[논문]LC-MS/MS를 이용한 천왕보심단(天王補心丹)의 함량분석 및 항산화 효능 연구

서창섭; 김온순; 신현규

LC-MS/MS를 이용한 천왕보심단(天王補心丹)의 함량분석 및 항산화 효능 연구
Quantitative Determination and Antioxidant Effects of Cheonwangbosimdan 원문보기

생약학회지, v.45 no.4 = no.179, 2014년, pp.300 - 314

서창섭 (한국한의학연구원 한약방제연구그룹) , 김온순 (한국한의학연구원 한약방제연구그룹) , 신현규 (한국한의학연구원 한약방제연구그룹)

Abstract ▼ AI-Helper

An ultra-performance liquid chromatography-electrospray ionization-mass spectrometer (UPLC-ESI-MS) method was established for the simultaneous quantification of eighteen marker compounds in traditional Korean formula, Cheonwangbosimdan (CWBSD). In addition, we evaluated the antioxidant effects of CWBSD. Eighteen marker components were separated on a UPLC BEH $C_{18}$ analytical column ($2.1{\times}100mm$, $1.7{\mu}m$) and kept at $45^{\circ}C$ by gradient elution with 0.1% (v/v) formic acid in water and acetonitrile as mobile phase. The flow rate was 0.3 mL/min and the injection volume was $2.0{\mu}L$. The antioxidant activities of CWBSD were assessed by measuring free radical scavenging activities on 2,2'-azinobis-3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid (ABTS) and 1-1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH). The calibration curves of all analytes showed good linearity (correlation coefficient ${\geq}0.9937$) within the test ranges. The limits of detection and quantification for the 18 marker compounds were 0.01-4.71 ng/mL and 0.03-14.13 ng/mL, respectively. The contents of the 18 compounds in CWBSD extract ranged from none to $1701.00{\mu}g/g$. The CWBSD showed the radical scavenging activity in a dose-dependent manner. The concentration required for 50% reduction ($RC_{50}$) against ABTS and DPPH radicals were $149.42{\mu}g/mL$ and $339.24{\mu}g/mL$.

주제어

AI 본문요약
AI-Helper

* AI 자동 식별 결과로 적합하지 않은 문장이 있을 수 있으니, 이용에 유의하시기 바랍니다.

문제 정의

²⁾ 본 처방은 혈관확장,³⁾ 혈압강하,³⁾ 항치매,^4-6) 항산화⁶⁾ 및 항우울⁷⁾ 효과 등 다양한 실험적 생리활성 연구가 진행 및 보고되었으며, 뇌경색 후 발생하는 심인성 심장질환 환자의 증상 개선에 대한 증례보고가 보고되었다.⁸⁾ 따라서 저자들은 본 연구에서는 임상에서 不眠에 널리 사용되는 처방의 하나인 天王補心丹을 선정하여 이에 대한 효율적인 품질관리에 대한 기초 자료를 제공하고자 주요 성분에 대한 함량분석을 실시하였다. 본 처방의 구성 생약의 성분에 관한 연구는 생건지황(生乾地黃)의 aucubin과 catalpol 등과 같은 iridoid glycosides,⁹⁾ 황련(黃蓮)의 berberine 등과 같은 alkaloids,¹⁰⁾ 석창포(石菖蒲)의 β-asarone 등과 같은 phenylpropanoids,¹¹⁾ 인삼(人蔘)의 ginsenosid Rb₁과 Rg₁ 등과 같은 triterpenoid saponins,¹²⁾ 당귀(當歸)의 nodakenin 등과 같은 coumarins,¹³⁾ 오미자(五味子)의 schizandrin과 gomisin A 등과 같은 lignans,¹⁴⁾ 천문동(天門冬)의 5-hydroxymethyl-2-furaldehyde(5-HMF) 등과 같은 furan derivatives,¹⁵⁾ 맥문동(麥門冬)의 spicatoside A와 B 등과 같은 saponins,¹⁶⁾ 백자인(柏子仁)의 myricetin 등과 같은 flavonoids,¹⁷⁾ 산조인(酸棗仁)의 spinosin과 6-feruloylspinosin 등과 같은 flavonoids,¹⁸⁾ 현삼(玄蔘)의 cinnamic acid 등과 같은 phenylpropanoids¹⁹⁾ 및 harpagide와 (E)-harpagoside 등과 같은 iridoid glycosides,²⁰⁾ 백복신(白茯神)의 pachymic acid와 dehydropachymic acid 등과 같은 triterpenoid,^21,22) 단삼(丹蔘)의 salvianolic acid 등과 같은 phenylpropanoids²³⁾ 및 tanshinone IIA 등과 같은 diterpenoids,²³⁾ 길경(桔梗)의 platycodin D 등과 같은 triterpenoid saponins²⁴⁾ 및 원지(遠志)의 3,4,5-trimethoxycinnamic acid 등과 같은 phenylpropanoids 계열²⁵⁾이 분리 보고되었다.

