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제안 방법
- 간의 total cholesterol, triglyceride 및 GOT, GPT 측정 − 간을 적출하여 생리식염수로 세척한 후 Folch 등의 지질 추출법36)에 따라 간을 곱게 갈아 균질용 tube에 넣고 초음파 세포막 분쇄기로 세포막을 파괴하고 chloroform:methanol=2:1 혼합액으로서 지질을 추출한 후 2,000 rpm에서 원심분리하여 그 상등액을 시료로 하여 지질 분석에 이용하였다.
- 정상군은 시판되는 표준사료를 급여하였으며, 나머지 군들은 고지혈 유도 식이를 급여하였다. 고지혈증 유발은 표준 사료를 곱게 빻은 가루에 1.5% cholesterol, 0.25% cholic acid 및 25% lard를 첨가하여 조제한 식이 (Table IV)로 10일간 유도하여 고지혈증을 유발시킨 후 안와정맥에서 채혈을 하였고, 고지혈 상태가 유지되도록 고지혈 유발 사료를 계속해서 급여하면서 R-G, R-A, R-P 및 lovastatin을 10일 간 경구 투여하였다.
- 8 ml을 채혈하였으며, 실험 마지막 날에 도살 전에 심장에서 채혈을 실시하여 곧바로 원심분리 후 혈장을 보관하였고, 혈액에 포함된 total cholesterol, triglyceride, HDL-cholesterol, LDL-cholesterol, GOT 및 GPT 등을 측정하기 위해 각종 혈액 분석 및 생화학 검사를 하였다. 아울러 간문맥 관류를 실시하고 간을 적출하여 간지질의 total cholesterol 및 triglyceride 함량을 시판 kit를 사용하여 측정하였다.
- 이상과 같은 내용을 토대로 본 연구에서는 괴화(Sophorae Flos)보다는 덜 알려지고 그 활성성분에 대해서도 비교적 알려져 있지 않으나 매우 우수한 isoflavone 및 flavone 화합물의 자원으로 판단되며28) ovariectomized rat에서 골다공증에도 효과가 있다29)고 알려진 회화나무 성숙 과실인 괴각(Sophorae Fructus)의 추출물을 이용한 고지혈증 및 지방간 개선 효과를 실험하였다.
- 실험기간동안 각 군에 투여된 시료, 투여량 및 방법은 Table I과 같다. 정상군은 시판되는 표준사료를 급여하였으며, 나머지 군들은 고지혈 유도 식이를 급여하였다. 고지혈증 유발은 표준 사료를 곱게 빻은 가루에 1.
- 혈청의 total cholesterol, triglyceride, HDL-cholesterol, LDL-cholesterol, GOT 및 GPT의 측정 −체중은 3일 간격으로 측정하였으며 채혈은 시료 투여 전일에는 ether 흡입 마취 후 안와정맥에서 1.7~1.8 ml을 채혈하였으며, 실험 마지막 날에 도살 전에 심장에서 채혈을 실시하여 곧바로 원심분리 후 혈장을 보관하였고, 혈액에 포함된 total cholesterol, triglyceride, HDL-cholesterol, LDL-cholesterol, GOT 및 GPT 등을 측정하기 위해 각종 혈액 분석 및 생화학 검사를 하였다.
- 회화열매 추출물 (R-G), 회화열매 추출물의 효소분해물(R-A) 및 회화열매 추출물 함유제품 (R-P) 으로부터 고지혈증 개선 및 예방 효과에 대한 실험으로서 in vivo 에서 고지혈 유도 식이로 고지혈증을 유도하고 각 시료를 경구투여하여 혈청 및 간지질에 대해 각종 생화학적 검사를 수행하였다. 고지혈 유도 식이로 유도된 고지혈증 흰쥐에서 total cholesterol 수치는 모든 시료 투여군에서 control 군 (시료비 투여군)에 비해 감소 효과를 보였으며 특히, R-P 군이 가장 높은 억제율(56%)을 보였고, triglyceride 수치는 모든 시료 투여군에서 감소를 보였으며 특히, R-G 군이 30%의 억제율을 나타내었다.
대상 데이터
- 시약 및 기구 −시약으로는 total cholesterol와 triglyceride는 아산제약(주)(경기도 화성) 제품을, lovastatin(메버스틴정)은 중외제약(주) 제품을 사용하였고, lard, cholic acid 및 cholestrol은 Sigma사(미국) 제품을 사용하였다.
- 실험 재료 −실험에 사용된 시료는 회화열매추출물Ⅰ(R-G;lot #0301S2), 회화나무열매 추출물 Ⅱ(R-A) 및 회화열매 추출물 함유 제품(이소칼 ; R-P)은 (주)렉스진 바이오텍에서 제공받았다.
- 실험동물 및 사육조건 −체중 100~120 g의 Sprague-Dawley계 웅성 흰쥐를 한림실험동물원(경기도)으로부터 구입하여 사용하였다.
- 실험동물 및 사육조건 −체중 100~120 g의 Sprague-Dawley계 웅성 흰쥐를 한림실험동물원(경기도)으로부터 구입하여 사용하였다. 중앙대학교 약학대학 동물실험실에서 1주 동안 순응시킨 뒤 실험하였다. 동물실험실의 온도는 23±1℃, 습도는 40~60%, 명암주기는 12시간 등 실험기간 동안 일정한 조건 하에 사육하였으며, 기본 사료 (고형사료, 한림실험동물원, 경기도)와 식수는 제한없이 공급하였다.
데이터처리
- 통계처리 −실험으로부터 얻어진 결과는 통계처리하여 평균값과 표준편차를 계산하였으며, control군과 각 실험군 간의 유의성 검정은 Student’ t-test를 이용하여 통계처리한 후, 신뢰구간(P valve)이 0.05보다 작은 경우 통계학적인 의의가 있는 것으로 판정하였다.
