본 연구에서는 양식 넙치의 주요 어병세균인 E. tarda, V. ichthyoenteri와 S. iniae에 대한 국내산 꿀벌로부터 분리한 봉독의 항균활성을 검색하였다. 그 결과 봉독은 폐사 납치로부터 분리한 그람음성균인 E. tarda, V. ichthyoenteri와 양성균인 S. iniae 모두에서 강한 항균 활성을 나타내는 것으로 확인되었다. 봉독은 E. tarda와 V. ichthyoenteri에 대하여 최소발육저지 농도는 각각 17.6 ${\mu}g$/ml, 1.76 ${\mu}g$/ml 였으며, 최소살균 농도는 34.6 ${\mu}g$/ml, 6.8 ${\mu}g$/ml, 항균력 지속시간은 5시간, 6시간으로 측정되었다. 또한 그람 양성균인 S. iniae에 대한 최소발육저지농도는 3.49 ${\mu}g$/ml, 최소살균농도는 11 ${\mu}g$/ml였으며, 항균력지속시간은 7시간으로 봉독은 매우 강한 증식 및 살균 억제력을 보였다. 뿐만 아니라, 다양한 pH 조건하에서도 향균활성이 유지되는 것으로 확인되었다.
본 연구에서는 양식 넙치의 주요 어병세균인 E. tarda, V. ichthyoenteri와 S. iniae에 대한 국내산 꿀벌로부터 분리한 봉독의 항균활성을 검색하였다. 그 결과 봉독은 폐사 납치로부터 분리한 그람음성균인 E. tarda, V. ichthyoenteri와 양성균인 S. iniae 모두에서 강한 항균 활성을 나타내는 것으로 확인되었다. 봉독은 E. tarda와 V. ichthyoenteri에 대하여 최소발육저지 농도는 각각 17.6 ${\mu}g$/ml, 1.76 ${\mu}g$/ml 였으며, 최소살균 농도는 34.6 ${\mu}g$/ml, 6.8 ${\mu}g$/ml, 항균력 지속시간은 5시간, 6시간으로 측정되었다. 또한 그람 양성균인 S. iniae에 대한 최소발육저지농도는 3.49 ${\mu}g$/ml, 최소살균농도는 11 ${\mu}g$/ml였으며, 항균력지속시간은 7시간으로 봉독은 매우 강한 증식 및 살균 억제력을 보였다. 뿐만 아니라, 다양한 pH 조건하에서도 향균활성이 유지되는 것으로 확인되었다.
In this study, we examined antimicrobial activity of the bee venom isolated from honeybee (Apis mellifera L.) against fish pathogenic bacteria, Edwardsiella tarda, Vibrio ichthyoenteri and Streptococcus iniae of cultured olive flounder, Paralichthys olvaceus. The bee venom exhibited significant anti...
In this study, we examined antimicrobial activity of the bee venom isolated from honeybee (Apis mellifera L.) against fish pathogenic bacteria, Edwardsiella tarda, Vibrio ichthyoenteri and Streptococcus iniae of cultured olive flounder, Paralichthys olvaceus. The bee venom exhibited significant antimicrobial activity against the both Gram-negative bacteria, E. tarda and V. ichthyoenteri and Gram-positive bacteria, S. iniae. Minimum inhibitory concentration (MIC) and minimun bactericidal concentration (MBC) of the bee venom were 17.6 ${\mu}g$/ml 34.6 ${\mu}g$/ml against E. tarda., and 1.76 ${\mu}g$/ml, 6.8 ${\mu}g$/ml against V. ichthyoenteri, respectively. MIC and MBC of the bee venom were 3.49 ${\mu}g$/ml, 11 ${\mu}g$/ml, respectively against S. iniae. The postantibiotic effect (PAE) of the bee venom was 5 hr, 6 hr, and 7 hr against E. tarda, V ichthyoenteri, and S. iniae, respectively. In addition, its antimicrobial activity was stable under various pH conditions. According to these results, the bee venom showed the excellent antimicrobial activity against the tested pathogenic bacteria.