제안 방법

ABTS 라디칼 소거능 측정 − ABTS 라디칼을 이용한 항산화능 측정은 ABTS+• cation decol orization assay 방법을 96 well plate에 맞게 수정하여 실시하였다.
LC-MS/MS 분석조건 확립 − 天王補心丹을 구성하는 구성 생약의 주요 성분인 aucubin, catalpol(이상 생건지황), β-asarone(석창포), ginsenoside Rb1, ginsenoside Rg1(이상 인삼), nodakenin(당귀), schizandrin, gomisin A(이상 오미자),5-HMF(천문동), myricetin(백자인), spinosin(산조인),cinnamic acid, harpagide, (E)-harpagoside(이상 현삼),salvianolic acid, tanshinone IIA(이상 단삼), platycodin D(길경) 및 3,4,5-trimethoxycinnamic acid(원지) 등 18종 성분에 대하여 LC-MS/MS를 이용하여 동시 정량을 실시하였다.
UPLC 및 LC-MS/MS 분석 조건 − 天王補心丹 내 주요 성분의 분리와 검출은 Waters(Milford, MA, USA)사의 질량분석기가 결합된 ACQUITY TQD LC-MS/MS를 사용하여 분석 하였다.
天王補心丹 물 추출물 조제 − 天王補心丹을 구성하는 한약재를 Table I과 같이 같은 비율로 배합한 후 총 시료 양을 5.0 kg(1첩 48.75 g × 102.5배)으로 맞춘 후 초고속진공저온추출기(Cosmos 660, Kyungseo Machine Co., Incheon, Korea)에 넣고, 물을 시료의 10배(50 L)로 첨가하여 100℃에서 2시간 전탕한 후 표준체(No. 270, 53 µm, Chung Gye Sang Gong Sa, Seoul, Korea)를 이용하여 여과하였다.
天王補心丹 추출물 중 주요성분의 함량분석 − 확립된 LC-MS/MS 분석 방법에 의해 天王補心丹의 주요 성분에 대한 피크 확인을 실시하였다.
天王補心丹 추출물의 항산화 효능 − 天王補心丹의 항산화 효능을 평가하고자 추출물을 농도별로 조제한 후 ABTS와 DPPH 라디칼 소거활성을 측정하였다.
天王補心丹을 구성하는 15가지 구성 생약의 주요 성분 중 aucubin, catalpol, harpagide, 5-HMF, spinosin, nodakenin, myricetin, salvianolic acid B, ginsenoside Rg1, 3,4,5-trimethoxycinnamic acid, platycodin D, (E)-harpagoside, cinnamic acid, ginsenoside Rb1, schizandrin, β-asarone, gomisin A 및 tanshinone IIA 등 18종의 성분에 대하여 LC-MS/MS를 이용한 함량분석을 실시하였다.
검량선 작성 − Aucubin, catalpol, harpagide, 5-HMF, spinosin, nodakenin, myricetin, salvianolic acid B, ginsenosideRg1, 3,4,5-trimethoxycinnamic acid, platycodin D, (E)-harpagoside, cinnamic acid, ginsenoside Rb1, schizandrin, β-asarone, gomisin A 및 tanshinone IIA 등 18종의 표준품에 대한 검량선은 10, 50, 100 및 500 ng/mL의 농도로 희석하여 피크 면적과 농도에 대해서 작성하였다.
7µm) 칼럼을 이용하여 성분의 분리를 위해 이동상으로 물-메탄올, 물-아세토나이트릴, 산이 함유된 물-메탄올 및 산이 함유된 물-아세토나이트릴 등을 이용하여 성분들의 검출을 시도하였다. 그 결과 최적의 이동상 조건을 산이 함유된 물-아세토나이트릴로 결정하였으며, 산으로 피크 꼬리 끌림 현상을 줄이고 각 성분의 이온에 대한 검출 감도를 향상시키기 위하여 0.1% 개미산을 첨가하였다. 이와 같이 최적의 이동상을 이용하여 ESI 방법의 양이온 모드와 음이온 모드에서 Table II와 III의 조건과 같이 분석을 실시하였으며, 칼럼온도는 45℃, 유속은 분당 0.
시료 조제를 위한 추출기는 경서기계산업의 초고속진공 저온농축추출기(COSMOS660, Incheon, Korea)를 사용하여 추출하였다. 본 처방의 함량분석에 사용된 UPLC는 pump, digasser, column oven 및 autosampler로 구성된 Waters의 ACQUITY UPLC system(Milford, MA, USA)를 사용하였으며, 질량분석기는 ESI source가 장착된 탠덤 사중극자 질량 분석기(ACQUITY TQD LC-MS/MS, Waters, Milford, MA, USA)를 사용하여 분석하였다. 데이터는 Waters MassLynx software(version 4.
15 mM의 DPPH 용액과 시료를 혼합하여 실온에서 30분간 반응시킨 후, 517 nm에서 흡광도를 측정하였다. 시료의 항산화능은 시료를 녹인 용매인 DMSO를 대조군으로 하여 대조군에 대한 라디칼 소거능을 백분율로 나타내었다. 활성비교를 위하여 vitamin C를 사용하였다.
USA)를 사용하여 734 nm에서 흡광도를 측정하였다. 시료의 항산화능은 시료를 녹인 용매인 PBS를 대조군으로 하여 대조군에 대한 라디칼 소거능을 백분율로 나타내었다. 활성비교를 위하여 vitamin C를 사용하였다.
역상 UPLC 조건에서 UPLC BEH C18(2.1 × 100 mm, 1.7µm) 칼럼을 이용하여 성분의 분리를 위해 이동상으로 물-메탄올, 물-아세토나이트릴, 산이 함유된 물-메탄올 및 산이 함유된 물-아세토나이트릴 등을 이용하여 성분들의 검출을 시도하였다.
이들 성분 중 본 연구에서는 생건지황(生乾地黃)의 aucubin과 catalpol, 석창포(石菖蒲)의 β-asarone, 인삼(人蔘)의 ginsenoside Rb1과 ginsenoside Rg1, 당귀(當歸)의 nodakenin, 오미자(五味子)의 schizandrin과 gomisin A, 천문동(天門冬)의 5-HMF, 백자인(柏子仁)의 myricetin, 산조인(酸棗仁)의 spinosin, 현삼(玄蔘)의 cinnamic acid, harpagide 및 (E)-harpagoside, 단삼(丹蔘)의 salvianolic acid B와 tanshinone IIA, 길경(桔梗)의 platycodin D 및 원지(遠志)의 3,4,5- trimethoxycinnamic acid 등 18종에 대하여 질량분석기가 결합된 초고성능 액체크로마토그래피(ultra-performance liquid chromatography-electrospray ionization-mass spectrometer; UPLC-ESI-MS)를 이용하여 함량분석과 항산화 효능을 검색하였다.
1% 개미산을 첨가하였다. 이와 같이 최적의 이동상을 이용하여 ESI 방법의 양이온 모드와 음이온 모드에서 Table II와 III의 조건과 같이 분석을 실시하였으며, 칼럼온도는 45℃, 유속은 분당 0.3 mL로 하여 모든 성분을 11분 이내로 분리하였다.

