버섯은 예전부터 단백질, 당질, 비타민, 무기질 등 일반 영양소들이 다량 함유되어 있을 뿐 아니라 다양한 약리작용을 가지고 있기 때문에 예로부터 민식용 및 민간요법으로도 많이 이용되어 왔다(17). 또한 현재에는 건강식으로 다양하게 이용되고 있다. 본 연구는 여러 가지 버섯 중, 팽이버섯의 추출물을 이용하여 이의 항암 활성을 실시하였다. 팽이버섯(Flammulina velutipes)의 항암활성을 검증하기 위하여 in vitro 실험으로 wound healing 활성 실험을 하였으며, in vivo 실험으로 마우스를 이용한 항암모델 실험을 실시하였다. Wound healing 활성 실험 결과 팽이버섯 추출물의 농도를 0-100 ug/mL로 처리함에 따라 B16 세포의 운동성이 감소하는 것을 알 수 있었다. 이를 바탕으로 마우스를 이용하여 항암 모델에 적용한 결과 B16 세포로 인해 형성되는 colony가 팽이버섯 추출물을 처리한 군에서 약 60% 내외로 현저히 감소하는 것을 알 수 있었다. 본 실험 결과는 팽이버섯 추출물의 항암 활성을 확인 한 것으로 향후 이의 추출물을 이용한 세포신호전달과정 등에 관한 연구와 건강기능성식품의 소재로의 제품 개발에 유용하게 사용될 수 있음을 나타내는 주요한 자료로 판단된다.
버섯은 예전부터 단백질, 당질, 비타민, 무기질 등 일반 영양소들이 다량 함유되어 있을 뿐 아니라 다양한 약리작용을 가지고 있기 때문에 예로부터 민식용 및 민간요법으로도 많이 이용되어 왔다(17). 또한 현재에는 건강식으로 다양하게 이용되고 있다. 본 연구는 여러 가지 버섯 중, 팽이버섯의 추출물을 이용하여 이의 항암 활성을 실시하였다. 팽이버섯(Flammulina velutipes)의 항암활성을 검증하기 위하여 in vitro 실험으로 wound healing 활성 실험을 하였으며, in vivo 실험으로 마우스를 이용한 항암모델 실험을 실시하였다. Wound healing 활성 실험 결과 팽이버섯 추출물의 농도를 0-100 ug/mL로 처리함에 따라 B16 세포의 운동성이 감소하는 것을 알 수 있었다. 이를 바탕으로 마우스를 이용하여 항암 모델에 적용한 결과 B16 세포로 인해 형성되는 colony가 팽이버섯 추출물을 처리한 군에서 약 60% 내외로 현저히 감소하는 것을 알 수 있었다. 본 실험 결과는 팽이버섯 추출물의 항암 활성을 확인 한 것으로 향후 이의 추출물을 이용한 세포신호전달과정 등에 관한 연구와 건강기능성식품의 소재로의 제품 개발에 유용하게 사용될 수 있음을 나타내는 주요한 자료로 판단된다.
To evaluate the anti-tumor activity of Flammulina velutipes extract, we used an in vitro wound-healing assay, and an in vivo approach using a mouse melanoma model. Wound-healing activity in B16 cells was affected by the extract in a dose-dependent manner, indicating that the extract had anti-metasta...
To evaluate the anti-tumor activity of Flammulina velutipes extract, we used an in vitro wound-healing assay, and an in vivo approach using a mouse melanoma model. Wound-healing activity in B16 cells was affected by the extract in a dose-dependent manner, indicating that the extract had anti-metastatic activity. The extract also exhibited strong anti-tumor activity against lung cancer when B16 cells were injected into mouse veins together with B16 melanoma cells. The results indicatethat the Flammulina velutipes extract decreased B16 cancer cell growth by inhibition of cell migration both in vitro and in vivo.
To evaluate the anti-tumor activity of Flammulina velutipes extract, we used an in vitro wound-healing assay, and an in vivo approach using a mouse melanoma model. Wound-healing activity in B16 cells was affected by the extract in a dose-dependent manner, indicating that the extract had anti-metastatic activity. The extract also exhibited strong anti-tumor activity against lung cancer when B16 cells were injected into mouse veins together with B16 melanoma cells. The results indicatethat the Flammulina velutipes extract decreased B16 cancer cell growth by inhibition of cell migration both in vitro and in vivo.
