[논문]Nested PCR법을 이용한 Cat Scratch Disease의 원인체인 Bartonella Henselae와 Bartonella Clarridgeiae균의 동물병원 수의사의 감염 실태조사

최은화; 이종화; 윤화영

Nested PCR법을 이용한 Cat Scratch Disease의 원인체인 Bartonella Henselae와 Bartonella Clarridgeiae균의 동물병원 수의사의 감염 실태조사
Prevalence of Bartonella Henselae and Bartonella Clarridgeiae in Veterinarian Working at the Veterinary Teaching Hospital (by nested PCR) 원문보기

Journal of veterinary clinics = 한국임상수의학회지, v.27 no.4 = no.75, 2010년, pp.374 - 377

최은화 (삼성생명과학연구소 실험동물연구센터) , 이종화 (서울대학교 수의과대학 인수공통질병연구소, 내과학교실) , 윤화영 (서울대학교 수의과대학 인수공통질병연구소, 내과학교실)

Abstract ▼ AI-Helper

Cat scratch disease is a zoonotic disease usually caused by the gram-negative bacterium Bartonella henselae. It is transmitted commonly by scratch or bite from cats or kitten. Cat scratch disease typically affects children and young adults, who develop regional lymphadenopathy. In contrast, in immunocompromised hosts, bacteremia may occur, bacillary angiomatosis and bacillary peliosis hepatitis or splenitis are the most common manifestations. Bartonella henselae was detected in three of thirty veterinarians and Bartonella clarridgeiae was detected in one of thirty veterinarians by a novel nested polymerase chain reaction. Cat scratch disease will not be neglected, and it needs continuous studies as well as observation and prevention of this disease.

주제어

AI 본문요약
AI-Helper

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문제 정의

이렇듯 야생 고양이뿐 만 아니라, 애완 고양이 및 애완견에서도 높은 양성률을 보여, 이 질병에 대한 관심과 예방 대책이 필요하다. 이 연구에서는 진료 시 애완 고양이 및 애완견과의 접촉이 빈번하게 이루어지는 수의사들을 대상으로 nested PCR 기법을 이용하여, Bartonella henselae 및 또 하나의 CSD 원인체로 지목되고 있는 Bartonella clarridgeiae의 감염률을 조사하여 그 감염실태를 파악하고자 하였다.

제안 방법

1차 PCR에서 DNA 1 µl 를 0.2 mM dNTP, 3 mM MgCl2 reaction buffer, Taq polymerase 0.5 U, 각 primer 0.5 pmoles/µl 를 혼합하였고, nested PCR에서는 1차 PCR 산물 1 µl를 0.2 mM dNTP, 1.5 mM MgCl2 reaction buffer, Taq polymerase 0.5 U, 각 primer 0.5pmoles/µl 를 멸균 증류수로 총량이 25 µl가 되도록 하였다.
기존의 단일 PCR 분석이 민감도가 낮은 것을 고려하여 nested PCR 분석법을 이용하였으며(13), 오염에 의한 위 양성을 막기 위해 1차, nested PCR 및 전기영동의 과정을 분리된 공간에서 실시하였으며, 매 과정 전 상용화된 DNAase 제재를 이용하여 모든 실험기자재의 소독을 실시하면서 진행하였다.
5pmoles/µl 를 멸균 증류수로 총량이 25 µl가 되도록 하였다. 이후 검체는 personal thermocycler를 이용해 1차 PCR에서 94℃에서 5분간 1회 반응시킨 후 94℃ 15초, 48.2℃ 30초, 72℃ 30초 순서로 40회 반복 후 최종적으로 72℃에서 7분간 반응 시켰으며, nested PCR에서 94℃에서 5분간 1회 반응시킨 후 94℃ 15초, 56℃ 30초, 72℃ 30초 순서로 40회 반복 후 최종적으로 72℃에서 7분간 반응 시켰다(13). 전기영동은 2% agarose gel을 ethidium bromide로 염색 후 ultra violet light로 확인하여 1차 및 nested PCR 과정에서 각각 Bartonella heselae에서 186 bp, 152 bp 그리고 Bartonellar clarridgeiae에서 168 bp, 134 bp 위치에 양성 band가 존재하는지를 확인하였다.
2℃ 30초, 72℃ 30초 순서로 40회 반복 후 최종적으로 72℃에서 7분간 반응 시켰으며, nested PCR에서 94℃에서 5분간 1회 반응시킨 후 94℃ 15초, 56℃ 30초, 72℃ 30초 순서로 40회 반복 후 최종적으로 72℃에서 7분간 반응 시켰다(13). 전기영동은 2% agarose gel을 ethidium bromide로 염색 후 ultra violet light로 확인하여 1차 및 nested PCR 과정에서 각각 Bartonella heselae에서 186 bp, 152 bp 그리고 Bartonellar clarridgeiae에서 168 bp, 134 bp 위치에 양성 band가 존재하는지를 확인하였다.
Primer design (Table 1)과 PCR조건 등의 nested PCR 분석법은 Rampersad 등이 2005년도에 발표한 논문의 방법을 따랐다(13). 즉, 1차 PCR primer로 P-phenfa와 P-benr1를 nested PCR primer로 N-bhenf1a와 N-bhenr을 이용해 다음과 같은 온도와 시간으로 실시하였다. 1차 PCR에서 DNA 1 µl 를 0.
채취된 sample로부터의 DNA 분리는 상용화된 kit (G-spin Genomic DNA Extraction kit, Intron biotechnology)를 사용하였다.

