[논문]선위확장증-의심 한스 마코앵무새(Ara nobilis nobilis )로부터 RT-PCR에 의한 avian bornavirus 최초 검출

김진현; 이부흥; 조재근; 윤원경; 김원; 김희정; 김은미; 김기석; 박최규

doi:10.7853/kjvs.2014.37.1.79

선위확장증-의심 한스 마코앵무새(Ara nobilis nobilis )로부터 RT-PCR에 의한 avian bornavirus 최초 검출
First detection of avian bornavirus by RT-PCR in proventricular dilatation disease-suspected Hahns Macaw (Ara nobilis nobilis) in Korea 원문보기

韓國家畜衛生學會誌 = Korean journal of veterinary service, v.37 no.1, 2014년, pp.79 - 84

김진현 (경상북도가축위생시험소) , 이부흥 (굿닥터동물병원) , 조재근 (대구광역시보건환경연구원) , 윤원경 (수호천사동물병원) , 김원 (경북대학교 수의전염병제어센터) , 김희정 (경북대학교 수의과대학) , 김은미 (경북대학교 수의과대학) , 김기석 (경북대학교 수의전염병제어센터) , 박최규 (경북대학교 수의전염병제어센터)

Abstract ▼ AI-Helper

Two Hahns Macaws (Ara nobilis nobilis), three and nine-month-old, with a three-weeks history of weight loss and anorexia were diagnosed presumptively with proventricular dilatation disease (PDD) by radiographic examination. The birds were treated with antimicrobials, analgesics, and fluid administration. However, these birds died three weeks after the first signs of PDD. At necropsy, the birds had severely dilated proventriculus, severe pectoral muscles atrophy, and blood vessels congestion on cortex of cerebrum. The partial matrix gene of avian bornavirus (ABV) was detected by RT-PCR from tissues of the brain, feather calami, and proventiculus of each PDD-suspected birds. This report describes the first detection of ABV in PDD-suspected Hahns Macaw in Korea.

주제어

AI 본문요약
AI-Helper

* AI 자동 식별 결과로 적합하지 않은 문장이 있을 수 있으니, 이용에 유의하시기 바랍니다.

문제 정의

4. Nucleotide sequences of amplified partial matrix genes of avian bornavirus in this study. The boxes indicate primer sequences for RT-PCR.
이후 전 세계적으로 다양한 품종의 조류에서 이 바이러스가 검출되고 있으나(Payne 등, 2012) 국내에서는 현재까지 ABV의 검출보고가 없는 실정이다. 따라서 본 증례에서는 국내 최초로 PDD가 의심되는 한스 마코앵무새(Ara nobilis nobilis)로부터 역전사중합효소연쇄반응(reverse tran-scription polymerase chain reaction; RT-PCR)을 통한 ABV의 검출을 보고하는 바이다.
이 병의 원인체인 avian bornavirus (ABV) 검출을 위하여 역전사중합효소연쇄반응을 실시한 결과, 뇌, 선위 및 깃촉에서 ABV 특이유전자가 검출되었다. 본 증례를 통하여 국내에서 선위확장증에 감염된 한스 마코앵무새에서 ABV가 처음으로 확인되었음을 보고한다.

가설 설정

Dilated proventriculus (arrow). B: Lateral view of a three-month-old Hahns Macaw. Dilated proventriculus (arrow).

