[논문]오미자(五味子) 추출물의 인간 전립선암 세포주 PC-3에 대한 성장 억제 효과

문정민; 석가형; 조수인

doi:10.6116/kjh.2012.27.4.17

오미자(五味子) 추출물의 인간 전립선암 세포주 PC-3에 대한 성장 억제 효과
Antiproliferative effect of Schisandrae Fructus extract on PC-3 human prostate cancer cells 원문보기

大韓本草學會誌 = The Korea journal of herbology, v.27 no.4, 2012년, pp.17 - 23

문정민 (부산대학교 한의학전문대학원) , 석가형 (부산대학교 한의학전문대학원) , 조수인 (부산대학교 한의학전문대학원)

Abstract ▼ AI-Helper

Objectives : Schisandrae Fructus (SF) has traditionally been used to balance level of body fluid and to strengthen kidney function. It has been reported that the SF extract has antioxidant, hepatoprotective, neuroprotective and anticancer effects. This study investigated an antiproliferative effect of SF extract on PC-3 human prostate cancer cells and analyzed active ingredients of SF extract qualitatively and quantitatively. Methods : We examined the antiproliferative effect of SF extract with MTT assay, DAPI staining and annexin-V/7-AAD double staining. The active ingredients of SF extract were identified by using HPTLC and HPLC/DAD system. Results : SF-chloroform fraction inhibited growth of PC-3 cells and changed the morphology of nucleus in a dose dependent manner. A dose-dependent apoptotic cell death was also measured by flow cytometry analysis. It was analyzed that SF-chloroform fraction contained more schizandrin than other fractions by using HPTLC and HPLC/DAD system. Conclusions : These results suggest that SF extract and schizandrin may be a potential chemotherapeutic agent for the control of PC-3 human prostate cancer cells.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

본 연구에서는 五味子 메탄올 추출물로부터 얻은 용매분획에서 전립선암세포주 (PC-3)에 대한 성장 억제 효과를 나타내는 분획을 조사하여 활성이 있는 분획의 농도에 따른 apoptosis 유도 정도를 확인하였다. 또한 HPTLC와 HPLC를 이용하여 활성이 있는 분획이 함유하고 있는 성분의 정성 및 정량 분석을 하고자 하였다.
최근에는 五味子 추출물 또는 gomisin N, schizandrin 등과 같이 五味子로부터 분리된 성분의 항암 효과에 대한 연구^13-22)가 많이 보고되고 있다. 본 연구에서는 五味子 메탄올 추출물로부터 얻은 용매분획에서 전립선암세포주 (PC-3)에 대한 성장 억제 효과를 나타내는 분획을 조사하여 활성이 있는 분획의 농도에 따른 apoptosis 유도 정도를 확인하였다. 또한 HPTLC와 HPLC를 이용하여 활성이 있는 분획이 함유하고 있는 성분의 정성 및 정량 분석을 하고자 하였다.

