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문제 정의
- 따라서 본 연구에서는 강독형 NDV인 Kr005주를 Vero 세포에서 연속 계대하여 증식성과 CPE 형성이 뚜렷하게 나타나는 Vero 세포 적응 NDV 주를 작성하였다. 또한 작성된 NDV 주에 대하여 Vero 세포에서의 바이러스 증식성, CPE 형성, 내열성, 바이러스 독력 등 생물학적 성상을 조사하여 Kr005주와 비교 분석하였다.
제안 방법
- HA titers of the NDV Kr005 strain after each serial passage in Vero cells. Culture fluids sampled after each of 55 serial passage in Vero cells were harvested on 5 days post-inoculation and tested for HA activity by microtiter HA test.
- Kr005 주를 Vero 세포에서 연속적으로 반복 계대하였다. 즉, Vero 세포 monolayer에 Kr005 주를 1.
- 바이러스 독력은 Alexander(1988)가 제시한 방법에 따라 SPF 종란에서의 평균치사시간(mean death time, MDT)을 측정하여 결정하였다. MDT는 100% 종란 폐사가 나타난 바이러스 희석액 중 최고 희석 배수에서 측정한 종란 평균 치사 시간으로 결정하였다. 바이러스의 독력은 MDT가 60시간이하일 경우, 강독(velogenic), 60시간 이상 90시간인 경우 중 간독(mesogenic), 90시간 이상일 경우 약독(lentogenic)으로 판정하였다.
- , 2008). RT-PCR에 의해 증폭된 DNA들은 순수 정제하여 direct sequencing을 실시하였으며, sequence data는 Vector NTI(Invitrogen, Carlsbad, CA) and BioEdit software(http://www.mbio.ncsu.edu/BioEdit/ bioedit.html)를 사용하여 alignment와 editing 과정을 거친 후 염기서열을 분석하였다.
- Vero 세포 배양을 위하여 항생제(GibcoTM antibiotic-antimycotic solution, Invitrogen Corp, Grand Island, NY, USA)이 첨가된 D-MEM 용액(Dulbecco's Medium, GibcoBRL, Grand Island, NY, USA)을 사용하였으며, 이때 fetal bovine serum (FBS, GibcoBRL)을 증식 배지에는 10%, 유지 배지에는 2%되게 첨가하였다.
- Vero 세포에 적응시키는 과정에서 NDV의 유전적 변화가 일어났는지 여부를 조사하기 위하여 Kr005 주 및 Kr005/V 주의 HN 단백질과 F 단백질의 전체 유전자 ORF 염기서열을 비교 분석하였다. 그 결과, Kr005/V 주의 HN 단백질의 경우, 443번째 아미노산에서만 변이(T에서 S)가 관찰되었으며, 주요 항원 부위를 포함한 나머지 부위에서의 유전적 변화는 관찰되지 않았다(Table 2).
- Vero 세포에 적응시킨 Kr005/V 주의 내열성 및 바이러스 독력 등 생물학적 특성을 조사하고, Kr005 주와 비교 분석하였다(Table 1). 바이러스 내열성 여부를 조사하기 위하여 56℃, 30분간 열처리한 결과, Kr005/V 주의 경우 열처리 전과 동일한 64배의 HA역가를 유지하고 있었으며, 열처리한 NDV를 종란에 접종했을 때에도 바이러스가 증식하였다.
- Vero 세포에 적응시킨 NDV의 유전적 변이 여부를 조사하기 위하여 HN과 F단백질 유전자 전체 open reading frame (ORF) 염기서열을 분석하였다. 이를 위하여 바이러스로부터 직접 RNA를 추출한 다음 one-step RT-PCR kit(Qiagen) 를 사용하여 RT-PCR를 실시하였다.
- Vero 세포적응 NDV주를 작성하기 위하여, Kr005주를 Vero 세포에 연속 계대하였다. 그 결과, Kr005 주를 5대 연속 계대할 때까지 CPE는 관찰되지 않았으며, 배양 5일째 채취한 배양액에서도 HA가 관찰되지 않았다.
- 바이러스 중화항체 역가는 well 내 CPE 형성이 완전히 억제되는 최대 희석 배수의 역수로 하였다. 각 검사 혈청에 대한 바이러스 중화 시험은 3번씩 반복하여 실시하였다.
- 그 후 1% 닭 적혈구 부유액을 전체 well에 well당 25 μL씩 첨가한 다음 실온에서 40분간 반응시킨 다음 판독하였다.