제안 방법

RT-PCR에 사용한 primer는 Guo 등(2012)이 보고한 PM-F1 5'-GGTAATTGTTCCTGGATGGC-3', PM-R1 5'-ACACCAATGTTCCGAAGACG-3'이며, RT-PCR 조건은 45^oC에서 30분간 reverse-transcription 및 95^oC에서 15분간 pre-denaturation 과정을 거친 다음, denatu-ration 95^oC에서 30초, annealing 55^oC에서 30초, ex-tension 72^oC에서 30초를 35 cycle 증폭과정을 거친후, 72^oC에서 10분간 final extension을 실시하였다. PCR 증폭산물은 UV trans-illuminator (Bio-Rad, USA)로 확인하였다. 그 결과, 2수의 한스 마코앵무새의 장기(뇌, 선위, 깃촉)에서 351 bp의 특이 유전자가 증폭되어 해당 개체가 공히 ABV에 감염되었음을 확인할 수 있었다(Fig.
RT-PCR에 사용한 primer는 Guo 등(2012)이 보고한 PM-F1 5'-GGTAATTGTTCCTGGATGGC-3', PM-R1 5'-ACACCAATGTTCCGAAGACG-3'이며, RT-PCR 조건은 45oC에서 30분간 reverse-transcription 및 95oC에서 15분간 pre-denaturation 과정을 거친 다음, denatu-ration 95oC에서 30초, annealing 55oC에서 30초, ex-tension 72oC에서 30초를 35 cycle 증폭과정을 거친후, 72oC에서 10분간 final extension을 실시하였다.
또한 celecoxib (Celebrex capsule, G. D. Searle LLC, USA)을 10 mg/kg의 용량으로 하루 1회 경구투여 하였으나, 치료 1∼2일 후 2수 모두 폐사하였다.
1A and B). 식욕 부진 및 구토등의 임상 증상과 방사선 검사 결과 등을 통하여 PDD로 가진단 하였으며, 대증 요법으로 따뜻한 생리식염수를 이용하여 소낭 세척을 실시하였으며, half-sol (Halfsol inj., Daihan Pharm co. LTD., Korea)을 1.5 ml/시간으로 점적 정맥 주사하였고, enrofloxacin (Baytril 50 inj., Bayer animal health Gmbh, Germany)을 30 mg/kg, cefotaxime (Wooridul cefotaxime sodium, Wooridul pharmaceutical LTD., Korea)을 75 mg/kg 및metoclopramide (Geslong, Cheil bio co. LTD., Korea)을1 mg/kg의 용량으로 하루 2회 정맥 주사하였다. 또한 celecoxib (Celebrex capsule, G.
의뢰된 PDD 의심 한스 마코앵무새로부터 깃촉, 소장, 뇌 및 선위를 채취하여 시판 핵산추출키트(RNA extraction kit, Inclone biotech, Korea)를 이용하여 RNA를 추출한 다음, Guo 등 (2012)의 방법에 따라 RT-PCR을 실시한 다음, 1.5% agarose gel 전기영동을 실시하여 ABV의 matrix 유전자의 증폭 여부를 확인하였다. RT-PCR에 사용한 primer는 Guo 등(2012)이 보고한 PM-F1 5'-GGTAATTGTTCCTGGATGGC-3', PM-R1 5'-ACACCAATGTTCCGAAGACG-3'이며, RT-PCR 조건은 45^oC에서 30분간 reverse-transcription 및 95^oC에서 15분간 pre-denaturation 과정을 거친 다음, denatu-ration 95^oC에서 30초, annealing 55^oC에서 30초, ex-tension 72^oC에서 30초를 35 cycle 증폭과정을 거친후, 72^oC에서 10분간 final extension을 실시하였다.

대상 데이터

서로 다른 가정에서 사육 중인 3개 월령 및 9개 월령의 한스 마코앵무새 2수가 3주 동안 심한 삭수, 식욕 부진, 구토 및 우울증 등의 증상을 보여 2013년 11월에 경기도 안양 소재 동물병원에 내원하였다. 이들 모두는 국내 애완조류 사육농장에서 부화되어 각 가정으로 분양되었으며, 각 가정 거실의 케이지에서사육되었다.

