급성 폐사 바지락 (Ruditapes philippinarum) 으로부터 Perkinsus olseni의 확산 기작 Dissemination of Perkinsus olseni is affected by the viability of Ruditapes philippinarum원문보기
This study was conducted in order to elucidate the dissemination mechanism of P. olseni using field and laboratory experiments. For this purpose, we quantified the level of P. olseni infection in buried (healthy) and surfaced (gapped) R. philippinarum from a clam bed on Wi-do Island on the west coas...
This study was conducted in order to elucidate the dissemination mechanism of P. olseni using field and laboratory experiments. For this purpose, we quantified the level of P. olseni infection in buried (healthy) and surfaced (gapped) R. philippinarum from a clam bed on Wi-do Island on the west coast of Korea. In addition, the levels of internal and released P. olseni cells from artificially infected (and later dead) R. philippinarum were monitored for 8 days using the RFTM-2 M NaOH lysis method. Our results indicate that P. olseni cells in buried R. philippinarum was $2,655,625{\pm}1,536,936cells/clam$; the level in gapped R. philippinarum was considerably lower, $28,203{\pm}24,889cells/clam$ (p < 0.05). In the laboratory experiment, the P. olseni cells remained in the host tissue 2 days after death was approximately 50% lower than the level of infection measured in living clams. The level dropped to 20% 4 days after death and to 1.5% 6 days after death; eight days after death, P. olseni cells were undetectable since the R. philippinarum flesh had completely decomposed. The level of released cells on the day of death was only 0.05% of the internal level in live R. philippinarum; however, the level increased to 2.3% 5 days after death then gradually decreased and no released cells were detected 8 days after death. Therefore, our laboratory experiment suggest that the low level of P. olseni infection observed in gapped R. philippinarum at Wi-do Island could be caused by lysis of the most of P. olseni cells during the decomposition of dead R. philippinarum tissues. Until the end of decomposition of R. philippinarum, 6.68% of the total amount of P. olseni was released within 8 days. Our study showed that the amount of P. olseni cells from dead host is a considerably higher level than naturally released from healthy R. philippinarum, suggesting that death of the host plays an important role in the dissemination of P. olseni.
This study was conducted in order to elucidate the dissemination mechanism of P. olseni using field and laboratory experiments. For this purpose, we quantified the level of P. olseni infection in buried (healthy) and surfaced (gapped) R. philippinarum from a clam bed on Wi-do Island on the west coast of Korea. In addition, the levels of internal and released P. olseni cells from artificially infected (and later dead) R. philippinarum were monitored for 8 days using the RFTM-2 M NaOH lysis method. Our results indicate that P. olseni cells in buried R. philippinarum was $2,655,625{\pm}1,536,936cells/clam$; the level in gapped R. philippinarum was considerably lower, $28,203{\pm}24,889cells/clam$ (p < 0.05). In the laboratory experiment, the P. olseni cells remained in the host tissue 2 days after death was approximately 50% lower than the level of infection measured in living clams. The level dropped to 20% 4 days after death and to 1.5% 6 days after death; eight days after death, P. olseni cells were undetectable since the R. philippinarum flesh had completely decomposed. The level of released cells on the day of death was only 0.05% of the internal level in live R. philippinarum; however, the level increased to 2.3% 5 days after death then gradually decreased and no released cells were detected 8 days after death. Therefore, our laboratory experiment suggest that the low level of P. olseni infection observed in gapped R. philippinarum at Wi-do Island could be caused by lysis of the most of P. olseni cells during the decomposition of dead R. philippinarum tissues. Until the end of decomposition of R. philippinarum, 6.68% of the total amount of P. olseni was released within 8 days. Our study showed that the amount of P. olseni cells from dead host is a considerably higher level than naturally released from healthy R. philippinarum, suggesting that death of the host plays an important role in the dissemination of P. olseni.
