로즈마리의 주요 성분인 carnosic acid는 carnosol, rosmarinic acid, ursolic acid 등과 같은 폴리페놀의 한 성분으로 다양한 생리활성 기능이 보고되어 있다. 본 연구에서는 로즈마리 유래 폴리페놀인 carnosic acid가 제브라피쉬 근육성장에 미치는 영향을 근육 내 주사와 사료를 통해서 확인해 보았다. 근육 내 주사 실험을 통해서 CA는 제브라 피쉬의 근육 내 단백질 함량을 증가시키고 중성지방의 함량을 감소시켰다. 또한 조직학적 분석 결과 근섬유의 평균 면적이 커지는 근섬유의 과비대 효과를 나타내었다. 사료 실험 결과 근육 내 단백질 및 중성지방의 함량에는 영향을 미치지 않았으며 조직학적 분석 결과 근육 내 주사 실험에서와 마찬가지로 근 섬유의 과비대를 유도하였다.
로즈마리의 주요 성분인 carnosic acid는 carnosol, rosmarinic acid, ursolic acid 등과 같은 폴리페놀의 한 성분으로 다양한 생리활성 기능이 보고되어 있다. 본 연구에서는 로즈마리 유래 폴리페놀인 carnosic acid가 제브라피쉬 근육성장에 미치는 영향을 근육 내 주사와 사료를 통해서 확인해 보았다. 근육 내 주사 실험을 통해서 CA는 제브라 피쉬의 근육 내 단백질 함량을 증가시키고 중성지방의 함량을 감소시켰다. 또한 조직학적 분석 결과 근섬유의 평균 면적이 커지는 근섬유의 과비대 효과를 나타내었다. 사료 실험 결과 근육 내 단백질 및 중성지방의 함량에는 영향을 미치지 않았으며 조직학적 분석 결과 근육 내 주사 실험에서와 마찬가지로 근 섬유의 과비대를 유도하였다.
Myogenesis is the formation process of multinucleated myofiber with a contractile capacity from muscle satellite cell (MSCs) during life. This process is tightly controlled by several transcription factors such as Pax3 and Pax7 (paired box protein 3 and 7), MEF2C (myocyte enhancer factor 2) and MRFs...
Myogenesis is the formation process of multinucleated myofiber with a contractile capacity from muscle satellite cell (MSCs) during life. This process is tightly controlled by several transcription factors such as Pax3 and Pax7 (paired box protein 3 and 7), MEF2C (myocyte enhancer factor 2) and MRFs (myogenic regulatory factors) etc. On the contrary, myostatin (MSTN) is a transforming growth factor-${\beta}$ superfamily, which functions as a negative regulator of skeletal muscle development and growth. Carnosic acid (CA) is a major phenolic component in rosemary (Rosmarinus officinalis) and have been reported various biological activities such as anticancer, antioxidant, antimicrobial and therapeutic agents for amnesia, dementia, alzheimer's disease. This study was confirmed to effects of CA on muscle cell line and muscle tissue alteration of zebrafish by intramuscular injection or feeding methods. $10{\mu}M$ CA showed a non-cytotoxic on myoblast and a complete inhibition effect against myostatin activity on luciferase assay. In intramuscular injection experiment, the total protein and triglyceride amount of $10{\mu}M/kg$ of CA injected group increased by 11% and decreased by 13% compared to these of the no injected group. In histology analysis of muscle tissues by hematoxylin/eosin staining, the number of muscle fiber of $10{\mu}M/kg$ of CA injected group decreased by 29% and fiber area increased 40% compared to these of no injected group. In feeding experiment, the total protein and triglyceride amount no significance difference compared to these of the normal feeding group. In histology analysis, the number of muscle fiber of 1% CA fed group decreased by 35% and fiber area increased 56% compared to these of normal fed group. We identified that CA have an effect on hypertrophy of muscle fiber in adult zebrafish and the results of this study are considered as the basic data that can reveal the mechanisms of muscle formation via gene and protein level analysis.
