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문제 정의
- 본 연구에서는 발효마늘분말과 발효마늘착즙액에 의한 비특이적 면역반응 평가를 위해 nitro-blue tetrazolium (NBT) activity, lysozyme activity 및 myeloperoxidase (MPO) activity를 분석하였다(Table 6). NBT activity는 대식세포의 활성을 측정하는 것으로 대식세포는 병원체가 몸 조직에 침범하였을 때 면역시스템에서 첫 번째로 작용하는 세포로 세균과 다른 미생물에 결합하여 포식작용을 수행하며, 선천면역과 적응면역 양쪽에 관여하는 포식세포이다.
- 실험 Ⅰ은 발효마늘분말의 첨가가 넙치의 성장과 비특이적 면역반응에 미치는 영향을 알아보고, 실험Ⅱ는 효과가 검증되지 않은 발효마늘착즙액을 사료에 농도별로 첨가하여 넙치의 성장, 면역반응, 혈액성분 및 어병세균(S. imiae 및 E. tarda)에 대한 질병 저항성을 알아보기 위해 수행되었다.
제안 방법
- 10주간의 사료공급 실험 후, 어류의 최종평균무게를 측정하여 증체율(Weight gain), 사료섭취율(Feed intake), 사료전환효율(Feed conversion ratio), 일간성장률(Specific growth rate), 단백질전환효율(Protein efficiency ratio) 및 생존율(Survival)을 계산하였다. 최종무게 측정 후 각 수조마다 6마리의 어류를 무작위로 선별하여 2-phenoxyethanol용액(100 ppm)으로 마취시켜 헤파린이 처리된 주사기를 사용하여 미부동맥에서 채혈을 하였다.
- 공격실험에 사용된 균의 적정농도는 사육실험이 종료되기 2주 전에 같은 크기의 넙치를 대상으로 예비실험을 하여 결정하였다. 10주간의 사육실험 후 실험구 당 넙치 10마리씩을 실험구로 사용하였으며, 세균을 현탁시킨 24oC 해수에 1시간 동안 침지시켰다. 모든 그룹은 24oC로 수온을 유지하였으며, 23일간 폐사를 관찰하였다.
- Hematocrit은 헤파린이 처리된 모세혈관채혈튜브(Microhematocrit Capillary Tubes)에 혈액을 채운 다음 고무판(Wax plates)에 세운 후, 혈액진단원심분리기(Micro Hematocrit VS12000, Vision Scientific, Korea)에서 10분간 원심분리하여 값을 측정하였다. Hemoglobin, triglyceride, cholesterol 및 HDLcholesterol 분석은 각각의 시판 시약과 반응시킨 후 혈액생화학분석기(Express plus system, Bayer, USA)를 이용하여 분석하였다.
- Hematocrit은 헤파린이 처리된 모세혈관채혈튜브(Microhematocrit Capillary Tubes)에 혈액을 채운 다음 고무판(Wax plates)에 세운 후, 혈액진단원심분리기(Micro Hematocrit VS12000, Vision Scientific, Korea)에서 10분간 원심분리하여 값을 측정하였다. Hemoglobin, triglyceride, cholesterol 및 HDLcholesterol 분석은 각각의 시판 시약과 반응시킨 후 혈액생화학분석기(Express plus system, Bayer, USA)를 이용하여 분석하였다. Hemoglobin은 end point, triglyceride, cholesterol 및 HDL-cholesterol은 kinetic방법으로 kit를 이용하여 분석되었다.
- 그 후 마늘고형물 잔사에 대해서는 Bacillus spp. 계통의 고온발효균주를 이용하여 고온발효에 의하여 마늘발효분말을 제조하였으며, 마늘착즙액은 발효효모를 이용하여 상온에서 발효시켜 마늘발효액을 제조하였다. 본 연구에 사용된 발효마늘분말의 일반성분 조성은 Table 1에 나타내었다.
- 병원성 세균 2 균주는 각각 TSA 배지에서 25℃에서24시간 배양한 후 집균하였고, 해수에 1×106 cfu/mL 농도가 되도록 현탁하여 침지 공격실험에 사용되었다. 공격실험에 사용된 균의 적정농도는 사육실험이 종료되기 2주 전에 같은 크기의 넙치를 대상으로 예비실험을 하여 결정하였다. 10주간의 사육실험 후 실험구 당 넙치 10마리씩을 실험구로 사용하였으며, 세균을 현탁시킨 24oC 해수에 1시간 동안 침지시켰다.