성능/효과

그 결과, 2수의 한스 마코앵무새의 장기(뇌, 선위, 깃촉)에서 351 bp의 특이 유전자가 증폭되어 해당 개체가 공히 ABV에 감염되었음을 확인할 수 있었다(Fig. 3).
하지만 국내에서는 Lee 등(2007)이 식욕 부진 및 체중 감소 등의 증상을보인 앵무새에 대한 임상증상 및 병리조직학적 소견을 통한 PDD의 발생을 보고한 적이 있으나, 현재까지 임상 환례에서 원인체인 ABV를 증명한 보고는 없었다. 본 증례를 통하여 국내에서 처음으로 PDD의 증상을 보인 앵무새에서 RT-PCR 기법을 이용하여 ABV를 검출하였으며, 증폭된 유전자의 핵산 염기서열을 확인한 결과, Weissenbock 등(2009)이 보고한 ABV genotype 4와 90% 이상 일치함을 확인하였다. ABV는 현재 국가별 또는 감수성 조류별로 다양한 유전형이 존재하는 것으로 보고되고 있으나(Weissenbock 등, 2009) 우리나라에서는 아직 ABV의 유전형 분포 등 체계적인 조사가 이루어진 적이 없어 향후 이에 대한 연구가 필요할 것으로 생각된다.
심한 삭수 및 식욕부진의 증상을 보여 내원한 3개월령 및 9개 월령 한스 마코앵무새 2수에 대하여 방사선 검사를 실시한 결과 선위확장증이 의심되어 치료를 실시하였으나 폐사하였다. 부검을 실시한 결과 2수 모두에서 선위의 종대, 흉근의 심한 수축 및 대뇌 피질부의 충혈 소견이 관찰되었다. 이 병의 원인체인 avian bornavirus (ABV) 검출을 위하여 역전사중합효소연쇄반응을 실시한 결과, 뇌, 선위 및 깃촉에서 ABV 특이유전자가 검출되었다.
부검을 실시한 결과 2수 모두에서 선위의 종대, 흉근의 심한 수축 및 대뇌 피질부의 충혈 소견이 관찰되었다. 이 병의 원인체인 avian bornavirus (ABV) 검출을 위하여 역전사중합효소연쇄반응을 실시한 결과, 뇌, 선위 및 깃촉에서 ABV 특이유전자가 검출되었다. 본 증례를 통하여 국내에서 선위확장증에 감염된 한스 마코앵무새에서 ABV가 처음으로 확인되었음을 보고한다.
정확한 폐사 원인을 알아보기 위하여 부검을 실시한 결과 선위의 현격한 종대가 관찰되었으며(Fig 2A), 선위 장막 충혈(Fig. 2A) 및 점막 부위 출혈(Fig. 2B)과 선위 내벽이 얇아지는 소견이 확인되었다. 또한 대뇌 피질부의 충혈 소견(Fig.
3). 증폭된 유전자 단편들에 대한 핵산 염기서열을 실시하고, DNASTA^ⓇLasergene (DNASTAR Inc. USA)를 이용하여 기존의 보고된 ABV 핵산 염기서열과 비교분석한 결과, Weissenbock 등(2009)이 보고한 ABV genotype-4 유전자(Genbank No. FJ794731)와 99% 이상 일치하였다(Fig. 4).