Myogenesis is the formation process of multinucleated myofiber with a contractile capacity from muscle satellite cell (MSCs) during life. This process is tightly controlled by several transcription factors such as Pax3 and Pax7 (paired box protein 3 and 7), MEF2C (myocyte enhancer factor 2) and MRFs (myogenic regulatory factors) etc. On the contrary, myostatin (MSTN) is a transforming growth factor-${\beta}$ superfamily, which functions as a negative regulator of skeletal muscle development and growth. Carnosic acid (CA) is a major phenolic component in rosemary (Rosmarinus officinalis) and have been reported various biological activities such as anticancer, antioxidant, antimicrobial and therapeutic agents for amnesia, dementia, alzheimer's disease. This study was confirmed to effects of CA on muscle cell line and muscle tissue alteration of zebrafish by intramuscular injection or feeding methods. $10{\mu}M$ CA showed a non-cytotoxic on myoblast and a complete inhibition effect against myostatin activity on luciferase assay. In intramuscular injection experiment, the total protein and triglyceride amount of $10{\mu}M/kg$ of CA injected group increased by 11% and decreased by 13% compared to these of the no injected group. In histology analysis of muscle tissues by hematoxylin/eosin staining, the number of muscle fiber of $10{\mu}M/kg$ of CA injected group decreased by 29% and fiber area increased 40% compared to these of no injected group. In feeding experiment, the total protein and triglyceride amount no significance difference compared to these of the normal feeding group. In histology analysis, the number of muscle fiber of 1% CA fed group decreased by 35% and fiber area increased 56% compared to these of normal fed group. We identified that CA have an effect on hypertrophy of muscle fiber in adult zebrafish and the results of this study are considered as the basic data that can reveal the mechanisms of muscle formation via gene and protein level analysis.
* AI 자동 식별 결과로 적합하지 않은 문장이 있을 수 있으니, 이용에 유의하시기 바랍니다.
문제 정의
포유류와는 달리 제브라피쉬는 한번에 200~300개의 알을 낳으며 발생이 빠른 장점을 이용하여 한번에 많은 수의 천연물 스크리닝에 이용되고 있으며 이러한 in vivo 수준에서의 스크리닝을 통해 포유류를 이용한 동물실험에서 경우의 수를 낮출 수 있는 장점이 있기 때문에 최근에 다양한 연구에서 사용되고 있다 (Leonard and Randall, 2005). 따라서 본 연구에서는 로즈마리가 포함하고 있는 대표적인 페놀계 화합물인 carnosic acid가 제브라피쉬의 근육성장에 미치는 영향을 확인해보고자 한다.
로즈마리의 주요 성분인 carnosic acid는 carnosol, rosmarinic acid, ursolic acid 등과 같은 폴리페놀의 한 성분으로 다양한 생리활성 기능이 보고되어 있다. 본 연구에서는 로즈마리 유래 폴리페놀인 carnosic acid가 제브라피쉬 근육성장에 미치는 영향을 근육 내 주사와 사료를 통해서 확인해 보았다. 근육 내 주사 실험을 통해서 CA는 제브라피쉬의 근육 내 단백질 함량을 증가시키고 중성지방의 함량을 감소시켰다.
제안 방법
24시간 후 CA를 1, 5, 10, 50, 100 μM/well로 처리하였고 10시간 후 10 μL의 WST reagent 를 첨가하고, 1시간 후 450 nm (Tecan, Durham, NC, USA)에서 흡광도를 측정하였다.
24시간 후, 혈청이 제거된 DMEM으로 교체하였고, 9시간 후 3 ng/mL의 재조합 myostatin (R&D systems, USA)과 CA를 1, 5, 10 μM/well로 각각 처리하였다.
24시간 후, 혈청이 제거된 DMEM으로 교체하였고, 9시간 후 3 ng/mL의 재조합 myostatin (R&D systems, USA)과 CA를 1, 5, 10 μM/well로 각각 처리하였다. 6시간 후 Dual-Glo luciferase assay system (Promega, USA)을 이용하여 microplate luminometer (Berthold, USA)에서 luciferase activity를 측정하였다.
L6 (KCBL No. 21458), C2C12 (ACTC No. AC30004) 근육 세포에 대한 carnosic acid (CA, TCI, Japan)의 세포독성을 WST assay (ITBio, Korea)를 통해 확인하였다. 각 세포는 96 well plate에서 well당 1×105 cells개씩 DMEM (10% FBS, 1% penicillin/streptomycin) 배지를 이용하여 5% CO2, 37℃가유지한 상태에서 배양하였다.
