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문제 정의
- 20) 하지만 간조직의 지질 대사 및 축적에 대한 밀순의 효과는 보고된 바가 없다. 따라서 본 연구에서는 밀순 물 추출물과 에탄올 추출물을 제조하고, 고지방식이를 마우스에게 제공하여 유발되는 비만 및 지방간증 동물에게 추출물을 경구투여 하여 혈액중의 지질 수준 및 간조직의 지질 축적에 밀순 추출물의 개선효과를 비교 평가하고자 하였다.
- 18) 하지만 지질대사를 향상시키고 지방축적을 억제하는 생리활성물질에 대한 연구는 밀순에서 보고된 바가 없다. 따라서 이들을 분리 정제하여 구조 규명과 지질합성 및 분해에 관련된 효소의 mRNA와 protein 발현수준을 확인하여 기전을 밝히고자 연구를 진행할 계획이다.
- 밀(Triticum aestivum Lamarck: TA)은 화본과 식물로 세계적으로 생산량 1위를 유지하는 작물이다. 최근 기능성 식품에 관심이 높아지면서 밀을 소재로 하여 다양한 기능성 제품을 개발하고자 하는 추세이다. 서양에서는 밀순을 wheetglass라는 명칭으로 분말 또는 착즙하여 영양부족 및 성인병 등의 건강 기능성보조식품으로 많이 이용되고 있다.
제안 방법
- 반면에 말초 조직으로부터 콜레스테롤을 간으로 운반하여 혈중 콜레스테롤을 제거하는 작용을 하는 HDL-콜레스테롤의 농도가 감소되어 동맥경화증의 위험성이 높아지게 된다.24) 따라서 고지방식이를 제공한 마우스에 TAWE 및 TAEE의 투여가 중성지질, 총콜레스테롤, HDL-콜레스테롤, LDL-콜레스테롤 등의 혈중 지질 함량에 미치는 영향을 조사하고자 각 실험군의 혈청을 분리하여 분석하였다(Table II). 고지방 식이에 의해 야기되는 대표적인 혈중 중성지질 함량은 정상식이군에서 122.
- 28) 고지방식이를 제공한 마우스의 간기능 이상에 대한 TAWE 및 TAEE의 영향을 조사하고자 간 조직 손상의 지표로 이용되는 효소인 혈청중의 ALT 및 AST 활성도를 측정하였다(Table III). 지방간 현상을 보인 고지방식이에서 ALT 및 AST 활성이 각각57.
- 체중 및 식이섭취량 측정 − 실험동물을 식이섭취량은 1주에 3회, 체중은 주1회 측정하였다. 각 실험군의 체중 증가율은 실험기간동안 1주일 간격으로 일정시간에 측정하였으며, 최종 체중에서 실험개시전의 체중을 감하여 실험개시 전의 체중으로 나누어 산출하였고, 에너지섭취량은 체중 증가량을 동일사육기간의 식이섭취량으로 나누어 구하였다.
- 간 조직내 지질 함량에서 추출물의 효과 − 고지방식이를 공급한 마우스의 간 조직 지방축적 증가에 대하여 TAWE 또는 TAEE 억제효과를 조사하고자 간 중량, 간조직중의 총 지질 및 중성지질 함량을 분석하였다.
- 실험군은 정상식이 대조군 (ND), 고지방 식이 대조군 (HFD), 고지방식이+밀순 물 추출물 투여군(HFD-TAWE), 및 고지방식이+밀순 에탄올 추출물 투여군(HFD-TAEE) 등의 4개로 나누고 난괴법에 준하여 마우스 분리하여 사육하였다. 고지방식이를 제공하는 마우스에 TAWE 또는 TAEE를 생리식염수에 현탁 하여 하루 200 mg/kg 용량으로 1회 동일한 시간에 경구로 5주간 투여하였다. 실험 대조군들은 생리식염수를 동일한 방법으로 투여하고 추출물 투여군과 비교 조사하였다.
- 밀순 추출물을 제조하고자 500 ml 정제수 및 500 ml 에탄올에 동결건조분말 50 g을 각각 넣고 실온에서 30분 간격으로 2회 초음파 추출하고, 이를 Whatmann paper filter로 여과하여 용매와 잔류물을 분리하고, 잔류물을 다시 동일한 방법으로 추출물을 얻어 초기 추출물과 합하여 회전감압 농축기(EYELA사, Tokyo, Japan)에서 감압농축 하였다. 농축된 추출물을 동결 건조기에서 완전히 건조하고 물 추출물(TAWE)과 에탄올 추출물(TAEE)을 얻었다. 각각의 추출물을 생리식염수에 적정농도로 희석하여 동물실험에 사용하였다.