- 1 mL씩 희석 당 8개 well 씩 첨가한 다음 5일간 37℃ 배양기에서 배양하였다. 그 후 CPE가 관찰된 well의 경우 바이러스가 증식한 것으로 간주 하였다. 바이러스의 증식 역가는 접종 well중 50%를 감염시킬 수 있는 바이러스액 희석 배수의 역수 즉 50% tissue culture infectious dose(TCID50)로 표시하였으며, Reed and Muench (1938)의 방법에 따라 계산하였다.
- 그 후 Vero 세포 또는 CEF 세포를 단층 형성시킨 96 well microplate에 바이러스-혈청 반응액을 well당 100 μL씩 첨가하여 37℃ 배양기에서 5일간 배양하면서 CPE 출현 여부를 관찰하였다.
- 1 mL 씩 희석당 종란 5개씩 요양막강(allantoic cavity)내로 접종한다음 5일간 37℃에서 배양하였다. 그 후 배양 종란의 요양막강액(allantoic cavity fluid)을 무균적으로 채취하여 닭 적혈구 응집능(HA) 여부를 조사하여 HA양성인 경우 NDV가 증식한 것으로 간주하였다. 바이러스의 증식 역가는 접종 종란의 50%를 감염시킬 수 있는 바이러스 희석 배수의 역수 즉 50% egg infectious dose(EID50)로 표시하였으며, Reed and Muench (1938)의 방법에 따라 계산하였다.
- 0 multiplicity of infection(MOI)되게 접종하여 37℃에서 1시간 동안 흡착시켰다. 그 후 접종액을 제거하고 유지 배지를 첨가하여 37℃ 배양기에서 5일간 배양하면서 CPE 출현 여부를 관찰하였다. 접종 5일 후 세포배양 상층액만을 회수하여 새로운 Vero 세포에서 동일한 방법으로 계대 배양을 반복 실시하였다.
- Kr005/V 주와 Vero 세포를 이용하여 닭 혈청 중 존재하는 NDV 중화항체를 검출할 수 있는 지 96 well microplate에서 beta method 방법으로 조사하였다. 동일한 검사 방법으로 Kr005 주와 CEF 세포를 사용하여 측정한 바이러스 중화항체 역가와 비교하였다. NDV 백신 접종을 실시한 농장 유래닭 혈청 10점을 대상으로 Kr005/V 주로 NDV 중화항체 역가를 측정하였을 때 바이러스 중화항체 역가(log2)는 3.
- 따라서 본 연구에서는 강독형 NDV인 Kr005주를 Vero 세포에서 연속 계대하여 증식성과 CPE 형성이 뚜렷하게 나타나는 Vero 세포 적응 NDV 주를 작성하였다. 또한 작성된 NDV 주에 대하여 Vero 세포에서의 바이러스 증식성, CPE 형성, 내열성, 바이러스 독력 등 생물학적 성상을 조사하여 Kr005주와 비교 분석하였다.
- 바이러스의 독력을 평가하기 위하여 SPF 종란에서 MDT를 측정하였다. 그 결과 Kr005 주의 MDT는 49.
- 본 연구를 통하여 Vero 세포에서 강독형 NDV인 Kr005주를 55대 연속 계대하여 Vero 세포에 적응된 Kr005/V 주를 작성하였다. Kr005/V 주는 Vero 세포에서 107.
- 25% 트립신 용액으로 소화하여 CEF 세포를 채취하여 106/mL 농도로 조정하여 세포배양에 사용하였다. 세포 배양에 사용한 배지는 Medium 199와 F10 medium(GibcoBRL)을 동량 혼합한 것으로, 송아지 혈청(calf serum, GibcoBRL)을 증식 배지에는 5%, 유지배지에는 1%되게 첨가하였다.
- NDV의 내열성을 조사하기 위하여 56℃, 30분간 바이러스를 열처리한 다음 실험에 사용할 때까지 -70℃에 보관하였다. 열처리한 바이러스는 96 well microplate에서 HA 역가를 측정하였으며, 감염성 여부를 판단하기 위하여 SPF 종란에 접종하여 바이러스 증식 여부를 조사였다. 그 결과, HA 역가가 4배 이상이거나 종란에서 바이러스가 증식하는 경우내열성이 있는 것으로 판단하였다.