후속연구

본 증례를 통하여 국내에서 처음으로 PDD의 증상을 보인 앵무새에서 RT-PCR 기법을 이용하여 ABV를 검출하였으며, 증폭된 유전자의 핵산 염기서열을 확인한 결과, Weissenbock 등(2009)이 보고한 ABV genotype 4와 90% 이상 일치함을 확인하였다. ABV는 현재 국가별 또는 감수성 조류별로 다양한 유전형이 존재하는 것으로 보고되고 있으나(Weissenbock 등, 2009) 우리나라에서는 아직 ABV의 유전형 분포 등 체계적인 조사가 이루어진 적이 없어 향후 이에 대한 연구가 필요할 것으로 생각된다.
본 증례에서 PDD가 발생한 한스 마코앵무새 2수는 국내 서로 다른 앵무새 사육농장에서 부화되어 각 사육 가정으로 판매된 개체들로 서로 역학적인 연관성이 확인되지 않았다. 따라서 관련 앵무새 사육장에서 감염되었을가능성과 다른 감염 앵무새와의 직ㆍ간접 접촉에 의하여 감염되었을 가능성이 높은 것으로 판단되며, 향후 앵무새 사육장이나 유통되는 앵무새에 대한 감염상황을 파악하기 위한 확대 조사가 필요할 것으로 생각된다. 한편, 미국 및 캐나다 등에서 야생 오리, 거위, 백조 및 갈매기 등의 분변에서 ABV를 검출하였다는 보고도 있어(Payne 등, 2012), 국내 야생 조류도 이 바이러스에 감염되어 있을 것으로 생각되며, 이들 야생조류를 통하여 ABV가 전파될 가능성 또한 배제할 수 없을 것으로 사료된다.
본 증례를 통하여 국내에서 PDD에 감염된 애완 앵무새에서 ABV의 감염을 처음으로 확인하였으며, 본 증례에서 이용한 RT-PCR 기법은 PDD 의심환례에서 ABV를 확진하는 진단법으로 활용될 수 있을 것으로 사료된다. 또한 향후 국내 애완조류 및 야생조류에서의 ABV 감염 실태 파악과 함께 ABV의 유전적 특성조사, 애완조류간 감염 및 전파를 차단하기 위한 역학 및 방제 분야에 대한 추가적인 연구가 이루어져야 할 것으로 생각된다.
본 증례를 통하여 국내에서 PDD에 감염된 애완 앵무새에서 ABV의 감염을 처음으로 확인하였으며, 본 증례에서 이용한 RT-PCR 기법은 PDD 의심환례에서 ABV를 확진하는 진단법으로 활용될 수 있을 것으로 사료된다. 또한 향후 국내 애완조류 및 야생조류에서의 ABV 감염 실태 파악과 함께 ABV의 유전적 특성조사, 애완조류간 감염 및 전파를 차단하기 위한 역학 및 방제 분야에 대한 추가적인 연구가 이루어져야 할 것으로 생각된다.

참고문헌 (16)

Berhane Y, Smith DA, Newman S, Taylor M, Nagy E, Binnington B, Hunter B. 2001. Peripheral neuritis in psittacine birds with proventricular dilatation disease. Avian Pathol 30: 563-570.

상세보기
de Kloet SR, Dorrestein GM. 2009. Presence of avian bornavirus RNA and anti-avian bornavirus antibodies in apparently healthy macaws. Avian Dis 53: 568-573.

상세보기
de Kloet AH, Kerski A, de Kloet SR. 2011. Diagnosis of avian bornavirus infection in Psittaciformes by serum antibody detection and reverse transcription polymerase chain reaction assay using feather calami. J Vet Diagn Invest 23: 421-429.

상세보기
Gray P, Hoppes S, Suchodolski P, Mirhosseini N, Payne S, Villanueva JH, Shivaprasad L. Honkavuori W, Lipkin I, Briese T, Reddy S, Tizard I. 2010. Use of avian bornavirus isolates to induce proventricular dilatation disease in conures. Emerg Infect Dis 16: 473-479.

상세보기
Gregory CR, Latimer KS, Niagro FD, Ritchie BW, Campagnoli RP, Norton TM, McManamon R, Greenacre CB. 1994. A review of proventricular dilatation syndrome. J Assoc Avian Vet 8: 69-75.

상세보기
Guo J, Covaleda L, Heatley JJ, Baroch JA, Tizard I, Payan SL. 2012. Widespread avian bornavirus infection in mute swans in the Northeast United States. Vet Med Res Rep 3: 49-52.
Honkavuori KS, Shivaprasad HL, Williams BL, Quan PL, Hornig M, Street C, Palacios G, Hutchison SK, Franca M, Egholm M, Briese T, Lipkin WI. 2008. Novel borna virus in psittacine birds with proventricular dilatation disease. Emerg Infect Dis 14: 1883-1886.

