2010년 진주시 농산물도매시장에 구입한 감귤에서 이상증상이 발생하였다. 상처 난 감귤 껍질이 수침상으로 물러지고 부패하기 시작하였다. 병징으로부터 분리한 감자한천 배지에서 곰팡이는 연한 갈색의 균총과 검은색의 포자낭을 형성하였다. 균사생육 적온은 $30^{\circ}C$이었으나 $37^{\circ}C$에서도 생육이 가능하였다. 포자낭경은 흰색에서 갈색이며 크기는 $6{\sim}20\;{\mu}m$ 이었다. 포자낭은 흰색에서 검은색으로 변하며 구형 또는 반구형으로 크기는 $40{\sim}200\;{\mu}m$이었다. 주축은 구형 또는 반구형으로 크기는 $85{\sim}120\;{\mu}m$이었다. 포자낭포자는 담갈색, 단포이며 구형으로 크기는 $4{\sim}10\;{\mu}m$이었다. 이상과 같은 병원균의 균학적 특징, ITS염기서열 유사도, 병원성 검정 결과, 본 병해를 Rhizopus oryzae에 의한 감귤 무름병으로 명명할 것을 제안한다.
2010년 진주시 농산물도매시장에 구입한 감귤에서 이상증상이 발생하였다. 상처 난 감귤 껍질이 수침상으로 물러지고 부패하기 시작하였다. 병징으로부터 분리한 감자한천 배지에서 곰팡이는 연한 갈색의 균총과 검은색의 포자낭을 형성하였다. 균사생육 적온은 $30^{\circ}C$이었으나 $37^{\circ}C$에서도 생육이 가능하였다. 포자낭경은 흰색에서 갈색이며 크기는 $6{\sim}20\;{\mu}m$ 이었다. 포자낭은 흰색에서 검은색으로 변하며 구형 또는 반구형으로 크기는 $40{\sim}200\;{\mu}m$이었다. 주축은 구형 또는 반구형으로 크기는 $85{\sim}120\;{\mu}m$이었다. 포자낭포자는 담갈색, 단포이며 구형으로 크기는 $4{\sim}10\;{\mu}m$이었다. 이상과 같은 병원균의 균학적 특징, ITS 염기서열 유사도, 병원성 검정 결과, 본 병해를 Rhizopus oryzae에 의한 감귤 무름병으로 명명할 것을 제안한다.
Soft rot caused by Rhizopus oryzae occurred on unshiu orange (Citrus unshiu Marc.) sampled from commercial markets in Jinju, Korea, 2010. The first symptom of soft rot on orange is a water-soaked appearance of the affected tissue. The infected parts later disintegrated into a mushy mass of disorgani...
Soft rot caused by Rhizopus oryzae occurred on unshiu orange (Citrus unshiu Marc.) sampled from commercial markets in Jinju, Korea, 2010. The first symptom of soft rot on orange is a water-soaked appearance of the affected tissue. The infected parts later disintegrated into a mushy mass of disorganized cells followed by rapid softening of the diseased tissue. The lesion on orange was rapidly softened and rotted, then became brown or dark brown. Optimum temperature for mycelial growth of the causal fungus on potato dextrose agar was $30^{\circ}C$ and growth was still apparent at $37^{\circ}C$. Sporangiophores were $6{\sim}20\;{\mu}m$ in diameter. Sporangia were globose and $40{\sim}200\;{\mu}m$ in size. The color of sporangia was brownish-grey to blackish-grey at maturity. Sporangiospores were sub-globose, brownish- black streaked and $4{\sim}10\;{\mu}m$ in size. Columella were globose to sub-globose and $85{\sim}120\;{\mu}m$ in size. On the basis of mycological characteristics, pathogenicity test, and the ITS sequence analysis, the causal fungus was identified as Rhizopus oryzae. To our knowledge, this is the first report of soft rot caused by R. oryzae on unshiu orange in Korea.
Soft rot caused by Rhizopus oryzae occurred on unshiu orange (Citrus unshiu Marc.) sampled from commercial markets in Jinju, Korea, 2010. The first symptom of soft rot on orange is a water-soaked appearance of the affected tissue. The infected parts later disintegrated into a mushy mass of disorganized cells followed by rapid softening of the diseased tissue. The lesion on orange was rapidly softened and rotted, then became brown or dark brown. Optimum temperature for mycelial growth of the causal fungus on potato dextrose agar was $30^{\circ}C$ and growth was still apparent at $37^{\circ}C$. Sporangiophores were $6{\sim}20\;{\mu}m$ in diameter. Sporangia were globose and $40{\sim}200\;{\mu}m$ in size. The color of sporangia was brownish-grey to blackish-grey at maturity. Sporangiospores were sub-globose, brownish- black streaked and $4{\sim}10\;{\mu}m$ in size. Columella were globose to sub-globose and $85{\sim}120\;{\mu}m$ in size. On the basis of mycological characteristics, pathogenicity test, and the ITS sequence analysis, the causal fungus was identified as Rhizopus oryzae. To our knowledge, this is the first report of soft rot caused by R. oryzae on unshiu orange in Korea.
