대회향(大茴香) 물추출물이 마우스 대식세포주(RAW 264.7 cell line)의 hydrogen peroxide 생성에 미치는 영향 Effect of Anisi Stellati Fructus Water Extract on Hydrogen Peroxide Production in RAW 264.7 Mouse Macrophages원문보기
The purpose of this study is to investigate effects of Anisi stellati Fructus Water Extract on hydrogen peroxide production in RAW 264.7 mouse macrophages. Anisi stellati Fructus were extracted by hot water. Effects of Anisi stellati Fructus water extract (AS) on hydrogen peroxide production in RAW ...
The purpose of this study is to investigate effects of Anisi stellati Fructus Water Extract on hydrogen peroxide production in RAW 264.7 mouse macrophages. Anisi stellati Fructus were extracted by hot water. Effects of Anisi stellati Fructus water extract (AS) on hydrogen peroxide production in RAW 264.7 were measured by dihydrorhodamine 123 assay after 20, 24, 28, 44, 48, and 52 h incubation at the concentrations of 10, 25, 50, and $100{\mu}g/mL$. For 20 h incubation, AS significantly increased hydrogen peroxide production in RAW 264.7 cells by $108.6{\pm}1.56%$, $109.5{\pm}1.94%$, $108.4{\pm}1.14%$, and $107.3{\pm}3.06%$ at the concentrations of 10, 25, 50, and $100{\mu}g/mL$ (P < 0.05) respectively. For 24, 28, 44, 48, and 52 h incubation, AS also significantly increased hydrogen peroxide production in RAW 264.7 cells at the concentrations of 10, 25, 50, and $100{\mu}g/mL$ (P < 0.05). These results suggest that Anisi stellati Fructus has the immune - enhancing property related with its increase of hydrogen peroxide production in macrophages.
The purpose of this study is to investigate effects of Anisi stellati Fructus Water Extract on hydrogen peroxide production in RAW 264.7 mouse macrophages. Anisi stellati Fructus were extracted by hot water. Effects of Anisi stellati Fructus water extract (AS) on hydrogen peroxide production in RAW 264.7 were measured by dihydrorhodamine 123 assay after 20, 24, 28, 44, 48, and 52 h incubation at the concentrations of 10, 25, 50, and $100{\mu}g/mL$. For 20 h incubation, AS significantly increased hydrogen peroxide production in RAW 264.7 cells by $108.6{\pm}1.56%$, $109.5{\pm}1.94%$, $108.4{\pm}1.14%$, and $107.3{\pm}3.06%$ at the concentrations of 10, 25, 50, and $100{\mu}g/mL$ (P < 0.05) respectively. For 24, 28, 44, 48, and 52 h incubation, AS also significantly increased hydrogen peroxide production in RAW 264.7 cells at the concentrations of 10, 25, 50, and $100{\mu}g/mL$ (P < 0.05). These results suggest that Anisi stellati Fructus has the immune - enhancing property related with its increase of hydrogen peroxide production in macrophages.
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문제 정의
그러므로 여러 가지 산화적 반응을 일으키는 물질들로 인해 인간 세포 내 에서 발생하는 hydrogen peroxide의 수준을 DHR assay를 이용하여 측정할 수 있다. 본 실험에서는 세포 내 H2O2 생성에 대한 시료의 영향을 측정하였다. 96 well plate에 1×104 cells/well의 농도로 분주되도록 1×105 cells/mL의 cell을 100 ㎕씩 넣고 37℃, 5% CO2 incubator에서 24시간 동안 배양한 후 배지를 버리고 배양세포 표면을 phosphate buffered saline(PBS) 용액으로 씻어주었다.
본 연구에서는 大茴香을 물추출하여 얻은 시료(AS)를 대상으로 마우스 대식세포 RAW 264.7의 hydrogen peroxide 생성에 미치는 영향을 알아보기 위하여 in vitro 실험을 수행하고 유의한 결과를 얻었기에 이에 보고하는 바이다.
본 연구에서는 大茴香을 물추출하여 얻은 시료(AS)를 대상으로 마우스 대식세포 RAW 264.7의 hydrogen peroxide 생성에 미치는 영향을 알아보기 위하여 in vitro 실험을 수행한 결과 다음을 알 수 있었다.