상세보기
Kerski A, de Kloet AH, de Kloet SR. 2012. Vertical transmission of avian bornavirus in Psittaciformes: avian bornavirus RNA and anti-avian bornavirus antibodies in eggs, embryos, and hatchlings obtained from infected sun conures (Aratinga solstitialis). Avian Dis 56: 471-478.

상세보기
Kistler AL, Gancz A, Clubb S, Skewes-Cox P, Fischer K, Sorber K, Chiu CY, Lublin A, Mechani S, Farnoushi Y, Greninger A, Wen CC, Karlene SB, Ganem D, DeRisi JL. 2008. Recovery of divergent avian bornaviruses from cases of proventricular dilatation disease: identification of a candidate etiologic agent. Virol J 5: 88.

상세보기
Kistler AL, Smith JM, Greninger AL, DeRisi JL, Ganem D. 2010. Analysis of naturally occurring avian bornavirus infection and transmission during an outbreak of proventricular dilatation disease among captive psittacine birds. J Virol 84: 2176-2179.

상세보기
Lee SY, Jung DI, Kim HJ, Kim JW, Lim CY, Kang BT, Yoo JH, Kim DY, Park HM. 2007. Proventricular dilation disease concurrent with ingluvitis in an Indian Ringnecked Parakeet (Psittacula krameri manillensis). J Vet Clin 24: 437-440.
Lierz M, Hafez MH, Honkavuori KS, Gruber AD, Olias P, Abdelwhab EM, Kohls A, Lipkin WI, Briese T, Hauck R. 2009. Anatomical distribution of avian bornavirus in parrots, its occurrence in clinically healthy birds and ABV-antibody detection. Avian Pathol 38: 491-496.

상세보기
Lutz ME, Wilson RB. 1991. Psittacine proventricular dilatation syndrome in an umbrella cockatoo. J Am Vet Med Assoc 198: 1962-1964.
Mannl A, Gerlach H, Leipold R. 1987. Neuropathic gastric dilatation in psittaciformes. Avian Dis 31: 214-221.

상세보기
Payne SL, Delnatte P, Guo J, Heatley JJ, Tizard I, Smith DA. 2012. Birds and bornaviruses. Anim Health Res Rev 13: 145-156.

상세보기
Weissenbock H, Bakonyi T, Sekulin K, Ehrensperger F, Doneley RJT, Durrwald R, Hoop R, ErdelyiK, Gal J, Kolodziejek J, Nowotny N. 2009. Avian bornaviruses in psittacine birds from Europe and Australia with proventricular dilatation disease. Emerging Infect Dis 15: 1453-1459.

상세보기

저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

내보내기 구분	파일저장 인쇄 메일전송
구성항목	기본정보 상세정보 관리번호, 논문명, 저널/프로시딩명, 저자 , 발행년, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, 발행기관 관리번호, 논문명, 대등논문명, 저자 , 저널/프로시딩명, 발행기관, 발행년, 발행언어, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, ISBN, ISSN, 주제분야, 키워드, 초록(한글), 초록(영문), 저자(소속기관)
저장형식	Text(ASCII format) Excel format RefWorks Direct Export RIS format (for Reference Manager, ProCite, EndNote), Scholar's Aids, Mendeley
메일정보	받는사람 (필수) @ 보내는사람 (선택) @ 제목 내용 KISTI 검색결과 이메일 서비스
안내	총 건의 자료가 검색되었습니다. 다운받으실 자료의 인덱스를 입력하세요. (1-10,000) 검색결과의 순서대로 최대 10,000건 까지 다운로드가 가능합니다. 데이타가 많을 경우 속도가 느려질 수 있습니다.(최대 2~3분 소요) 다운로드 파일은 UTF-8 형태로 저장됩니다. 파일의 내용이 제대로 보이지 않을실 때는 웹브라우저 상단의 보기 -> 인코딩 -> 자동선택 여부를 확인하십시오. ~ Text(ASCII format) Excel format

연합인증