선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 2. Phylogenic tree of foliar endophytic fungi isolated from L. obtusiloba using ITS rDNA sequences in this study. Numbers in bold indicate the isolate numbers in Table 1.
- , 2009). 따라서 본 연구에서는 다양한 식물 종에 대한 내생균 탐색의 일환으로 우리나라에 널리 분포하고 있는 생강나무에 공생하고 있는 내생균을 분리하고 동정하여 다양성을 파악하고자 한다.
제안 방법
- 1). 각 지역 산림에서 외관상 건강한 생강나무를 3개체씩 선별한 다음, 각각의 개체에서 3개씩 잎을 채취하여 냉장 보관하여 균 분리에 사용하였다.
- 또한 본 연구에서는 3개의 서로 다른 배지에서 균 분리를 수행하였다. 총 12종의 내생균이 분리되었으나 각각의 배지에서는 최소 5개에서 최대 7개의 균주가 분리되었다(Table 3).
- 채집된 생강나무의 잎은 48시간 이내에 균 분리 과정을 진행하였다. 모든 잎은 표면에 있는 이물질들을 제거하기 위해서 흐르는 물로 세척한 다음, 1% NaOCl에 3분, 70%에탄올수용액에 2분간 처리하고 멸균수로 2회 세척하는 표면 살균과정을 수행하였다(Arnold et al., 2001). 표면 살균된 잎은 12 개의 조각(10 × 10 mm)으로 절단한 뒤에 potato dextrose agar (PDA), malt extract agar(MEA), water ager(WA) 에 각각 4개의 절편씩 치상하여 25℃ 의암실에서 배양하였다.
- 반응에 사용된 primer들은 사용 전에 모두 10pmol의 농도로 조정하여 사용하였으며, primer ITS1F와 ITS4를 각각 1µl, 주형 DNA 1 µl, 멸균수 7µl, 2X Taq Premix (SolGent, Korea) 10 µl를 넣어 최종 반응용량을 20 µL로 맞추었다. 반응조건으로는 94℃에서 5분간 predenaturation 후, 94℃에서 30초간 denaturation, 50oC에서 30초간 annealing, 72℃에서 1분간 elongation을 1 cycle로 하여 총 30회를 진행하였으며, 최종적으로 72℃에서 5분간 증폭된 산물을 안정화시켜 4℃에서 보관하였다. 증폭된 산물은 RedSafe™ nucleic acid staining solution(iNtRON Biotechnology, Korea)을 첨가한 1.
- 증폭된 산물은 RedSafe™ nucleic acid staining solution(iNtRON Biotechnology, Korea)을 첨가한 1.5%(w/v) agarose gel에 1µl씩 loading하여 100 V로 20분간 전기영동한 뒤에 UV transilluminator 상에서 밴드를 확인하였다.
- 채집된 생강나무의 잎은 48시간 이내에 균 분리 과정을 진행하였다. 모든 잎은 표면에 있는 이물질들을 제거하기 위해서 흐르는 물로 세척한 다음, 1% NaOCl에 3분, 70%에탄올수용액에 2분간 처리하고 멸균수로 2회 세척하는 표면 살균과정을 수행하였다(Arnold et al.
- 표면 살균된 잎은 12 개의 조각(10 × 10 mm)으로 절단한 뒤에 potato dextrose agar (PDA), malt extract agar(MEA), water ager(WA) 에 각각 4개의 절편씩 치상하여 25℃ 의암실에서 배양하였다.
대상 데이터
- 강원도의 영서지역인 어답산과 좌방산 그리고 영동지역인 죽변산과 칠성산 등 총 4개의 산에서 생강나무의 병증이 없는 건강한 잎을 채집하였다(Fig. 1). 각 지역 산림에서 외관상 건강한 생강나무를 3개체씩 선별한 다음, 각각의 개체에서 3개씩 잎을 채취하여 냉장 보관하여 균 분리에 사용하였다.
데이터처리
- 분석된 염기서열은 NCBI(http://www.ncbi.nlm.gov) 에서 BLAST 프로그램을 이용하여 종을 확인하였다. 계통수 작성은 bootstrap을 1000번 반복으로 설정하고, Spathularia flavida를 outgroup으로 사용하여 나타내었다(Kil et al.
이론/모형
- 순수 분리되어 배양된 내생균은 DNeasy plant mini kit(GeneAll, Korea)의 방법에 따라 내생균의 균사에서 genomic DNA를 추출하였다. 추출된 DNA는 균특이적인 primer ITS1F와 ITS4를 사용하여 ITS영역을 포함하는 rDNA를 선택적으로 증폭시켰다(Gardes and Bruns, 1993).