본 연구팀은 이미 선행연구를 통하여 한국산 黃芩 물추출물과 중국산 黃芩 물추출물이 모두 마우스 대식세포의 hydrogen peroxide의 생성을 유의하게 증가시킴에 대해서 보고하여 감염성 질환에 대한 黃芩의 항병효능(抗病效能)의 실험적 근거를 제시한 바 있다12). 이 연구에서도 마우스 대식세포의 hydrogen peroxide 생성에 대한 AS의 조절능을 확인함으로써 AS의 감염성질환에 대한 항병효능 및 인체면역기능강화효능을 확인하고자 하였다.
제안 방법
시료를 처리하기 전에 우선 DHR(10 uM)이 담긴 배지를 30분간 각 well에 처리한 뒤 배지를 제거하였다. 그리고 다양한 농도의 시료들을 배지에 담아 각 well에 처리하고 20, 24, 28, 44, 48, 52 시간 동안 37℃, 5% CO2 incubator에서 배양한 후 spectrofluorometer(TRIAD LT; excitation filter 485 nm and emission filter 535 nm)를 이용하여 세포내 hydrogen peroxide 생성량을 측정, 비교하였다.
시료가 RAW 264.7의 hydrogen peroxide(H2O2) 생성증가에 미치는 영향에 대해 알아보기 위하여 이미 보고12-19)된 방법을 응용, dihydrorhodamine 123(DHR) assay를 실시하여 측정하였다. DHR은 비형광이지만 세포 내에서 세포 내 H2O2에 의하여 산화되어 녹색의 형광을 발현하는 물질인 rhodamine 123로 바뀌게 된다.
대상 데이터
Louis, MO, USA)로부터 구입하여 사용하였다12-14). 각 시약의 품질은 분석용 등급 이상의 것으로 사용하였으며 본 실험에 사용된 기기는 CO2 incubator(NUAIRE, USA), clean bench(Jeiothec, Korea), rotary vacuum evaporator(Eyela, Japan), research rieroscope(Becton diekinson, USA), centrifuge(Gyrozen, Korea), water bath(Sae Han, Korea), vortex rixer(Vision Scientific Co, Korea), freeze dryer(Eyela), deep freezer(Gudero, Il 위한n Lab, Korea), TRIAD LT spectrofluorometer(Dynex, Chantilly, VA, USA) 등이다12-14).
본 실험에 사용된 大茴香은 옴니허브주식회사(대구, 한국)로부터 구입한 후 검정하여 사용하였다.
본 실험에 사용된 시약 중 Dulbecco's Modified Eagle's Medium(DMEM), heat-inactivated fetal bovine serum(FBS), penicillin and streptomycin, phosphate-buffered saline(PBS, pH 7.4)은 Gibco BRL사(Grand Island, NY, USA)에서, cell viability측정을 위한 MTT assay, NO 생성측정을 위한 Griess reagent와 hydrogen peroxide 생성측정을 위한 dihydrorhodorhne 123(DHR) 등은 Shgma-Aldrich사(St. Louis, MO, USA)로부터 구입하여 사용하였다12-14).
실험에 사용된 대식세포는 mouse macrophage(RAW 264.7 cell line)이며, 한국세포주은행(KCLB, Korea)에서 구입하였다.
데이터처리
실험성적은 평균치 ± 표준편차 (Mean ± SD)로 나타내었으며, 대조군과 각 실험군과의 평균 차이는 Student t-test로 분석하여 P < 0.05일 때 통계적으로 유의한 것으로 판정하였다.
성능/효과
AS로 20시간 동안 배양한 후 RAW 264.7의 hydrogen peroxide 생성을 측정한 결과 AS는 10, 25, 50, 100 ㎍/mL의 농도에서 각각 108.6 ± 1.56%, 109.5 ± 1.94%, 108.4 ± 1.14%, 107.3 ± 3.06%로 유의한 증가를 나타내었다(P < 0.05)(Fig. 1).
AS로 20시간 동안 배양한 후 RAW 264.7의 hydrogen peroxide 생성을 측정한 결과 AS는 10, 25, 50, 100 ㎍/mL의 농도에서 각각 108.6 ± 1.56%, 109.5 ± 1.94%, 108.4 ± 1.14%, 107.3 ± 3.06%로 유의한 증가를 나타내었다(P < 0.05).