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문제 정의
따라서 본 연구는 위도 지역 바지락 양식장에서 저질에 노출되어 gapped 한 채 사망한 바지락과 저질에 잠입해 있는 바지락내의 P. olseni의 감염도를 비교하고, 이와 유사한 실험을 실험실내에서 재현함으로써 숙주의 사망에 따른 P. olseni의 양식장내 확산 기작을 이해하기 위하여 수행하였다.
본 연구는 한국 서해안 조간대에서 서식중인 바지락의 주요 기생충인 P. olseni의 확산 기작에 관한 연구로써, 숙주 폐사에 따른 숙주내 P. olseni의 잔존량, 체외 방출 시기, 방출 기간 및 방출량 등을 조사한 결과이다. 조사 결과 숙주 폐사 후 체내 잔존 충체는 생존시 충체량과 비교하여 조사기간 동안 급격히 감소하여 8일째에는 전혀 검출되지 않았으며, 같은 기간 동안 체외로 방출된 충체량은 폐사 5일째까지는 증가하다 이후 급격히 감소하여 8일째에는 방출개체가 소멸하였다.
제안 방법
16개의 바지락을 각 개체별로 독립된 수조 (100 ml) 에 넣은 다음, P. olseni를 3 x 107 cell/clam 농도로 조절된 멸균 해수 0.5 ml를 후폐각근에 주입하고, 매일 해수로 방출되는 P.olseni을 정량하였다. 수조에는 aeration을 실시하였다.
수조에는 aeration을 실시하였다. 실험 도중 폐사한 개체들이 발생하면 이 개체의 각장, 각고를 측정하고 육질부를 분리한 다음 습중량을 측정하였으며, 이 후 이 육질부를 다시 개별 수조에 넣고 폐사 순서에 따라 2마리씩 4개 그룹 (Group-A-D) 으로 나눈 후, Group-A는 폐사 당일부터 2일간 해수중으로 방출된 P. olseni 양을 매일 정량하였으며, 마지막 날에는 바지락 체내의 충체를 정량 하였다. 동일한방법으로 Group-B는 폐사 후 4일간, Group-C는 폐사 후 6일간, Group-D는 폐사 후 8일간 해수 중으로 방출된 P.
본 연구에 사용한 바지락은 충남 태안군 소원면 파도리의 바지락 양식장에서 채집하였고, 군산대학교 해양수산교육연구센터의 어류기생충학 실험실에서 1달간 수온 20℃와 염분 30 psu에서 순치시킨 다음 실험에 이용하였다. 이 기간 동안 매일 1시간씩 Shellfish diet 1800Ⓡ (Reed Mariculture Inc, USA) 를 1 x 107 cell/mL/day의 농도로 공급하였다.
이 후 실험실로 옮겨 각장, 각고, 습중량 및 condition index (CI) 등을 측정하였으며, 육질부는 RFTM (Ray’s Fluid Thioglycollate Medium) - 2M NaOH lysis 방법을 이용해 P. olseni의 감염도를 측정하였다.
대상 데이터
olseni (KHS-1) 를 확보하였다. P. olseni (KHS-1) 는 실험 전까지 5% cryo-MEM(Minimum Essential Medium, DMEM:F12 with 10% FBS with 5% DMSO) 에 동결보존 하였으며, P. olseni(KHS-1) 를 MEM (DMEM:F12 with 10% FBS) 에 재배양하여 영양체를 확보하였다.
본 연구에 사용한 P. olseni는 충청남도 홍성군 바지락 양식장에서 채집한 바지락의 혈림프내에서 분리하였으며, monoclonal culture를 수행하여 P. olseni (KHS-1) 를 확보하였다. P.
본 연구에 사용한 바지락은 충남 태안군 소원면 파도리의 바지락 양식장에서 채집하였고, 군산대학교 해양수산교육연구센터의 어류기생충학 실험실에서 1달간 수온 20℃와 염분 30 psu에서 순치시킨 다음 실험에 이용하였다. 이 기간 동안 매일 1시간씩 Shellfish diet 1800Ⓡ (Reed Mariculture Inc, USA) 를 1 x 107 cell/mL/day의 농도로 공급하였다.
