여 시에 분절현상이 보다 더 진행되었고, 25μM Cisplatin 단독 투여 시보다는 40배 희석 半枝蓮 단독 투여 시의 핵에 근접한 모양이 관찰되었다(Fig.
- 또한 40배 희석된 半枝蓮 물중탕 추출물과 MeOH 추출물을 0, 5, 10, 25, 50 μM Cisplatin과 각각 24시간 병용처리한 후, cell viability를 확인하였다.
- 이때 Cisplatin의 농도를 포화농도였던 25μM로 일정하게 하고 半枝蓮의 농도를 점차 높여서 처리하였고, 半枝蓮은 물중탕 extracts과 MeOH extracts를 이용하였다. 또한 半枝蓮의 농도를 포화농도였던 40배 희석으로 일정하게 하고 Cisplatin의 농도를 점차로 높여서 처리하여 일련의 실험을 진행하였다. 이 경우에도 半枝蓮은 물중탕 extracts과 MeOH extracts을 이용하였다.
- 24시간 약물처리 한 세포를 파쇄완충용액(CLBC 100 μM, 4℃)에 넣어 sonification 한 후 30분 동안 ice상에서 incubation 하고 centrifuge (16200rpm, 4℃, 30분) 하여 세포파쇄액을 만들었다. 세포파쇄액의 단백질을 bradford protein assay를 통해 정량하고, 70㎍의 단백질을 10% SDS-PAGE 전기영동으로 단백질을 분리한 다음, wet electrotransfer system(34 mA/㎠)을 통해서 PVDF membrane에 이동시켰다. membrane은 5% skim milk로 blocking시킨 후에 primary antibody (PARP) 1:1000과 상온에서 1시간 30분 동안 반응시키고 TBS-T로 15분 세척(5분, 3회)하였다.
- 양방항암제와 半枝蓮의 병용투여가 암세포 성장저해에 미치는 효과를 평가하기 위해 추출용매별, 농도별, 투여순서별 차이를 두고 세포활성을 측정하고, DNA분절형성에 미치는 작용, apoptosis에 미치는 작용, cell cycle pattern에 미치는 작용, PARP cleavage에 미치는 작용 등을 관찰하였다.
- HeLa cell을 6-well plates에 분주하고, 각각 25 μM Cisplatin, ×40 半枝蓮의 MeOH extract, 복합처리를 24시간 하였다. 역주기 명암 현미경(inverted phases-contrast microscope (Leica, Germany))을 이용하여 morphology 사진을 촬영하였고 핵을 DAPI (10 mg/ml)로 염색하여 형광 현미경[fluorescence microscopy(Olympus VENOX-AHBT3, Japan)]으로 관찰하였다.
- Apoptosis assay를 통해 半枝蓮 MeOH extracts와 Cisplatin이 유도하는 apoptosis mechanism이 다르다는 것을 유추할 수 있었고, 이 결과 또한 복합처리 시 세포사멸의 효과가 증가하는 것을 보였다. 이는 Annexin V-FITC와 propidium iodide(PI) 염색을 통해 세포의 early apoptosis (Annexin V 양성 및 PI 음성), late apoptosis (Annexin V 양성 및 PI 양성)necrosis (Annexin V 음성 및 PI 양성)와 생존세포(Annexin V 음성 및 PI 음성)를 감별 측정하였다. 半枝蓮 추출물과 Cisplatin을 병용 투여할 때 나타나는 양상이 半枝蓮 추출물만을 투여했을 때처럼 late apoptosis의 비율이 높은 양상을 띠었다.
- 즉 25μM의 Cisplatin과 0, ×80, ×40, ×20, ×10 dilution 半枝蓮 물중탕 추출한 것과 MeOH 추출한 것을 각각 24시간 처리한 후 cell viability를 측정하였다.
- 그리고 MTT (5 ㎎/㎖) 10 ㎖을 각각의 well에 처리해 주었다. 처리 후 살아있는 세포에 의해 생성된 보라색 formazan의 검출을 위하여, MTT가 들어있는 배양액을 모두 제거하고 dimethyl sulfoxide (DMSO)를 200 ㎕씩 처리하여 충분히 녹인 후, Optical density는 ELISA reader를 사용해 570 ㎚에서 측정하였다.