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문제 정의
버섯은 예전부터 건강식으로 광범위하게 이용되코 있는 특용작물이다 최근 들어 버섯을 이용한 유용성분 분쳐 등 많은 연구가 이루어지고 있는데 (13), 본 연구는 팽이버섯의 물 추출물을 이용하여 항암효과의 여부를 확인해 보고자 하였다.
또한 현재에는 건강식으로 다양하게 이용되고 있다. 본 연구는 여러 가지 버섯 중, 팽이버섯의 추출물을 이용하여 이의 항암 활성을 실시하였다. 팽이버섯(Flamglina velutipes)^ 항암 활성을 검증하기 위하여 in vitro 실험으로 wound healing 활성 실험 흞 하였으며, in wvo 실험으로 '마우스를 이용한 항암 모델 실험을 실시하였다.
본 연구에서ft팽이버섯 추출물을 이용하여 항암효과를, 알아보기 위한 in vitro 실험으로 wound healing assay를 실시하였으며, in vivo 실험으로 마우스의 미정맥에 B16 세포를 주입하여 폐에 형성되는 cancer colony에 대한 조사를 하여 팽이버섯이 항암에 효과가 있는지를 먼저 확인하고자 하였다.
제안 방법
배양 배지를 교체한 다음, 팽이버섯 추출물을 농도별로 처리하여 20시간 배양하여 무처리군의 wound가 거의 사라질 때쯤에 10% formaldehyde solution을 처리하여 세포를 고정하였다. 광학현미경을 이용하여 wound의 저해 여부를 촬영하였으며, wound healing된 꺼리를 측정하여 팽이버섯에 의한 세포의 운동성 저해 활성 정도를 측정하였다 (10).
동물실험은 ICLAS(Intemational Council for Laboratory Animal Science)의 기준에 의거하여 경북대학교 실험동물윤리위원회의 가이드라인에 따라 진행하였다 (11). 팽이 버섯 추출물의 in vivo 항암 활성을 알아버기 위해 C57BL/6 마우스(5~6 주령, male)의 미정맥에 B16세포를 5x106 cells/head로 주사하였으며, 20일간 사육하여 마우스 폐를 절취하여 cancer colony를 확인하였다. 실험에 사용된 마우스는 무처리군, B16 세포처리군, B16 세포처리군에 팽이버섯 추출물 처리군으로 각각 5마리씩을 실험에 사용하였다.
팽이버섯 추출물에 의한 세포의 운동성 억제 효과를 확인하기 위해 wound healing assay를 실시하였다. 배양 중인 B16 세포를 6 well 배양 접시에 1x1/ cells/well로 처리한 다음 overnight하여 세포가 배양접시에 confluent 상태가 되는 시점에, yellow tip을 이용하여 woundfi 형성시켰다.
팽이버섯 추출물에 의한 세포의 운동성 저해 활성을 알아보치 위해 B16 세포를 이용하여 wound healing 활성 실험을 실시하였다. 실험 결과, 그림1에서 보는 바와 같이, 버섯 추출물의 농또에 의존적으로 wound healing 정도를 감소시 킴을 확인하였다.
실험에 사용된 마우스는 무처리군, B16 세포처리군, B16 세포처리군에 팽이버섯 추출물 처리군으로 각각 5마리씩을 실험에 사용하였다. 팽이버섯 추출물의 처리는 세포를 주입하기 하루 전, 세포주입 후 5일, 12일째 등 3회 처리하였으며, 각각 500 g의 팽이버섯 추출물을 500 uL의 비율로 복강주사하였다. 폐릁적출 후 사진 촬영과 함께 colony 수를 파악하였다 (12).
본 연구는 여러 가지 버섯 중, 팽이버섯의 추출물을 이용하여 이의 항암 활성을 실시하였다. 팽이버섯(Flamglina velutipes)^ 항암 활성을 검증하기 위하여 in vitro 실험으로 wound healing 활성 실험 흞 하였으며, in wvo 실험으로 '마우스를 이용한 항암 모델 실험을 실시하였다. Wound healing 활성 실험 결과 팽이버섯 추출물의 농도률 0-100 ug/mL로 처리함에 따라 B16 세포의 운동성이 감소하는 것을 알 수 있었다.