제안 방법

625 ㎍/㎖의 농도로 단계적으로 희석하여 표준액으로 사용하였다. 3번씩 반복 측정하여 peak area의 평균을 구한 후 표준액의 schizandrin 농도와 peak area 사이의 상관관계를 도출하여 검량선을 작성하였다.
PC-3 세포를 48-well 세포 배양 용기에 4 × 104 cells/㎖씩 분주하여 24 시간 배양하였고, 용기에 부착된 PC-3 세포에 五味子 추출물을 분획별로 50, 100, 200 ㎍/㎖의 농도로 48 시간 동안 처리하였다.
PC-3 세포를 6-well 세포 배양 용기에 5 × 104 cells/㎖씩 분주하여 24 시간 배양하였고, 용기에 부착된 PC-3 세포에 五味子 클로로포름 분획을 30, 60, 120 ㎍/㎖의 농도로 48 시간 동안 처리하였다.
PC-3 세포를 현미경 관찰용 glass를 넣은 12-well 세포 배양 용기에 1 × 105 cells/㎖씩 분주하여 24 시간 배양하였고, 용기에 부착된 PC-3 세포에 五味子 클로로포름 분획을 30, 60, 120 ㎍/㎖의 농도로 48 시간 동안 처리하였다.
五味子 클로로포름 분획의 처리에 따른 PC-3 세포의 성장 억제 및 세포핵의 형태 변화가 apoptosis에 의한 것인지 확인하기 위하여 PC-3 세포에 五味子 클로로포름 분획을 0, 30, 60, 120 ㎍/㎖의 농도로 48 시간 동안 처리한 후 annexin-V/7-AAD double staining을 이용하여 조사하였다. annexin-V는 apoptosis 초기에 세포막 표면에 노출되는 phosphatidylserine과 결합하고, 7-AAD는 apoptosis 후기에 핵막이 파괴되면 핵을 염색하며, 각각의 시약이 염색하는 세포를 flow cytometry로 측정하였다.
column의 온도는 40℃로 유지하였고, UV 254 ㎚ 검출파장에서 acetonitrile-water을 20 : 80 (0 min)에서 100 :0 (40 min)으로 gradient를 주었으며 유속은 1.0 ㎖/min, 주입량은 5 ㎕로 하여 3번씩 반복 측정하여 분석하였다.
1 ㎍/㎖가 되도록 DAPI 용액을 처리하여 상온에서 20 분간 염색하였다. glass를 꺼내어 slide glass 위에 부착하였고, 형광현미경으로 400배의 배율로 PC-3 세포의 핵 형태를 관찰하였다.
五味子 용매분획을 PC-3 세포에 처리하여 세포생존율을 조사한 결과, 에틸아세테이트 분획은 처리한 농도와 세포생존율 사이에 상관관계가 없었으며, 부탄올 분획과 증류수 분획은 세포 증식 억제 효과가 거의 나타나지 않았다. n-헥산 분획과 클로로포름 분획의 세포 증식 억제 효과는 처리한 농도에 비례하여 뚜렷하게 나타났고, 특히 클로로포름 분획을 처리한 세포에서 생존율이 가장 많이 감소하였기 때문에 이 후 실험은 五味子 클로로포름 분획을 이용하였다 (Figure 2).
五味子 메탄올 추출물 및 분획의 처리에 따른 세포생존율을 조사하기 위하여 PC-3 세포에 五味子 메탄올 추출물 및 분획을 50, 100, 200 ㎍/㎖의 농도로 48 시간 동안 처리한 후 MTT assay를 이용하여 조사하였다. 그 결과 에틸아세테이트 분획을 제외한 메탄올 추출물 및 나머지 분획은 처리한 농도에 비례하여 세포 성장이 억제되었다.
五味子 메탄올 추출물과 n-헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올, 증류수 분획의 HPTLC 패턴을 분석하기 위하여 TLC plate (HPTLC Silica gel 60 F₂₅₄)에 검액을 점적하고 헥산:에틸아세테이트 = 2:3의 전개용매로 전개시켜 UV 254 ㎚에서 성분을 검출하였다.
五味子 메탄올 추출물과 n-헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올, 증류수 분획의 HPTLC 패턴을 분석하기 위하여 동시에 분석 가능한 HPTLC 분석 조건을 설정하였다.
五味子 메탄올 추출물과 클로로포름 분획의 HPLC 패턴 분석 및 schizandrin의 정량을 위해 HPLC/DAD (Agilent 1200 series, Netherlands)로 peak를 확인하였다. HPLC에 사용된 column은 ZORBAX Eclipse XDB-C18 (4.
五味子 메탄올 추출물과 클로로포름 분획의 HPLC 패턴 분석 및 schizandrin의 정량을 위해 설정된 HPLC 분석 조건하에서 peak를 확인하였다.
五味子 클로로포름 분획의 처리에 따른 PC-3 세포의 성장 억제 및 세포핵의 형태 변화가 apoptosis에 의한 것인지 확인하기 위하여 PC-3 세포에 五味子 클로로포름 분획을 0, 30, 60, 120 ㎍/㎖의 농도로 48 시간 동안 처리한 후 annexin-V/7-AAD double staining을 이용하여 조사하였다. annexin-V는 apoptosis 초기에 세포막 표면에 노출되는 phosphatidylserine과 결합하고, 7-AAD는 apoptosis 후기에 핵막이 파괴되면 핵을 염색하며, 각각의 시약이 염색하는 세포를 flow cytometry로 측정하였다.
五味子 클로로포름 분획의 처리에 따른 PC-3 세포핵의 형태 변화를 조사하기 위하여 PC-3 세포에 五味子 클로로포름 분획을 30, 60, 120 ㎍/㎖의 농도로 48 시간 동안 처리한 후 DAPI staining을 실시하여 형광현미경으로 관찰하였다. 五味子 클로로포름 분획이 처리되지 않은 PC-3 세포는 핵의 형태가 뚜렷하게 염색이 되었으나 五味子 클로로포름 분획이 처리된 PC-3 세포는 apoptosis가 일어난 세포에서 전형적으로 관찰되는 염색질 응축에 의한 apoptotic body가 관찰되었다.
따라서 본 연구에서는 五味子를 메탄올로 추출하여 분획을 실시한 뒤 전립선암세주 (PC-3)에 대한 성장 억제 효과와 apoptosis 유도 정도를 조사하였고, 활성이 있는 분획이 함유하고 있는 성분의 정성 및 정량 분석을 HPTLC와 HPLC를 이용하여 시도하였다.
4%로 다른 분획에 비하여 가장 많이 감소하였다 (Figure 2). 따라서 이후 실험은 五味子 클로로포름 분획만을 이용하여 실시하였다.
배지를 제거하고 DMSO를 가하여 생성된 보라색 formazan을 용해하여 96-well 세포 배양 용기로 100 ㎕씩 옮겨 Fluorescence reader (TECAN, Grödig, Austria)로 540㎚에서 흡광도를 측정하였다.
분리·정제된 schizandrin 표준품은 3 ㎎을 HPLC용 메탄올 3 ㎖에 녹이고 이것을 stock solution으로 500, 250, 125, 62.5, 31.25, 15.625 ㎍/㎖의 농도로 단계적으로 희석하여 표준액으로 사용하였다.
남아있는 cell pellet에 1x annexin-V binding buffer 100 ㎕를 첨가하여 pipetting 하였다. 여기에 4 ㎕의 annexin-V와 4 ㎕의 7-AAD 시약을 첨가하여 상온에서 15 분간 세포막과 핵을 각각 염색하였다. 염색된 세포는 flow cytometry (FACS Canto, BD Biosciences)를 이용하여 측정하였고, FACSDiva Version 6.
여기에 4 ㎕의 annexin-V와 4 ㎕의 7-AAD 시약을 첨가하여 상온에서 15 분간 세포막과 핵을 각각 염색하였다. 염색된 세포는 flow cytometry (FACS Canto, BD Biosciences)를 이용하여 측정하였고, FACSDiva Version 6.0 software (Becton Dickinson Co.)를 이용하여 apoptosis가 유도된 세포를 분석하였다.
94%)의 메탄올 추출물을 얻었다. 이 중 100 g의 메탄올 추출물을 증류수에 현탁시킨 후 n-헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올, 증류수로 극성에 따라 순차적으로 용매분획을 실시하였으며 각각의 용매 추출물을 농축하여 분획을 얻었다 (Figure 1).