- 따라서 각 실험군의 간 조직에서 파라핀 절편을 제작하여 Hematoxylin & Eosin 시액으로 조직염색을 실시하였다.
- 밀순은 동결건조하고 곱게 분쇄하였다. 밀순 추출물을 제조하고자 500 ml 정제수 및 500 ml 에탄올에 동결건조분말 50 g을 각각 넣고 실온에서 30분 간격으로 2회 초음파 추출하고, 이를 Whatmann paper filter로 여과하여 용매와 잔류물을 분리하고, 잔류물을 다시 동일한 방법으로 추출물을 얻어 초기 추출물과 합하여 회전감압 농축기(EYELA사, Tokyo, Japan)에서 감압농축 하였다. 농축된 추출물을 동결 건조기에서 완전히 건조하고 물 추출물(TAWE)과 에탄올 추출물(TAEE)을 얻었다.
- 본 연구는 고지방식이를 공급한 마우스에서 간조직의 지질축적에 미치는 밀순의 물 추출물과 에탄올 추출물의 영향을 규명하고자 정상식이를 급여한 정상대조군, 고지방식이대조군(HFD), 고지방-밀순 물 추출물 투여군(HFD-TAWE) 및 고지방-밀순 에탄올 추출물 투여군(HFD-TAEE)으로 4개 실험군으로 나누어 5주간 사육하고 지질함량을 분석하였다. 고지방식이를 공급한 대조군과 비교하여 HFD-TAWE 투여군과 HFD-TAEE 투여군에서 체중 및 식이섭취량이 유의적으로 감소하였으며, 혈중 중성지질, 총콜레스테롤, LDL-콜레스테롤 수준을 유의적으로 저하시켰다.
- 고지방식이를 제공하는 마우스에 TAWE 또는 TAEE를 생리식염수에 현탁 하여 하루 200 mg/kg 용량으로 1회 동일한 시간에 경구로 5주간 투여하였다. 실험 대조군들은 생리식염수를 동일한 방법으로 투여하고 추출물 투여군과 비교 조사하였다. 본 연구의 동물실험은 전북대학교 동물실험 윤리 위원회에서 승인 하에 윤리규정을 준수하며 실시하였다.
- 한편 대조군으로 정상식이 사료를 동일한 방법으로 제공하였다. 실험군은 정상식이 대조군 (ND), 고지방 식이 대조군 (HFD), 고지방식이+밀순 물 추출물 투여군(HFD-TAWE), 및 고지방식이+밀순 에탄올 추출물 투여군(HFD-TAEE) 등의 4개로 나누고 난괴법에 준하여 마우스 분리하여 사육하였다. 고지방식이를 제공하는 마우스에 TAWE 또는 TAEE를 생리식염수에 현탁 하여 하루 200 mg/kg 용량으로 1회 동일한 시간에 경구로 5주간 투여하였다.
- 조직절편을 xylene으로 탈파라핀화 과정을 거쳐 파라핀을 제거하고 hematoxylin & eosin (Sigma)시액으로 핵과 세포질을 염색하여 광학현미경(200x)에서 각 실험군들의 조직을 형태학적으로 관찰하였다.
- 체중 및 식이섭취량 측정 − 실험동물을 식이섭취량은 1주에 3회, 체중은 주1회 측정하였다.
- 체중 및 식이섭취량에서 추출물의 효과 − 고지방식이 섭취를 통해 유도되는 비만 마우스 실험모델에서 체중, 식이 섭취량 및 에너지섭취량 증가에 밀순 물 추출물(TAWE) 또는 에탄올 추출물(TAEE)이 미치는 영향을 조사하고자 추출물들을 마우스에 5주간 1일 1회 200 mg/kg씩 경구투여하여 그 변화를 측정하였다(Table I).
- 파라핀 블록을 제작한 후 절편기를 사용하여 5 µm두께로 잘라 조직절편을 제작하였다.