- Vero 세포에 적응시킨 NDV의 유전적 변이 여부를 조사하기 위하여 HN과 F단백질 유전자 전체 open reading frame (ORF) 염기서열을 분석하였다. 이를 위하여 바이러스로부터 직접 RNA를 추출한 다음 one-step RT-PCR kit(Qiagen) 를 사용하여 RT-PCR를 실시하였다. HN 유전자 1,779bp를 증폭하기 위하여 forward primer HNf(5'-ACA AGAGTCAA TCATGGACCG-3')와 reverse primer HNr(5'-TCGTCTTCCC AACCATCCTAT-3')를 사용하였으며, F유전자 1,719 bp를 증폭하기 위하여 forward primer Ff(5'-ACATTCAGGACACA ATATGGG-3')와 reverse primer Fr(5'-CACAGGCTGCTGTT GGGTAT-3')을 사용하였다(Lee et al.
- 그 후 접종액을 제거하고 유지 배지를 첨가하여 37℃ 배양기에서 5일간 배양하면서 CPE 출현 여부를 관찰하였다. 접종 5일 후 세포배양 상층액만을 회수하여 새로운 Vero 세포에서 동일한 방법으로 계대 배양을 반복 실시하였다. Vero 세포에서의 반복 계대는 cell monolayer에서 CPE가 완전히 형성될 때까지 반복하였다.
- 즉, 96 well microplate의 전체 well에 0.1 M phosphate buffered saline(PBS, pH 7.2)을 well당 25 μL씩 첨가한 다음, 첫 번째 well에 혈청을 25 μL를 첨가하여 2진 단계 희석을 실시하였다.
대상 데이터
- CEF 세포는 10일령 SPF 종란의 계태아 몸통을 무균적으로 적출하여 세절한 다음 0.25% 트립신 용액으로 소화하여 CEF 세포를 채취하여 106/mL 농도로 조정하여 세포배양에 사용하였다. 세포 배양에 사용한 배지는 Medium 199와 F10 medium(GibcoBRL)을 동량 혼합한 것으로, 송아지 혈청(calf serum, GibcoBRL)을 증식 배지에는 5%, 유지배지에는 1%되게 첨가하였다.
- HN 유전자 1,779bp를 증폭하기 위하여 forward primer HNf(5'-ACA AGAGTCAA TCATGGACCG-3')와 reverse primer HNr(5'-TCGTCTTCCC AACCATCCTAT-3')를 사용하였으며, F유전자 1,719 bp를 증폭하기 위하여 forward primer Ff(5'-ACATTCAGGACACA ATATGGG-3')와 reverse primer Fr(5'-CACAGGCTGCTGTT GGGTAT-3')을 사용하였다(Lee et al., 2008).
- , 2004), 국내에서 NDV 백신 검정을 위한 공격접종 바이러스(challenge virus)로 사용하고 있는 강독형 NDV 중 하나이다. Kr005주는 특정병원체부재(specific pathogen free, SPF) 종란(SPAFASⓇ, Charles River Laboratories, Nort Franklin, CT, USA)의 요막강(allantoic cavity) 내로 접종한 다음 3일간 배양하여 바이러스를 증식시킨 요막강 액(allantoic fluid)을 무균적으로 채취하여 사용하였다.
- Vero 세포와 CEF 세포가 실험에 사용되었다. Vero 세포 (ATCC CCL81)는 African green monkey kidney 유래 세포 주로서 미국 American Type Culture Collection사(ATCC; Ma- nassas, VA, USA)사로부터 구입하여 사용하였다. Vero 세포 배양을 위하여 항생제(GibcoTM antibiotic-antimycotic solution, Invitrogen Corp, Grand Island, NY, USA)이 첨가된 D-MEM 용액(Dulbecco's Medium, GibcoBRL, Grand Island, NY, USA)을 사용하였으며, 이때 fetal bovine serum (FBS, GibcoBRL)을 증식 배지에는 10%, 유지 배지에는 2%되게 첨가하였다.
- Vero 세포와 CEF 세포가 실험에 사용되었다. Vero 세포 (ATCC CCL81)는 African green monkey kidney 유래 세포 주로서 미국 American Type Culture Collection사(ATCC; Ma- nassas, VA, USA)사로부터 구입하여 사용하였다.
- 본 연구에 사용된 닭 혈청시료는 농림수산검역검사본부 뉴캣슬병 OIE reference laboratory에 보관되어 있는 혈청으로서 NDV 표준 항혈청 1점(대조양성 혈청), SPF 닭 혈청 1점 (대조음성 혈청) 그리고 NDV 백신을 접종한 야외 농장 유래 닭 혈청 10점이었다.