대상 데이터

서울대학교 수의과대학 부속 동물병원에서 동물과 빈번한 접촉이 있는 진료에 참여하는 수의사 30명의 혈액, 침 그리고 손톱의 시료를 채취하였다.

이론/모형

Primer design (Table 1)과 PCR조건 등의 nested PCR 분석법은 Rampersad 등이 2005년도에 발표한 논문의 방법을 따랐다(13). 즉, 1차 PCR primer로 P-phenfa와 P-benr1를 nested PCR primer로 N-bhenf1a와 N-bhenr을 이용해 다음과 같은 온도와 시간으로 실시하였다.

성능/효과

인수공통 질환인 CSD의 Bartonella henselae균 감염 실태 조사 결과는 Table 2, 3과 같다. Bartonella 1차 PCR 기법에서 혈액, 침 그리고 손톱에서 모두 음성이었으며, nested PCR 기법을 통하여, 혈액으로부터의 샘플에서 Bartonella henselae 균은 152bp위치에서, Bartonella charridgeiae균은 134bp위치에서 양성을 확인하였다(Fig 1). 침과 손톱 시료에서는 어떠한 균도 검출되지 않았다.
근래 가속화되고 있는 핵가족화와 더불어 애완동물에 대한 관심 증가에 힘입어 반려동물과 함께 생활하는 가정이 지속적으로 증가하는 현실에서 반려동물 유래의 인수공통 전염병의 연구 필요성이 공중 보건학적 측면에서 제기 되어 지고 있다. 얼마 전에 보고된 CSD의 원인체인 Bartonella henselae 균의 국내 고양이 및 개의 감염실태 조사에서 많은 수의 동물이 nested PCR법에서 양성을 보였으며(9), 이번 연구를 통해 실시한, nested PCR 기법을 이용한 수의사 감염실태조사에서 30명 중 3명이 Bartonella henselae 양성을, 1명이 Bartonella charridigeae 양성을 보였다. 이들은 진료시에 고양이나 개에게 할큄을 당한 적이 있었으며, 미열과 림프절 종대의 증상을 경험하기도 했다.

후속연구

또한 Bartonella spp.가 고양이 벼룩 (Ctenocephalides felis)을 통해 전파되므로(3), 이러한 벼룩을 관리하는 것이 이의 전파를 막는 근본적인 예방책이 될 수 있을 것이다. Insect growth regulators나 insect development inhibitors등은 곤충에게만 있는 수용체에 작용하므로 포유류에는 안전하므로 이를 이용한 장기간의 벼룩 관리나 애완동물 주거환경에 대한 청결에 대한 안내와 보호자 교육이 필요하다고 생각한다.
더 나아가 반려동물과의 관계를 통해 인간에게 발생할 수 있는 인수공통 질병을 선정하고 이들의 감염실태 기초 역학 조사 연구를 시작으로 감염경로에 대한 추적조사 및 예방방법과 진단법을 확립해 나가는 연구를 진행해 질병예방환경을 조성하고, 반려동물을 기르는 보호자 및 이들과의 접촉이 빈번한 수의사에 대한 공중보건학적 주의사항에 대한 지표를 확립해 주는 연구들이 계속되어야 하겠다.
6%에서 나타났다. 이렇듯 야생 고양이뿐 만 아니라, 애완 고양이 및 애완견에서도 높은 양성률을 보여, 이 질병에 대한 관심과 예방 대책이 필요하다. 이 연구에서는 진료 시 애완 고양이 및 애완견과의 접촉이 빈번하게 이루어지는 수의사들을 대상으로 nested PCR 기법을 이용하여, Bartonella henselae 및 또 하나의 CSD 원인체로 지목되고 있는 Bartonella clarridgeiae의 감염률을 조사하여 그 감염실태를 파악하고자 하였다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	Cat scratch disease는 우리나라 말로 무엇이라고 명명되는가?	Cat scratch disease (CSD)는 우리나라 말로 묘소병(猫搔病), 고양이 긁힘병, 고양이 할큄병이라고 명명된다. 이 질환은 인수공통전염병이며, 그람 음성 간상균인 Bartonella henselae에 의해서 발생된다(6,7).
	Cat scratch disease 은 어떻게 발생하는가?	Cat scratch disease (CSD)는 우리나라 말로 묘소병(猫搔病), 고양이 긁힘병, 고양이 할큄병이라고 명명된다. 이 질환은 인수공통전염병이며, 그람 음성 간상균인 Bartonella henselae에 의해서 발생된다(6,7). 잠복기가 대개 3-12일 정도로 급성 경과를 취하며 고양이와 접촉한 아이들과 젊은이에게서 가장 흔하게 발생한다(5).
	고양이 긁힘병은 어떤 병인가?	고양이 긁힘병(Cat scratch disease)은 그람 음성 간상균인 Bartonella henselae에 의해서 발생되는 인수공통전염병이다. 고양이에게 물리거나 할퀴어서 전파되며, 주로 어린이나 어린 성인에 많이 발생하며, 국소 림프절병증을 일으킨다.