In this study, we examined antimicrobial activity of the bee venom isolated from honeybee (Apis mellifera L.) against fish pathogenic bacteria, Edwardsiella tarda, Vibrio ichthyoenteri and Streptococcus iniae of cultured olive flounder, Paralichthys olvaceus. The bee venom exhibited significant antimicrobial activity against the both Gram-negative bacteria, E. tarda and V. ichthyoenteri and Gram-positive bacteria, S. iniae. Minimum inhibitory concentration (MIC) and minimun bactericidal concentration (MBC) of the bee venom were 17.6 ${\mu}g$/ml 34.6 ${\mu}g$/ml against E. tarda., and 1.76 ${\mu}g$/ml, 6.8 ${\mu}g$/ml against V. ichthyoenteri, respectively. MIC and MBC of the bee venom were 3.49 ${\mu}g$/ml, 11 ${\mu}g$/ml, respectively against S. iniae. The postantibiotic effect (PAE) of the bee venom was 5 hr, 6 hr, and 7 hr against E. tarda, V ichthyoenteri, and S. iniae, respectively. In addition, its antimicrobial activity was stable under various pH conditions. According to these results, the bee venom showed the excellent antimicrobial activity against the tested pathogenic bacteria.
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문제 정의
pH 2.0에서부터 pH 11.0가지 조절한 봉독에서 pH 에 따른 봉독의 항균활성의 변화를 알아보고자 하였다. 그 결과 Table 4에서 보는 바와 같이 pH변동에 따른 봉독의 항균활성 차이가 전혀 관찰되지 않았다.
, 2010b). 따라서 본 연구에서는 폐사한 넙치로부터 분리한 Edwardsiella tarda, Vibrio ichthyoenteri, Streptococcus iniaee 대한봉독의 항균활성을 조사하여 양식어류에 대한 질병 예방 및 치료제로서의 가능성을 탐색하고자 하였다.
본 연구에서는 양식 넙치의 주요 어병세균인 E. tarda, V. ichthyoeMeri와 S. iniae에 대한 국내산 꿀벌로부터 분리한 봉독의 항균활성을 검색하였다. 그 결과 봉독은 폐사 납치로부터 분리한 그람음성균인 E.
가설 설정
a) The concentration of honeybee venom loaded on disc was 10 μg/disc, respectively. b) Diameter of inhibition zone: 10~15 mm; +, 16 ~20; ++, 21 ~25; +++
제안 방법
1% NaCl이 첨가된 BHI배지로 봉독을 희석한 후무균 여과하여 액체배지희석법에 준하여 단계적으로 희석한 후 2 X 106 CFU/well이 되도록 조절한 각각의 균주에 접종하여 25℃에서 24시간 동안 배양하였다. 각각의 배양액 100ul를 새로운 1% NaCl BHI배지에 접종하여 25℃에서 24시간 동안 배양한 다음 흡광도 (540nm)를 측정하여 증식이 일어나지 않은 농도를 최소살균농도로 나타내었다.
5가 되도록 멸균생리식염수로 현탁 조정하였다. BHI 평판배지에 현탁균액 200 ill 씩을 골고루 도말한 다음, 봉독이 함유된 paper disc를 올려놓고 25℃에서 24~48시간동안 배양한 후 배지위에 형성된 저지환을 vernier caliper로 측정하였다.
5 및 1 ㎍이 되도록 하였다. E. tarda, S. iniae 그리고 V. ichthyoenteri는 각각 MacFaland No. 0.5가 되도록 멸균생리식염수로 현탁 조정하였다. BHI 평판배지에 현탁균액 200 ill 씩을 골고루 도말한 다음, 봉독이 함유된 paper disc를 올려놓고 25℃에서 24~48시간동안 배양한 후 배지위에 형성된 저지환을 vernier caliper로 측정하였다.
각각의 배양액 100ul를 새로운 1% NaCl BHI배지에 접종하여 25℃에서 24시간 동안 배양한 다음 흡광도 (540nm)를 측정하여 증식이 일어나지 않은 농도를 최소살균농도로 나타내었다.