L6 세포에서 pGL3-(CAGA)12-luciferase reporter assay를 이용한 myostatin 활성 억제능을 측정하였다. 세포를 96 well plate에 well당 8×103 cell/200 μL로 24시간 동안 배양한 후 0.
5℃로 유지하였다. 광주기는 14 L:10 D을 유지하여 사육하였으며 먹이는 1일 3회 사료를(Color charasin, 43.8% crude protein, 4.5% crude lipid, 2.75% calcium, 2.62% crude fiber, 11.79% crude ash, 1.8% phosphorus, JAQNO, Korea) 급여하였다.
근섬유 분석은 근육조직을 bouin’s 용액에 고정한 후 파라핀 침투 후 microtome을 이용하여 5 μm 두께로 박편을 제작하였다.
근육 내 주사 실험을 위해 각 그룹은 0.7 L 사육조 내에 5마리씩 총 4개의 사육조(n=20)로 구성하여 배양기 내에서 사육하였다. 대조구는 주사를 실시하지 않은 그룹과 corn oil을 주입한 그룹, 실험구는 5 μM/kg과 10 μM/kg의 CA를 주입한 그룹으로 실험을 진행하였다.
근육 내 주사의 부위는 등지느러미를 기준으로 좌, 우 1 mm 내에 근육이 많은 부분에 주입하였으며 매주 그 위치를 바꾸어 주입하였다. 근육 내 주사 회수는 주 1회 주입, 총 4주간 실험하였으며 매주 개체간 체중 및 체장을 측정하였다.
CA는 corn oil (Sigma, USA)에 녹여 사용하였으며 시료의 주입은 10 μL micosyringe (701RN, HAMILTON, USA)에 32 gauge needle을 이용하여 개체당 1 μL씩 주입하였다. 근육 내 주사의 부위는 등지느러미를 기준으로 좌, 우 1 mm 내에 근육이 많은 부분에 주입하였으며 매주 그 위치를 바꾸어 주입하였다. 근육 내 주사 회수는 주 1회 주입, 총 4주간 실험하였으며 매주 개체간 체중 및 체장을 측정하였다.
대조구는 주사를 실시하지 않은 그룹과 corn oil을 주입한 그룹, 실험구는 5 μM/kg과 10 μM/kg의 CA를 주입한 그룹으로 실험을 진행하였다.
CA는 ethanol에 녹여 사료에 0, 1, 5%가 포함되도록 배합하여 급여하였다. 사료는 1일 3회 급여하였으며 매주 개체 간 체중 및 체장을 측정하였다.
사료를 통한 CA의 효과를 알아보기 위한 실험을 위해 각 그룹은 0.7 L 사육 조 내에 5마리씩 총 4개의 사육 조(n=20)로 구성하여 배양기 내에서 사육하였다. CA는 ethanol에 녹여 사료에 0, 1, 5%가 포함되도록 배합하여 급여하였다.
사육 수는 UV 멸균된 수돗물을 이용하여 1일 1회 환수하였고 수온을 28.5±0.5℃로 유지하였다.
세포를 96 well plate에 well당 8×103 cell/200 μL로 24시간 동안 배양한 후 0.1 μg의 pGL-(CAGA)12 plasmid와 0.05 μg의 pRL-TK plasmid (Promega, Madison, USA)를 형질 도입하였다(FuGENE 6 transfection Reagent, Promega, Madison, USA).
근섬유 분석은 근육조직을 bouin’s 용액에 고정한 후 파라핀 침투 후 microtome을 이용하여 5 μm 두께로 박편을 제작하였다. 이후 hematoxylin/eosin 염색을 한 후 Image J 프로그램을(http://rsbweb.nih.gov/ij) 이용하여 근섬유의 수, 면적, 지름을 측정하였다.
제브라피쉬 근육 내 단백질 함량은 근조직으로부터 BCA protein assay kit (Pierce, USA)을 이용하여 측정하였으며 중성지방을 함량은 Triglyceride quantification kit (Biovision, USA)을 이용하여 측정하였다.
대상 데이터
제브라피쉬는 생후 3개월된 개체를 구입하여(Seoulaqua, Korea) 사용하였다. 사육 수는 UV 멸균된 수돗물을 이용하여 1일 1회 환수하였고 수온을 28.
데이터처리
통계처리는 SPSS 20.0 프로그램을 이용하여 one way ANOVA test를 실시하여 Duncan 검정을 통해 개체 무게, 단백질과 중성지방의 함량, 근섬유의 수와 평균 면적을 분석하였다.