이론/모형
- 동맥경화지수는 Haglund 등의 방법34)에 따라 [(total cholesterol)-(HDL-cholesterol)] / [HDL-cholesterol]의 공식에 의해 계산되었다. GOT 및 GPT 함량은 Reitman-Frankel 법35)에 따라 Hitachi-747(Hitachi사, 일본)를 사용하여 흡광도 505 nm에서 측정하고 검량선에 준해 그 함량을 IU/L로 표시하였다.
- Triglyceride 함량은 Saldesai 등의 효소법에 준하여 시판 kit(아산제약 (주))를 사용하여 흡광도 550 nm에서 측정하고 검량선에 준해 그 함량을 mg/dl로 표시하였다. GOT 및 GPT 함량은 Reitman-Frankel 법에 따라 시판 kit(아산제약 (주))를 사용하여 흡광도 505 nm에서 측정하고 검량선에 준해 그 함량을 IU/L로 표시하였다.
- Triglyceride 함량은 Saldesai 등의 효소법31)에 준하여 Hitachi-747(Hitachi사, 일본)를 사용하여 흡광도 550nm에서 측정하고 검량선에 준해 그 함량을 mg/dl로 표시하였다. HDL-cholesterol 함량은 Lopes 등의 효소법32)에 따라 Hitachi-747(Hitachi사, 일본)를 사용하여 흡광도 500 nm에서 측정하고 검량선에 준해 그 함량을 mg/dl로 표시하였다. LDL-chloesterol 함량은 mainard 등의 효소법33)에 따라 Synchron CX-9 (Beckman사, 미국)를 사용하여 측정하였다.
- HDL-cholesterol 함량은 Lopes 등의 효소법32)에 따라 Hitachi-747(Hitachi사, 일본)를 사용하여 흡광도 500 nm에서 측정하고 검량선에 준해 그 함량을 mg/dl로 표시하였다. LDL-chloesterol 함량은 mainard 등의 효소법33)에 따라 Synchron CX-9 (Beckman사, 미국)를 사용하여 측정하였다. 동맥경화지수는 Haglund 등의 방법34)에 따라 [(total cholesterol)-(HDL-cholesterol)] / [HDL-cholesterol]의 공식에 의해 계산되었다.
- 에 따라 간을 곱게 갈아 균질용 tube에 넣고 초음파 세포막 분쇄기로 세포막을 파괴하고 chloroform:methanol=2:1 혼합액으로서 지질을 추출한 후 2,000 rpm에서 원심분리하여 그 상등액을 시료로 하여 지질 분석에 이용하였다. Total cholesterol 함량은 Allain 등의 효소법에 의하여 시판 kit(아산제약 (주), 경기도 화성)를 사용하여 흡광도 500 nm에서 측정하고 검량선에 준해 그 함량을 mg/dl로 표시하였다. Triglyceride 함량은 Saldesai 등의 효소법에 준하여 시판 kit(아산제약 (주))를 사용하여 흡광도 550 nm에서 측정하고 검량선에 준해 그 함량을 mg/dl로 표시하였다.
- 에 의하여 Hitachi-747(Hitachi사, 일본)를 사용하여 흡광도 500 nm에서 측정하고 검량선에 준해 그 함량을 mg/dl로 표시하였다. Triglyceride 함량은 Saldesai 등의 효소법31)에 준하여 Hitachi-747(Hitachi사, 일본)를 사용하여 흡광도 550nm에서 측정하고 검량선에 준해 그 함량을 mg/dl로 표시하였다. HDL-cholesterol 함량은 Lopes 등의 효소법32)에 따라 Hitachi-747(Hitachi사, 일본)를 사용하여 흡광도 500 nm에서 측정하고 검량선에 준해 그 함량을 mg/dl로 표시하였다.
- Total cholesterol 함량은 Allain 등의 효소법에 의하여 시판 kit(아산제약 (주), 경기도 화성)를 사용하여 흡광도 500 nm에서 측정하고 검량선에 준해 그 함량을 mg/dl로 표시하였다. Triglyceride 함량은 Saldesai 등의 효소법에 준하여 시판 kit(아산제약 (주))를 사용하여 흡광도 550 nm에서 측정하고 검량선에 준해 그 함량을 mg/dl로 표시하였다. GOT 및 GPT 함량은 Reitman-Frankel 법에 따라 시판 kit(아산제약 (주))를 사용하여 흡광도 505 nm에서 측정하고 검량선에 준해 그 함량을 IU/L로 표시하였다.
- LDL-chloesterol 함량은 mainard 등의 효소법33)에 따라 Synchron CX-9 (Beckman사, 미국)를 사용하여 측정하였다. 동맥경화지수는 Haglund 등의 방법34)에 따라 [(total cholesterol)-(HDL-cholesterol)] / [HDL-cholesterol]의 공식에 의해 계산되었다. GOT 및 GPT 함량은 Reitman-Frankel 법35)에 따라 Hitachi-747(Hitachi사, 일본)를 사용하여 흡광도 505 nm에서 측정하고 검량선에 준해 그 함량을 IU/L로 표시하였다.
- 혈청 중 total cholesterol 함량은 Allain 등의 효소법30)에 의하여 Hitachi-747(Hitachi사, 일본)를 사용하여 흡광도 500 nm에서 측정하고 검량선에 준해 그 함량을 mg/dl로 표시하였다. Triglyceride 함량은 Saldesai 등의 효소법31)에 준하여 Hitachi-747(Hitachi사, 일본)를 사용하여 흡광도 550nm에서 측정하고 검량선에 준해 그 함량을 mg/dl로 표시하였다.
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