대상 데이터

Louis, MO, USA)에서 구입하였다. Dimethyl sulfoxide (DMSO)는 Junsei Chemical Co., Ltd. (Tokyo, Japan)에서 구입하였으며 FITC annexin-V와 7-Aminoactinomycin D (7-AAD)는 BD Bioscience (San Jose, CA, USA)에서 구입하였다.
Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM)은 Thermo scientific (Utah, USA)에서 구입하였고, penicillin-streptomycin은 GibcoBRL (Eggenstein, Germany)에서 구입하였다.
Fetal bovine serum (FBS)3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) 및 4’,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)는 Sigma (St. Louis, MO, USA)에서 구입하였다.
6 × 150㎜, 5 ㎛, Agilent)이다. HPLC용 용매는 HPLC grade의 water, acetonitrile, 메탄올 (Fisher Scientific Korea Ltd.)을 사용하였다.
인간 전립선암세포주인 PC-3 세포는 American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA)으로부터 분양 받아 10% FBS와 1% penicillin-streptomycin이 포함된 DMEM 배지를 사용하여 37℃, 5% CO₂ 조건의 세포배양기에서 배양하였다.

데이터처리

모든 실험의 표시된 결과는 3번 이상 수행하였으며, 정규성과 등분산 가정이 성립되는 경우는 One-way ANOVA test를 실시하여 통계적 유의성은 p < 0.05 로 판정하였다.