- 그 후 2,000×g에서 5분 동안 원심분리를 하여 최종적으로 상층액을 취한 후, NBT의 감소되는 범위를 분광광도계(Genesys 10 UV, Rochester, NY, USA)를 사용하여 최적의 흡광도인 540 nm에서 측정하였다.
- 0 g)는 각각 총 12개의 150 L 원형 플라스틱 수조에 각 수조당 30마리씩 무작위로 선택되어 배치되었다. 두 실험 모두 실험구당 2반복구를 두었으며, 사육수는 여과 해수를 사용하여 3 L/min의 유수량이 되도록 조절하였고, 모든 실험수조에 용존산소 유지와 원활한 사육수 순환을 위하여 에어 스톤을 설치하였다. 광주기는 형광등을 이용하여 12L:12D 조건으로 유지되었고 전 사육실험기간 동안의 평균수온은 20℃-26℃ 범위로 자연수온에 의존하였다.
- 10주간의 사육실험 후 실험구 당 넙치 10마리씩을 실험구로 사용하였으며, 세균을 현탁시킨 24oC 해수에 1시간 동안 침지시켰다. 모든 그룹은 24oC로 수온을 유지하였으며, 23일간 폐사를 관찰하였다.
- 본 실험에 사용된 실험사료의 조성과 일반성분 분석은 Table 2에 나타내었다. 발효마늘분말의 사료 내 첨가함량이 각각 0%, 0.5%, 1% 및 1.5%가 되도록 첨가하여(G-0, G-0.5, G-1 및 G-1.5) 실험사료를 제조하였다. 실험사료 제조는 모든 사료원들을 파쇄기를 이용하여 분말형태로 일정하게 만든 후, 각 사료원들을 사료조성표에 따라 무게를 재고 혼합하였다.
- 병원성 세균 2 균주는 각각 TSA 배지에서 25℃에서24시간 배양한 후 집균하였고, 해수에 1×106 cfu/mL 농도가 되도록 현탁하여 침지 공격실험에 사용되었다.
- 발효마늘착즙액을 이용한 실험 Ⅱ의 실험사료는 총 4개로 실험사료의 조성과 일반성분 분석은 Table 3에 나타내었다. 상업용 배합사료(수협사료)에 액체형태의 마늘액상을 각각 0%, 0.25%, 0.5% 및 1%가 되도록 첨가하여(GF-0, GF-0.25, GF0.5 및 GF-1) 흡착시킨 후 유실을 막기 위해 키토산코팅제로 코팅처리 하였다. 실험사료 제조는 적당량의 마늘액상과 증류수를 혼합하여 상업사료에 뿌려 충분히 흡착시킨 후, 다시 키토산 코팅제(1% chitosan, 1% tamarind gum, 0.
- 5%로 제한급이를 하였다. 성장률 측정은 매2주마다 실시되었고 측정 24시간 전에 모든 실험어류를 절식시켰다. 실험 Ⅰ과 Ⅱ의 사료공급실험은 각각 10주간씩 수행되었다.
- 성장률 측정은 매2주마다 실시되었고 측정 24시간 전에 모든 실험어류를 절식시켰다. 실험 Ⅰ과 Ⅱ의 사료공급실험은 각각 10주간씩 수행되었다.
- 실험Ⅱ의 성장실험 종료 후, 발효마늘착즙액이 넙치의 항 병력에 미치는 영향을 조사하기 위해 병원성 세균 2종 S. iniae (KCTC-3651) 및 E. tarda (KCTC-3657)로 각각 공격실험을 실시하였다. 병원성 세균 2 균주는 각각 TSA 배지에서 25℃에서24시간 배양한 후 집균하였고, 해수에 1×106 cfu/mL 농도가 되도록 현탁하여 침지 공격실험에 사용되었다.
- 5) 실험사료를 제조하였다. 실험사료 제조는 모든 사료원들을 파쇄기를 이용하여 분말형태로 일정하게 만든 후, 각 사료원들을 사료조성표에 따라 무게를 재고 혼합하였다. 혼합 후 사료원 총량의 30-40%에 해당하는 증류수를 첨가하여 사료혼합기(NVM-14-2P, KOREA)로 혼합 및 반죽하였다.