대상 데이터

1. Chemical structures of 18 marker compounds of CWBSD.
Harpagide(≥98.0%), salvianolic acid B(≥98.0%), platycodin D(≥98.0%) 및 tanshinone IIA(≥98.0%)는 ChemFaces(Wuhan, China)에서 구입하였으며, 5-HMF(≥98.0%)와 3,4,5-trimethoxycinnamic acid(≥98.0%)는 SigmaAldrich(St. Louis, MO, USA)에서 구입하였다.
Louis, MO, USA)에서 구입하였다. LC-MS/MS 분석을 위한 메탄올, 아세토나이트릴 및 물은 J.T. Baker(Phillipsburg, NJ, USA)에서 구입하였으며, 개미산은 Sigma-Aldrich(St. Louis, MO, USA)에서 구입하여 사용하였다.
Nodakenin(≥98.0%), myricetin(≥97.8%) 및 β-asarone(≥98.0%)은 NPC Bio Technology(Yeongi, Korea), TCI(Tokyo, Japan) 및 ROTH(Karlsruhe, Germany)로부터 각각 구입하였다.
본 처방의 함량분석에 사용된 UPLC는 pump, digasser, column oven 및 autosampler로 구성된 Waters의 ACQUITY UPLC system(Milford, MA, USA)를 사용하였으며, 질량분석기는 ESI source가 장착된 탠덤 사중극자 질량 분석기(ACQUITY TQD LC-MS/MS, Waters, Milford, MA, USA)를 사용하여 분석하였다. 데이터는 Waters MassLynx software(version 4.1, Milford, MA, USA)를 사용하여 수집 및 처리하였다.
시료 조제를 위한 추출기는 경서기계산업의 초고속진공 저온농축추출기(COSMOS660, Incheon, Korea)를 사용하여 추출하였다. 본 처방의 함량분석에 사용된 UPLC는 pump, digasser, column oven 및 autosampler로 구성된 Waters의 ACQUITY UPLC system(Milford, MA, USA)를 사용하였으며, 질량분석기는 ESI source가 장착된 탠덤 사중극자 질량 분석기(ACQUITY TQD LC-MS/MS, Waters, Milford, MA, USA)를 사용하여 분석하였다.
시약 및 기기 − Aucubin(≥98.0%), cinnamic acid(≥98.0%), ginsenoside Rb1(≥98.0%), schizandrin(≥98.0%) 및 gomisin A(≥98.0%)는 Wako Pure Chemical Industries, Ltd. (Osaka, Japan)로부터 구입하였으며, catalpol(≥98.0%), spinosin(≥98.0%), ginsenoside Rg1(≥98.0%) 및 (E)-harpagoside(≥98.0%)는 Chengdu Biopurify Phytochemicals(Chengdu, China)에서 구입하였다.
실험재료 − Table I과 같이 본 실험에 사용된 天王補心丹을 구성하는 15종의 한약재는 모두 광명당제약(Ulsan, Korea)에서 규격품을 구입하여 동국대학교 한의과대학 이제현 교수(Gyeongju, Korea)로부터 감정 후 사용하였다.
항산화 효능 평가를 위한 dimethyl sulfoxide(DMSO), 2,2'-azinobis-3-ethyl-benzothiazoline-6-sulfonic acid(ABTS) 및 2,2-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH)는 Sigma-Aldrich(St. Louis, MO, USA)에서 구입하였다.
시료의 항산화능은 시료를 녹인 용매인 PBS를 대조군으로 하여 대조군에 대한 라디칼 소거능을 백분율로 나타내었다. 활성비교를 위하여 vitamin C를 사용하였다.