성능/효과

HPTLC를 이용하여 五味子 메탄올 추출물과 n-헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올, 증류수 분획이 함유하고 있는 성분의 TLC 패턴을 분석하였을 때 가장 선명하고 굵은 band는 schizandrin 성분이었다. 같은 농도의 五味子 메탄올 추출물의 성분들보다 n-헥산과 클로로포름 분획이 가지고 있는 각각의 성분의 양이 훨씬 많다는 것을 정성적으로 확인할 수 있었다 (Figure 6).
그 결과 에틸아세테이트 분획을 제외한 메탄올 추출물 및 나머지 분획은 처리한 농도에 비례하여 세포 성장이 억제되었다. n-헥산과 클로로포름 분획을 처리한 세포에서 세포생존율이 많이 감소되었으며, 특히 클로로포름 분획은 50, 100, 200 ㎍/㎖을 처리한 세포에서 세포생존율이 각각 51.8%, 33.7%, 19.4%로 다른 분획에 비하여 가장 많이 감소하였다 (Figure 2). 따라서 이후 실험은 五味子 클로로포름 분획만을 이용하여 실시하였다.
五味子 메탄올 추출물 (Figure 7B)과 클로로포름 분획(Figure 7C)의 HPLC 결과에서 16.9 분에 나타나는 schizandrin이 五味子 추출물에 가장 많이 함유되어 있다는 것을 확인하였다. 五味子 메탄올 추출물과 클로로포름 분획이 함유하고 있는 schizandrin의 peak area 평균은 각각 497.
9 분에 나타나는 schizandrin이 五味子 추출물에 가장 많이 함유되어 있다는 것을 확인하였다. 五味子 메탄올 추출물과 클로로포름 분획이 함유하고 있는 schizandrin의 peak area 평균은 각각 497.767, 3303.37 이었고, 검량선을 이용하여 schizandrin의 농도를 구한 결과는 각각 50.88 ㎍/㎖, 357.25 ㎍/㎖ 이었다. 五味子 메탄올 추출물보다 클로로포름 분획에 약 7배로 schizandrin이 많이 함유되어 있다는 것을 알 수 있었다.
따라서 五味子 메탄올 추출물의 용매분획 과정에서 schizandrin보다 극성이 낮은 물질들은 n-헥산층으로 대부분 이행되었고, 五味子 클로로포름 분획에는 주로 schizandrin을 포함한 보다 극성이 높은 물질들이 함유되어 있다는 것을 HPTLC와 HPLC를 이용한 패턴 분석 결과를 통해서 알 수 있었다. 五味子 메탄올 추출물과 클로로포름 분획이 함유하고 있는 schizandrin의 농도를 검량선을 이용하여 구한 결과는 五味子 클로로포름 분획이 五味子 메탄올 추출물보다 schizandrin을 약 7배 정도 더 농축되어 함유하는 것으로 나타났다. 따라서 五味子 메탄올 추출물보다 五味子 클로로포름 분획이 MTT assay에서 세포 증식 억제 효과가 높게나온 이유는 같은 농도에서 보다 많은 schizandrin을 함유하고 있기 때문이라고 할 수 있다.
25 ㎍/㎖ 이었다. 五味子 메탄올 추출물보다 클로로포름 분획에 약 7배로 schizandrin이 많이 함유되어 있다는 것을 알 수 있었다.
五味子 용매분획을 PC-3 세포에 처리하여 세포생존율을 조사한 결과, 에틸아세테이트 분획은 처리한 농도와 세포생존율 사이에 상관관계가 없었으며, 부탄올 분획과 증류수 분획은 세포 증식 억제 효과가 거의 나타나지 않았다. n-헥산 분획과 클로로포름 분획의 세포 증식 억제 효과는 처리한 농도에 비례하여 뚜렷하게 나타났고, 특히 클로로포름 분획을 처리한 세포에서 생존율이 가장 많이 감소하였기 때문에 이 후 실험은 五味子 클로로포름 분획을 이용하였다 (Figure 2).
본 연구에서 annexin-V/7-AAD double staining을 실시한 후 apoptosis가 유도된 세포수를 flow cytometry로 측정하여 조사한 결과 五味子 클로로포름 분획의 농도에 비례하여 apoptosis가 유도된 세포가 증가하였다. 五味子 클로로포름 분획 120 ㎍/㎖의 농도에서 약 20%의 세포가 apoptosis가 유도됨을 확인하였다 (Figure 5).
