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Melittin이 NF-${\\kappa}$B의 불활성화를 통한 DU-145 전립선 암세포의 성장 및 세포자멸사 유도에 미치는 영향
Melittin Inhibits DU -145 Human Refractory Prostate Cancer Cell Growth Through Induction of Apoptosis Via Inactivation of NF-${\\kappa}$B 원문보기

大韓鍼灸學會誌= The journal of Korean Acupuncture & Moxibustion Society, v.26 no.3, 2009년, pp.39 - 48  

최철훈 (경원대학교 한의과대학 침구학교실) ,  송호섭 (경원대학교 한의과대학 침구학교실)

초록
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목적 : 이 연구는 봉약침의 주요성분인 멜리틴이 NF-${\kappa}$B의 활성억제를 통하여 세포자멸사를 유도하고, 전립선 암세포주인 DU-145 세포의 성장을 억제하는지를 확인하고 멜리틴의 NF-${\kappa}$B 활성억제기전을 살펴보고자 하였다. 방법 : 멜리틴을 처리한 후 DU-145의 성장억제를 관찰하기 위해 WST-1 assay를 시행하였고, 세포자멸 사의 관찰에는 DAPI stairung assay를 통한 세포형태관찰을 시행하였으며, 염증관련유전자 발현 관찰에는 western blot analysis를 시행하였고, 세포자멸사와 연관된 NF-${\kappa}$B의 활성 변화를 관찰하기 위해 EMSA와 luciferase assay를 시행하였으며, DU-145에서 멜리틴과 NF-${\kappa}$B의 상호작용을 관찰하기 위해 transient transfection assay를 시행 시 세포생존율과 NF-${\kappa}$B의 활성 변동을 측정하였다. 결과 : DU-145 세포에 멜리틴을 처리한 후, 전립선암세포의 성장, 세포자멸사의 유발, 염중관련유전자 발현 및 NF-${\kappa}$B의 활성, NF-${\kappa}$B의 p50 치환 후 NF-${\kappa}$B의 활성과 DU-145 세포 증식에 미치는 영향을 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. DU-145 세포에서 멜리틴을 처리한 후 세포자멸사가 유도되어 세포성장이 억제되었다. 2. DU-145 세포에서 멜리틴을 처리한 후 염증관련유전자 발현 및 NF-${\kappa}$B의 활성에 유의한 감소를 나타내었다. 3. DU-145 세포에서 NF-${\kappa}$B의 p50와 IKK들을 치환하여 작용기를 없애고 멜리틴을 처리하였을 경우에도 세포활성 및 NF-${\kappa}$B의 활성의 유의한 감소를 나타내었다.

주제어

#봉독   #멜리틴   #전립선암   #세포자멸사  

AI 본문요약
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제안 방법

  • To deHneate whether the inhibition of cell growth by MT was due to increase of the induction of apoptosis, I evaluated change of the chromatin morphology of human prostate cancer cells using DAPI staining. Consistent with the loss of viability, DU-145 cell demonstrated the characteristics of apoptotic morphologic change including cell shrinkage with irregular shape, cytoplasmic blebbing, chromatin condensation, DNA fragmentation and apoptotic bodies, etc(Fig.
  • In addition, NF-kB is known to be inhibitory transcription factor of apoptosis. To investigate the hypothesis that MT can inactivate NF-kB and suppress the expression of inflammation related genes such as iNOS, COX-2 and cPL&, and thereby prevent anti-apoptotic ability of NF-kB causing DU-145 cells go apoptosis, I assessed NF-kB activity in the cells treated for different concentration of MT for 24hr by EMSA and observed inflammation gene expression in the ceDs by western bl아 analysis. NF가cB was highly activated in this cell and inflammation related gene expression wa돊 also enhanced, however the activation of NF-kB and inflammatoiy gene expression were gradually decreased by the culture in the presaice of MT in the cells(Fig.

대상 데이터

  • A fusion gene containing pCMV promoter and p50, IKKs(IKKa, IKKP) mutant was used. DU-145 cells were transfected with these mutant genes constructs.
  • The DU-145 human prostate cancer cell was obtained from ATCC(American Type Culture Collection, Rockville, MD). Prostate(시Is were culturrf in RPMI-1640 medium(Life Technologies Inc.

데이터처리

  • Data were analyzed using one-way analysis of variance followed by Tuckey test as a post hoc test. Differences were considered significant at p< 0.
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