이론/모형

또한 각 성분의 MS 및 MS/MS 분석 조건은 Table II와 같으며 양이온 모드와 음이온 모드에서 검출하였다. 최적의 MS 검출을 위해 capillary voltage(3.3 kV), extract voltage(3 V), source temperature(120℃), RF lens(0.3 V), desolvation temperature(300℃), desolvation gas(600 L/h), cone gas(50 L/h) 및 collision gas(0.14 mL/min) 등에 대한 조건(Table II)과 각 성분의 precursor ion, product ion, cone voltage 및 collision energy 등에 대한 최적의 조건(Table III)을 설정하여 다중반응탐색법(multiple reaction monitoring)을 이용하여 정량을 실시하였다.

성능/효과

29) Spinosin은 m/z 609.6에서 1분자의 glucose와 C4H6O4가 떨어진 [M+H−C4H6O4]+ 형태의 m/z 327.1에서 피크를 확인하였으며,30) nodakenin은 m/z 409.4에서 glucose가 떨어진 [M+H−Glc]+ 형태의 m/z 247.2에서 분자 이온 피크를 확인하였다.
31) Myricetin과 salvianolic acid B는 m/z 319.2와 717.5에서 C8H6O4와 C9H9O5가 각각 떨어진 [M+H−C8H6O4]+와 [M−H−C9H9O5]− 형태의 m/z 153.1과 519.2에서 피크를 각각 확인하였으며,32-34) platycodin D는 28번 탄소에 결합된 Ara-Rha-Xyl-Api에서 90 Da이 이탈된 m/z 469.4에서 분자 이온 피크를 확인하였다.
35) 3,4,5-Trimethoxycinnamic acid, cinnamic acid, schizandrin 및 gomisin A는 m/z 239.2, 148.9, 433.4 및 417.4에서 1개의 물분자가 이탈된 [M+H−H2O]+ 형태의 m/z 221.1, 130.9, 415.1 및 399.4에서 분자 이온 피크를 확인하였다.
42) 이상과 같이 각 성분의 precursor ion과 product ion을 설정한 후 정량을 실시하였으며, 설정된 天王補心丹의 LC-MS/MS MRM 분석법에 의해 분석한 결과 aucubin, catalpol, harpagide, 5-HMF, spinosin, nodakenin, myricetin, salvianolic acid B, ginsenoside Rg1, 3,4,5-trimethoxycinnamic acid, platycodin D, (E)-harpagoside, cinnamic acid, ginsenoside Rb1, schizandrin, β-asarone, gomisin A 및 tanshinone IIA 등 18종의 성분은 0.80, 0.80, 0.80, 1.06, 1.37, 1.85, 2.23, 2.35.
天王補心丹 추출물의 항산화 효능 − 天王補心丹의 항산화 효능을 평가하고자 추출물을 농도별로 조제한 후 ABTS와 DPPH 라디칼 소거활성을 측정하였다. ABTS 라디칼의 소거활성을 비교한 결과 추출물의 농도가 증가함에 따라 ABTS 라디칼 소거활성이 증가하는 경향을 보였다. 天王補心丹 추출물 25, 50, 100, 200 및 400 µg/mL 농도에서 각각 9.
4A). DPPH 라디칼의 소거활성 또한 ABTS 라디칼의 소거활성과 유사하게 농도의존적인 증가를 나타냈다. 추출물 25, 50, 100, 200 및 400 µg/mL 농도에서 각각 4.
天王補心丹 추출물 25, 50, 100, 200 및 400 µg/mL 농도에서 각각 9.78, 20.31, 35.49, 65.21 및 94.87%의 라디칼 소거활성을 나타냈으며, 시료를 첨가하지 않은 대조구의 흡광도를 1/2로 감소시키는데 필요한 시료의 양(RC50)은 149.92 µg/mL로 관찰되었다.
검량선, 검출한계 및 정량한계 작성 − LC-MS/MS를 이용하여 농도에 대한 피크 면적 값에 대하여 18종 성분의 검량선 작성 결과 상관 계수(r2) 값이 0.99이상으로 양호한 직선성을 나타내었으며, 검출한계와 정량한계는 0.01-4.71 ng/mL와 0.03-14.13 ng/mL로 나타났다(Table IV).
