Streptococcus mutans는 구강 내에 상존하는 치아우식증의 주요 원인균으로서 치면의 피막에 부착 후 glucan을 형성하여 세균의 군락을 이루며, 외부로부터 공급된 자당대사를 통하여 유기산을 생성함으로써 법랑질을 탈회시킨다. 치아우식 활성도의 평가를 위한 단클론항체를 이용한 방법은 진료실에서 빠른 시간 내에 간편하게 타액에 존재하는 Streptococcus mutans의 정량분석이 가능한 방법이다. 이 연구는 3세에서 6세 사이의 어린이 15명을 대상으로 자극성 타액을 채취하여 시판 중인 단클론항체를 이용한 Salivacheck$^{TM}$ Mutans, strip을 이용한 Dentocult$^{(R)}$-SM 그리고 MSB배지 배양법으로서 타액 내 Streptococcus mutans를 측정한 후 그 값을 우식경험치아수와 비교하여 상관관계를 알아보았다. Saliva-check$^{TM}$ Mutans를 이용한 방법은 Dentocult$^{(R)}$-SM과 MSB배지법과 통계학적으로 유의한 상관관계를 보였으나(p<0.05), MSB배지법은 어린이의 우식경험치아수와 통계학적으로 유의한 결과를 나타내지 않았다(p=0.34).
Streptococcus mutans는 구강 내에 상존하는 치아우식증의 주요 원인균으로서 치면의 피막에 부착 후 glucan을 형성하여 세균의 군락을 이루며, 외부로부터 공급된 자당대사를 통하여 유기산을 생성함으로써 법랑질을 탈회시킨다. 치아우식 활성도의 평가를 위한 단클론항체를 이용한 방법은 진료실에서 빠른 시간 내에 간편하게 타액에 존재하는 Streptococcus mutans의 정량분석이 가능한 방법이다. 이 연구는 3세에서 6세 사이의 어린이 15명을 대상으로 자극성 타액을 채취하여 시판 중인 단클론항체를 이용한 Salivacheck$^{TM}$ Mutans, strip을 이용한 Dentocult$^{(R)}$-SM 그리고 MSB배지 배양법으로서 타액 내 Streptococcus mutans를 측정한 후 그 값을 우식경험치아수와 비교하여 상관관계를 알아보았다. Saliva-check$^{TM}$ Mutans를 이용한 방법은 Dentocult$^{(R)}$-SM과 MSB배지법과 통계학적으로 유의한 상관관계를 보였으나(p<0.05), MSB배지법은 어린이의 우식경험치아수와 통계학적으로 유의한 결과를 나타내지 않았다(p=0.34).
Streptococcus mutans, one of the major causal agents of dental caries, is component of the dental plaque. It produces various organic acids such as lactic acid which is the end-product of glycolysis, and this leads to dental caries. A new system using species-specific monoclonal antibodies was devel...
Streptococcus mutans, one of the major causal agents of dental caries, is component of the dental plaque. It produces various organic acids such as lactic acid which is the end-product of glycolysis, and this leads to dental caries. A new system using species-specific monoclonal antibodies was developed to detect Streptococcus mutans in saliva. The system quickly detects salivary Streptococcus mutans in 30min and classifies the result into two levels. The purpose of this study was to investigate correlation between monoclonal antibody-based detecting system and selective medium-based detecting methods. Children's deft indices were also compared with Streptococcus mutans counts in MSB agar plate. Subjects consisted of 15 children in the age of 3 to 6 years. They were assigned to three groups : Group I(deft index = 3), Group II(deft index $\leqq$3), Group III(deft index $\geqq$4). The results are as follows : 1. The rate of children with positive response was 13.3% and with negative response was 86.7% in the result of Saliva-checkTM Mutans test kit. 2. There was a positive correlation between monoclonal antibody-based detecting system and selective medium-based detecting methods(p<0.05). 3. Streptococcus mutans counts in MSB agar plate were irrelevant to deft of children(p=0.34).