대상 데이터
- Cell culture와 관련된 시약은 JBI(Korea)에서, 이를 제외한 모든 시약은 Sigma/Aldrich (St Louis, USA)로부터 구입하였다.
- 半枝蓮 whole plant 84g을 methanol(MeOH) 320 ㎖에 넣고 추출하였다. 半枝蓮 추출물을 거름종이 (Lot.
- protein 수준에서 半枝蓮 MeOH extract와 Cisplatin 병용투여가 대표적인 apoptotic maker인 Poly ADP ribose polymerase (PARP)의 cleavage에 주는 영향을 알아보기 위해 western blot analysis로 관찰 분석하였다. 대조군에서는 116kd의 PARP만 존재한다. 이와 비교해서 각 항암제를 처리했을 때 절단된 PARP가 나타났다는 것을 확인할 수 있었다(Fig.
이론/모형
- Cell viability는 MTT assay를 통해서 측정하였다. 항상 최종 incubation 시간은 24시간에 맞추었다.
- Cell 실험을 통해 알아본 半枝蓮과 Cisplatin의 복합효과가 실제적으로 대표적인 apoptotic maker인 PARP의 cleavage에 어떠한 영향을 주는지 알아보기 위해 western blot analysis로 protein 수준에서 분석하였다. 기질 단백질인 PARP를 분해하여 핵 밖으로 노출시켜 DNA 분절 등의 핵변화보다 먼저 apoptosis를 감지할 수 있다.
- 현탁된 sample을 FACS 전용 유리관으로 옮겨 담고, 어두운 상태의 Room Temperature에서 1시간 incubation시켰다. 그런 다음, Flow Cytometry는 서울대 임상의학연구소에 의뢰하여 분석하였다.
성능/효과
- 40배 희석된 半枝蓮과 25 μM Cisplatin의 단독투여와 병용투여된 HeLa cells의 cell cycle pattern을 비교 분석한 결과, 세포 주기 중에서 apoptotic portion을 나타내는 sub G1기를 살펴보면 25 μM Cisplatin만을 투여 시 18.52%, 40배 희석 半枝蓮만을 투여 시 4.29%, 40배 희석 半枝蓮과 25 μM Cisplatin 병용투여 시 7.19%로 분석되었다.
- Apoptosis assay를 통해 半枝蓮 MeOH extracts와 Cisplatin이 유도하는 apoptosis mechanism이 다르다는 것을 유추할 수 있었고, 이 결과 또한 복합처리 시 세포사멸의 효과가 증가하는 것을 보였다. 이는 Annexin V-FITC와 propidium iodide(PI) 염색을 통해 세포의 early apoptosis (Annexin V 양성 및 PI 음성), late apoptosis (Annexin V 양성 및 PI 양성)necrosis (Annexin V 음성 및 PI 양성)와 생존세포(Annexin V 음성 및 PI 음성)를 감별 측정하였다.
- Apoptosis assay를 통해 半枝蓮 MeOH 추출물과 cisplatin이 유도하는 apoptosis mechanism은 다르다는 것을 유추할 수 있었고, 병용투여 시 세포사멸의 효과가 Cisplatin 만을 단독 투여했을 때보다 약 21.16% 증가하고 半枝蓮 추출물만을 투여한 경우보다는 3.34% 증가하는 것을 보였다.
- Cell morphological assessment 결과 모두 DNA 분절현상의 apoptosis 형태가 관찰되었고, 半枝蓮과 Cisplatin 병용 투여 시 분절현상이 조금 더 진행된 것으로 관찰되었다.
- 半枝蓮 추출물과 Cisplatin을 병용 투여할 때 나타나는 양상이 半枝蓮 추출물만을 투여했을 때처럼 late apoptosis의 비율이 높은 양상을 띠었다. Cisplatin이 유도하는 apoptosis mechanism보다는 半枝蓮 추출물의 apoptosis mechanism과 매우 흡사한 것을 관찰할 수 있었고, 이를 통해 복합효과가 半枝蓮에 의해서 강화된다는 것을 알 수 있었다.