- 5 및 GF-1) 흡착시킨 후 유실을 막기 위해 키토산코팅제로 코팅처리 하였다. 실험사료 제조는 적당량의 마늘액상과 증류수를 혼합하여 상업사료에 뿌려 충분히 흡착시킨 후, 다시 키토산 코팅제(1% chitosan, 1% tamarind gum, 0.5% vitamin C, 0.3% glucosamin sulfate, 0.1% chitooligossacharide, 0.5% asthaxanthin)로 실험사료를 코팅시켰다. 두 실험의 실험사료는 공급 전까지 -20℃ 냉동고에 보관 후 실험에 사용되었다.
- 광주기는 형광등을 이용하여 12L:12D 조건으로 유지되었고 전 사육실험기간 동안의 평균수온은 20℃-26℃ 범위로 자연수온에 의존하였다. 실험사료는 1일 2회 (09:00와 16:00시)로 어체중의 1-1.5%로 제한급이를 하였다. 성장률 측정은 매2주마다 실시되었고 측정 24시간 전에 모든 실험어류를 절식시켰다.
- 최종무게 측정 후 각 수조마다 6마리의 어류를 무작위로 선별하여 2-phenoxyethanol용액(100 ppm)으로 마취시켜 헤파린이 처리된 주사기를 사용하여 미부동맥에서 채혈을 하였다. 채혈 즉시 hematocrit, hemoglobin 및 nitroblue tetrazolium(NBT) activity를 측정하였다. 분석 후, 남은 혈액은 myeloperoxidase (MPO) activity, lysozyme activity, triglycerol, cholesterol 및 HDL-cholesterol 분석을 위해 원심분리기 (Micro 17TR, Hanil Science, Korea)를 이용하여 5,000 rpm으로 10분간 원심분리하여 혈장을 분리하였다.
- 10주간의 사료공급 실험 후, 어류의 최종평균무게를 측정하여 증체율(Weight gain), 사료섭취율(Feed intake), 사료전환효율(Feed conversion ratio), 일간성장률(Specific growth rate), 단백질전환효율(Protein efficiency ratio) 및 생존율(Survival)을 계산하였다. 최종무게 측정 후 각 수조마다 6마리의 어류를 무작위로 선별하여 2-phenoxyethanol용액(100 ppm)으로 마취시켜 헤파린이 처리된 주사기를 사용하여 미부동맥에서 채혈을 하였다. 채혈 즉시 hematocrit, hemoglobin 및 nitroblue tetrazolium(NBT) activity를 측정하였다.
- 현탁액 200 µL를 96-well plates에 분주하고, 어류에서 분리한 혈청 10µL를 혼합시킨 후, microplate reader를 이용하여 530 nm에서 1분과 6분에 흡광도 값을 측정하였다.
- 혈액내의 대식세포 활성은 Kumari and Sahoo (2005)의 분석방법을 응용하여 호흡폭발 동안의 호중구(Neutrophils)에 의한 oxidative radical 생성량을 측정하였는데 분석방법은 다음과 같다. 우선 혈액(전혈)과 NBT solution (0.
대상 데이터
- 그 후 2,000×g에서 5분 동안 원심분리를 하여 최종적으로 상층액을 취한 후, NBT의 감소되는 범위를 분광광도계(Genesys 10 UV, Rochester, NY, USA)를 사용하여 최적의 흡광도인 540 nm에서 측정하였다. Blank는 dimethyl formamide를 사용하였다.
- 실험기간 동안 모든 실험구의 생존율은 100%였다. 대조구는 상업용 배합사료(Expanded pellet)를 그대로 사용하였고, 첨가실험구는 발효마늘착즙액을 농도별로 침지시킨 후, 키토산코팅제로 코팅하여 실험어류에 공급하였다. 실험사료의 일반성분 분석(Table 3)을 보면 알 수 있듯이 수분과 지방의 함량이 마늘액상을 첨가한 실험사료가 일반 상업용 배합사료보다 높은 값을 보였다.
- 발효마늘분말과 발효액은 제주특별자치도 제주시 오등동에 위치한 아쿠아그린텍(주)에서 자체 개발하여 제조한 것을 구입하여 사용하였다. 제조방법은 다음과 같다.