팽이버섯 추출물의 처리는 세포를 주입하기 하루 전, 세포주입 후 5일, 12일째 등 3회 처리하였으며, 각각 500 g의 팽이버섯 추출물을 500 uL의 비율로 복강주사하였다. 폐릁적출 후 사진 촬영과 함께 colony 수를 파악하였다 (12).
대상 데이터
마우스는 5~6주령 C57BL/6(Samtako Bio Korea, Osan, Korea)를 사용하였다. 12시간 주기로 light-dark cycle을 주었고 22±℃의 온도와 50±5%의 습도 아래에서 사육하였다.
본 실험에 사용된 팽이버섯은 전남 무안구 현 경면 평산리에서 생산되었으며, 실험을 위해 실험실로 가져온 후 arc diy oven에서 3일간 잘게 부수어 건조 과정을 거쳐 수분횰완전히 제거한 다음, 분말로 만들어 100mg/mL의 농도로 증류수(DW)에 상온에서 약 2시간 동안 교반과정을 거쳤으며, 이를 14, 000 rpm에 30분간 원심분리한 후, 상층 액을 실험에 사용하였다.
팽이 버섯 추출물의 in vivo 항암 활성을 알아버기 위해 C57BL/6 마우스(5~6 주령, male)의 미정맥에 B16세포를 5x106 cells/head로 주사하였으며, 20일간 사육하여 마우스 폐를 절취하여 cancer colony를 확인하였다. 실험에 사용된 마우스는 무처리군, B16 세포처리군, B16 세포처리군에 팽이버섯 추출물 처리군으로 각각 5마리씩을 실험에 사용하였다. 팽이버섯 추출물의 처리는 세포를 주입하기 하루 전, 세포주입 후 5일, 12일째 등 3회 처리하였으며, 각각 500 g의 팽이버섯 추출물을 500 uL의 비율로 복강주사하였다.
실험에 사용된 세포는 B16F1 (a mouse melanoma cell line, B16) 세포주로서, DMEM (Delbecco's modified eagle medium) 배지에 10% FBS가 첨가된 배지를 시용하였으며, 배양 초건은 37℃, 5% CO2 배양기를 이용하였다. 2~3일 간격으로 세포가 약 70-80% 정도 자랐을 때 반복적으로계대를 하였으며 20 passage를 넘지 않았다.
이론/모형
12시간 주기로 light-dark cycle을 주었고 22±℃의 온도와 50±5%의 습도 아래에서 사육하였다. 동물실험은 ICLAS(Intemational Council for Laboratory Animal Science)의 기준에 의거하여 경북대학교 실험동물윤리위원회의 가이드라인에 따라 진행하였다 (11). 팽이 버섯 추출물의 in vivo 항암 활성을 알아버기 위해 C57BL/6 마우스(5~6 주령, male)의 미정맥에 B16세포를 5x106 cells/head로 주사하였으며, 20일간 사육하여 마우스 폐를 절취하여 cancer colony를 확인하였다.
성능/효과
효과를 가지는 것으로 보고되었다 (4). B16 세포와 Ca-775 (adenocarcinoma) 세포를 처리한 마우스에 팽이버섯을 처리한 결과 마우스의 생존율이 80% 이상 증가한것올 알 수 있었는데 (16), 이는 본 실험 결과와 유사한 결과로서, 추출물을 처리하는 조건에 따라서 억제 활성이 상이함을 알 수 있다. 또한, 이 버섯은 다양한 활성을 가지고 있는데 breast cancer cell (MCF-7, MDA-MB-231)과 colon cancer cell (HT-29, HTC-116)의 증식을 억제하는데, 이는 세포주기의 G0/G1 사이클을 억제하여 이와 같은 현상이 나타나는 겴으로 알려져 있다(8).
팽이버섯(Flamglina velutipes)^ 항암 활성을 검증하기 위하여 in vitro 실험으로 wound healing 활성 실험 흞 하였으며, in wvo 실험으로 '마우스를 이용한 항암 모델 실험을 실시하였다. Wound healing 활성 실험 결과 팽이버섯 추출물의 농도률 0-100 ug/mL로 처리함에 따라 B16 세포의 운동성이 감소하는 것을 알 수 있었다.이를 바탕으로, 마우스를 이용하여 항암 모델에 적용한 결과 B16 세포로 인해 형성되는 colony가 팽이버섯 추출물을 처리한 군에서 약 60% 내외로 현저히 감소하는 것을 알 수 있었다.