Streptococcus mutans, one of the major causal agents of dental caries, is component of the dental plaque. It produces various organic acids such as lactic acid which is the end-product of glycolysis, and this leads to dental caries. A new system using species-specific monoclonal antibodies was developed to detect Streptococcus mutans in saliva. The system quickly detects salivary Streptococcus mutans in 30min and classifies the result into two levels. The purpose of this study was to investigate correlation between monoclonal antibody-based detecting system and selective medium-based detecting methods. Children's deft indices were also compared with Streptococcus mutans counts in MSB agar plate. Subjects consisted of 15 children in the age of 3 to 6 years. They were assigned to three groups : Group I(deft index = 3), Group II(deft index $\leqq$3), Group III(deft index $\geqq$4). The results are as follows : 1. The rate of children with positive response was 13.3% and with negative response was 86.7% in the result of Saliva-checkTM Mutans test kit. 2. There was a positive correlation between monoclonal antibody-based detecting system and selective medium-based detecting methods(p<0.05). 3. Streptococcus mutans counts in MSB agar plate were irrelevant to deft of children(p=0.34).
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문제 정의
하지만 이러한 방법들은 전문 장비나 인력을 필요로 하며, 시간과 노력도 많이 든다는 단점을 가지고 있다. 그러므로 이러한 검사 방법들의 단점을 보완하며, 보다 간편하고 정확하게 이용할 수 있는 검사 방법을 필요로 하게 되었다.
이 연구는 S. mutans의 검출 시 새롭게 개발된 단클론항체를 이용한 Saliva-checkTM Mutans(GC, Tokyo, Japan)와 기존의 방법인 Dentocult®-SM(Orion diagnostica, Espoo, Finland), MSB배지법을 서로 비교하고, 우식경험치아수와 타액 내 S. mutans 수준 사이의 관계에 대해서 연구하고자 한다.
이 연구에서는 S. mutans를 검출하기 위해 새롭게 소개된 Saliva-checkTM Mutans를 기존의 방법인 Dentocult®-SM, MSB배지법과 서로 비교하여 보고, 우식경험치아수와 타액 내 S. mutans 수준 사이의 관계를 평가하기 위해 소아환자(3~6세) 15명을 대상으로 자극성 타액을 채취 연구하여 다음의 결과를 얻었다.
제안 방법
각각의 타액은 Saliva-checkTM Mutans, Dentocult®-SM, MSB배지를 이용하여 비교 평가하였다.
단클론항체를 이용하는 Saliva-checkTM Mutans와 기존에 널리 사용되어 온 Dentocult®-SM을 MSB배지법과 비교해 보았다.
대상 아동들은 우식경험치아수가 “0”인 대조군과 “3”이하인 저위험군 그리고 “4”이상인 고위험군으로 나누어 각각 A, B, C 군으로 분류 하였으며, 우식경험치아수의 평균과 표준편차는 다음과 같이 나타났다(Table 2).
치과의사 1인이 치아우식증에 대한 구강검사를 시행하였고, 백색반점 또는 백묵양 반점 등의 초기 치아우식증을 갖고 있는 치아는 건전치아로 판명하였다. 선정된 15명 어린이들의 구강검사 후 우식경험치아수를 기록하고 자극성 타액을 채취하였다. 자극성 타액의 채취 시 paraffin wax를 씹으며 생긴 처음 1분의 타액은 버리거나 삼키도록 지시 했으며, 그 이후에 분비된 약 2~3 ml의 타액을 플라스틱 튜브에 채취하였다.
약 15분 후 키트 내의 screening strip을 타액이 담긴 플라스크에 담구어 타액을 적용한 후 과잉의 타액은 제거 하고 시험관에 옮겨 뚜껑을 느슨하게 잠근다. 시험관을 37℃ 항온 배양기에 48시간 배양 한 후 판정은 제작 회사의 판정표를 참고하여 각각의 시료들을 0, 1, 2, 3의 레벨로 나눈다(Table 1).
치과의사 1인이 치아우식증에 대한 구강검사를 시행하였고, 백색반점 또는 백묵양 반점 등의 초기 치아우식증을 갖고 있는 치아는 건전치아로 판명하였다. 선정된 15명 어린이들의 구강검사 후 우식경험치아수를 기록하고 자극성 타액을 채취하였다.