- 발효마늘분말을 이용한 실험 Ⅰ의 실험사료는 총 4개로 조단백질 함량과 에너지 수준이 각각 45%와 17.1 MJ/kg를 갖도록 동일하게 조성되었다. 본 실험에 사용된 실험사료의 조성과 일반성분 분석은 Table 2에 나타내었다.
- 이번 실험에 사용된 실험어류는 제주도내 양식장에서 구입하여 제주대학교 소속 해양과환경연구소로 운송되어, 2주 동안 시판 배합사료를 공급하면서 실험환경에 적응할 수 있도록 순치시킨 후 사료공급실험에 사용되었다. 실험 Ⅰ과 Ⅱ에서의 넙치치어(초기 평균무게: 65.0 g)는 각각 총 12개의 150 L 원형 플라스틱 수조에 각 수조당 30마리씩 무작위로 선택되어 배치되었다. 두 실험 모두 실험구당 2반복구를 두었으며, 사육수는 여과 해수를 사용하여 3 L/min의 유수량이 되도록 조절하였고, 모든 실험수조에 용존산소 유지와 원활한 사육수 순환을 위하여 에어 스톤을 설치하였다.
- 제조방법은 다음과 같다. 우선 서귀포시 대정읍에서 수확된 마늘을 구입하여 깨끗하게 세척한 후 마늘착즙액과 마늘고형 잔사로 제조한다. 그 후 마늘고형물 잔사에 대해서는 Bacillus spp.
- 이번 실험에 사용된 실험어류는 제주도내 양식장에서 구입하여 제주대학교 소속 해양과환경연구소로 운송되어, 2주 동안 시판 배합사료를 공급하면서 실험환경에 적응할 수 있도록 순치시킨 후 사료공급실험에 사용되었다. 실험 Ⅰ과 Ⅱ에서의 넙치치어(초기 평균무게: 65.
데이터처리
- 데이터 값의 유의차는 Duncan's multiple test (P≤0.05)로 비교되었다.
- 실험사료군의 배치는 완전확률계획법(Completely randomized design)에 따라 실시하였고, 분석결과는 SPSS (Statistical package for the social sciences, Version 12.0) 프로그램을 이용하여 One-way ANOVA로 통계 분석되었다. 데이터 값의 유의차는 Duncan's multiple test (P≤0.
이론/모형
- Hemoglobin, triglyceride, cholesterol 및 HDLcholesterol 분석은 각각의 시판 시약과 반응시킨 후 혈액생화학분석기(Express plus system, Bayer, USA)를 이용하여 분석하였다. Hemoglobin은 end point, triglyceride, cholesterol 및 HDL-cholesterol은 kinetic방법으로 kit를 이용하여 분석되었다.
- 실험사료원 및 실험사료의 일반성분 분석은 AOAC (1995) 방법에 따라 수분은 상압가열건조법(125℃, 3시간), 조회분은 직접회화법(550℃, 12시간), 단백질은 자동 조단백 분석기(Kejltec System 2300, Sweden)로 분석되었으며, 지방은 Folch et al. (1959)의 방법에 따라 Soxhlet 추출장치(Soxhlet Heater System C-SH6, Korea)를 이용하여 분석되었다.
- 혈청 내 lysozyme 활성은 Yeh et al. (2008)의 분석방법을 바탕으로 분석하였다. 먼저 0.
- 혈청 내 myeloperoxidase 활성은 Kumari and Sahoo (2005)의 방법을 기초로 분석하였다. 먼저 HBSS (Hanks balanced salt solution)를 96-well plates에 80 µL씩 분주한 다음 혈청 20 µL를 넣는다.
성능/효과
- (2011)은 넙치를 대상으로 배합사료의 수침효과 실험을 수행하였다. 그 결과, 비록 유의적인 차이는 관찰되지 않았지만, 수침을 하지 않은 비수침실험구에서 오히려 높은 성장률, 일간성장률, 사료효율 및 단백질이용효율을 보였다. 조직학적 분석결과도 전장의 조직상에서 수침그룹이 비수침그룹 보다 오히려 점막상피층의 핵 응축과 일부 점막층이 탈락된 점막 주름이 더 많이 관찰되었으며, 점막주름의 길이도 짧아진 것을 관찰할 수 있었다고 보고하였다.