1999). 각각의 접종 균은 2 x 106 CFU/well이 되도록 조절하여 봉독 시료와 함께 25℃에서 24시간 동안 배양한 후, 육안 및 현미경으로 균의 성장을 관찰하였고 흡수파장 540nm에서 흡광도를 측정하여 최소억제농도로 결정하였다.
봉독은 멸균 증류수에의 희석한 후 무균여과하여paper disc(직경 8 mm, Advantec, Japan)에 50 μ1씩흡습시킨 후에 크린벤치에서 자연건조하였으며, 이때 disc당 봉독의 함유량은 50, 25, 10, 5, 2.5 및 1 ㎍이 되도록 하였다. E.
봉독의 pH변화에 따른 항균활성의 안정성은 HC1 과 NaOH를 사용하여 조절된 각각의 용액에 봉독을 희석한 다음 상온에서 24시간 동안 처리한 다음 pH 7.0으로 중화하여 항균력을 측정하였다.
대상 데이터
본 연구에서 사용한 봉독은 국내 양봉농가에서 사육되는 이탈리안계통의 서양종 꿀벌(&, is mellifera. L)을 봉독채집장치를 사용하여 채집한 후 봉독의 간이정제법을 이용하여 순수한 봉독만을 정제한 봉독을 실험에 사용하였다(한 등 2005). 어류 병원성 세균은폐사한 넙치로부터 분리 동정한 Edwardsiella tarda FP5060, Vibrio ichthyoenteri FP4004와 Streptococcus iniae FP5228을 국립수산과학원 전략양식연구소로부터 분양받아 1% NaCl이 첨가된 brain heart infiision(BHI) broth에 접종하고 25℃에서 100 rpm으로 진탕하면서 18시간 배양하여 실험에 사용하였다.
L)을 봉독채집장치를 사용하여 채집한 후 봉독의 간이정제법을 이용하여 순수한 봉독만을 정제한 봉독을 실험에 사용하였다(한 등 2005). 어류 병원성 세균은폐사한 넙치로부터 분리 동정한 Edwardsiella tarda FP5060, Vibrio ichthyoenteri FP4004와 Streptococcus iniae FP5228을 국립수산과학원 전략양식연구소로부터 분양받아 1% NaCl이 첨가된 brain heart infiision(BHI) broth에 접종하고 25℃에서 100 rpm으로 진탕하면서 18시간 배양하여 실험에 사용하였다. 양성대조군으로 시판용 항생제인 ampicillin(BBL, USA)과 oxytetracycline(BBL, USA)을 구입하여 사용하였다.
이론/모형
봉독을 1% NaCl이 첨가된 BHI배지로 희석한 후무균 여과하여 액체배지희석법에 준하여 단계적으로 희석하여 최소발육저지농도를 구하였다(Wu and Hancock, 1999). 각각의 접종 균은 2 x 106 CFU/well이 되도록 조절하여 봉독 시료와 함께 25℃에서 24시간 동안 배양한 후, 육안 및 현미경으로 균의 성장을 관찰하였고 흡수파장 540nm에서 흡광도를 측정하여 최소억제농도로 결정하였다.
어병균주에 대한 봉독의 살균력 지속시간을 측정하기 위하여 1 X 108 CFU/ml로 조절한 균주에 2 X MIC값 농도의 봉독과 함께 1시간 동안 배양한 후원심분리와 배지 희석법을 사용하여 봉독성분을 제거하였다 (Matthew and Levison, 2004). 이후 새로운 배지로 교환하여 25℃ 배양기에서 배양하며 2시간간격으로 균수를 측정하였다 이때 PAE 수치가 클수록 항균 지속 효과가 우수하다고 할 수 있으며, PAE 를 구하는 식은 아래와 같다.