- 혈액 및 조직시료채취 − 실험동물은 시험 종료일에 에테르로 흡입마취한 후 주사기(21G)를 이용하여 심장에서 혈액을 채취하여 안락사 시키고 혈액을 1,900×g에서 20분간 원심 분리하여 혈청을 분리하여 혈청지질 함량 및 효소활성 측정용 시료로 사용하였다. 한편 간 조직을 적출하여 0.9% 생리식염수로 남아있는 혈액을 헹구고 여지로 수분을 제거한 후 중량을 측정하였으며, 간 조직 시료들의 일부는 조직염색을 위해 포르말린용액에 고정하고, 나머지는 조직 내 지질 분석을 위한 시료로 사용 전까지 액체질소에 급속 동결하여 -70℃의 deep freezer에서 보관하였다.
- 혈액 및 조직시료채취 − 실험동물은 시험 종료일에 에테르로 흡입마취한 후 주사기(21G)를 이용하여 심장에서 혈액을 채취하여 안락사 시키고 혈액을 1,900×g에서 20분간 원심 분리하여 혈청을 분리하여 혈청지질 함량 및 효소활성 측정용 시료로 사용하였다.
- 혈중 ALT 및 AST활성 측정 − 간의 손상정도를 측정하기 위하여 아미노산전이효소인 ALT와 AST 활성은 (주)아산제약에서 구입한 효소법에 의한 정량용 kit를 이용하여 측정하였다.
- 혈중 및 간 조직내의 지질함량 측정 − 중성지질(Triglycerides) 및 총콜레스테롤(Total cholesterol)함량은 혈액에서 혈청을 분리하여 (주)아산제약 (Seoul, Korea)에서 구입한 각각의 효소분석 Kit들을 사용하여 제공된 프로토콜에 따라 550 nm에서 흡광도를 측정하여 산출하였다.
대상 데이터
- 실험동물은 전북대학교 동물 사육실에서 온도 22±2℃, 상대 습도 50±10%, 12시간 명암주기의 조건에서 사육하였으며, 7일의 환경적응 후 체중 측정 및 육안적 건강 상태를 확인하여 적합한 마우스들을 선별하여 실험에 사용하였다. 간지방증을 유도하기 위해서 마우스에 제공한 사료는 Research Diets사(New Brunswick, NJ)의 지방 45%를 함유하는 고지 방식이 사료(D12451)를 중앙실험동물 통하여 구입하였으며 실험동물에게 6주간 물과 함께 자유롭게 섭취하게 하였다. 한편 대조군으로 정상식이 사료를 동일한 방법으로 제공하였다.
- 실험동물 사육 − C57BL/6J계 6주령의 수컷 마우스를 (주)샘타코(Gyeonggi-do, Korea)에서 구입하여 사용하였다.
- 실험동물은 전북대학교 동물 사육실에서 온도 22±2℃, 상대 습도 50±10%, 12시간 명암주기의 조건에서 사육하였으며, 7일의 환경적응 후 체중 측정 및 육안적 건강 상태를 확인하여 적합한 마우스들을 선별하여 실험에 사용하였다.
- 추출물 제조 − 본 실험에 사용된 밀순은 국립식량과학원에서 공급받은 밀품종 금강밀(Triticum aestivum Lamarck: TA)을 수정 우리밀농원(Gyeonggi-do, Korea)에서 온실의 평균 온도를 20±2℃로 유지하며 무균 유기농 발아용 피트머스 위에서 발아시켜 2주간 재배하여 수확하였다.
데이터처리
- 통계처리 − 모든 실험결과는 SPSS 통계 package(Version 10.0)를 이용하여 평균치와 표준편차를 산출하였고 p < 0.05수준에서 Duncan's multiple range test를 사용하여 실험군 평균치간의 유의성을 검정 하였다.
이론/모형
- 혈중 및 간 조직내의 지질함량 측정 − 중성지질(Triglycerides) 및 총콜레스테롤(Total cholesterol)함량은 혈액에서 혈청을 분리하여 (주)아산제약 (Seoul, Korea)에서 구입한 각각의 효소분석 Kit들을 사용하여 제공된 프로토콜에 따라 550 nm에서 흡광도를 측정하여 산출하였다. HDL-콜레스테롤 함량을 측정하기 위해 혈청에 2% dextran sulfate 용액과 1M의 MgCl2 용액 (1:1, v/v)을 가하여 원심분리 후 그 상층액을 시료로 표준효소법에 의해 kit(Asan., Korea)를 사용하여 500 nm에서 흡광도를 측정하여 산출하였다. 혈중 LDL-콜레스테롤 함량은 Friedewald식21)에 의하여 계산하였다.