AS로 24시간 동안 배양한 후 RAW 264.7의 hydrogen peroxide 생성을 측정한 결과 AS는 10, 25, 50, 100 ㎍/mL의 농도에서 각각 109.5 ± 1.12%, 110.8 ± 2.12%, 109.4 ± 1.37%, 108.6 ± 3.48%로 유의한 증가를 나타내었다(P < 0.05)(Fig. 2).
AS로 24시간 동안 배양한 후 RAW 264.7의 hydrogen peroxide 생성을 측정한 결과 AS는 10, 25, 50, 100 ㎍/mL의 농도에서 각각 109.5 ± 1.12%, 110.8 ± 2.12%, 109.4 ± 1.37%, 108.6 ± 3.48%로 유의한 증가를 나타내었다(P < 0.05).
AS로 28시간 동안 배양한 후 RAW 264.7의 hydrogen peroxide 생성을 측정한 결과 AS는 10, 25, 50, 100 ㎍/mL의 농도에서 각각 110.9 ± 1.74%, 110.5 ± 2.13%, 110.0 ± 1.44%, 109.1 ± 3.73%로 유의한 증가를 나타내었다(P < 0.05)
AS로 28시간 동안 배양한 후 RAW 264.7의 hydrogen peroxide 생성을 측정한 결과 AS는 10, 25, 50, 100 ㎍/mL의 농도에서 각각 110.9 ± 1.74%, 110.5 ± 2.13%, 110.0 ± 1.44%, 109.1 ± 3.73%로 유의한 증가를 나타내었다(P < 0.05)(Fig. 3).
AS로 44시간 동안 배양한 후 RAW 264.7의 hydrogen peroxide 생성을 측정한 결과 AS는 10, 25, 50, 100 ㎍/mL의 농도에서 각각 106.9 ± 1.49%, 105.7 ± 2.51%, 105.6 ± 2.09%, 108.1 ± 4.62%로 유의한 증가를 나타내었다(P < 0.05)
AS로 44시간 동안 배양한 후 RAW 264.7의 hydrogen peroxide 생성을 측정한 결과 AS는 10, 25, 50, 100 ㎍/mL의 농도에서 각각 106.9 ± 1.49%, 105.7 ± 2.51%, 105.6 ± 2.09%, 108.1 ± 4.62%로 유의한 증가를 나타내었다(P < 0.05)(Fig. 4).
AS로 48시간 동안 배양한 후 RAW 264.7의 hydrogen peroxide 생성을 측정한 결과 AS는 10, 25, 50, 100 ㎍/mL의 농도에서 각각 106.8 ± 1.25%, 104.4 ± 2.36%, 105.2 ± 1.69%, 106.6 ± 4.69%로 유의한 증가를 나타내었다(P < 0.05)
AS로 48시간 동안 배양한 후 RAW 264.7의 hydrogen peroxide 생성을 측정한 결과 AS는 10, 25, 50, 100 ㎍/mL의 농도에서 각각 106.8 ± 1.25%, 104.4 ± 2.36%, 105.2 ± 1.69%, 106.6 ± 4.69%로 유의한 증가를 나타내었다(P < 0.05)(Fig. 5).
AS로 52시간 동안 배양한 후 RAW 264.7의 hydrogen peroxide 생성을 측정한 결과 AS는 10, 25, 50, 100 ㎍/mL의 농도에서 각각 104.6 ± 1.56%, 104.0 ± 2.23%, 103.9 ± 1.69%, 106.4 ± 3.9%로 유의한 증가를 나타내었다(P < 0.05)
AS로 52시간 동안 배양한 후 RAW 264.7의 hydrogen peroxide 생성을 측정한 결과 AS는 10, 25, 50, 100 ㎍/mL의 농도에서 각각 104.6 ± 1.56%, 104.0 ± 2.23%, 103.9 ± 1.69%, 106.4 ± 3.9%로 유의한 증가를 나타내었다(P < 0.05)(Fig. 6).
본 연구의 실험결과 소염제로 사용되는 인도메타신 (Indomethacin)이 대식세포의 hydrogen peroxide 생성을 감소시키는 것과 반대로 AS가 대식세포의 hydrogen peroxide 생성을 증가시키는 것으로 나타났으며, 이는 AS가 대식세포의 산화폭발(oxidative burst)작용을 촉진시킬 수 있는 것으로 이해될 수 있다.
이상의 실험결과는 大茴香 물추출물이 대식세포의 세포내 하이드로겐 퍼록사이드 생성을 증가시킴으로써 대식세포가 외부로부터 침입하는 병원체를 제거하는 기능을 향상시킬 수 있음을 나타내는 것이다.