- HeLa cells 대조군과 각각 Cisplatin(25 μM), 半枝蓮 MeOH 추출물 (×40), Cisplatin (25 μM)과 半枝蓮 MeOH 추출물을 합한 것을 HeLa cells에 24시간 처리한 후, cell morphology를 관찰한 결과 각각의 약물이 세포를 효과적으로 사멸시키는 것을 확인하였다.
- PARP 단백질의 분절로 세포내 apoptosis의 전형적인 형태학적 변화인 DNA 분절을 일으킨다39). PARP가 cleavage되는 일은 apoptosis가 일어나는 세포에서 나타나는 것으로 이는 곧 처리한 항암제들이 세포에 apoptosis를 유도한다고 결론 내릴 수 있었다. 그런데 PARP band를 image scanning하여 densitometry를 측정한 결과 半枝蓮과 Cisplatin 병용 처리 시에 PARP cleavage수치가 半枝蓮 단독 처리에 비해 낮은 것을 확인 할 수 있었다.
- 半枝蓮 extracts와 Cisplatin을 HeLa cell에 병용투여한 후 MTT assay로 cell viability를 살펴보았다. 半枝蓮 MeOH extracts와 Cisplatin 각각 처리 시 농도 의존적으로 생존율이 감소하는 것을 확인하고 그 정도를 비교하여 半枝蓮 물중탕 extracts과 MeOH extracts와 Cisplatin의 상호작용에 의해 세포독성의 효과가 더 커지는 것을 알 수 있었다. 이때 Cisplatin의 농도를 포화농도였던 25μM로 일정하게 하고 半枝蓮의 농도를 점차 높여서 처리하였고, 半枝蓮은 물중탕 extracts과 MeOH extracts를 이용하였다.
- 半枝蓮 물중탕 추출시 Cisplatin의 농도가 5 μM일 때 29%, 10 μM 일 때 34%이상의 차이를 보여 여기에서도 半枝蓮과 Cisplatin의 상호작용에 의해 세포독성의 효과가 더 커지는 것을 확인 할 수 있었다.
- 94%가 두루 관찰되었다. 半枝蓮 추출물로 단독 처리했을 때는 necrosis 8.58%, late apoptosis 88.32%, early apoptosis 0.30%가, 半枝蓮 추출물과 Cisplatin을 병용 처리했을 때에는 necrosis 6.08%, late apoptosis 91.58%, early apoptosis 0.38%로 半枝蓮 추출물만을 투여했을 때처럼 late apoptosis의 비율이 높은 양상을 띠었다.
- 이처럼 MTT assay를 통해 cell viability를 분석하고, cell cycle analysis를 통하여 半枝蓮이 HeLa cell의 cell cycle arrest에 미치는 영향을 확인하였고, DAPI staining을 이용하여 DNA 분절현상을 형광현미경으로 관찰하고, Cell morphological assessment 결과 모두 DNA 분절현상의 apoptosis 형태를 관찰할 수 있었다. 半枝蓮과 Cisplatin의 복합처리 시에는 Cisplatin 단독처리의 효과보다 半枝蓮의 효과가 더욱 강하게 나타남을 보이며, 궁극적으로는 각각의 단독처리보다는 HeLa cell 사멸을 더욱 촉진하는 것으로 사료되었다. 더욱이 Annexin V-FITC와 propidium iodide(PI) 염색을 통한 관찰과 PARP의 cleavage의 분석, 세포주기 subG1비율분석은 Cisplatin의 pattern과는 다른 양상을 보이고 있어 半枝蓮이 apoptosis 이외의 다른 기전으로 항암효과를 더욱 증가시킨다는 것을 추측하게 하였다.
- 半枝蓮의 MeOH 추출물은 HeLa cell에 대해 cytotoxicity를 가지는데, 半枝蓮의 MeOH 추출물과 Cisplatin은 HeLa cell에 대해 apoptosis를 유도하며 병용투여 시 세포사멸의 효과는 증대되었다.