- 혈중 LDL-콜레스테롤 함량은 Friedewald식21)에 의하여 계산하였다. 간 조직중의 총지질 함량은 Folch 등의 방법22)에 준하여 클로로포름：메탄올 (2:1, v/v) 혼합액으로 지질을 추출한 후 총지질함량은 Frings와 Dunn의 방법23)으로 측정하였으며, 중성지질 함량은 혈청에서 분석 방법과 동일하게 분석하였다.
- , Korea)를 사용하여 500 nm에서 흡광도를 측정하여 산출하였다. 혈중 LDL-콜레스테롤 함량은 Friedewald식21)에 의하여 계산하였다. 간 조직중의 총지질 함량은 Folch 등의 방법22)에 준하여 클로로포름：메탄올 (2:1, v/v) 혼합액으로 지질을 추출한 후 총지질함량은 Frings와 Dunn의 방법23)으로 측정하였으며, 중성지질 함량은 혈청에서 분석 방법과 동일하게 분석하였다.
성능/효과
- 4%로 중성지방혈증이 더욱 문제가 되고 있으며,26) 혈중 총 콜레스테롤과 LDL-콜레스테롤 수준 상승은 심혈관계 질환의 위험인자로 밝혀짐에 따라 고지혈증 환자에서 혈중 LDL-콜레스테롤을 감소시키는 치료가 강조되고 있다.27) 따라서 상기 결과로부터 밀순 에탄올 추출물이 고지혈증 환자의 혈중 지질 수준을 개선하는데 매우 효과적일 것으로 사료된다.
- 마우스 경우 사람의 정상범위 수치와 다르기 때문에 AST, ALT 수치보다는 AST와 ALT의 비율로 간 건강상태를 암시할 수 있다.28) 이를 토대로 AST와 ALT의 비율에서 정상대조군과 비교하면 모든 실험군에서 유의적인 차이는 보이지 않았다. 이상의 결과로 고지방식이로 야기된 간기능 손상이 밀순 에탄올 추출물이 효과적으로 개선할 수 있을 것으로 사료된다.
- 1,2) 또한 제2형 당뇨병 등의 대사성질환에서도 빈발하며, 지방간이 있는 사람의 대부분은 생활에 큰 영향을 미치지 않지만 고혈압, 제2당뇨병, 고지방혈증, 고인슐린증과 같은 위험질환이 동반되면 지방간증(hepatostaetosis)으로 진행한다고 보고되었다.3) 또한 인슐린저항성 당뇨병과 고인슐린혈증과는 연관성이 적은 독립적인 병인으로 밝혀지면서 최근에는 대사성질환의 한 요소로 분류하려는 추세이다.4)
- 알코올성 지방간증은 알코올을 차단하면 바로 상태가 호전되므로 특별한 치료가 필요하지는 않다.6) 비만, 당뇨, 고지혈증 등의 대사증후군과 연관성이 있는 비알코올성 지방간증은 대부분 과다한 지방섭취에 의해 체내에서 대사되지 못하고 간 및 지방 조직에 축적이 주된 원인이며, 일부는 유전 및 환경적 원인에 기인한 복합 대사성질환으로 나타난다.7) 지방간의 병인은 대사이상으로 야기되는 고인슐린혈증에 의해 간 및 지방조직으로 유리지방산의 이동을 증가시키고 지방축적이 초래된다.
- 6) 비만, 당뇨, 고지혈증 등의 대사증후군과 연관성이 있는 비알코올성 지방간증은 대부분 과다한 지방섭취에 의해 체내에서 대사되지 못하고 간 및 지방 조직에 축적이 주된 원인이며, 일부는 유전 및 환경적 원인에 기인한 복합 대사성질환으로 나타난다.7) 지방간의 병인은 대사이상으로 야기되는 고인슐린혈증에 의해 간 및 지방조직으로 유리지방산의 이동을 증가시키고 지방축적이 초래된다. 이 과정에서 산화적 스트레스를 유발하며 이에 노출된 간 조직에서는 염증반응 및 조직손상이 일어난다고 알려져 있다.