성능/효과
iniae에 대한 국내산 꿀벌로부터 분리한 봉독의 항균활성을 검색하였다. 그 결과 봉독은 폐사 납치로부터 분리한 그람음성균인 E. tarda, V. ichthyoenteri와 양성균인 S. iniae 모두에서 강한 항균 활성을 나타내는 것으로 확인되었다. 봉독은 E.
따라서, 봉독은 기존항생제와는 달리 E. tarda, V. ichthyoeeeri와 S. iniae에 대해 모두 높은 항균력을 갖고 있는 것으로 확인되었으며, 정균작용은 물론살균작용을 나타내므로 그람양성세 균과 음성세균이 복합적으로 어류에 감염되어 발병하는 어류의 질병의 예방과 치료에 유용하게 사용될 수 았을 것으로 사료된다.
(Table 2). 또한, macrolide- lincosamide-streptogramin계항생제 인 erythromycin과 spiramycin 등은 E. tarda와 V. ichthyoenleri에 대한 항균효과는 낮으며(>100 ㎍/ml] 각각), 또한 linomycin에서도 매우 낮은 항균효과를 나타내었다. 이와 같이 기존 항생제는 그람양성균과 음성균의 종류에 따라 항균효과가 크게 발생하며 항생제 내성으로 인해 질병의 치료와 예방을 어렵게 하고있다(Choi et al.
iniae 모두에서 강한 항균 활성을 나타내는 것으로 확인되었다. 봉독은 E. tarda와 V. ichthyoenteri에 대하여 최소발육저지농도는 각각 17.6 ㎍/ml, 1.76 ㎍/ml였으며, 최소살균농도는 34.6 ㎍/ml, 6.8 ㎍/ml, 항균력 지속시간은 5시간 6시간으로 측정되었다 또한 그람 양성균인 S. iniae에 대한 최소발육저지농도는 3.49 Wml, 최소살균농도는 11 ㎍/ml이였으며, 항균력지속시간은 7시간으로 봉독은 매우 강한 증식 및 살균 억제력을 보였다. 뿐만 아니라, 다양한 pH 조건하에서도 항균 활성이 유지되는 것으로 확인되었다.
iniae에대한 최소발육저지농도에 있어 페니실린계인 ampicillin, amoxicillin 등은 >100 ㎍/ml라고 보고하였다. 봉독은 table 2에서 보는 바와 같이 E. tarda, S. iniae와 V. ichthyoenteri에 대한 최소발육저지농도가 1.76—17.6 ㎍/ml로 이들 항생제보다 강한 항균활성을 가지고 있음을 알 수 있었다 E. *와 S iniae에서 항균력이 낮게나타나는 퀴논계(quinolones) 항생제인 flumequine(>50 //g/ml, >100 /㎍/ml 각각)과 pefloxacin(>50㎍/ml, >100㎍/ml 각각)인 보다 봉독이 강한 항균효과를 나타내었다
최소살균농도를 Table 2에 나타내었다. 봉독의 S. iniae와 V. ichthyoewteri는 각각 3.49 ㎍/ml와 1, 76 ㎍/ml 이였으며 E.tarda에 대한 최소발육저지농도는 17.6 ㎍/ml로 확인되었다 최소살균농도는 E. tarda는 34.9 ㎍/ml, V. ichthyoenferi는 6.8㎍/mll 이며 S. iniae는 11㎍/ml로 강한 살균작용을 나타내었다.
49 Wml, 최소살균농도는 11 ㎍/ml이였으며, 항균력지속시간은 7시간으로 봉독은 매우 강한 증식 및 살균 억제력을 보였다. 뿐만 아니라, 다양한 pH 조건하에서도 항균 활성이 유지되는 것으로 확인되었다.
최소발육저지농도의 2배 농도로 세균에 처리하여 1시간 동안 반응을 시킨 후 봉독을 제거했을 때 항균효과는 E. tarda와 V. ichthyoenteri는 각각 5시간 6시간, S. iniae sp는 7시간 동안 균의 생장이 억제됨을 확인하였다. 이와 같은 결과로 봉독을 제거한 이후에도 항균효과가 비교적 길게 지속되는 것으로 추측되었다.
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