대상 데이터
이 연구는 2009년 8월에 전북대학교 치과병원 소아치과에 내원한 만 3~6세의 어린이들을 우식경험치아수에 따라 대조군 (deft = 0)과 저위험군(deft ≦ 3) 그리고 고위험군(deft ≧ 4)으로 분류하였으며, 군별로 5명의 어린이를 선정하여 총 15명의 어린이를 대상으로 하였다.
mutans는 유치가 맹출하기 전에는 구강 내에서 잘 발견되지 않지만, 유치가 맹출하는 시기인 생후 8개월에서 3세 이후부터는 구강 내에서 관찰가능하다는 보고가 있으며9), 또한 우식 경험 유치지수와 향후 영구치 우식 경험지수의 증가와는 유의한 상관관계가 있다는 보고도 있다10,11). 이 연구에서도 3~6세의 유치열기 아동을 대상으로 하였는데, 이는 향후 영구치의 초기 우식을 예측하는 데에도 큰 의미가 있다.
데이터처리
대상 아동들의 군에 따른 MSB배지의 S. mutans 수를 one-way ANOVA로 평가해본 결과 F=1.18이며, p=0.34(p>0.05)로 통계학적으로 유의한 차이를 보이지 않았다(Table 8).
대상 아동들의 우식경험치아수와 Saliva-checkTM Mutans, Dentocult®-SM, MSB배지 사이의 상관관계를 SPSS 16.0 프로그램을 이용하여 분석하였다.
성능/효과
1. Saliva-checkTM Mutans를 이용한 검사 결과 양성을 나타낸 아동은 15명 중 2명으로 13.3%이었고, 음성을 나타낸 아동은 13명으로 86.7%이었다.
2. Saliva-checkTM Mutans를 이용한 방법은 Dentocult®- SM, MSB배지를 이용한 방법과 타액 내 S. mutans 수준에서 통계학적으로 유의한 결과를 보였다(p<0.05).
3. MSB배지를 이용한 S. mutans의 CFU/ml 값은 대상 어린이의 우식경험치아수와 통계학적으로 유의한 결과를 나타내지 않았다(p=0.34).
Dentocult®-SM 레벨간의 사후검증 결과 레벨 1과 레벨 3, 레벨 2와 레벨 3 사이에 유의한 차이(p<0.05)를 발견할 수 있었다(Table 6).
Dentocult®-SM을 이용한 실험에서도 비슷한 결과가 나왔는데, Dentocult®-SM의 레벨 1을 제외하고는 모두 제조자가 지시한 값보다 적은 수의 S. mutans가 검출되었다.
Dentocult®-SM의 레벨에 따른 MSB배지의 S. mutans 수를 one-way ANOVA로 평가해본 결과 F=7.40이며, p=0.01(p<0.05)로 통계학적으로 유의한 차이를 보였다(Table 5).
Saliva-checkTM Mutans로 검사한 대상의 평균을 내보았을 때, 음성군은 개체 수가 13이며, 3.11×104 ± 7.07×102 CFU/ml의 평균과 표준편차를 나타내었고, 양성군은 개체 수가 2이며, 9.46×103 ± 7.68×103 CFU/ml의 평균과 표준편차를 나타내었다.
Saliva-checkTM Mutans에 의한 결과를 Dentocult®-SM과 MSB배지법에 의한 결과와 비교했을 때 통계학적으로 유의한 상관관계를 나타내었다.
Saliva-checkTM Mutans의 음성과 양성에 따른 MSB배지의 S. mutans 수를 T-test로 평가해본 결과 t=-9.89이며, p=0.00(p<0.05)으로 통계학적으로 유의한 차이를 보였다(Table 4).
마지막으로 Spearman 상관계수를 이용하여 Saliva-checkTM Mutans, Dentocult®-SM, MSB배지를 이용한 방법, 그리고 우식경험치아수에 따른 대상 아동들의 군 사이의 상관관계를 알아보았는데, 이 결과에서도 Saliva-checkTM Mutans 를 이용한 방법은 Dentocult®-SM 그리고 MSB배지법과 유의한 상관관계(p<0.05)를 나타내었으며, 특히 Dentocult®-SM과 매우 높은 상관관계를 나타내었다(p<0.01).
우식경험치아수에 따라 나누어진 대상아동의 군과 MSB배지를 이용하여 S. mutans 수준을 측정한 결과를 비교한 통계에서 P=0.34로 통계학적으로 유의한 결과를 얻을 수 없었다. 이러한 결과는 S.
특히 Saliva-checkTM Mutans와 Dentocult®-SM사이에는 매우 높은 상관관계를 나타내었다(p>0.01).