- HFD+TAWE 투여군에서는 167.50±14.24 mg/dl, HFD+TAEE 투여군에서는 142.35±10.31 mg/dl으로 고지방 식이로 인한 증가된 혈중 중성지질 함량이 유의적으로 감소하였다.
- HFD-TAEE 투여군의 ALT활성은 48.38±9.61 IU/L이었고 AST활성은 112.85±15.14 IU/L로 정상식이군의 효소 활성수준으로 유의하게 감소하는 것으로 나타났다.
- 체중 및 식이섭취량에서 추출물의 효과 − 고지방식이 섭취를 통해 유도되는 비만 마우스 실험모델에서 체중, 식이 섭취량 및 에너지섭취량 증가에 밀순 물 추출물(TAWE) 또는 에탄올 추출물(TAEE)이 미치는 영향을 조사하고자 추출물들을 마우스에 5주간 1일 1회 200 mg/kg씩 경구투여하여 그 변화를 측정하였다(Table I). 고지방 식이 투여 개시 전 평균 체중은 20.63 g이었으며 일반식이와 고지방식이를 5주간의 제공한 후 최종 체중증가량은 정상식이 대조군(ND)은 27.3%이며, 고지방식이 대조군(HFD)은 85.0% 으로 고지방식이군에서 3배 이상 체중 증가량을 보였다. 한편 HFD+TAWE 투여군에서는 68.
- 6%의 체중 증가를 보였다. 고지방식이 대조군 대비 체중증가 억제율을 비교하면 TAWE 투여군은 10.6%, TA 에탄올 추출물은 22.4%의 억제 효과를 보였다. 특히 TAWE 투여에 의한 체중감소에 비하여 TAEE 투여군에서 체중감소 효과가 유의하게 2배 이상 높았다.
- 본 연구는 고지방식이를 공급한 마우스에서 간조직의 지질축적에 미치는 밀순의 물 추출물과 에탄올 추출물의 영향을 규명하고자 정상식이를 급여한 정상대조군, 고지방식이대조군(HFD), 고지방-밀순 물 추출물 투여군(HFD-TAWE) 및 고지방-밀순 에탄올 추출물 투여군(HFD-TAEE)으로 4개 실험군으로 나누어 5주간 사육하고 지질함량을 분석하였다. 고지방식이를 공급한 대조군과 비교하여 HFD-TAWE 투여군과 HFD-TAEE 투여군에서 체중 및 식이섭취량이 유의적으로 감소하였으며, 혈중 중성지질, 총콜레스테롤, LDL-콜레스테롤 수준을 유의적으로 저하시켰다. 그러나 HFD-TAEE 투여군과 HFD-TAWE 투여군을 비교하면 혈중 총콜레스테롤, HDL-콜레스테롤 및 LDL-콜레스테롤 수준을 개선하는 효과는 서로 유의적인 차이가 없었지만, 체중 및 혈중 중성 지질 수준의 감소효과는 밀순 에탄올 추출물에서 유의하게 2배 높았다.
- 그러나 HFD-TAEE 투여군과 HFD-TAWE 투여군을 비교하면 혈중 총콜레스테롤, HDL-콜레스테롤 및 LDL-콜레스테롤 수준을 개선하는 효과는 서로 유의적인 차이가 없었지만, 체중 및 혈중 중성 지질 수준의 감소효과는 밀순 에탄올 추출물에서 유의하게 2배 높았다. 고지방식이에 유도된 간조직에서 지질 축적양상과 지질 함량을 비교한 결과 HFD-TAWE 투여군에서는 간조직에 작은 지방공포가 부분적으로 관찰되었지만 지방 축적이 현저히 감소했으며, 고지방식이대조군과 비교해서 간 중량은 38%, 총지질 및 중성지질 함량은 각각 55.5%, 38.9%의 유의적인 감소를 보였다. 한편 HFD-TAEE 투여군에서는 간조직에 지방공포가 전혀 관찰되지 않았으며, 고지방식이대조군과 비교해서 간 중량은 50.