성능/효과
- 2). Phomopsis amygdali는 모든 지역의 생강나무에서 발견되었고 어답산을 제외한 세 지역의 생강나무잎에서 우점하는 내생균 종으로 나타났다(Table 2). 일반적으로 Phomopsis속을 포함하여 Colletotrichum, Phyllostica, Xylaria 등의 속에 속하는 균은 부생균으로 보고된 적은 없으며 일반적으로 식물의 잎에 우점하는 내생균으로 알려져 있다(Photita et al.
- , 2005; Wong and Hyde, 2001). 그러나 Xylaria속에 속하는 균은 어답산에서 한 개의 균주 만이 분리되었으며, Colletorichum과 Phyllostica에 속하는 균은 분리되지 않았다. Glomerella cingulata는 일반적으로 과실이나 채소의 탄저병에 원인으로 알려져 있으며(Kwon et al.
- 5종의 내생균을 분리하였다. 따라서 전체적으로 영서지방의 생강나무에서 영동지역보다 다양한 내생균을 분리할 수 있었다. 숙주식물의 종과 성숙도뿐만 아니라 강우량, 온도, 습도와 같은 환경요인도 잎에 서식하는 내생균의 다양성에 큰 영향을 미치는 것으로 알려져 있다(Chareprasert et al.
- 총 12종의 내생균이 분리되었으나 각각의 배지에서는 최소 5개에서 최대 7개의 균주가 분리되었다(Table 3). 모든 배지에서 분리된 내생균은 Glomerella acutata, P. amygdali 로 2종이 확인되었다. PDA배지에서만 분리된 내생균은 Annulohypoxylon annulatum, Paraconiothyrium brasiliense, P.
- 지역적으로는 어답산에서 6종의 내생균이 분리되었으며, 좌방산과 죽변산에서 각각 5종, 그리고 칠성산에서 2종의 내생균을 분리할 수 있었다(Table 2). 영서지역인 어답산과 좌방산에서는 총 10종, 평균 5종의 내생균을 분리할 수 있었으나 영동지역인 죽변산과 칠성산에서는 총 5종, 평균 3.5종의 내생균을 분리하였다. 따라서 전체적으로 영서지방의 생강나무에서 영동지역보다 다양한 내생균을 분리할 수 있었다.
- 지역적으로는 어답산에서 6종의 내생균이 분리되었으며, 좌방산과 죽변산에서 각각 5종, 그리고 칠성산에서 2종의 내생균을 분리할 수 있었다(Table 2). 영서지역인 어답산과 좌방산에서는 총 10종, 평균 5종의 내생균을 분리할 수 있었으나 영동지역인 죽변산과 칠성산에서는 총 5종, 평균 3.
- 또한 본 연구에서는 3개의 서로 다른 배지에서 균 분리를 수행하였다. 총 12종의 내생균이 분리되었으나 각각의 배지에서는 최소 5개에서 최대 7개의 균주가 분리되었다(Table 3). 모든 배지에서 분리된 내생균은 Glomerella acutata, P.
- 총 15개체의 생강나무 잎으로부터 총 59개의 균주를 분리하여 ITS지역의 염기서열을 이용하여 동정한 결과 총 12종이 확인되었다(Table 1; Fig. 2). Phomopsis amygdali는 모든 지역의 생강나무에서 발견되었고 어답산을 제외한 세 지역의 생강나무잎에서 우점하는 내생균 종으로 나타났다(Table 2).
후속연구
- 또한 일반적으로 사용하는 배지에서는 배양할 수 없는 균들이 존재하며 많은 내생균들은 성장이 느려 배양에 어려움이 있다. 따라서 내생균의 배양을 위해서는 다양한 배지를 사용하고, 잎에 서식하는 내생균의 다양성의 확인을 위해서는 클로닝, tRFLP, DGGE 등과 같이 분자생물학적 방법을 이용한 연구가 필요할 것으로 생각된다.
- 또한 동일한 종이지만 다른 계통 즉, 병원성과 비병원성의 계통이 있을 수도 있다. 따라서 이를 검증하기 위해서 분리한 균주를 생강나무에 접종하여 관찰하는 연구가 필요하며 분리된 내생균의 분류 및 생태에 대한 연구와 더불어 이러한 생강나무에서 내생균의 역할에 대한 후속 연구가 진행되어야 할 것이다.
- , 2006). 본 연구에서는 강원도의 영동과 영서지역에서 두 개의 산을 선택하여 시료를 채취하였는데 기후 요인에 있어서 영동과 영서 지역은 평균 온도 및 강수량에 있어 큰 차이를 보이며 이러한 환경적 차이는 본 연구에서 나타난 지역 간 다양성의 차이를 어느 정도 설명할 수 있을 것으로 생각된다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.