이론/모형
- Kr005/V 주와 Vero 세포를 이용하여 닭 혈청 중 존재하는 NDV 중화항체를 검출할 수 있는 지 96 well microplate에서 beta method 방법으로 조사하였다. 동일한 검사 방법으로 Kr005 주와 CEF 세포를 사용하여 측정한 바이러스 중화항체 역가와 비교하였다.
- Vero 세포 배양액에서 채독한 Kr005/V 바이러스에 대하여 Vero 세포 배양법과 SPF 종란접종법으로 바이러스 역가를 측정하였다(Table 1). 그 결과, Kr005/V 바이러스의 역가는 Vero 세포에서 측정했을 때 107.
- 바이러스 독력은 Alexander(1988)가 제시한 방법에 따라 SPF 종란에서의 평균치사시간(mean death time, MDT)을 측정하여 결정하였다. MDT는 100% 종란 폐사가 나타난 바이러스 희석액 중 최고 희석 배수에서 측정한 종란 평균 치사 시간으로 결정하였다.
- 바이러스 역가는 종란접종법 또는 세포배양법으로 측정하였다. 종란접종법의 경우 바이러스 희석액을 종란당 0.
- 바이러스 중화시험은 일정량의 NDV (200 TCID50)와 단계 희석한 닭 혈청을 사용하여 beta method로 실시하였다. 즉, 96 well microplate에서 검사 혈청을 2진 희석하여 well 당 25 μL씩 첨가한 다음 동량의 바이러스액을 첨가한 다음, 37℃, 1시간 동안 중화시켰다.
- 그 후 CPE가 관찰된 well의 경우 바이러스가 증식한 것으로 간주 하였다. 바이러스의 증식 역가는 접종 well중 50%를 감염시킬 수 있는 바이러스액 희석 배수의 역수 즉 50% tissue culture infectious dose(TCID50)로 표시하였으며, Reed and Muench (1938)의 방법에 따라 계산하였다.
- 그 후 배양 종란의 요양막강액(allantoic cavity fluid)을 무균적으로 채취하여 닭 적혈구 응집능(HA) 여부를 조사하여 HA양성인 경우 NDV가 증식한 것으로 간주하였다. 바이러스의 증식 역가는 접종 종란의 50%를 감염시킬 수 있는 바이러스 희석 배수의 역수 즉 50% egg infectious dose(EID50)로 표시하였으며, Reed and Muench (1938)의 방법에 따라 계산하였다. 세포배양법의 경우, Vero 세포 또는 CEF 세포를 미리 단층 형성시킨 96 well micro- plate에 바이러스 희석액을 well당 0.
성능/효과
- Kr005/V 주의 HN 단백질과 F 단백질의 염기서열을 분석한 결과, HN 단백질의 443번째 아미노산에서만 변이(T에서 S)가 관찰되었다. Kr005/V 주와 Vero 세포를 사용 하여 야외 닭 혈청을 대상으로 혈청중화 항체가를 측정한결과, Kr005주와 CEF 세포를 사용하여 측정한 혈청중화 항체가와 97%의 상관성을 나타내었다.
- 6시간의 MDT)와 달리 Kr005/V 주는 120시간 이상의 MDT를 보여 약독형 바이러스(lentogenic virus)로 분류되었다. Kr005/V 주의 HN 단백질과 F 단백질의 염기서열을 분석한 결과, HN 단백질의 443번째 아미노산에서만 변이(T에서 S)가 관찰되었다. Kr005/V 주와 Vero 세포를 사용 하여 야외 닭 혈청을 대상으로 혈청중화 항체가를 측정한결과, Kr005주와 CEF 세포를 사용하여 측정한 혈청중화 항체가와 97%의 상관성을 나타내었다.
- 7로 다양하였다. MicroSoft Excel 프로그램에 내장된 도구를 사용하여두 그룹간 바이러스 중화항체 역가간 상관성을 조사했을 때 97%(r2=0.97)의 높은 상관성을 보였다.
- 또한 이열성(heat labile) NDV Kr005주와 달리 NDV Kr005/V 주는 내열성(thermostable)을 보였다. 계태아에서 평균 치사 시간(MDT)를 측정한 결과, 강독형인 Kr005주(49.6시간의 MDT)와 달리 Kr005/V 주는 120시간 이상의 MDT를 보여 약독형 바이러스(lentogenic virus)로 분류되었다. Kr005/V 주의 HN 단백질과 F 단백질의 염기서열을 분석한 결과, HN 단백질의 443번째 아미노산에서만 변이(T에서 S)가 관찰되었다.