전라북도 부안군 위도에 위치한 바지락 양식장에서 서식중인 바지락 중 저질에 잠입해있는 바지락과 저질 표면으로 올라온 후 패각을 5 mm 정도 벌린 채 사망한 바지락을 각각 20개체씩 채집하였다 (Fig. 1). 이 후 실험실로 옮겨 각장, 각고, 습중량 및 condition index (CI) 등을 측정하였으며, 육질부는 RFTM (Ray’s Fluid Thioglycollate Medium) - 2M NaOH lysis 방법을 이용해 P.
데이터처리
olseni의 농도의 차이는 SPSS. 12.0.1패키지의 T-test 또는 One-way ANOVA를 실시한 다음 Duncan의 사후분석을 95%의 신뢰수준에서 평가하였다.
이론/모형
P. olseni의 정량은 RFTM방법과 Choi's 2M NaOH lysis 방법을 사용하였다 (OIE, 2006).
성능/효과
Group-A는 인위감염 3일 째 사망한 2개체였으며, 나머지 그룹은 인위감염 4일 째 사망한 6개체를 2개체씩 나누어 구성하였다. Group-A의 체내 잔존 P. olseni의 수는 10,668,750 cell/clam 였고, Group-B는 1,662,500 cell/clam 로 감소하였으며, Group-C는 300,000 cell/clam 로 감소하는 등 시간이 경과할수록 급격히 감소하였다. 더욱이 Group-D는 육질부가 대부분 분해되었으며 이들 내에서 P.
P. olseni 에 인위 감염된 바지락은 인위감염 당일 평균 857,000 cell/clam 을 해수 중으로 방출하였으며, 감염 2일째부터 4일째까지 매일 약 200,000 cell의 P. olseni가 방출된 것으로 나타났다 (Fig. 2). 인위감염 3일째에 2개체가 사망하였고, 4일째에 6개체가 사망함으로써 전체 바지락 중 누적 폐사율이 50%가 되었으며, 이 날 생존한 채 남아 있는 8개 바지락의 평균 P.
결론적으로, 바지락의 대량 폐사 시 P. olseni의 확산은 폐사 후 8일 이내에 이루어지며, 이러한 숙주 체외로의 방출은 숙주의 생존 시 갖고 있었던 충체 수의 6.68%에 달하였다. 따라서 이러한 정보는 P.
05). 그러나 P.olseni 감염도는 잠입 바지락에서 평균 2,655,626 cell/clam 또는 767,324 cell/GTWW이 검출되었으나, gapped 바지락의 경우 평균 28,203 cell/clam 또는 17,005 cell/GTWW 만이 검출되었다 (Table 1).
, 2002). 그러나 바지락에 기생하는 P. olseni의 경우에는 생존한 개체보다는 폐사한 개체의 충체 유출이 병원체의 확산에 주요하게 작용함이 본 연구를 통하여 확인되었다.
3%로 최대 방출량을 보인 후 점차 감소하여 폐사 8일 째에는 방출된 충체가 전혀 검출되지 않았다. 따라서 폐사한 개체로부터 숙주의 폐사 후 7일째까지 방출된 누적 P.olseni 수는 숙주의 생존 시 숙주 체내에 있었던 충체량의6.8%에 달하였다. 이러한 결과는 Park et al.
olseni의 영양체 역시 분해되었기 때문으로 판단된다. 본 연구에서 조사 된 바와 같이 바지락 사망 후 경과 일수에 따른 P. olseni 충체 수를 생존시 충체 수와 비교한 결과 폐사후 2일 째에는 생존한 바지락의 50% 수준에 불과하였으며, 4일 째에는 약 20%, 6일 째는 약 1.5%로 감소하였다. 이러한 결과는 본 연구진이 위도 지역을 방문하여 조사한 gapped 바지락내 충체 수가 생존 바지락의 2%수준에 불과하였으며 이 때가 폐사 발생 후 약 5일정도 경과한 시점였음을 고려하면 실험실내 실험과 현장의 결과가 매우 유사한 결과로 판단된다.