- 고지방식이를 공급한 대조군과 비교하여 HFD-TAWE 투여군과 HFD-TAEE 투여군에서 체중 및 식이섭취량이 유의적으로 감소하였으며, 혈중 중성지질, 총콜레스테롤, LDL-콜레스테롤 수준을 유의적으로 저하시켰다. 그러나 HFD-TAEE 투여군과 HFD-TAWE 투여군을 비교하면 혈중 총콜레스테롤, HDL-콜레스테롤 및 LDL-콜레스테롤 수준을 개선하는 효과는 서로 유의적인 차이가 없었지만, 체중 및 혈중 중성 지질 수준의 감소효과는 밀순 에탄올 추출물에서 유의하게 2배 높았다. 고지방식이에 유도된 간조직에서 지질 축적양상과 지질 함량을 비교한 결과 HFD-TAWE 투여군에서는 간조직에 작은 지방공포가 부분적으로 관찰되었지만 지방 축적이 현저히 감소했으며, 고지방식이대조군과 비교해서 간 중량은 38%, 총지질 및 중성지질 함량은 각각 55.
- 이상의 결과로부터 고지방식이에 의해 야기되는 혈중 지질 함량이 TAEE 및 TAWE 투여에 의해 억제되며, 혈중 HDL-콜레스테롤 수준이 개선되는 효과가 있음을 확인하였다. 그러나 TAEE과 TAWE 투여군을 비교하면 혈중 총콜레스테롤, HDL-콜레스테롤 및 LDL-콜레스테롤 수준에는 유의적인 차이가 없었지만, 혈중 중성지질함량이 TAEE 투여군에서 억제효과가 유의하게 증가하였다. 포화지방산 및 탄수화물의 과다 섭취는 혈중지질 수준을 증가시킨다고 보고 되었으며,5) 최근 한국인 30세 이상의 성인의 경우 탄수화물과 포화지방산의 과다 섭취로 인하여 고지혈증 환자가 증가는 추세이다.
- 이와 같이 밀순 물 추출물과 밀순 에탄올 추출물 모두에서 간조직의 지질 침착도를 유의하게 억제하는 효과를 보였으며, 특히 밀순 에탄올 추출물에서 보다 증가된 지질 침착을 억제효과가 보였다. 또한 간손상 지표 ALT 및 AST 효소활성을 TAEE 투여군에서 유의적으로 억제하였지만 AST와 ALT의 비율로서 비교하면 모든 실험군에서 유의적인 차이는 보이지 않았다. 본 연구 결과를 종합하면 밀순 물 추출물과 밀순 에탄올 추출물 모두 고지혈증 및 간 조직 지질 침착을 개선하는 효과가 있는 것으로 나타났다.
- 또한 간조직을 파라핀절편으로 제작하여 Hematoxylin & Eosin 시액으로 염색하여 관찰하면 Fig. 1에서와 같이 정상식이군은 간세포가 균일하고 지방공포가 전혀 보이지 않았지만, 고지방식이 대조군의 간 조직에서는 세포질에 크고 작은 지방축적으로 인해 간세포질의 지방 공포가 많이 출현 하였으며 간세포 내 지방 축적의 흔적이 뚜렷하게 관찰되었다(Fig. 1b).
- 63 mg/dl으로 고지방식이에 의해 증가된 혈중 총 콜레스레롤 수준이 유의적으로 감소하였다. 또한 혈중 LDL콜레스테롤 함량도 총콜레스테롤 수준과 비례하여 고지방식이에 의해 증가하였으며, TAWE 투여군과 TAEE 투여군에서 유의적으로 감소하였다. 한편 혈중 HDL-콜레스테롤 함량은 정상식이 대조군과 비교할 경우 고지방식이 대조군에서 유의하게 감소하는 경향을 보였고, TAWE 투여군과 TAEE 투여군에서는 정상식이군의 수준으로 혈중 HDL-콜레스테롤 함량이 유의하게 증가하였다.
- 1c). 반면 HFD+TAEE 투여군에서는 간 조직의 지방침착이 뚜렷하게 억제 되었으며, 지방침착이 정상식이군과 유사한 수준으로 개선시키는 효과를 보였다(Fig. 1d). 이상의 결과로 밀순 에탄올 추출물이 고지방식이로 유도되는 지방간증의 개선에 효과적인 기능성소재로 가치가 높을 것으로 사료된다.