- 바이러스의 독력을 평가하기 위하여 SPF 종란에서 MDT를 측정하였다. 그 결과 Kr005 주의 MDT는 49.6시간이었다. 반면에 Kr005/V 주를 종란에 접종했을 경우 측정된 MDT는 120시간 이상이었다.
- 열처리한 바이러스는 96 well microplate에서 HA 역가를 측정하였으며, 감염성 여부를 판단하기 위하여 SPF 종란에 접종하여 바이러스 증식 여부를 조사였다. 그 결과, HA 역가가 4배 이상이거나 종란에서 바이러스가 증식하는 경우내열성이 있는 것으로 판단하였다.
- Vero 세포적응 NDV주를 작성하기 위하여, Kr005주를 Vero 세포에 연속 계대하였다. 그 결과, Kr005 주를 5대 연속 계대할 때까지 CPE는 관찰되지 않았으며, 배양 5일째 채취한 배양액에서도 HA가 관찰되지 않았다. 그 이후 계대에서는 Vero 세포에서 cell rounding과 같은 CPE가 관찰되기시작하였으며, 15대 이상 계대하면서 CPE 출현시점이 점점 단축되면서 채취한 배양액에서도 HA가 관찰되었다.
- Vero 세포 배양액에서 채독한 Kr005/V 바이러스에 대하여 Vero 세포 배양법과 SPF 종란접종법으로 바이러스 역가를 측정하였다(Table 1). 그 결과, Kr005/V 바이러스의 역가는 Vero 세포에서 측정했을 때 107.8 TCID50/mL, SPF 종란에서측정했을 때 105.3 EID50/mL이었다. 종란에서 증식시킨 Kr005바이러스의 경우, Vero 세포 대신 CEF 세포에서 측정하였으며, 이때 바이러스의 역가는 108.
- Vero 세포에 적응시키는 과정에서 NDV의 유전적 변화가 일어났는지 여부를 조사하기 위하여 Kr005 주 및 Kr005/V 주의 HN 단백질과 F 단백질의 전체 유전자 ORF 염기서열을 비교 분석하였다. 그 결과, Kr005/V 주의 HN 단백질의 경우, 443번째 아미노산에서만 변이(T에서 S)가 관찰되었으며, 주요 항원 부위를 포함한 나머지 부위에서의 유전적 변화는 관찰되지 않았다(Table 2). Kr005/V 주의 F 단백질의 경우 Kr005주의 F 단백질 염기서열과 일치하였다.
- 그 결과, Kr005 주를 5대 연속 계대할 때까지 CPE는 관찰되지 않았으며, 배양 5일째 채취한 배양액에서도 HA가 관찰되지 않았다. 그 이후 계대에서는 Vero 세포에서 cell rounding과 같은 CPE가 관찰되기시작하였으며, 15대 이상 계대하면서 CPE 출현시점이 점점 단축되면서 채취한 배양액에서도 HA가 관찰되었다. Vero 세포에서 35대 이상 계대하면서 접종 24시간 이내에 cell roun- ding이 관찰되었고, 시간이 경과하면서 일부 세포에서 작은 크기의 합포체도 관찰되기 시작하였다(Fig.
- 이 결과로 볼 때, Kr005/V 주는 Vero 세포에서 55대 연속계 대하는 과정에서 Vero 세포에 이미 적응되어 계태아에 대한 바이러스 감수성이 Vero 세포에서 계대하기 이전보다 훨씬 낮아진 것으로 판단된다. 따라서 바이러스 독력을 종란(계태아)에서 MDT로 측정했다는 점을 감안해 볼 때 Kr005/V 주의 독력이 순화된 것은 독력을 결정하는 바이러스 구조단백질의 변이에 의한 것이라기보다 계태아 숙주의 바이러스 감수성이 낮아진 데서 기인하였다고 보는 것이 보다 설득력이 있어 보인다.
- Vero 세포에 적응시킨 Kr005/V 주의 내열성 및 바이러스 독력 등 생물학적 특성을 조사하고, Kr005 주와 비교 분석하였다(Table 1). 바이러스 내열성 여부를 조사하기 위하여 56℃, 30분간 열처리한 결과, Kr005/V 주의 경우 열처리 전과 동일한 64배의 HA역가를 유지하고 있었으며, 열처리한 NDV를 종란에 접종했을 때에도 바이러스가 증식하였다. 반면에 동일한 조건에서 열처리를 실시한 Kr005 주의 경우 열처리 이후 바이러스의 HA 능을 완전히 상실하였으며, 종란에 접종 했을 때에도 바이러스가 증식되지 않았다.