그 결과 5-HMF, spinosin, nodakenin, myricetin, 3,4,5-trimethoxycinnamic acid, cinnamic acid, schizandrin, β-asarone, gomisin A 및 tanshinone IIA 등 10종은 m/z 126.9, 609.5, 409.4, 319.2, 239.2, 148.9, 433.3, 209.2, 417.4 및 295.3에서 [M+H]+ 형태의 분자이온피크를 확인하였으며, aucubin, catalpol, harpagide, salvianolic acid B, ginsenoside Rg1, platycodin D, (E)-harpagoside 및 ginsenoside Rb1 등 8종의 성분은 m/z 345.3, 361.3, 363.3, 717.5, 799.2, 1224.3, 493.4 및 1107.5에서 [M−H]− 형태의 분자이온 피크를 각각 확인하였다(Table III).
83 µg/g) 등이 다른 성분에 비해 많이 함유되어 있음을 확인하였다. 또한 天王補心丹의 ABTS와 DPPH 라디칼 제거를 통한 항산화 활성은 용량이 높을수록 높은 활성을 나타내었다. 이러한 분석 결과는 天王補心丹의 품질관리와 새로운 생리활성 연구를 위한 기초 자료로 활용될 수 있을 것으로 사료되며, 天王補心丹의 항산화 효능을 통해 산화적 스트레스에 의한 다양한 질환의 초기단계를 예방하는데 활용할 수 있을 것으로 기대 된다.
분석 결과 본 한약 처방에서는 단삼(丹蔘)의 주요 성분인 salvianolic acid B가 가장 많은 1701.00 µg/g으로 검출되었으며, 당귀(當歸)의 nodakenin(463.50 µg/g), 길경(桔梗)의 platycodin D(225.00 µg/g), 현삼(玄蔘)의 (E)-harpagoside(202.50 µg/g), 석창포(石菖蒲)의 β-asarone(204.17 µg/g) 및 생건지황(生乾地黃)의 catalpol(167.83 µg/g) 등이 다른 성분에 비해 많이 함유되어 있음을 확인하였다.
추출물 25, 50, 100, 200 및 400 µg/mL 농도에서 각각 4.02, 9.92, 17.61, 37.18 및 57.02%의 라디칼 소거활성을 나타냈으며, RC50는 339.24 µg/mL로 관찰되었다.
함량 분석 결과 天王補心丹 추출물 중에서 천문동(天門冬)의 5-HMF, 백자인(柏子仁)의 myricetin, 오미자(五味子)의 schizandrin 및 단삼(丹蔘)의 tanshinone IIA 등 4종은 검출이 되지 않았으며, 이들 4종을 제외한 14종의 성분 함량은 6.23-1701.00 µg/g으로 나타났다(Table V).

후속연구

또한 天王補心丹의 ABTS와 DPPH 라디칼 제거를 통한 항산화 활성은 용량이 높을수록 높은 활성을 나타내었다. 이러한 분석 결과는 天王補心丹의 품질관리와 새로운 생리활성 연구를 위한 기초 자료로 활용될 수 있을 것으로 사료되며, 天王補心丹의 항산화 효능을 통해 산화적 스트레스에 의한 다양한 질환의 초기단계를 예방하는데 활용할 수 있을 것으로 기대 된다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	−天王補心丹을 구성하는 구성 생약의 주요 성분은?	LC-MS/MS 분석조건 확립 −天王補心丹을 구성하는 구성 생약의 주요 성분인 aucubin, catalpol(이상 생건지황), β-asarone(석창포), ginsenoside Rb1, ginsenoside Rg1(이상 인삼), nodakenin(당귀), schizandrin, gomisin A(이상 오미자), 5-HMF(천문동), myricetin(백자인), spinosin(산조인), cinnamic acid, harpagide, (E)-harpagoside(이상 현삼), salvianolic acid, tanshinone IIA(이상 단삼), platycodin D(길경) 및 3,4,5-trimethoxycinnamic acid(원지) 등 18종 성분에 대하여 LC-MS/MS를 이용하여 동시 정량을 실시하였다. 역상 UPLC 조건에서 UPLC BEH C18(2.
	−天王補心丹 추출물에서 DPPH 라디칼의 소거활성을 측정한 결과는?	4A). DPPH 라디칼의 소거활성 또한 ABTS 라디칼의 소거활성과 유사하게 농도의존적인 증가를 나타냈다. 추출물 25, 50, 100, 200 및 400 μg/mL 농도에서 각각 4.
	−天王補心丹 추출물에서 ABTS 라디칼의 소거활성을 측정한 결과는?	天王補心丹 추출물의 항산화 효능 −天王補心丹의 항산화 효능을 평가하고자 추출물을 농도별로 조제한 후 ABTS와 DPPH 라디칼 소거활성을 측정하였다. ABTS 라디칼의 소거활성을 비교한 결과 추출물의 농도가 증가함에 따라 ABTS 라디칼 소거활성이 증가하는 경향을 보였다. 天王補心丹 추출물 25, 50, 100, 200 및 400 μg/mL 농도에서 각각 9.