참고문헌 (18)

Anderson BE, Neuman MA. Bartonella spp. as emerging human pathogens. Clin Microbiol Rev 1997; 10: 203-219.

상세보기
Bass JW, Vincent JM, Person DA. The expanding spectrum of Bartonella infections: II. Cat-scratch disease. Pediatr Infect Dis J 1997; 16: 163-179.

상세보기
Chang CC, Lee CC, Maruyama S, Lin JW, Pan MJ. Catscratch disease in veterinary-associated populations and in its cat reservoir in Taiwan. Vet Res 2006; 37: 565-577.

상세보기
Chomel BB, Abbott RC, Kasten RW, Floyd-Hawkins KA, Kass PH, Glaser CA, Pedersen NC, Koehler JE. Bartonella henselae prevalence in domestic cats in California: risk factors and association between bacteremia and antibody titers. J Clin Microbiol 1995; 33: 2445-2450.

상세보기
Chung JY, Han TH, Kim BE, Kim CK, Kim SW, Hwang ES. Human metapneumovirus infection in hospitalized children with acute respiratory disease in Korea. J Korean Med Sci 2006; 21: 838-842.

상세보기
Guptill L, Slater L, Wu CC, Glickman LT, Lin TL, Welch DF, Crippen JT, HogenEsch H. Immune response of neonatal specific pathogen-free cats to experimental infection with Bartonella henselae. Vet Immunol Immunopathol 1999; 71: 233-243.

상세보기
Kabeya H, Sase M, Yamashita M, Maruyama S. Predominant T helper 2 immune responses against Bartonella henselae in naturally infected cats. Microbiol Immunol 2006; 50: 171-178.

상세보기
Keret D, Giladi M, Kletter Y, Wientroub S. Cat-scratch disease osteomyelitis from a dog scratch. J Bone Joint Surg Br 1998; 80: 766-767.

상세보기
Kim YS, Seo KW, Lee JH, Choi EW, Lee HW, Hwang CY, Shin NS, Youn HJ, Youn HY. Prevalence of Bartonella henselae and Bartonella clarridgeiae in Cats and Dogs in Korea. J Vet Sci 2009; 10: 85-87.

상세보기
Koehler JE, Glaser CA, Tappero JW. Rochalimaea henselae infection. A new zoonosis with the domestic cat as reservoir. JAMA 1994; 271: 531-535.

상세보기
Kordick DL, Papich MG, Breitschwerdt EB. Efficacy of enrofloxacin or doxycycline for treatment of Bartonella henselae or Bartonella clarridgeiae infection in cats. Antimicrob Agents Chemother 1997; 41: 2448-2455.

상세보기
Kunz S, Oberle K, Sander A, Bogdan C, Schleicher U. Lymphadenopathy in a novel mouse model of Bartonella-induced cat scratch disease results from lymphocyte immigration and proliferation and is regulated by interferon-alpha/beta. Am J Pathol 2008; 172: 1005-1018.

상세보기
Rampersad JN, Watkins JD, Samlal MS, Deonanan R, Ramsubeik S, Ammons DR. A nested-PCR with an Internal Amplification Control for the detection and differentiation of Bartonella henselae and B. clarridgeiae: an examination of cats in Trinidad. BMC Infect Dis 2005; 5: 63.

상세보기
Resto-Ruiz S, Burgess A, Anderson BE. The role of the host immune response in pathogenesis of Bartonella henselae. DNA Cell Biol 2003; 22: 431-440.

상세보기
Sander A, Zagrosek A, Bredt W, Schiltz E, Piemont Y, Lanz C, Dehio C. Characterization of Bartonella clarridgeiae flagellin (FlaA) and detection of antiflagellin antibodies in patients with lymphadenopathy. J Clin Microbiol 2000; 38: 2943-2948.

상세보기
Slater LN, Welch DF, Min KW. Rochalimaea henselae causes bacillary angiomatosis and peliosis hepatis. Arch Intern Med 1992; 152: 602-606.

상세보기
Tsuneoka H, Umeda A, Tsukahara M, Sasaki K. Evaluation of indirect fluorescence antibody assay for detection of Bartonella clarridgeiae and Seroprevalence of B. clarridgeiae among patients with suspected cat scratch disease. J Clin Microbiol 2004; 42: 3346-3349.

상세보기
Manfredi R, Sabbatani S, Chiodo F. Bartonellosis: light and shadows in diagnostic and therapeutic issues. Clin Microbiol Infect. 2005; 11: 167-169.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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