실험 결과, 그림1에서 보는 바와 같이, 버섯 추출물의 농또에 의존적으로 wound healing 정도를 감소시 킴을 확인하였다. 무처리군의 wound가 약 10% 정도 남아있을 때, 팽이버섯 추출물 10 ug/mL< 처리한 경우에 약 25% 전후반의 억제 활성을 나타내었으며, 100 ug/mL을 처리한 경우에 약 50%, 1000 ug/mL을 처리한 경우는 약 70%의 억제 활성이 있는 졧으로 나타났다.
나타났다(15).본 연구에서는 팽이버섯 추출물이 세포의 운동성을 억제하는 것으로 나타났는데, 이는 여러 가지 버섯의 추출물이 세포의 운동성을 억제하는 물질을 포함하고 있는 것으로 사료된다.
실험 결과, 그림1에서 보는 바와 같이, 버섯 추출물의 농또에 의존적으로 wound healing 정도를 감소시 킴을 확인하였다. 무처리군의 wound가 약 10% 정도 남아있을 때, 팽이버섯 추출물 10 ug/mL< 처리한 경우에 약 25% 전후반의 억제 활성을 나타내었으며, 100 ug/mL을 처리한 경우에 약 50%, 1000 ug/mL을 처리한 경우는 약 70%의 억제 활성이 있는 졧으로 나타났다.
Wound healing 활성 실험 결과 팽이버섯 추출물의 농도률 0-100 ug/mL로 처리함에 따라 B16 세포의 운동성이 감소하는 것을 알 수 있었다.이를 바탕으로, 마우스를 이용하여 항암 모델에 적용한 결과 B16 세포로 인해 형성되는 colony가 팽이버섯 추출물을 처리한 군에서 약 60% 내외로 현저히 감소하는 것을 알 수 있었다.본 실험 결과는 팽이버섯 추출물의 항암 활성을 확인한 걼으로 향후 이의 추출물욜 이용한 세포신호전달 과정 등에 관한 연구와 건강 기능성 식품의 소재로 의 제품 개발에 유용하게 사용될 수 있음을 나타내는 주요한 자료로 판단된다.
팽이버섯 추출물을 이용하여 B16 흑색종을 마우스 미정 맥에 주입하여 폐에 선택적으로 전이되 븐 colony의 억제 정도를 비교하는 登델(그림2)에서 항암 활성 효과를 검증하였다 실험 결과, B16 세포만 처리한 군에서는 약 200개 이상의 colony가 출현하였으며 이의 경우에는 약 14일 경에 복수가 많이 차고 심지어는 마우스가 사망하는 예가 나타나기 시작하였다(자료 미제출).이에 비하여 팽이버 섰 추출물을 처리한 실험군에서 cancer colony의 수가 현저하게 감소되는것을 페의 해부를 통하여 확인할 수 있었다(그림3A).
후속연구
결론적으로, 팽이버섯 추출물이 마우스 내의 전이된 폐암 형성을 억제하는 활성이 있으며, 앞서 wound healing 활성 결과 암세ㅠㅗ의 확장 또한 억제하는 것으로 판단되며 암세포의 성장과 운동성에 관련이 있는 다양한 분자표적, 예를 들면 CD44, uPAR, MMPs, VCAM, ICAM, chemokines 등의 발현에 어떻게 기능을 하는지에 대한 연구와 면역증강에 작용하는 기전의 연구에 중점을 두고 연구를 진행하고 있다.
이를 바탕으로, 마우스를 이용하여 항암 모델에 적용한 결과 B16 세포로 인해 형성되는 colony가 팽이버섯 추출물을 처리한 군에서 약 60% 내외로 현저히 감소하는 것을 알 수 있었다.본 실험 결과는 팽이버섯 추출물의 항암 활성을 확인한 걼으로 향후 이의 추출물욜 이용한 세포신호전달 과정 등에 관한 연구와 건강 기능성 식품의 소재로 의 제품 개발에 유용하게 사용될 수 있음을 나타내는 주요한 자료로 판단된다.
참고문헌 (17)
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