참고문헌 (42)

Wei, Y. L. (1990) Seuideukhyobang, 217. Esdang, Seoul.
Herbal formulation Professors of Korean Medicine (2003) Herbal formulation, 329-331. Younglimsa, Seoul.
Kim, N. J., Kong, Y. Y. and Chang, S. W. (1988) Studies on the efficacy of combined preparation of crude drugs (XXXVII). The effects of Chunwangboshimdan on the central nervous system and cardio-vascular system. Kor. J. Pharmacogn. 19: 208-215.
Lee, J. Y., Jung, I. C. and Lee, S. R. (2002) Effects of Chenwhangbosimdan (CWBD) on inhibition of impairment of learning and memory, and acetylcholinesterase in amnesia mice. J. Orient. Neuropsychiatry 13: 149-171.
Choi, K. W. and Jung, I. C. (2008) The effects of Chenwhangbosindan (CBD) hot water extract & ultra-fine powder on the Alzheimer's disease model. J. Orient. Neuropsychiatry 19: 77-93.
Jung, I. C. (2008) Effects of Chenwhangbosim-dan and Sungimjihwang-tang on protecting microglia and inhibiting acetylcholinesterase and oxidants. Korean J. Orient. Physiol. Pathol. 22: 120-125.
Park, J. H., Bae, C. W., Jun, H. S., Hong, S.Y. and Park, S. D. (2004) Antidepressant effect of chunwangboshimdan and its influence on monoamines. Korena J. Orient. Med. Prescrip. 12: 77-93.
Han, S. H., Jeong, S. H., Jeog, S. H., Shin, G. C. and Lee, W. C. (2002) Treated one case of neurogenic heart disease patient with Chunwangbosim-dan (天王補心丹). Korea J. Joongpoong 3: 75-80.
Kim, N. J., Jung, E. A., Kim, H. J., Sim, S. B. and Kim, J. W. (2000) Quality evaluation of various dried roots of Rehmannia glutinosa. Kor. J. Pharmacogn. 31: 130-141.
Ma, B. L., Ma, Y. M., Shi, R., Wang, T. M., Zhang, N., Wang, C. H. and Yang, Y. (2010) Identification of the toxic constituents in Rhizoma Coptidis. J. Ethnopharmacol. 128: 357-364.

상세보기
Liao, J. F., Huang, S. Y., Jan, Y. M., Yu, L. L. and Chen, C. F. (1998) Central inhibitory effects of water extract of Acori Graminei Rhizoma in mice. J. Ethnopharmacol. 61: 185-193.

상세보기
Shan, S. M., Luo, J. G., Huang, F. and Kong, L. Y. (2014) Chemical characteristics combined with bioactivity for comprehensive evaluation of Panax ginseng C.A.Meyer in different ages and seasons based on HPLC-DAD and chemometric methods. J. Pharm. Biomed. Anal. 89: 76-82.

상세보기
Ahn, M. J., Lee, M. K., Kim, Y. C. and Sung, S. H. (2008) The simultaneous determination of coumarins in Angelica gigas root by high performance liquid chromatography-diode array detector coupled with electrospray ionization/mass spectrometry. J. Pharm. Biomed. Anal. 46: 258-266.

상세보기
Koo, D. C., Suh, W. S., Baek, S. Y. and Shim, S. H. (2011) Quantitative determination of lignans from Schizandra chinensis by HPLC. Kor. J. Pharmacogn. 42: 233-239.
Kwak, H. M., Kim, J. Y., Lim, J. H., Chung, S. K., Kwon, S. H., Jeong, H. H., Hur, J. M. and Song, K. S. (2005) Changes in chemical composition and biological activities of oriental crude drugs by food processing techniques III - Changes of HMF contents from roasted Asparagi Tuber. Kor. J. Pharmacogn. 36: 235-239.
Shin, J. S. (2002) Saponin composition of Liriope platyphylla and Ophioppgon japonicas. Korean J. Crop Sci. 47: 236-239.