- 이것은 발효마늘분말이 어병세균에 대한 질병저항성을 높일 수 있음을 간접적으로 증명한다. 따라서 마늘분말에 포함된 생리활성 물질이 어류에 효과적으로 전달되어 비특이적 면역반응을 증가시켜 어병세균에 대한 질병저항성을 높인 것으로 판단된다.
- , 2010)의 면역반응 결과와 본 연구의 발효마늘분말의 효과를 비교해 보면, 거의 차이를 보이지 않았다. 따라서 발효마늘 분말은 저수온과 적수온 모두에서 비특이적 면역반응을 향상시킬 수 있음이 증명되었다. 추후 발효마늘분말은 고수온에 대한 효과실험이 보완되어야 할 것으로 판단되며, 발효마늘착즙액은 저수온과 고수온에 대한 효과실험이 추가적으로 수행되어야 할 것으로 판단된다.
- , 1994). 따라서 본 연구에서 가장 높은 첨가구인 1.5% 실험구에서 대조구와 유의적인 차이를 보이지 않은 것은 사육수온, 어체 크기, 발효마늘분말에 포함된 생리활성물질 및 마늘의 향 등이 복합적으로 작용한 것으로 판단된다. 생존율에서는 마늘분말 첨가함량이 증가함에 따라 유의적으로 높은 생존율을 보였다.
- 그 결과 수침사료는 일반배합사료 보다 더 쉽고 빨리 대사와 이화작용이 이루어져 어류가 이용하기 전에 체내에서 빠져나가기 때문이라고 판단하고 있다. 따라서 본 연구에서도 사료섭취율, 사료전환효율 및 단백질이용효율이 발효마늘착즙액으로 침지시킨 그룹에서 대조구와 차이를 보인 것은 실험사료의 수분함량, 지방함량, 사료사이즈, 점결성, 마늘의 생리활성물질 및 향 등이 복합적으로 작용한 것으로 판단된다.
- 이 효소는 백혈구로부터 방출되어 박테리아 살균제인 hypochlorous acid (HOCL)을 만들어 병원체를 사멸시켜 비특이적 면역반응을 증가시킨다. 발효마늘 분말을 첨가한 실험Ⅰ에서는 농도-의존적으로 증가하는 경향을 보였으나 유의적인 차이를 보이지 않았으며, 발효마늘착즙액을 첨가한 실험Ⅱ에서는 0.25% 첨가구에서 대조구보다 유의적으로 높은 활성을 보였으며, 0.5% 및 1% 첨가구와는 유의적인 차이를 보이지 않았다.
- Hematocrit, hemoglomin 및 HDL-cholesterol의 함량은 두 실험에서 유의적인 차이를 관찰할 수 없었다. 발효마늘분말을 첨가한 실험Ⅰ에서는 cholesterol 및 triglycerol 함량이 농도의존적으로 감소하였으며, 발효마늘 착즙액을 침지시킨 실험Ⅱ에서는 cholesterol 함량이 대조구 보다 유의적으로 낮은 값을 보였다. 발효마늘분말을 첨가하여 수행한 선행연구에서도 이와 비슷하게 triglycerol 함량이 유의적으로 감소하였다.
- 본 연구를 수행하는 과정에서 모든 수조에서 자연적으로 질병이 발병하였다. 발효마늘분말이 첨가되지 않는 대조구와 가장 낮은 함량인 0.5% 첨가구의 생존율은 46.7%, 고농도인 1% 및 1.5% 첨가구는 각각 96.7%와 98.3%의 생존율을 보였다. 이것은 발효마늘분말이 어병세균에 대한 질병저항성을 높일 수 있음을 간접적으로 증명한다.
- iniae에 대한 질병저항성이 현저히 증가하는 것으로 확인되었다. 발효마늘액상을 첨가하지 않은 대조구(FGF-0)에서는 감염 후 5일째에 100%의 누적폐사율을 보였지만, 발효마늘착즙액 첨가 실험구(0.25%, 0.5%, 1% groups)에서는 각각 50%, 30%, 30%의 누적폐사율을 나타내어 발효마늘착즙액에 대해 농도-의존적으로 폐사가 감소되는 것을 보였으며, 대조구에 비해 실험구 모두에서 생존율이 크게 향상됨을 확인할 수 있었다. 하지만 E.