성능/효과
4주 동안 CA를 근육 내 주사를 통해 주입한 결과 제브라피쉬의 체중은 그룹 간에 유의적인 차이를 보이지 않았지만 10 μM/kg의 CA를 주입한 그룹이 대조구에 비해 체장이 감소한 것을 확인하였다.
50 μM의 CA는 랫 유래의 근원세포인 L6 세포 에는 아무런 영향을 미치지 않았지만, 마우스 유래의 근원세포인 C2C12 세포에는 약 60%의 세포 사멸을 확인할 수 있었다.
Luciferase assay system을 이용하여 CA의 myostatin 활성 저해 능을 확인해본 결과 10 μM에서 myostatin 활성을 저해하는 것으로 확인되었다(Fig. 1C).
근섬유의 크기 및 평균면적 분석을 위한 조직분석 결과, 대조구에 비해 10 μM/kg CA 주입 그룹이 근섬유의 수는 29% 감소하였고, 근섬유의 평균 면적은 40% 증가하였다.
근육 내 주사 실험과 마찬가지로 4주간 사료에 CA를 첨가하여 급여한 결과 체중 및 체장 모두 대조구와 유의적인 차이를 보이지 않았다. 체중에 따른 성장률은 대조구가 15% 증가한 반면, 1% CA 사료 그룹이 11%, 5% CA 사료 그룹이 4%의 성장률을 보였다(Table 2).
4A, B). 근육 섬유의 조직 분석 결과, 1% CA 사료 그룹이 대조구에 비해 근섬유의 면적은 35% 감소하고 근섬유의 평균 면적은 56% 증가하였다. 유사하게 1,000 μm2 이상 근섬유 및 30 μm 이상의 지름을 가진 근섬유의 분포가 대조구에 비해 각각 136%, 98% 증가하였다(Table 2, Fig.
근육조직 내 단백질과 중성지방의 함량 분석결과 10 μM/kg CA 주입 그룹에서 대조구에 비해 단백질 함량은 11% 증가하였고, 중성지방의 함량은 13% 감소하였다(Fig. 2A, B).
근육 내 주사 실험을 통해서 CA는 제브라피쉬의 근육 내 단백질 함량을 증가시키고 중성지방의 함량을 감소시켰다. 또한 조직학적 분석 결과 근섬유의 평균 면적이 커지는 근섬유의 과비대 효과를 나타내었다. 사료 실험 결과 근육 내 단백질 및 중성지방의 함량에는 영향을 미치지 않았으며 조직학적 분석 결과 근육 내 주사 실험에서와 마찬가지로 근 섬유의 과비대를 유도하였다.
무게에 따른 성장률에서 대조구의 경우 약 10%의 성장률을 보인 반면, 5 μM/kg의 CA를 주입한 그룹은 3%, 10 μM/kg CA 주입 그룹은 5%의 증가율을 보였다(Table 1).
본 연구에서 in vitro 수준에서 CA가 myostatin 신호의 억제능을 확인하였으며 성체 제브라피쉬를 이용한 in vivo 실험을 통해 로즈마리의 대표적인 페놀화합물인 CA가 제브라피쉬 근섬유에 영향을 미치는 것을 확인할 수 있었다. 또한 in vitro 실험에서 CA의 효과는 세포에 따라 다른 경향을 나타내었다.
또한 조직학적 분석 결과 근섬유의 평균 면적이 커지는 근섬유의 과비대 효과를 나타내었다. 사료 실험 결과 근육 내 단백질 및 중성지방의 함량에는 영향을 미치지 않았으며 조직학적 분석 결과 근육 내 주사 실험에서와 마찬가지로 근 섬유의 과비대를 유도하였다.
유사하게 1,000 μm2 이상 근섬유 및 30 μm 이상의 지름을 가진 근섬유의 분포가 대조구에 비해 각각 136%, 98% 증가하였다(Table 2, Fig. 5).
유사하게 1,000 μm2 이상의 근섬유의 분포가 대조 구에 비해 153% 증가하였고 30 μm 크기의 지름을 가지는 근섬유의 분포 또한 80% 증가하였다(Table 1, Fig. 3).
