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닭 전염성빈혈 감염률 및 유전자 분석
Investigation of infection rate and genetic sequence analysis of chicken infectious anemia virus 원문보기

韓國家畜衛生學會誌 = Korean journal of veterinary service, v.33 no.1, 2010년, pp.13 - 21  

추금숙 (전라북도축산위생연구소 정읍지소) ,  강미선 (전라북도축산위생연구소 정읍지소) ,  송희종 (전북대학교 수의과대학) ,  이정원 (전라북도축산위생연구소 정읍지소)

Abstract AI-Helper 아이콘AI-Helper

Chicken anemia virus (CAV) has been recognized as an immunosuppressive agent and plays role as an etiological agent of multifactorial diseases in chicken. In this study, we investigated distribution of CAV antibody by ELISA and the virus gene by PCR in poultry farms in Jeongeup, Jeonbuk province. In...

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제안 방법

  • 2009년 1월부터 2009년 12월까지 전북 정읍지소 관내 종계장 및 부화장 가금질병 모니터링 사업에 의거 종계장 19농가, 백세미 종계장 9농가 및 산란계 10농가, 부화장 5개소 등 총 43개소를 대상으로 항체검사를 실시하였고 항원검사는 종계장 11농가, 백세미 종계장 8농가, 부화장 병아리 5개소의 총 24개소에 대한 폐사 및 도태계와 병성감정 의뢰 된 24농가 가검물 49건은 항체 및 항원검사를 실시하였으며 CAV의 유전자를 품종별로 구분하여 분석을 실시하였다.
  • CAV N gene의 증폭에 사용한 primer는 Carterina 등(2004)과 동일하게 합성하여 forward primer (5′-GACTGTAAGATGGCAAGACGAGCTC-3′)와 reverse primer (5′-GGCTGAAGGATCCCTCATTC-3′)를 사용하여 PCR을 다음과 같이 수행하였다.
  • PCR 완료 후 반응액 6µl와 loading dye 1µl를 1.5% agarose gel (ethidium bromide 0.5µg/ml in DW)에 100bp DNA marker와 함께 1×TAE buffer가 함유된 전기영동 tank에 gel을 침적시킨 후 100V/cm, 50분간(owl easy cast minigel system) 전기영동을 실시하여 자외선 하에서 특이 band 증폭 유무를 확인하였다.
  • viral gene spin viral DNA/RNA extraction kit (iNtRON) 및 bioneer exiprep 16 automated nucleic acid extraction system을 이용하여 추출한 nucleotides 3µl와 각 primer 1µl를 PCR premix (Maxime PCR Premix, iNtRON)에 첨가하여 94°C에서 5분, 94°C에 1분 50°C에 1분 및 72°C에 2분씩 35회 반복 반응시킨 후 최종 72°C에서 10분 반응시켰다.
  • 검출된 N gene의 염기서열은 품종별로 육용종계(KCAVBB01) 1개, 토종닭 종계(KCA-VBB02) 1개, 백세미종계(KCAVL03, 04) 2개, 토종닭(KCAVKC08-10) 3개, 육계(KCAVB07) 1개, 백세미(KCAVSG05,06) 2개 총 10개를 비교·분석하였다.
  • 그 후 plate를 5회 세척하고 TMB substrate를 100µl씩 첨가하여 실온에서 15분간 반응시키고, stop solution을 100µl씩 첨가하여 반응을 정지시킨 후 흡광도 650nm에서 측정하여 S/P ratio 0.6 이상을 양성 판정하였다.
  • 백신 비접종 계군은 혈청을 희석액으로 10배 희석하고, 백신접종 계군은 100배 희석하여 ELISA 검사용 plate에 100µl씩 첨가하고 실온에서 60분간 반응시켰다.
  • 염기서열 분석은 N gene에서 증폭된 675bp의 PCR 생성물을 정제한 후 cosmo genetech DNA sequencing service (Cosmo, Korea)를 이용하여 양방향으로 분석하였고 분석된 염기서열은 multilian과 CLUSTALW를 이용하여 비교분석 및 phylogenetic tree를 작성하였다.
  • 즉, 부검 후 장기(흉선, 간 등)를 균질화 후 5% PBS 부유액을 원심분리하고 상층액을 -70°C에 보존하였다.
  • 최근 국내에서는 CAV에 대한 질병 발생이 인식되면서 종계에 대한 백신접종과 실태조사 등을 실시하고 있으나 품종별 감염실태 및 질병 발생에 대한 통계가 부족한 실정이므로 본 연구에서는 품종별 항체가 및 항원 검사와 병성감정 의뢰축에 대한 조사를 병행하여 닭 전염성빈혈에 대한 감염 실태를 파악하고 분리된 유전자염기 서열을 분석하여 외국 분리주와의 유전적 특성을 비교 분석하였다.
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질의응답

핵심어 질문 논문에서 추출한 답변
2~4주 닭에서 CAV로 인한 닭의 폐사율은? CAV는 종종 면역 억제를 동반한 lymphoid의 위축과 바이러스 및 세균, 곰팡이 감염 등의 이차감염이 이루어지고 hemorrhagic syndrome이나 aplastic anemia과 연계되어 질병의 원인체 역할을 하는 것으로 나타나고 있다. 또한, 2~4주 닭에서 전염성빈혈 증후군을 유발하여 성장부진이 나타나고 폐사율이 10~20%에서 60%까지도 가능하다(McNulty, 1991). 6주 이상의 일령에서는 aplastic anemia-hemorrhagic syndrome 발생의 병인론에서 중요한 역할을 한다.
Circoviridae는 무엇인가? 양돈 및 양계에서 최근 문제시 되는 Circoviridae는 외피가 없는 14~25nm의 single-stranded circular DNA 바이러스로 porcine circovirus (PCV), psittacine beak and feather disease virus (PBFDV), chicken anemia virus (CAV)를 포함하나 CAV는 PCV 및 PBFDV와 유전자 구조로 구분되며 human TT virus와 비슷하다. CAV는 일본에서 Yuasa 등(1979)이 최초로 보고, 이후 전 세계적으로 확인되고 있으며 단일 혈청형을 가지고 있다(McNulty, 1991; Saif 등, 2003).
CAV가 최초로 보고된 시기는? 양돈 및 양계에서 최근 문제시 되는 Circoviridae는 외피가 없는 14~25nm의 single-stranded circular DNA 바이러스로 porcine circovirus (PCV), psittacine beak and feather disease virus (PBFDV), chicken anemia virus (CAV)를 포함하나 CAV는 PCV 및 PBFDV와 유전자 구조로 구분되며 human TT virus와 비슷하다. CAV는 일본에서 Yuasa 등(1979)이 최초로 보고, 이후 전 세계적으로 확인되고 있으며 단일 혈청형을 가지고 있다(McNulty, 1991; Saif 등, 2003). CAV는 종종 면역 억제를 동반한 lymphoid의 위축과 바이러스 및 세균, 곰팡이 감염 등의 이차감염이 이루어지고 hemorrhagic syndrome이나 aplastic anemia과 연계되어 질병의 원인체 역할을 하는 것으로 나타나고 있다.
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참고문헌 (22)

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