5%로 감소하였다. 이러한 결과는 본 연구진이 위도 지역을 방문하여 조사한 gapped 바지락내 충체 수가 생존 바지락의 2%수준에 불과하였으며 이 때가 폐사 발생 후 약 5일정도 경과한 시점였음을 고려하면 실험실내 실험과 현장의 결과가 매우 유사한 결과로 판단된다.
2). 인위감염 3일째에 2개체가 사망하였고, 4일째에 6개체가 사망함으로써 전체 바지락 중 누적 폐사율이 50%가 되었으며, 이 날 생존한 채 남아 있는 8개 바지락의 평균 P. olseni 감염도는 19,800,000 cell/clam 였다(Table 2).
3%에 불과하였다. 조사 8일 동안 체외로 방출된 P. olseni는 총 1,334,375 cell 였으며, 이는 생존 시 바지락이 보유하였던 총충체의 6.68%에 달하였다. 본 실험에 사용된 생존 바지락과 폐사 바지락의 각장과 CI는 서로 유사하였다 (Table 4).
조사 결과 숙주 폐사 후 체내 잔존 충체는 생존시 충체량과 비교하여 조사기간 동안 급격히 감소하여 8일째에는 전혀 검출되지 않았으며, 같은 기간 동안 체외로 방출된 충체량은 폐사 5일째까지는 증가하다 이후 급격히 감소하여 8일째에는 방출개체가 소멸하였다.
Group A-D 에 속한 개체들이 폐사 당일 방출한 충체 수는 9,375 cell/clam 였으며, 폐사 2일째는 65,625 cell/clam 로 증가하였고, 폐사 3일 째에는 GroupB-D에 속한 개체들에게서 147,917 cell/clam 이 방출되었다. 폐사 5일 째에는 Group C-D에 속한 개체들에게서 평균 459,375cell/clam 이 해수중으로 방출되어 최대 방출량을 기록하였다. 그러나 이후 해수로의 충체 방출량은 급격히 감소하여 폐사 7일째 Group-D로부터 방출된 충체의 수는 87,500 cell/clam 에 불과하였고, 폐사 8일 째에는 충체가 검출되지 않았다.
한편, 실험실내 실험에서 인위적으로 P. olseni 감염된 후 사망한 바지락 사육수내의 P. olseni의 량을 측정한 결과 폐사 당일에는 폐사 직전 보유하고 있던 총 충체 수의 0.05%를 방출하였으며, 2일 째에는 0.33%로 증가하였고 이러한 방출량은 5일째에 2.3%로 최대 방출량을 보인 후 점차 감소하여 폐사 8일 째에는 방출된 충체가 전혀 검출되지 않았다. 따라서 폐사한 개체로부터 숙주의 폐사 후 7일째까지 방출된 누적 P.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
기생충인 P. olseni 감염이 바지락에게 주는 피해는?
, 2005). 이 충체는 바지락의 조직내에서 심각한 염증과 번식량의 저하를 유발하며 (Hamaguchi et al., 1998; Park et al., 2006; Waki et al., 2012), 연중 바지락 체내 P.olseni의 감염도는 바지락의 폐사 시기에 증가하고 (Park etal., 2005), 바지락 치패의 폐사를 유발함이 보고된 바 있다(Waki et al., 2012).
바지락의 특징은?
바지락, Ruditapes philippinarum은 성장이 빠르고 환경변화에 대한 적응력이 뛰어나기 때문에 한국에서 굴, 홍합과 함께 산업적으로 매우 중요한 수산자원이다 (Eugenia et al.,1992; Lee et al.
기생충은 숙주가 사망하면 어떤 일을 하는가?
기생충은 숙주의 사망으로 인한 숙주 조직의 붕괴가 발생하면 숙주의 체외로 탈출한다 (Bushek et al., 2002; Moodie,2005).
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