후속연구
또한 새롭게 개발된 단클론항체를 이용한 우식활성 검사 장비는 아직까지 그 적용의 한계가 있지만, 추후 지속적인 단점의 보완으로 그 사용의 가능성이 높을 것으로 생각된다. 더불어 단클론항체를 이용한 우식활성 검사에 있어서 더 많은 대상과 실험 변수들의 조정을 통해 보다 정확하고 발전적인 연구가 필요하리라 생각된다.
mutans의 수와 우식경험치아수의 비교는 쉽지 않다. 또한 새롭게 개발된 단클론항체를 이용한 우식활성 검사 장비는 아직까지 그 적용의 한계가 있지만, 추후 지속적인 단점의 보완으로 그 사용의 가능성이 높을 것으로 생각된다. 더불어 단클론항체를 이용한 우식활성 검사에 있어서 더 많은 대상과 실험 변수들의 조정을 통해 보다 정확하고 발전적인 연구가 필요하리라 생각된다.
이러한 결과는 단클론항체를 이용한 방법인 Saliva-checkTM Mutans가 기존의 방법들인 Dentocult®-SM, MSB배지를 이용한 배양 방법과 유사한 결과를 도출해 냄을 의미하며, Saliva-checkTM Mutans의 특성 및 장단점을 잘 파악한다면, 상황에 따라서는 S. mutans의 검출에 있어서 기존 방법들의 대체 장비로 사용될 수도 있을 것으로 생각된다.
이상의 결과를 종합해 볼 때 새로 개발된 장비인 Saliva-checkTM Mutans는 사용하기 간편하고, 시간과 장소의 제약을 받지 않는다는 등 많은 장점이 있지만, 아직까지 임상에 적용함에 있어 비용 및 결과의 세분화 문제 등 적용의 한계가 있는 것으로 생각된다.
mutans의 수만을 비교한 것은 실험의 목표 달성에 있어 한계점이 되었던 것 같다. 정확한 실험을 위해서는 S. mutans와 치아우식증 사이의 관계 파악에 있어서, 치아우식증에 영향을 미치는 다른 요소들이 차단된 상태에서 실험이 이루어져야 한다고 생각된다. 또한 S.
이 실험에서도 치아우식증이 다원적 질환이기 때문에 칫솔질, 타액의 점도, 타액의 산도와 같은 요인들에 대한 고려가 필요했다. 하지만, 그에 대한 고려 없이 우식경험치아수와 S. mutans의 수만을 비교한 것은 실험의 목표 달성에 있어 한계점이 되었던 것 같다. 정확한 실험을 위해서는 S.
. 하지만, 이 실험에서는 개체 수가 적어 결과의 신뢰도가 낮았으며, 더 많은 개체수를 통한 평가가 필요하리라고 생각된다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
치아우식증이란 무엇인가?
치주질환과 함께 구강 내에서 빈번하게 발생하는 양대 구강병의 하나인 치아우식증은 치면 세균막에 축적되어진 산에 의해 치질이 탈회됨으로써 치아조직의 결손을 초래하는 세균성 치아 경조직 질환이다. 특히, Streptococcus mutans(S.
Streptococcus mutans란 무엇인가?
Streptococcus mutans는 구강 내에 상존하는 치아우식증의 주요 원인균으로서 치면의 피막에 부착 후 glucan을 형성하여 세균의 군락을 이루며, 외부로부터 공급된 자당대사를 통하여 유기산을 생성함으로써 법랑질을 탈회시킨다. 치아우식 활성도의 평가를 위한 단클론항체를 이용한 방법은 진료실에서 빠른 시간 내에 간편하게 타액에 존재하는 Streptococcus mutans의 정량분석이 가능한 방법이다.
S. mutans를 선택적으로 분리하기 위한 방법들의 단점은 무엇인가?
mutans를 선택적으로 분리하기 위한 방법으로 mitis salivarius agar에 bacitracin을 첨가한 MSB(mitis salivarius sucrose-bacitracin) 배지를 이용한 방법4), 단클론항체를 이용하는 방법5), DNA probe법6), 그리고 종 특이 primer를 이용한 중합효소연쇄반응(PCR) 등이 개발되어 사용되어 왔다7). 하지만 이러한 방법들은 전문 장비나 인력을 필요로 하며, 시간과 노력도 많이 든다는 단점을 가지고 있다. 그러므로 이러한 검사 방법들의 단점을 보완하며, 보다 간편하고 정확하게 이용할 수 있는 검사 방법을 필요로 하게 되었다.
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