- PARP가 cleavage되는 일은 apoptosis일어나는 세포에서 나타나는 것으로 이는 곧 처리한 항암제들이 세포에 apoptosis를 유도한다고 결론내릴 수 있다. 그러나 PARP band를 image scanning 하여 densitometry를 측정한 결과 半枝蓮과 Cisplatin 병용투여 시에 PARP cleavage 수치가 半枝蓮 단독투여에 비해 낮은 것을 확인 할 수 있었다(Fig. 6B). 이는 viability가 크게 감소했던 위의 실험결과에 비추어 보면 병용투여는 세포를 고사시키긴 하되 apoptosis가 아닌 다른 기전에 의해서 임을 알 수 있다.
- PARP가 cleavage되는 일은 apoptosis가 일어나는 세포에서 나타나는 것으로 이는 곧 처리한 항암제들이 세포에 apoptosis를 유도한다고 결론 내릴 수 있었다. 그런데 PARP band를 image scanning하여 densitometry를 측정한 결과 半枝蓮과 Cisplatin 병용 처리 시에 PARP cleavage수치가 半枝蓮 단독 처리에 비해 낮은 것을 확인 할 수 있었다.
- 대조군에서는 apoptosis가 일어나지 않은 균질한 타원형 형광염색된 핵을 관찰하였고, 나머지 그룹에서는 DNA fragmentation과 nuclear condensation을 띄는 apoptosis 형태가 관찰되었고, 40배 희석 半枝蓮과 25μM Cisplatin을 병용투여 시에 분절현상이 보다 더 진행되었고, 25μM Cisplatin 단독 투여 시보다는 40배 희석 半枝蓮 단독 투여 시의 핵에 근접한 모양이 관찰되었다(Fig. 4).
- 대조군은 대부분 생존세포가 관찰되었고 cisplatin으로 단독 처리했을 때에는 necrosis 5.02%, late apoptosis 49.86%와 early apoptosis 20.94%가 두루 관찰되었다. 半枝蓮 추출물로 단독 처리했을 때는 necrosis 8.
- 半枝蓮과 Cisplatin의 복합처리 시에는 Cisplatin 단독처리의 효과보다 半枝蓮의 효과가 더욱 강하게 나타남을 보이며, 궁극적으로는 각각의 단독처리보다는 HeLa cell 사멸을 더욱 촉진하는 것으로 사료되었다. 더욱이 Annexin V-FITC와 propidium iodide(PI) 염색을 통한 관찰과 PARP의 cleavage의 분석, 세포주기 subG1비율분석은 Cisplatin의 pattern과는 다른 양상을 보이고 있어 半枝蓮이 apoptosis 이외의 다른 기전으로 항암효과를 더욱 증가시킨다는 것을 추측하게 하였다.
- HeLa cells 대조군과 각각 Cisplatin(25 μM), 半枝蓮 MeOH 추출물 (×40), Cisplatin (25 μM)과 半枝蓮 MeOH 추출물을 합한 것을 HeLa cells에 24시간 처리한 후, cell morphology를 관찰한 결과 각각의 약물이 세포를 효과적으로 사멸시키는 것을 확인하였다. 또한, 각각의 약물의 단독처리 시보다 병용처리 시에 cell viability가 더욱 감소함이 보였다(Fig. 2).
- 실험 결과 cell cycle analysis에서는 Cisplatin만을 투여했을 때보다 半枝蓮 추출물과 Cisplatin을 병용 투여 시 subG1의 증가가 보였고, 이는 半枝蓮과 유사한 양상을 보였다. 이를 통해 半枝蓮이 cell cycle pattern에 더 영향을 미치는 것을 확인할 수 있었다.
- 또한 40배 희석된 半枝蓮 물중탕 추출물과 MeOH 추출물을 0, 5, 10, 25, 50 μM Cisplatin과 각각 24시간 병용처리한 후, cell viability를 확인하였다. 이 경우 半枝蓮 Methanol 추출물이 半枝蓮 물중탕 추출물보다 세포독성 효과가 더 좋은 것으로 나타났다. 半枝蓮 물중탕 추출시 Cisplatin의 농도가 5 μM일 때 29%, 10 μM 일 때 34%이상의 차이를 보여 여기에서도 半枝蓮과 Cisplatin의 상호작용에 의해 세포독성의 효과가 더 커지는 것을 확인 할 수 있었다.