- 실험Ⅰ의 lysozyme activity 분석결과, 대조구보다 발효마늘분말을 첨가한 실험구에서 높은 값을 보였으며, 1% 첨가구에서 대조구보다 유의적으로 높은 활성을 보였다. 발효마늘착즙액을 첨가한 실험Ⅱ에서는 농도-의존적으로 증가하여 0.5% 및 1%의 고농도 첨가구에서 대조구보다 유의적으로 높은 활성을 보였다.
- 발효마늘착즙액이 넙치의 항병력에 미치는 영향을 분석하기 위하여, 병원성세균 2종(S. iniae 와 E. tarda)을 사용하여 침지 감염을 통한 누적폐사율을 관찰한 결과(Fig 1, 2), S. iniae에 대한 질병저항성이 현저히 증가하는 것으로 확인되었다. 발효마늘액상을 첨가하지 않은 대조구(FGF-0)에서는 감염 후 5일째에 100%의 누적폐사율을 보였지만, 발효마늘착즙액 첨가 실험구(0.
- Qureshi (1983)는 마늘 급여에 의해 triglyceride은 감소하였으나 HDL-cholesterol 수준은 변화가 없다고 보고하였다. 본 연구결과와 지금까지 수행된 연구결과를 종합해 볼 때, 사료 내 발효마늘분말의 첨가는 cholesterol 및 triglyceride 수준을 감소시키며, 발효마늘착즙액은 cholesterol 수준을 감소시키는 것으로 판단된다.
- 실험Ⅰ의 성장실험 결과, 사료 내 발효마늘분말의 첨가에 따른 성장률, 일간성장률, 사료 전환효율 및 단백질전환효율에서는 모든 실험구에서 유의적인 차이를 관찰할 수 없었다. 사료섭취율에서는 마늘분말이 0.5%및 1% 첨가된 실험구에서 대조구와 비교하여 유의적으로 낮은 값을 보였으며, 가장 높은 실험구인 1.5% 실험구에서는 유의적인 차이를 보이지 않았다. 저수온기에 넙치 치어를 대상으로 수행한 선행연구(Kim et al.
- 실험 Ⅱ의 성장실험 결과, 사료 내 발효마늘착즙액의 첨가에 따른 성장률, 일간성장률 및 생존율에서는 모든 실험구에서 유의적인 차이를 보이지 않았다. 사료섭취율에서는 발효마늘액상을 침지시킨 모든 실험구에서 대조구보다 유의적으로 높은 섭취율을 보였다. 사료효율은 0.
- 사료섭취율에서는 발효마늘액상을 침지시킨 모든 실험구에서 대조구보다 유의적으로 높은 섭취율을 보였다. 사료효율은 0.25% 첨가구에서 대조구보다 유의적으로 낮은 효율을 보였으며, 단백질이용효율에서는 0.25% 및 0.5% 첨가구에서 대조구 보다 유의적으로 낮은 값을 보였다. 실험기간 동안 모든 실험구의 생존율은 100%였다.
- 5% 실험구에서 대조구와 유의적인 차이를 보이지 않은 것은 사육수온, 어체 크기, 발효마늘분말에 포함된 생리활성물질 및 마늘의 향 등이 복합적으로 작용한 것으로 판단된다. 생존율에서는 마늘분말 첨가함량이 증가함에 따라 유의적으로 높은 생존율을 보였다. 본 연구를 수행하는 과정에서 모든 수조에서 자연적으로 질병이 발병하였다.
- , 2010)에서도 이와 비슷하게 사료섭취율을 제외하고 모든 실험구에서 유의적인 차이를 관찰할 수 없었다. 선행연구에서 사료섭취율은 마늘분말 첨가함량이 증가 함에 따라 유의적으로 감소하였는데, 본 연구에서는 가장 높은 1.5% 실험구에서 대조구와 유의적인 차이를 보이지 않고 다른 첨가실험구 보다는 유의적으로 높은 값을 보였다. 그 이유는 사육수온 및 어체크기의 차이로 판단된다.
- 실험 Ⅱ의 성장실험 결과, 사료 내 발효마늘착즙액의 첨가에 따른 성장률, 일간성장률 및 생존율에서는 모든 실험구에서 유의적인 차이를 보이지 않았다. 사료섭취율에서는 발효마늘액상을 침지시킨 모든 실험구에서 대조구보다 유의적으로 높은 섭취율을 보였다.