이러한 점으로 미루어 보아 10 μM/kg의 CA를 근육 내 주사 그룹과 1% CA가 포함된 사료를 급식한 제브라피쉬의 경우 근섬유의 과형성이 일어났으며 5% CA가 포함된 사료를 급식한 그룹의 20 μm이하의 근섬유의 분포가 대조구에 비해 약 48% 증가한 것으로 미루어 보아 CA가 제브라피쉬 근섬유의 과형성 및 과비대에 영향을 미쳤다고 생각된다.
근육 내 주사 실험과 마찬가지로 4주간 사료에 CA를 첨가하여 급여한 결과 체중 및 체장 모두 대조구와 유의적인 차이를 보이지 않았다. 체중에 따른 성장률은 대조구가 15% 증가한 반면, 1% CA 사료 그룹이 11%, 5% CA 사료 그룹이 4%의 성장률을 보였다(Table 2). 근육 조직 내 단백질과 중성지방의 함량을 분석해본 결과 그룹 간에 유의적인 차이를 보이지 않았다(Fig.
후속연구
이러한 점으로 미루어 보아 10 μM/kg의 CA를 근육 내 주사 그룹과 1% CA가 포함된 사료를 급식한 제브라피쉬의 경우 근섬유의 과형성이 일어났으며 5% CA가 포함된 사료를 급식한 그룹의 20 μm이하의 근섬유의 분포가 대조구에 비해 약 48% 증가한 것으로 미루어 보아 CA가 제브라피쉬 근섬유의 과형성 및 과비대에 영향을 미쳤다고 생각된다. 따라서 본 연구의 자료를 토대로 근육 성장과 관련된 유전자 및 단백질 분석, 더 나아가 포유류를 이용한 동물실험을 통해 CA가 근 섬유에 미치는 메커니즘에 관한 연구가 진행되어야 할 것으로 사료된다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
로즈마리 유래 폴리페놀인 carnosic acid가 제브라피쉬 근육성장에 미치는 영향을 근육 내 주사와 사료를 통해서 확인한 결과는?
본 연구에서는 로즈마리 유래 폴리페놀인 carnosic acid가 제브라피쉬 근육성장에 미치는 영향을 근육 내 주사와 사료를 통해서 확인해 보았다. 근육 내 주사 실험을 통해서 CA는 제브라 피쉬의 근육 내 단백질 함량을 증가시키고 중성지방의 함량을 감소시켰다. 또한 조직학적 분석 결과 근섬유의 평균 면적이 커지는 근섬유의 과비대 효과를 나타내었다. 사료 실험 결과 근육 내 단백질 및 중성지방의 함량에는 영향을 미치지 않았으며 조직학적 분석 결과 근육 내 주사 실험에서와 마찬가지로 근 섬유의 과비대를 유도하였다.
근육은 어떤 기관인가?
근육은 에너지 대사 및 운동능력에 있어서 매우 중요한 기관이다(Braun and Gautel, 2011). 근육분화(myogenesis)는근 원전구세포인 근육위성세포(muscle satellite cell, MSCs)가수축성을 가지는 다핵성의 근섬유로 형성되는 과정을 말하며 paired box protein 3 (Pax3), paired box protein 7 (Pax7), myocyte enhancer factor 2 (MEF2), myogenic regulatory factors (MRFs) 등과 같은 다양한 전사인자들에 의해 조절된다 (Lee et al.
로즈마리의 주요 성분은 무엇인가?
로즈마리의 주요 성분인 carnosic acid는 carnosol, rosmarinic acid, ursolic acid 등과 같은 폴리페놀의 한 성분으로 다양한 생리활성 기능이 보고되어 있다. 본 연구에서는 로즈마리 유래 폴리페놀인 carnosic acid가 제브라피쉬 근육성장에 미치는 영향을 근육 내 주사와 사료를 통해서 확인해 보았다.
참고문헌 (28)
Amali, A.A., C.J. Lin, Y.H. Chen, W.L. Wang, H.Y. Gong, C.Y. Lee, Y.L. Ko, J.K. Lu, G.M. Her, T.T. Chen and J.L. Wu. 2004. Up-regulation of muscle-specific transcription factors during embryonic somitogenesis of zebrafish (Danio rerio) by knock-down of myostatin-1. Developmental Dynamics, 229: 847-856.
Benzie, I.F. and S. Wachtel-Galor. 2011. Herbal medicine: Biomolecular and clinical aspects. CRC Press.