五味子 클로로포름 분획의 처리한 농도에 비례하여 apoptosis가 일어난 세포에서 관찰되는 염색질 응축에 의한 apoptotic body가 증가하였으며 apoptosis가 유도된 세포 비율도 증가하였다. 五味子 클로로포름 분획의 주성분은 schizandrin이라는 것을 HPTLC 패턴 분석을 통해 알 수 있었으며 五味子 클로로포름 분획은 五味子 메탄올 추출물보다 약 7배로 schizandrin이 많이 함유되어 있다는 것을 HPLC를 이용한 schizandrin의 정량을 통해 알 수 있었다.
본 연구에서 인간 전립선암 세포주인 PC-3 세포를 이용하여 五味子 클로로포름 분획이 미치는 영향을 평가한 결과, 五味子 메탄올 추출물 및 분획의 처리한 농도에 비례하여 세포 성장이 억제되었으며 특히 클로로포름 분획을 처리한 세포에서 세포생존율이 가장 많이 감소하였다. 五味子 클로로포름 분획의 처리한 농도에 비례하여 apoptosis가 일어난 세포에서 관찰되는 염색질 응축에 의한 apoptotic body가 증가하였으며 apoptosis가 유도된 세포 비율도 증가하였다. 五味子 클로로포름 분획의 주성분은 schizandrin이라는 것을 HPTLC 패턴 분석을 통해 알 수 있었으며 五味子 클로로포름 분획은 五味子 메탄올 추출물보다 약 7배로 schizandrin이 많이 함유되어 있다는 것을 HPLC를 이용한 schizandrin의 정량을 통해 알 수 있었다.
annexin-V가 염색된 우측 아래는 초기 apoptosis 상태의 세포를 의미하며, annexin V와 7-AAD가 모두 염색된 우측 위는 후기 apoptosis 상태의 세포를 의미하므로 (Figure 4A), 우측 위와 아래에 있는 세포를 백분율로 나타내어 둘의 합을 그래프로 나타내었다 (Figure 4B). 그 결과 五味子 클로로포름 분획의 처리한 농도에 비례하여 apoptosis가 유도된 세포 비율이 증가하였고, 120 ㎍/㎖의 농도로 48 시간 동안 처리하였을 때 20.2%로 증가하였다.
五味子 메탄올 추출물 및 분획의 처리에 따른 세포생존율을 조사하기 위하여 PC-3 세포에 五味子 메탄올 추출물 및 분획을 50, 100, 200 ㎍/㎖의 농도로 48 시간 동안 처리한 후 MTT assay를 이용하여 조사하였다. 그 결과 에틸아세테이트 분획을 제외한 메탄올 추출물 및 나머지 분획은 처리한 농도에 비례하여 세포 성장이 억제되었다. n-헥산과 클로로포름 분획을 처리한 세포에서 세포생존율이 많이 감소되었으며, 특히 클로로포름 분획은 50, 100, 200 ㎍/㎖을 처리한 세포에서 세포생존율이 각각 51.
분리·정제된 五味子 단일 성분들의 표준품과 五味子 추출물의 HPTLC 패턴을 비교해 보았을 때 schizandrin의 band가 가장 굵고 선명하게 나타났으므로 schizandrin을 표준품으로 하여 五味子 메탄올 추출물과 n-헥산, 클로로포름, 에틸아세 테이트, 부탄올, 증류수 분획을 전개시킨 것을 나타내었다(Figure 5). 그 결과 에틸아세테이트, 부탄올, 증류수 분획은 UV 254 ㎚에서 검출되는 성분이 거의 없었고, 五味子 메탄올 추출물과 n-헥산, 클로로포름 분획은 schizandrin을 포함한 여러 성분을 포함하고 있었다. 특히 클로로포름 분획에서는 五味子 메탄올 추출물보다 더 많은 schizandrin을 함유하고 있다는 것을 알 수 있었다.
또한 실험에 주로 이용한 五味子 클로로포름 분획의 HPLC 패턴을 五味子 메탄올 추출물과 비교해 보았을 때 五味子 메탄올 추출물에서는 42 분 동안 모든 성분이 검출되었지만 (Figure 7B), 五味子 클로로포름 분획에서는 32 분 이내에 모든 성분이 검출되었다 (Figure 7C). 따라서 五味子 메탄올 추출물의 용매분획 과정에서 schizandrin보다 극성이 낮은 물질들은 n-헥산층으로 대부분 이행되었고, 五味子 클로로포름 분획에는 주로 schizandrin을 포함한 보다 극성이 높은 물질들이 함유되어 있다는 것을 HPTLC와 HPLC를 이용한 패턴 분석 결과를 통해서 알 수 있었다. 五味子 메탄올 추출물과 클로로포름 분획이 함유하고 있는 schizandrin의 농도를 검량선을 이용하여 구한 결과는 五味子 클로로포름 분획이 五味子 메탄올 추출물보다 schizandrin을 약 7배 정도 더 농축되어 함유하는 것으로 나타났다.