- 따라서 대식세포활성의 증가는 미생물에 대하여 세포독성을 일으키는 superoxide anion, hydrogen peroxide 및 hydroxyl radical과 같은 ROS 생산을 증가시키게 되므로 이러한 ROS의 측정을 통해 간접적으로 대식세포의 활성을 확인할 수 있다. 실험Ⅰ과 Ⅱ의 NBT activity 분석결과, 발효마늘분말과 발효마늘착즙액을 첨가한 실험구에서 대조구 보다 높은 값을 보였으나, 유의적인 차이는 보이지 않았다.
- 병원균에 대한 항균 매커니즘은 세균 세포벽의 구성성분인 peptidoglycan의 β-1,4-glucoside 결합을 가수분해하여 세균의 세포벽을 파괴함으로써 항균작용을 나타낸다. 실험Ⅰ의 lysozyme activity 분석결과, 대조구보다 발효마늘분말을 첨가한 실험구에서 높은 값을 보였으며, 1% 첨가구에서 대조구보다 유의적으로 높은 활성을 보였다. 발효마늘착즙액을 첨가한 실험Ⅱ에서는 농도-의존적으로 증가하여 0.
- Table 4에는 발효마늘분말과 발효액에 의한 실험 Ⅰ과 Ⅱ의 10주간 성장실험 결과를 나타내었다. 실험Ⅰ의 성장실험 결과, 사료 내 발효마늘분말의 첨가에 따른 성장률, 일간성장률, 사료 전환효율 및 단백질전환효율에서는 모든 실험구에서 유의적인 차이를 관찰할 수 없었다. 사료섭취율에서는 마늘분말이 0.
- 대조구는 상업용 배합사료(Expanded pellet)를 그대로 사용하였고, 첨가실험구는 발효마늘착즙액을 농도별로 침지시킨 후, 키토산코팅제로 코팅하여 실험어류에 공급하였다. 실험사료의 일반성분 분석(Table 3)을 보면 알 수 있듯이 수분과 지방의 함량이 마늘액상을 첨가한 실험사료가 일반 상업용 배합사료보다 높은 값을 보였다. Kim et al.
- 이상의 결과를 종합해 볼때, 사료 내 발효마늘분말과 발효 마늘착즙액의 첨가는 대식세포, lysozyme 및 myeolperoxidase activity를 활성화시키는 것으로 사료된다. 따라서 본 연구에서 사용한 발효마늘분말 및 발효마늘착즙액은 넙치의 면역강화용 사료첨가제로서의 사용가능성을 보여주고 있다.
- 5%, 1% groups)에서는 각각 50%, 30%, 30%의 누적폐사율을 나타내어 발효마늘착즙액에 대해 농도-의존적으로 폐사가 감소되는 것을 보였으며, 대조구에 비해 실험구 모두에서 생존율이 크게 향상됨을 확인할 수 있었다. 하지만 E. tarda을 이용하여 감염시킨 경우에는 모든 그룹에서 공격 후 9일 이내에 100% 누적폐사율을 보였으며, 대조구와 유의적인 차이는 관찰되지 않았다. 본 연구결과와 비슷하게 발효마늘분말을 이용하여 저수온기 넙치 치어를 대상으로 한 선행연구에서도 V.
후속연구
- 이상의 결과를 종합해 볼때, 사료 내 발효마늘분말과 발효 마늘착즙액의 첨가는 대식세포, lysozyme 및 myeolperoxidase activity를 활성화시키는 것으로 사료된다. 따라서 본 연구에서 사용한 발효마늘분말 및 발효마늘착즙액은 넙치의 면역강화용 사료첨가제로서의 사용가능성을 보여주고 있다.
- 따라서 발효마늘 분말은 저수온과 적수온 모두에서 비특이적 면역반응을 향상시킬 수 있음이 증명되었다. 추후 발효마늘분말은 고수온에 대한 효과실험이 보완되어야 할 것으로 판단되며, 발효마늘착즙액은 저수온과 고수온에 대한 효과실험이 추가적으로 수행되어야 할 것으로 판단된다.
- tarda에 대한 항병력에는 효과가 없거나 침지농도가 적절하지 않았을 것으로 추측된다. 하지만 보다 더 정확한 매커니즘은 추가적인 분석이 필요할 것으로 판단된다.
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