- 대조군에서는 116kd의 PARP만 존재한다. 이와 비교해서 각 항암제를 처리했을 때 절단된 PARP가 나타났다는 것을 확인할 수 있었다(Fig. 6A). PARP가 cleavage되는 일은 apoptosis일어나는 세포에서 나타나는 것으로 이는 곧 처리한 항암제들이 세포에 apoptosis를 유도한다고 결론내릴 수 있다.
- 34% 증가하는 것을 보였다. 이중에서도 late apoptosis의 경우 병용 투여 시에 91.58%로 半枝蓮 추출물만을 투여했을 때 88.32%와 거의 흡사한 높은 비율을, early apoptosis의 경우 0.38%와 0.30%라는 매우 낮은 비율을 띠었고, 오히려 necrosis의 경우에는 병용 투여 시 6.08%로 半枝蓮 추출물만을 투여했을 때 8.58%보다도 낮아졌다. 이처럼 병용 투여 시 Cisplatin만을 단독 투여한 경우보다는 半枝蓮 추출물만을 단독 투여한 경우와 보다 유사한 양상의 세포사멸양상을 띠는 것을 관찰할 수 있었다(Fig.
- 이처럼 MTT assay를 통해 cell viability를 분석하고, cell cycle analysis를 통하여 半枝蓮이 HeLa cell의 cell cycle arrest에 미치는 영향을 확인하였고, DAPI staining을 이용하여 DNA 분절현상을 형광현미경으로 관찰하고, Cell morphological assessment 결과 모두 DNA 분절현상의 apoptosis 형태를 관찰할 수 있었다. 半枝蓮과 Cisplatin의 복합처리 시에는 Cisplatin 단독처리의 효과보다 半枝蓮의 효과가 더욱 강하게 나타남을 보이며, 궁극적으로는 각각의 단독처리보다는 HeLa cell 사멸을 더욱 촉진하는 것으로 사료되었다.
- 58%보다도 낮아졌다. 이처럼 병용 투여 시 Cisplatin만을 단독 투여한 경우보다는 半枝蓮 추출물만을 단독 투여한 경우와 보다 유사한 양상의 세포사멸양상을 띠는 것을 관찰할 수 있었다(Fig. 3).
- 半枝蓮 물중탕 추출시 Cisplatin의 농도가 5 μM일 때 29%, 10 μM 일 때 34%이상의 차이를 보여 여기에서도 半枝蓮과 Cisplatin의 상호작용에 의해 세포독성의 효과가 더 커지는 것을 확인 할 수 있었다. 즉 Cisplatin이 일으키는 DNA damage에 半枝蓮이 일으키는 또 다른 형태의 damage가 더해져 더 많은 세포사멸을 일으키는 것으로 유추할 수 있었다. (Fig.
- 즉 Morphology의 변화, cell cycle pattern의 변화, apoptosis 분석, 단백질 분석 등에 의하면 Cisplatin가 유도하는 apoptosis와는 다른 양상을 보이며, 더욱이 半枝蓮과 Cisplatin의 병용 투여 시에는 半枝蓮과 Cisplatin 각각의 단독 투여시보다 cytotoxicity 효과가 더 강하게 나타났다.
- 즉, Morphology의 변화, apoptosis 분석, cell cycle pattern의 변화, 단백질 분석 모두 공통적으로 Cisplatin의 pattern과는 다른 양상을 보이며 게다가 半枝蓮과 Cisplatin의 병용투여 시에는 Cisplatin 단독투여의 효과보다 半枝蓮의 효과가 더욱 더 강하게 나타남을 보이며 궁극적으로는 각각의 단독투여보다는 HeLa cells의 사멸을 더욱 촉진하는 것으로 사료된다(Fig. 2-6).
후속연구
- 향후 후속 연구들을 통해 半枝蓮의 병용 투여가 갖는 항암작용 증가 효과와 그 기작을 보다 상세히 밝히고 항암환자들에게 임상적으로 적용할 수 있을 것으로 사료된다.
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