9 분에서 peak가 확인되었고, 五味子 메탄올 추출물과 클로로포름 분획 모두 schizandrin이 가장 많이 함유되어있음을 확인할 수 있었다. 또한 실험에 주로 이용한 五味子 클로로포름 분획의 HPLC 패턴을 五味子 메탄올 추출물과 비교해 보았을 때 五味子 메탄올 추출물에서는 42 분 동안 모든 성분이 검출되었지만 (Figure 7B), 五味子 클로로포름 분획에서는 32 분 이내에 모든 성분이 검출되었다 (Figure 7C). 따라서 五味子 메탄올 추출물의 용매분획 과정에서 schizandrin보다 극성이 낮은 물질들은 n-헥산층으로 대부분 이행되었고, 五味子 클로로포름 분획에는 주로 schizandrin을 포함한 보다 극성이 높은 물질들이 함유되어 있다는 것을 HPTLC와 HPLC를 이용한 패턴 분석 결과를 통해서 알 수 있었다.
따라서 annexin-V/7-AAD double staining을 이용하면 초기 apoptosis와 후기 apoptosis가 유도된 정도를 판단할 수 있다²⁸⁾. 본 연구에서 annexin-V/7-AAD double staining을 실시한 후 apoptosis가 유도된 세포수를 flow cytometry로 측정하여 조사한 결과 五味子 클로로포름 분획의 농도에 비례하여 apoptosis가 유도된 세포가 증가하였다. 五味子 클로로포름 분획 120 ㎍/㎖의 농도에서 약 20%의 세포가 apoptosis가 유도됨을 확인하였다 (Figure 5).
본 연구에서 五味子 500 g을 메탄올 5 ℓ로 24 시간 동안 추출하여 농축 및 동결 건조시킨 메탄올 추출물은 109.7 g을 얻어 수율이 21.94%로 나타났다. 이 중 100 g의 메탄올 추출물을 n-헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올, 증류수순으로 용매분획을 실시하여 농축하였을 때 클로로포름 분획의 수율이 가장 낮게 나타났다 (Figure 1).
본 연구에서 인간 전립선암 세포주인 PC-3 세포를 이용하여 五味子 클로로포름 분획이 미치는 영향을 평가한 결과, 五味子 메탄올 추출물 및 분획의 처리한 농도에 비례하여 세포 성장이 억제되었으며 특히 클로로포름 분획을 처리한 세포에서 세포생존율이 가장 많이 감소하였다. 五味子 클로로포름 분획의 처리한 농도에 비례하여 apoptosis가 일어난 세포에서 관찰되는 염색질 응축에 의한 apoptotic body가 증가하였으며 apoptosis가 유도된 세포 비율도 증가하였다.
. 본 연구에서도 HPLC를 이용하여 schizandrin 표준품과 五味子 추출물의 성분을 검출하였을 때 설정된 분석 조건 하에서 schizandrin은 16.9 분에서 peak가 확인되었고, 五味子 메탄올 추출물과 클로로포름 분획 모두 schizandrin이 가장 많이 함유되어있음을 확인할 수 있었다. 또한 실험에 주로 이용한 五味子 클로로포름 분획의 HPLC 패턴을 五味子 메탄올 추출물과 비교해 보았을 때 五味子 메탄올 추출물에서는 42 분 동안 모든 성분이 검출되었지만 (Figure 7B), 五味子 클로로포름 분획에서는 32 분 이내에 모든 성분이 검출되었다 (Figure 7C).
n-헥산과 클로로포름 분획이 가장 많이 함유하고 있는 성분 또한 schizandrin이므로 PC-3 세포에 증식 억제 효과를 주로 나타내는 성분이 schizandrin이라고 짐작할 수 있다. 에틸아세테이트, 부탄올, 증류수 분획은 UV 254 ㎚에서 검출되는 성분이 거의 없는 것으로 보아 MTT assay에서 세포 증식 억제 효과가 거의 나타나지 않은 것과 상응하는 결과임을 알 수 있었다.
94%로 나타났다. 이 중 100 g의 메탄올 추출물을 n-헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올, 증류수순으로 용매분획을 실시하여 농축하였을 때 클로로포름 분획의 수율이 가장 낮게 나타났다 (Figure 1).
그 결과 에틸아세테이트, 부탄올, 증류수 분획은 UV 254 ㎚에서 검출되는 성분이 거의 없었고, 五味子 메탄올 추출물과 n-헥산, 클로로포름 분획은 schizandrin을 포함한 여러 성분을 포함하고 있었다. 특히 클로로포름 분획에서는 五味子 메탄올 추출물보다 더 많은 schizandrin을 함유하고 있다는 것을 알 수 있었다.