원문보기 상세보기
Song, H. Y., Kim, J. K., Hong, S. H., Gwang, C. Y. and Kim, N. K. (2004) Increasing effect of myricetin of Biotae Semen & Biotae Orientalis Folium on the melanogenesis. Korean J. Orient. Physiol. Pathol. 18: 830-836.
Niu, C. and Zhang, J. (2011) Quantitative analysis and chromatographic fingerprinting of the Semen Zizyphi Spinosae by ultra-high-performance liquid chromatography coupled with diode-array detector. J. Sep. Sci. 34: 2989-2996.

상세보기
Lee, H. W., Park, S. Y., Choo, B. K., Chun, J. M., Lee, A. Y. and Kim, H. K. (2007) Quantitative analysis comparison of Korea and China Scrophulariae Radix. Kor. J. Pharmacogn. 38: 15-18.
Zhang, H. Y., Kim, G. J., Hwang, I. H., Cho, H. J., Lee, S. H. and Na, M. K. (2011) Comparison of the Scrophulariae Radix of Gyeongbuk's with that of Chinese: Content of harpagoside and inhibitory effect of nitric oxide. Kor. J. Pharmacogn. 42: 15-21.
Li, G., Xu, M. L., Lee, C. S., Woo, M. H., Chang, H. W. and Son, J. K. (2004) Cytotoxicity and DNA topoisomerases inhibitory of constituents from the sclerotium of Poria cocos. Arch. Pharm. Res. 27: 829-833.

원문보기 상세보기
Hoang, L., Kwon, S. H., Kim, K. A., Hur, J. M., Kang, Y. H. and Song, K. S. (2005) Chemical standardization of Poria cocos. Kor. J. Pharmacogn. 36: 177-185.
Fang, Z., Moon, D. C., Son, K. H., Son, J. K., Min, B. S. and Woo, M. H. (2010) Quantitative analyses for the quality evaluation of Salviae Miltiorrhizae Radix by HPLC. Nat. Prod. Sci. 16: 251-258.
Kim, T. J., Lee, S. I., Lee, T. H. and Ko, J. S. (1990) Isolation and determination of platycodin D from Platycodi Radix. Anal. Sci. Technol. 3: 399-404.
Kawashima, K., Miyako, D., Ishino, Y., Makino, T., Saito, K. and Kano, Y. (2004) Anti-stress effects of 3,4,5-trimethoxycinnamic acid, an active constituent of roots of Polygala tenuifolia (Onji). Biol. Pharm. Bull. 27: 1317-1319.

상세보기
Hong, J. L., Qin, X. Y., Shu, P., Wu, G., Wang, Q. and Qin, M. J. (2010) Analysis of catalpol derivatives by characteristic neutral losses using liquid chromatography combined with electrospray ionization multistage and time-of-flight mass spectrometry. Rapid Commun. Mass Spectrom. 24: 2680-2686.

상세보기
Zhao, J., Su, C., Yang, C., Liu, M., Tang, L., Su, W. and Liu, Z. (2012) Determination of ginsenosides Rb1, Rb2, and Rb3 in rat plasma by a rapid and sensitive liquid chromatography tandem mass spectrometry method: Application in a pharmacokinetic study. J. Pharm. Biomed. Anal. 64-65: 94-97.

상세보기
Wu, Q., Yuan, Q., Liu, E. H., Qi, L. W., Bi, Z. M. and Li, P. (2010) Fragmentation study of iridoid glycosides and phenylpropanoid glycosides in Radix Scrophulariae by rapid resolution liquid chromatography with diode-array detection and electrospray ionization time-of-flight mass spectrometry. Biomed. Chromatogr. 24: 808-819.
Ye, J., Zhang, X., Dai, W., Yan, S., Huang, H., Liang, X., Li, Y. and Zhang, W. (2009) Chemical fingerprinting of Liuwei Dihuang Pill and simultaneous determination of its major bioactive constituents by HPLC coupled with multiple detections of DAD, ELSD and ESI-MS. J. Pharm. Biomed. Anal. 49: 638-645.

상세보기
Ren, Y., Wang, P., Wu, C., Zhang, J. and Niu, C. (2013) Identification of the metabolites after oral administration of extract of ziziphi spinosae semen to rats or dogs by high-performance liquid chromatography/linear ion trap FTICR hybrid mass spectrometry. Biomed. Chromatogr. 27: 17-26.

상세보기
Kim, M. K., Yang, D. H., Jung, M., Jung, E. H., Eom, H. Y., Suh, J. H., Min, J. W., Kim, U., Min, H., Kim, J. and Han, S. B. (2011) Simultaneous determination of chromones and coumarins in Radix Saposhnikoviae by high performance liquid chromatography with diode array and tandem mass detectors. J. Chromatogr. A. 1218: 6319-6330.