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문제 정의
균학적 특성, 병원성 검정, ITS rDNA 염기서열 비교분석 등을 바탕으로 본 연구에서 보고한 이 병을 우리나라의 감귤에서 지금까지 보고되지 않은 Rhizopus oryzae Went & Prinsen Geerligs에 의한 감귤 무름병으로 명명할 것을 제안한다.
oryzae에 의한 감귤 무름병 이외 다른 어떤 작물에도 발생 보고되지 않았다(한국식물병리학회, 2009). 따라서 본 연구에서는 R. oryzae에 의한 감귤 무름병 발생 보고하기 위해 병징을 관찰하고 병원균의 균학적 특징과 병원성 검정을 실시하였다.
제안 방법
HQ897686). MEGA4 프로그램을 사용하여 Mucor miehei(Accession No. AF198253)의 ITS rDNA 염기서열을 그룹외 표본으로 하여 계통발생을 비교분석하였다(Abe 등, 2006). Fig.
농산물도매시장에서 감귤 한 상자를 구입하여 실내에 둔 후 상자 내 감귤의 부패 증상을 관찰하였다. 병해 발생은 실내온도가 올라가고 습도가 적당히 유지되는 상자에 보관중일 때 무름병이 쉽게 발생하며 주로 상처가 난 과실에서 먼저 무름병이 발생하였다.
병원균 동정을 확인하기 위해 ITS(internal transcribed spacer) rDNA 부분을 2개의 프라이머 ITS1(5'-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3')과 ITS4(5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3')로 증폭하였고 pGEMT Easy vector에 클로닝한 후 염기서열(총 627 bp)을 결정하여(White 등, 1997) GenBank에 등록하였다(Accession No. HQ897686).
병원성을 확인하기 위하여 농산물도매시장에서 구입한 건전한 감귤을 1% 차아염소산나트륨(NaOCl)으로 표면 살균한 다음 멸균수로 3회 세척하여 완전히 말렸다. 접종상으로 준비해 둔 3개의 플라스틱 상자(29×22×15 cm)에 표면 소독한 감귤을 넣고 상처접종 9개, 무상처 접종 3개를 준비하여 총 12개로 3회 인공접종 하였다.
병징이 뚜렷한 과실을 채집하여 습실 처리한 후 포자낭포자가 형성된 과실로부터 핀셋으로 포자낭 한 개씩 떼어 내어 감자한천배지(Potato dextrose agar: PDA) 위에 30개를 옮긴 다음 30℃ 항온기에서 3일간 배양하였다. 배양한 균사 끝부분을 5×5 mm 크기로 잘라내어 PDA배지 위에 다시 옮겨 30℃ 항온기에서 7일간 배양한 다음 시험균주로 사용하였다.
p>2010년 12월 진주시 농산물도매시장에서 판매하기 위해 저장 중인 감귤에서 물러지고 부패되는 증상을 발견하였다. 부패가 진행 중인 감귤의 표면에서 솜털 같은 곰팡이가 발생하였고 물러지는 이상증상을 관찰하였다. 이러한 증상을 보이는 감귤을 채집하여 실험실에서 병원균을 분리, 배양한 후 균학적 특징과 병원성을 검정하였다.
부패가 진행 중인 감귤의 표면에서 솜털 같은 곰팡이가 발생하였고 물러지는 이상증상을 관찰하였다. 이러한 증상을 보이는 감귤을 채집하여 실험실에서 병원균을 분리, 배양한 후 균학적 특징과 병원성을 검정하였다. 병원균의 동정을 명확히 하고자 ITS(internal transcribed spacer) rDNA 염기서열 분석을 하였고 그 결과 Rhizopus oryzae Went & Prinsen Geerligs로 동정되었다.
감귤 껍질표면에 3 mm 크기로 상처를 내고서 붓으로 현탁액 1방울(30 µl) 접종하였다. 접종 후 플라스틱 상자 안에 일정한 습도가 유지될 수 있도록 필터 페이프를 5장씩 3곳에 깔고 일회용 페트리디쉬 위에 접종한 과실을 올려놓고 멸균수 300 ml 붓고 뚜껑을 닿은 후 30℃ 항온기에 넣고서 발병유무를 조사하였다. 접종 3일후 상처 접종한 감귤 표면이 수침상으로 물러지면서 부패하기 시작하였으며 시간이 경과함에 따라 자연 발생한 병징과 동일하였다(Fig.