후속연구

Schizandrin과 gomisin N을 포함한 五味子로부터 분리된 여러 성분들의 항암 효과에 대한 연구^15-22)가 보고되어 있으므로, schizandrin과 구조가 비슷한 다른 리그난 성분들도 PC-3세포에 항암 효과가 있을 가능성이 있지만, 五味子에 가장 많이 함유되어 있으며 분리하기 쉬운 schizandrin이 PC-3 세포에 항암 효과를 가진다는 것이 의미가 있다고 할 수 있겠으며, apoptosis를 유도하는 기전에 대한 후속 연구가 더 필요할 것이다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	五味子란 무엇인가?	五味子 (Schisandrae Fructus)는 오미자과 (Schisandraceae)에 속한 落葉木質藤本인 오미자 (北五味子) Schisandra chinensis (Trucz.) Baill. 또는 華中五味子 (南五味子) S. sphenanthera Rehd. et Wils.의 완숙한 果實을 건조한 것으로 性은 溫하고, 味는 酸甘하며 肺, 心, 腎經에 들어가 上으로는 肺氣를 斂하고, 下로는 腎陰을 滋하며 澀精止瀉, 生津, 止汗 등의 작용을 가지고 있다1). 五味子의 주성분은 schizandrin, deoxyschizandrin, γ-schizandrin, schizandrol, schizandrin C, schizandrol B (gomisin A) 등의 diphenylcyclen계의 lignan으로 그 양이 18.
	五味子의 성분은 무엇인가?	의 완숙한 果實을 건조한 것으로 性은 溫하고, 味는 酸甘하며 肺, 心, 腎經에 들어가 上으로는 肺氣를 斂하고, 下로는 腎陰을 滋하며 澀精止瀉, 生津, 止汗 등의 작용을 가지고 있다1). 五味子의 주성분은 schizandrin, deoxyschizandrin, γ-schizandrin, schizandrol, schizandrin C, schizandrol B (gomisin A) 등의 diphenylcyclen계의 lignan으로 그 양이 18.1~19.2% 정도이며, 이외에 정유를 약 3% 함유하고 citric acid, citral, β-sitosterol, 비타민 C, E 등도 함유하고 있다2).
	오미자와 관련된 연구로는 무엇이 있나?	五味子와 관련된 연구로는 항산화 효과3-5), 간세포 보호 효과6-7), 신경세포 보호 효과3,8-9), 멜라닌 생성 억제와 미백 효과10), 항당뇨 및 항고지혈 효과11), 항균 효과12) 등이 있다. 五味子 추출물의 항암 효과에 대한 연구로는 간암세포주(SNU-398)13), 대장암세포주 (HT-29)14)에 대해 보고된 바있으며, 五味子로부터 분리된 성분의 항암 효과에 대한 연구로는 gomisin N의 혈구암세포주 (U937)에 대한 효과, schizandrin의 유방암세포주 (T47D)에 대한 효과를 비롯하여 많은 연구15-22)가 보고되었다.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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