- 또한 간손상 지표 ALT 및 AST 효소활성을 TAEE 투여군에서 유의적으로 억제하였지만 AST와 ALT의 비율로서 비교하면 모든 실험군에서 유의적인 차이는 보이지 않았다. 본 연구 결과를 종합하면 밀순 물 추출물과 밀순 에탄올 추출물 모두 고지혈증 및 간 조직 지질 침착을 개선하는 효과가 있는 것으로 나타났다. 일반적으로 고지혈증 및 간지방증 환자의 경우 심각한 지질축적과 동반되는 대사성 질환의 합병증으로 효과적인 치료요법이 요구된다.
- 5% 증가하였다. 이상의 결과로 TAWE와 TAEE 모두 간조직의 총지질 및 중성지질 수준을 유의하게 저하시키는 효과가 있었으며, 특히 밀순 에탄올 추출물은 고지방식이 의존적 간조직의 지질 축적을 정상대조군 수준으로 억제하는 뛰어난 효과가 있는 것으로 사료된다. 밀순 물 추출물의 지질대사 개선 효과는 밀순에 함유된 수용성 식이섬유 β-glucan에 의해 나타날 것으로 예측된다.
- 한편 혈중 HDL-콜레스테롤 함량은 정상식이 대조군과 비교할 경우 고지방식이 대조군에서 유의하게 감소하는 경향을 보였고, TAWE 투여군과 TAEE 투여군에서는 정상식이군의 수준으로 혈중 HDL-콜레스테롤 함량이 유의하게 증가하였다. 이상의 결과로부터 고지방식이에 의해 야기되는 혈중 지질 함량이 TAEE 및 TAWE 투여에 의해 억제되며, 혈중 HDL-콜레스테롤 수준이 개선되는 효과가 있음을 확인하였다. 그러나 TAEE과 TAWE 투여군을 비교하면 혈중 총콜레스테롤, HDL-콜레스테롤 및 LDL-콜레스테롤 수준에는 유의적인 차이가 없었지만, 혈중 중성지질함량이 TAEE 투여군에서 억제효과가 유의하게 증가하였다.
- 5%의 유의적인 감소를 보였다. 이와 같이 밀순 물 추출물과 밀순 에탄올 추출물 모두에서 간조직의 지질 침착도를 유의하게 억제하는 효과를 보였으며, 특히 밀순 에탄올 추출물에서 보다 증가된 지질 침착을 억제효과가 보였다. 또한 간손상 지표 ALT 및 AST 효소활성을 TAEE 투여군에서 유의적으로 억제하였지만 AST와 ALT의 비율로서 비교하면 모든 실험군에서 유의적인 차이는 보이지 않았다.
- 각 실험군들의 식이섭취량에서 산출된 에너지 섭취량 역시 식이섭취량과 동일한 결과를 나타냈다. 이와 같이 밀순 에탄올 추출물 및 물 추출물을 투여할 경우 고지방 식이에 의해 야기되는 높은 식이 섭취량이 유의적으로 감소되고 이로써 체중 증가가 유의적으로 억제되는 것으로 확인하였으며, 특히 밀순 에탄올 추출물이 체중감소 및 식이 섭취량 감소에 훨씬 효과적인 것으로 사료된다.
- 따라서 각 실험군의 간 조직에서 파라핀 절편을 제작하여 Hematoxylin & Eosin 시액으로 조직염색을 실시하였다. 정상식이군과 고지방식이군으로부터 적출한 간 조직의 형태를 관찰하면 정상식이군에서는 전체적으로 균일한 진한 선홍색을 나타내지만, 고지방식이군에서는 간의 부피와 무게가 증가하였으며 전체적으로 옅은 분홍색에 황색 및 백색의 지방들이 침착된 전형적인 지방간 형상을 보였다. 또한 간조직을 파라핀절편으로 제작하여 Hematoxylin & Eosin 시액으로 염색하여 관찰하면 Fig.
- 지방간 현상을 보인 고지방식이에서 ALT 및 AST 활성이 각각57.47±9.82 IU/L와 138.61±18.32 IU/L 로 유의적으로 높은 수치를 보였으며, HFD-TAWE 투여군은 각각 53.61±6.61 IU/L와 127.36±13.11 IU/L으로 고지방식이군에 비해 낮아졌으나 유의적인 차이를 보이지 않았다.
- 체중 증가에 밀접한 관련이 있는 각 실험군들의 1일 식이 섭취량을 비교한 결과 정상식이대조군에서 3.10±0.53 g/day이고, 고지방식이군에서 4.25±0.67 g/day으로 식이섭취량이 증가하였다.