접종상으로 준비해 둔 3개의 플라스틱 상자(29×22×15 cm)에 표면 소독한 감귤을 넣고 상처접종 9개, 무상처 접종 3개를 준비하여 총 12개로 3회 인공접종 하였다.
대상 데이터
p>2010년 12월 진주시 농산물도매시장에서 판매하기 위해 저장 중인 감귤에서 물러지고 부패되는 증상을 발견하였다. 부패가 진행 중인 감귤의 표면에서 솜털 같은 곰팡이가 발생하였고 물러지는 이상증상을 관찰하였다.
2010년 진주시 농산물도매시장에 구입한 감귤에서 이상증상이 발생하였다. 상처 난 감귤 껍질이 수침상으로 물러지고 부패하기 시작하였다.
Phylogenetic tree using ITS sequences showing relationships among Rhizopus oryzae isolated from Citrus unshiu and closely relative Rhizopus species. DNA sequences from the NCBI nucleotide database were aligned using ClustalW and a phylogenetic tree was constructed using MEGA4 with neighbor-joining method and Tajima-Nei distance model. Numbers above the branches indicate the bootstrap values.
성능/효과
1C와 1D). 병원균을 재분리하여 동정한 결과 R. oryzae에 의한 감귤 무름병과 같은 병원균이었다. 무상처 접종한 감귤에서는 조사기간 동안 병이 발생하지 않았다.
병원균의 동정을 명확히 하고자 ITS(internal transcribed spacer) rDNA 염기서열 분석을 하였고 그 결과 Rhizopus oryzae Went & Prinsen Geerligs로 동정되었다.
조사기간 동안 접합포자는 관찰되지 않았다. 이상과 같이 감귤에서 발생한 병원균을 분리 배양하여 균학적 특성을 조사한 결과 Lunn(1977)이 기술한 R. oryzae와 잘 일치하였다.
후속연구
포자낭포자는 담갈색, 단포이며 구형으로 크기는 4~10 µm이었다. 이상과 같은 병원균의 균학적 특징, ITS 염기서열 유사도, 병원성 검정 결과, 본 병해를 Rhizopus oryzae에 의한 감귤 무름병으로 명명할 것을 제안한다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
Rhizopus oryzae 균사 적정 생육 온도는?
병징으로부터 분리한 감자한천 배지에서 곰팡이는 연한 갈색의 균총과 검은색의 포자낭을 형성하였다. 균사생육 적온은 30°C이었으나 37°C에서도 생육이 가능하였다. 포자낭경은 흰색에서 갈색이며 크기는 6~20 µm이었다.
Rhizopus spp.가 분포와 발생하는 지역은?
Rhizopus spp.는 전 세계적으로 널리 분포하고 있으며, 접합균류 중 가장 일반적인 병원균의 하나로서 따뜻한 지역에서 주로 발생한다고 보고되어 있다(Domsch, 1980). Rhizopus는 전 세계적으로 수확 후 채소 및 과일, 화훼류의 다육질 식물에 발병하며 저장, 운반, 판매 중에 발생한다(Agrios, 2005).
R. oryzae의 병징은?
과실이 수침상으로 물러지면서 부패되어지고 점차 병징이 진전되어 병반부위에는 백색의 균사가 자라면서 균사 끝부분에 작은 검은색의 포자낭이 많이 형성되었다(Fig. 1A). 과실 내부가 연화되어 상품성이 없게 되었다(Fig. 1B).
참고문헌 (7)
권진혁, 박창석. 2002. Rhizopus stolonifer에 의한 감귤 무름병.한국균학회지 30: 166-169.
Abe, A., Oda, Y., Asano, K. and Sone, T. 2006. The molecular phylogeny of the genus Rhizpus based on rDNA sequences. Biosci. Biotechnol. Biochem. 70: 2387-2393.
Agrios, G. N. 2005. Plant Pathology. 5th ed.. Academic Press. 922 pp.
Domsch, K. H., Gams, W. and Anderson, T. H. 1980.Compendium of Soil Fungi. Vol. 1. Academic Press. 859 pp.
Lunn, J. A. 1977. Rhizopus oryzae. CMI descriptions of pathogenic fungi and bacteria. No. 525. Commonwealth Mycological Institute, Ferry Lane, Kew, Surrey, England.
White, T. J., Bruns, T., Lee, S. and Taylor, J. W. 1990. Amplification and direct sequencing of fungal ribosomal RNA genes for phylogenetics. In : PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, ed. by M. A. Innis, D. H. Gelfand, J. J. Sninsky, and T. J. White, pp. 315-322. Academic Press,Inc., New York, USA.
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