Biga, P.R. and F.W. Goetz. 2006. Zebrafish and giant danio as models for muscle growth: Determinate vs. indeterminate growth as determined by morphometric analysis. American Journal of Physiology-Regulatory, Integrative and Comparative Physiology, 291: R1327-R1337.
Frankel, E.N., S.W. Huang, A. Aeschbach and E. Prior. 1996. Antioxidant activity of a rosemary extract and its constituents, carnosic acid, carnosol, and rosmarinic acid, in bulk oil and oil-in-water emulsion. J. Agricultural and Food Chemistry, 44: 131-135.
Fuentes, E.N., K. Pino, C. Navarro, I. Delgado, J.A. Valdes and A. Molina. 2013. Transient inactivation of myostatin induces muscle hypertrophy and overcompensatory growth in zebrafish via inactivation of the SMAD signaling pathway. J. Biotechnol., 168: 295-302.
Kambadur, R., M. Sharma, T.P. Smith and J.J. Bass. 1997. Mutations in myostatin (GDF8) in double-muscled belgian blue and piedmontese cattle. Genome Res., 7: 910-915.
Lee, E.J., A.R. Bhat, M.R. Kamli, S. Pokharel, T. Chun, Y.H. Lee, Y.H. Nahm, J.H. Nam, S.K. Hong, B. Yang, K.Y. Chung, S.H. Kim and I. Choi. 2013. Transthyretin is a key regulator of myoblast differentiation. PloS One, 8: e63627.
Lopez-Jimenez, A., M. Garcia-Caballero, M.A. Medina and A.R. Quesada. 2013. Anti-angiogenic properties of carnosol and carnosic acid, two major dietary compounds from rosemary. Eur. J. Nutr., 52: 85-95.
McPherron, A.C. and S. Lee. 1997. Double muscling in cattle due to mutations in the myostatin gene. Proceedings of the National Academy of Sciences, 94: 12457-12461.
Michael, S., P. Irene, G. Judith, L. Joseph, S. Yoav and D. Michael. 2001. Carnosic acid inhibits proliferation and augments differentiation of human leukemic cells induced by 1,25-Dihydroxyvitamin Dsub3 and Retinoic acid. Nutrition and Cancer, 41: 135-144.
Ostbye, T.K., O.F. Wetten, A. Tooming-Klunderud, K.S. Jakobsen, A. Yafe, S. Etzioni, T. Moen and O. Andersen. 2007. Myostatin (MSTN) gene duplications in atlantic salmon: Evidence for different selective pressure on teleost MSTN-1 and-2. Gene, 403: 159-169.
Relaix, F., D. Rocancourt, A. Mansouri and M. Buckingham. 2005. A Pax3/Pax7-dependent population of skeletal muscle progenitor cells. Nature, 435: 948-953.
Rescan, P. 2008. New insights into skeletal muscle development and growth in teleost fishes. Journal of Experimental Zoology Part B: Molecular and Developmental Evolution., 310: 541-548.
Seth, A., D.L. Stemple and I. Barroso. 2013. The emerging use of zebrafish to model metabolic disease. Disease Models & Mechanisms, 6: 1080-1088.
Thomas, M., B. Langley, C. Berry, M. Sharma, S. Kirk, J. Bass and R. Kambadur. 2000. Myostatin, a negative regulator of muscle growth, functions by inhibiting myoblast proliferation. J. Biol. Chem., 275: 40235-40243.
Toshiyuki, T., T. Takahito, T. Yosei, K. Kunit, T. Yasunhiro and S. Takumi. 2009. Carnosic acid and carnosol inhibit adipocyte differentiation in mouse 3T3-L1 cells through induction of phase2 enzymes and activation of glutathione metabolism. Biochemical and Biophysical Reseach Communications, 382: 549-554.
Wang, T., Y. Takikawa, T. Tabuchi, T. Satoh, K. Kosaka and K. Suzuki. 2012. Carnosic acid (CA) prevents lipid accumulation in hepatocytes through the EGFR/MAPK pathway. J. Gastroenterology, 47: 805-813.
Yesil-Celiktas, O., C. Sevimli, E. Bedir and F. Vardar-Sukan. 2010. Inhibitory effects of rosemary extracts, carnosic acid and rosmarinic acid on the growth of various human cancer cell lines. Plant Foods for Human Nutrition, 65: 158-163.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.