- 4%의 억제 효과를 보였다. 특히 TAWE 투여에 의한 체중감소에 비하여 TAEE 투여군에서 체중감소 효과가 유의하게 2배 이상 높았다. 체중 증가에 밀접한 관련이 있는 각 실험군들의 1일 식이 섭취량을 비교한 결과 정상식이대조군에서 3.
- 9%의 유의적인 감소를 보였다. 한편 HFD-TAEE 투여군에서는 간조직에 지방공포가 전혀 관찰되지 않았으며, 고지방식이대조군과 비교해서 간 중량은 50.6%, 총지질 및 중성지질 함량은 각각 61.6%, 49.5%의 유의적인 감소를 보였다. 이와 같이 밀순 물 추출물과 밀순 에탄올 추출물 모두에서 간조직의 지질 침착도를 유의하게 억제하는 효과를 보였으며, 특히 밀순 에탄올 추출물에서 보다 증가된 지질 침착을 억제효과가 보였다.
- 반면에 HFD+TAWE 투여군과 HFD+TAEE 투여군에서 간 중량은 고지방식이 대조군에 비하여 각각 38%, 50%의 간 중량이 감소율을 보였다. 한편 간 조직내의 총지질, 중성지질 함량이 정상식이군에 비해서 고지방식이군에서 각각 약186.7%, 115.1% 유의적으로 증가하였으며, 한편 HFD+TAWE 투여 군에서 정상식이군 대비 총지질이 27.7%, 중성지방이 31.4% 증가하였으며, HFD+TAEE 투여군에서는 총지질이 9.9%, 중성지질이 8.5% 증가하였다. 이상의 결과로 TAWE와 TAEE 모두 간조직의 총지질 및 중성지질 수준을 유의하게 저하시키는 효과가 있었으며, 특히 밀순 에탄올 추출물은 고지방식이 의존적 간조직의 지질 축적을 정상대조군 수준으로 억제하는 뛰어난 효과가 있는 것으로 사료된다.
- 또한 혈중 LDL콜레스테롤 함량도 총콜레스테롤 수준과 비례하여 고지방식이에 의해 증가하였으며, TAWE 투여군과 TAEE 투여군에서 유의적으로 감소하였다. 한편 혈중 HDL-콜레스테롤 함량은 정상식이 대조군과 비교할 경우 고지방식이 대조군에서 유의하게 감소하는 경향을 보였고, TAWE 투여군과 TAEE 투여군에서는 정상식이군의 수준으로 혈중 HDL-콜레스테롤 함량이 유의하게 증가하였다. 이상의 결과로부터 고지방식이에 의해 야기되는 혈중 지질 함량이 TAEE 및 TAWE 투여에 의해 억제되며, 혈중 HDL-콜레스테롤 수준이 개선되는 효과가 있음을 확인하였다.
- 혈중 총콜레스테롤 함량은 고지방식이에 의해서 151.32±9.83 mg/dl으로 증가하지만 HFD+TAWE 투여군과 HFD+TAEE 투여군에서는 128.32±7.22 mg/dl과 125.94±5.63 mg/dl으로 고지방식이에 의해 증가된 혈중 총 콜레스레롤 수준이 유의적으로 감소하였다.
후속연구
- 일반적으로 고지혈증 및 간지방증 환자의 경우 심각한 지질축적과 동반되는 대사성 질환의 합병증으로 효과적인 치료요법이 요구된다. 또한 비알콜성 지방간 환자의 경우 현재 효과적인 치료제가 없기 때문에 밀순 물 추출물 및 밀순 에탄올 추출물은 간지방증 환자를 치료 또는 치료보조제로써 유용한 후보물질이 될 수 있을 것으로 사료된다.
- 28) 이를 토대로 AST와 ALT의 비율에서 정상대조군과 비교하면 모든 실험군에서 유의적인 차이는 보이지 않았다. 이상의 결과로 고지방식이로 야기된 간기능 손상이 밀순 에탄올 추출물이 효과적으로 개선할 수 있을 것으로 사료된다.
- 1d). 이상의 결과로 밀순 에탄올 추출물이 고지방식이로 유도되는 지방간증의 개선에 효과적인 기능성소재로 가치가 높을 것으로 사료된다.
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