상세보기
Rak, G., Fodor, P. and Abranko, L. (2010) Three-step HPLC.ESI-MS/MS procedure for screening and identifying non-target flavonoid derivatives. Int. J. Mass Spectrom. 290: 32-38.

상세보기
Ma, Y. L., Li, Q. M., Heuvel, V. and Claeys, M. (1997) Characterization of flavone and flavonol aglycones by collision-induced dissociation tandem mass spectrometry. Rapid Commun. Mass Spectrom. 11: 1357-1364.

상세보기
Liu, A. H., Guo, H., Ye, M., Lin, Y. H., Sun, J. H., Xu, M. and Guo, D. A. (2007) Detection, characterization and identification of phenolic acids in Danshen using high-performance liquid chromatography with diode array detection and electrospray ionization mass spectrometry. J. Chromatog. A. 1161: 170-182.

상세보기
Na, Y. C., Ha, Y. W., Kim, Y. S. and Kim, K. J. (2008) Structural analysis of platycosides in Platycodi Radix by liquid chromatography/electrospray ionization-tandem mass spectrometry. J. Chromatogr. A. 1189: 467-475.

상세보기
Jaiswal, R., Matei, M. F., Ullrich, F. and Kuhnert, N. (2011) How to distinguish between cinnamoylshikimate esters and chlorogenic acid lactones by liquid chromatography-tandem mass spectrometry. J. Mass Spectrom. 46: 933-942.

상세보기
Gardana, C., Scaglianti, M., Pietta, P. and Simonetti, P. (2007) Analysis of the polyphenolic fraction of propolis from different sources by liquid chromatography-tandem mass spectrometry. J. Pharm. Biomed. Anal. 45: 390-399.

상세보기
Chang, Y. W., Yao, H. T., Chien, D. S. and Yeh, T. K. (2008) High-performance liquid chromatography-electrospray mass spectrometry for the simultaneous determination of multiple active components in Sheng-Mai San, a prescription of traditional Chinese medicine. Phytochem. Anal. 19: 258-265.

상세보기
Colas, C., Garcia, P., Popot, M. A., Bonnaire, Y. and Bouchonnet, S. (2006) Liquid chromatography/electrospray ionization mass spectrometric characterization of Harpagophytum in equine urine and plasma. Rapid Commun. Mass Spectrom. 20: 3257-3266.

상세보기
Zhao, J., Su, C., Yang, C., Liu, M., Tang, L., Su, W. and Liu, Z. (2012) Determination of ginsenosides $Rb_1$ , $Rb_2$ , and $Rb_3$ in rat plasma by a rapid and sensitive liquid chromatography tandem mass spectrometry method: Application in a pharmacokinetic study. J. Pharm. Biomed. Anal. 64-65: 94-97.

상세보기
Deng, C., Lin, S., Huang, T., Duan, G. and Zhang, X. (2006) Development of gas chromatography/mass spectrometry following headspace solid-phase microextraction for fast determination of asarones in plasma. Rapid Commun. Mass Spectrom. 20: 2120-2126.

상세보기
Li, P., Wang, G. J., Li, J., Hao, H. P. and Zheng, C. N. (2006) Identification of tanshinone IIA metabolites in rat liver microsomes by liquid chromatography-tandem mass spectrometry. J. Chromatogr. A. 1104: 366-369.

상세보기

저자의 다른 논문 :

LOADING...

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

내보내기 구분	파일저장 인쇄 메일전송
구성항목	기본정보 상세정보 관리번호, 논문명, 저널/프로시딩명, 저자 , 발행년, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, 발행기관 관리번호, 논문명, 대등논문명, 저자 , 저널/프로시딩명, 발행기관, 발행년, 발행언어, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, ISBN, ISSN, 주제분야, 키워드, 초록(한글), 초록(영문), 저자(소속기관)
저장형식	Text(ASCII format) Excel format RefWorks Direct Export RIS format (for Reference Manager, ProCite, EndNote), Scholar's Aids, Mendeley
메일정보	받는사람 (필수) @ 보내는사람 (선택) @ 제목 내용 KISTI 검색결과 이메일 서비스
안내	총 건의 자료가 검색되었습니다. 다운받으실 자료의 인덱스를 입력하세요. (1-10,000) 검색결과의 순서대로 최대 10,000건 까지 다운로드가 가능합니다. 데이타가 많을 경우 속도가 느려질 수 있습니다.(최대 2~3분 소요) 다운로드 파일은 UTF-8 형태로 저장됩니다. 파일의 내용이 제대로 보이지 않을실 때는 웹브라우저 상단의 보기 -> 인코딩 -> 자동선택 여부를 확인하십시오. ~ Text(ASCII format) Excel format

연합인증