후속연구
이상의 실험결과는 大茴香 물추출물이 대식세포의 세포내 하이드로겐 퍼록사이드 생성을 증가시킴으로써 대식세포가 외부로부터 침입하는 병원체를 제거하는 기능을 향상시킬 수 있음을 나타내는 것이며, 앞으로 大茴香 물추출물의 면역강화작용에 대한 보다 자세한 연구가 요구되는 바이다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
대회향이란?
대회향(大茴香; Anisi stellati Fructus)은 붓순나무과 (Illiciaceae)에 속하는 상록식물인 대향나무(Illicium verum)의 열매를 말린 것으로 팔각회향(八角茴香; star anise)으로도 불리운다. 대향나무는 중국 남서부, 베트남 북부의 국경지역, 말레이반도에서 자생하며, 중국의 복건성, 광동성, 광서성, 운남성과 인도, 인도차이나반도에서 넓게 재배되고 있다.
대향나무의 자생지는?
대회향(大茴香; Anisi stellati Fructus)은 붓순나무과 (Illiciaceae)에 속하는 상록식물인 대향나무(Illicium verum)의 열매를 말린 것으로 팔각회향(八角茴香; star anise)으로도 불리운다. 대향나무는 중국 남서부, 베트남 북부의 국경지역, 말레이반도에서 자생하며, 중국의 복건성, 광동성, 광서성, 운남성과 인도, 인도차이나반도에서 넓게 재배되고 있다. 대향나무의 꽃은 적갈색이며, 팔각회향(八角茴香)이라는 이름은 대향나무의 열매의 모양이 마치 단단한 껍질로 싸인 꼬투리 여덟 개가 별처럼 붙어있는 모양에서 유래된 것이다.
大茴香을 물추출하여 얻은 시료(AS)를 대상으로 마우스 대식세포 RAW 264.7의 hydrogen peroxide 생성에 미치는 영향을 알아보기 위하여 in vitro 실험을 수행하여 얻은 결과는?
AS로 20시간 동안 배양한 후 RAW 264.7의 hydrogen peroxide 생성을 측정한 결과 AS는 10, 25, 50, 100 ㎍/mL의 농도에서 각각 108.6 ± 1.56%, 109.5 ± 1.94%, 108.4 ± 1.14%, 107.3 ± 3.06%로 유의한 증가를 나타내었다(P < 0.05).
AS로 24시간 동안 배양한 후 RAW 264.7의 hydrogen peroxide 생성을 측정한 결과 AS는 10, 25, 50, 100 ㎍/mL의 농도에서 각각 109.5 ± 1.12%, 110.8 ± 2.12%, 109.4 ± 1.37%, 108.6 ± 3.48%로 유의한 증가를 나타내었다(P < 0.05).
AS로 28시간 동안 배양한 후 RAW 264.7의 hydrogen peroxide 생성을 측정한 결과 AS는 10, 25, 50, 100 ㎍/mL의 농도에서 각각 110.9 ± 1.74%, 110.5 ± 2.13%, 110.0 ± 1.44%, 109.1 ± 3.73%로 유의한 증가를 나타내었다(P < 0.05)
AS로 44시간 동안 배양한 후 RAW 264.7의 hydrogen peroxide 생성을 측정한 결과 AS는 10, 25, 50, 100 ㎍/mL의 농도에서 각각 106.9 ± 1.49%, 105.7 ± 2.51%, 105.6 ± 2.09%, 108.1 ± 4.62%로 유의한 증가를 나타내었다(P < 0.05)
AS로 48시간 동안 배양한 후 RAW 264.7의 hydrogen peroxide 생성을 측정한 결과 AS는 10, 25, 50, 100 ㎍/mL의 농도에서 각각 106.8 ± 1.25%, 104.4 ± 2.36%, 105.2 ± 1.69%, 106.6 ± 4.69%로 유의한 증가를 나타내었다(P < 0.05)
AS로 52시간 동안 배양한 후 RAW 264.7의 hydrogen peroxide 생성을 측정한 결과 AS는 10, 25, 50, 100 ㎍/mL의 농도에서 각각 104.6 ± 1.56%, 104.0 ± 2.23%, 103.9 ± 1.69%, 106.4 ± 3.9%로 유의한 증가를 나타내었다(P < 0.05)
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