- MDT는 100% 종란 폐사가 나타난 바이러스 희석액 중 최고 희석 배수에서 측정한 종란 평균 치사 시간으로 결정하였다. 바이러스의 독력은 MDT가 60시간이하일 경우, 강독(velogenic), 60시간 이상 90시간인 경우 중 간독(mesogenic), 90시간 이상일 경우 약독(lentogenic)으로 판정하였다.
- , 2002; Gravel and Morrison, 2003; Melanson and Iorio, 2004). 본 연구에서 Kr005/ V주의 HN 단백질과 F 단백질의 아미노산 서열을 분석한 결과 HN 단백질의 443번째에서만 아미노산 변이가 나타났을 뿐 F 단백질과 나머지 HN 단백질 부위에서는 Kr005주와 동일하였다. 그러나 HN 단백질의 443번째 아미노산이 FFWI 활성에 관여하는 지는 현재까지 밝혀져 있지 않다.
- 본 연구에서 작성한 NDV Kr005/V 주는 Vero 세포에서의 바이러스 증식성이 107.8 TCID50/mL로 우수하고 CPE 형성이 명확하였다. 비록 야외 농장 닭 혈청 10수만 가지고 실시했지만, Kr005/V 주와 Vero 세포를 사용하여 측정한 바이러스 중화 항체 역가시험 결과가 CEF 세포를 사용하여 측정한 바이러스 중화시험 결과와 높은 상관성(r 2=0.
- 8 TCID50/mL로 우수하고 CPE 형성이 명확하였다. 비록 야외 농장 닭 혈청 10수만 가지고 실시했지만, Kr005/V 주와 Vero 세포를 사용하여 측정한 바이러스 중화 항체 역가시험 결과가 CEF 세포를 사용하여 측정한 바이러스 중화시험 결과와 높은 상관성(r 2=0.97)을 보였다. 이것은 CEF 세포 대신 Vero 세포를 이용하여 닭 혈청에 존재하는 NDV 중화항체 역가를 측정할 수 있다는 것을 말해 준다.
- 6 EID50)보다 10배 이상 낮게 나왔다. 이 결과로 볼 때, Kr005/V 주는 Vero 세포에서 55대 연속계 대하는 과정에서 Vero 세포에 이미 적응되어 계태아에 대한 바이러스 감수성이 Vero 세포에서 계대하기 이전보다 훨씬 낮아진 것으로 판단된다. 따라서 바이러스 독력을 종란(계태아)에서 MDT로 측정했다는 점을 감안해 볼 때 Kr005/V 주의 독력이 순화된 것은 독력을 결정하는 바이러스 구조단백질의 변이에 의한 것이라기보다 계태아 숙주의 바이러스 감수성이 낮아진 데서 기인하였다고 보는 것이 보다 설득력이 있어 보인다.
- 1). 채취한 바이러스 배양액에서의 HA역가는 35대 연속 계대이후 급격하게 증가하기 시작하여 55대 계대한 바이러스 배양액에서는 HA 역가가 64배까지 상승하였다(Fig. 2). 따라서 Vero 세포에서 Kr005주를 55대 연속 계대한 후 채독한 바이러스를 Vero 세포에 적응된 NDV로 간주하고, Kr005/V 주로 명명하였다.
- 흥미롭게도 강독형 NDV Kr005주를 Vero 세포에서 55대 연속 계대한 결과, 바이러스 독력이 약독 바이러스 수준으로 순화되었다. 이와 같은 세포 계대에 의한 독력의 순화는 일부 연구자들에 의해 이미 보고된 바가 있다(Kumanan et al.
후속연구
- , 2004). 그러므로 본 연구를 통하여 Vero에 적응시킨 Kr005/V 주의 경우 Vero 세포를 사용하기 때문에 CEF 세포가 가지고 있는 문제점들을 극복하는 데 도움이 될 수 있다.
- 이것은 CEF 세포 대신 Vero 세포를 이용하여 닭 혈청에 존재하는 NDV 중화항체 역가를 측정할 수 있다는 것을 말해 준다. 그러므로 본 연구에서 작성한 Kr005/V 주는 Vero 세포에서 실시할 수 있는 각종 검사 또는 평가시험(예, 소독제 효력시험이나 혈청검사)에 유용할 것으로 판단된다.
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