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문제 정의
- 본 연구에서는 수궐음심포경의 대릉(PC7)에 상응하는 흰쥐의 경혈부위에 골격근을 지배하는 운동신경과 감각신경세포체를 추적하는 좋은 추적자로 알려진 CTB를 주입하여 신경세포체 및 신경섬유의 표지부위를 관찰하고, 표지된 신경세포 내 신경전달물질을 관찰함으로써 수궐음경근을 지배하는 신경원의 실체와 연계성을 파악해보고자 하였다.
- 이에 본 연구에서는 상지 내측에 분포하는 수궐음심포경의 대릉(PC7)에 상응하는 흰쥐의 경혈부위에 CTB를 주입하여 운동신경과 감각신경의 분포영역을 관찰하고, 표지된 신경세포 내 신경전달물질을 관찰함으로써 수궐음심포경을 지배하는 신경원의 실체와 그 연계성을 파악해보고자 한다.
제안 방법
- 그 후 4% paraformaldehyde로 고정한 후 20% sucrose-phosphate용액으로 30분간 관류시켰다. 각각의 취혈 부위와 관련된 신경세포 및 신경섬유의 표지부위를 관찰하기 위하여 척수분절, 감각신경절 및 교감신경절을 순서대로 절취하였다. 척수와 감각신경절의 영역은 C3∼T4영역을 절취하였고, 교감신경절은 위목신경절(superior cervical ganglia, SCG), 중간목신경절(middle cervical ganglia, MCG), 별신경절(stellate ganglia, STG), T4∼T6 교감신경절을 순서대로 절취하였다.
- 대릉(PC7)에서 투사한 척수분절과 신경절내의 신경 펩타이드인 Rabbit anti-calcitonin gene related peptide(CGRP, C8198, Sigma-Aldrich, U.S.A.)와 Rabbit anti-substance P(SP, S1042, Sigma-Aldrich, U.S.A.)를 관찰하기 위하여 절단된 절편조직을 이용하여 면역조직화학염색을 시행하였다. 염색 방법은 상기한 면역조직화학염색과 동일하게 시행하였으나 사용된 1차 항체는 Rabbit anti-CGRP와 Rabbit anti-substance P를 각각 1:7,000과 1:5,000으로 희석하여 4℃에서 24시간 반응시켰다.
- 1M PB로 세척하였다. 세척 후 Tris buffer에 2 ㎎의 diaminobenzidin과 3% H2O2용액 20 ㎕를 첨가한 발색제에서 10-15분간 반응시켜 통상적인 방법으로 탈수와 투명화를 거쳐 봉입한 후 광학현미경으로 신경세포체와 신경섬유의 표지된 영역들을 관찰하였다.
- 신경추적자인 cholera toxin subunit B(CTB)를 이용하여 대릉(PC7)과 관련된 운동과 감각신경의 공통된 표지영역을 관찰하고, 표지된 신경세포내 신경전달물질을 관찰함으로써 경혈의 신경해부학적 특이성을 신경추적자 기법과 면역조직화학적 염색방법에 의하여 비교 관찰한 바 다음과 같은 결과를 얻었다.
- 각각의 취혈 부위와 관련된 신경세포 및 신경섬유의 표지부위를 관찰하기 위하여 척수분절, 감각신경절 및 교감신경절을 순서대로 절취하였다. 척수와 감각신경절의 영역은 C3∼T4영역을 절취하였고, 교감신경절은 위목신경절(superior cervical ganglia, SCG), 중간목신경절(middle cervical ganglia, MCG), 별신경절(stellate ganglia, STG), T4∼T6 교감신경절을 순서대로 절취하였다. 절취한 신경조직은 냉동절편기(cryocut)를 이용하여 40 ㎛ 두께의 관상절편을 제작한 후 CTB 면역조직화학염색을 시행하였다.
- 흰쥐는 Avertin(2 g, 2,2,2-tribromoethanol; 2.0 ㎖ 2-methyl-2-butanol; 100 ㎖ nanopure water), 5 ㎖/㎏ B.W.를 복강내 주입하여 마취한 후 시행하였다. 주입할 경혈 부위의 취혈은 인체의 경혈에 상응하는 부위를 골도법에 따라 취혈한 후 경혈부위 주변의 털을 animal clipper로 완전히 제거한 후 시행하였다.
대상 데이터
- 250-300 g의 성숙한 Sprague-Dawley 흰쥐 16마리를 다물사이언스(한국)에서 분양받아 1주일간 사육실에서 적응시킨 후 항온항습(22±2℃, 65±2% RH) 환경에서 사육하였고, 사료는 시판하는 고형사료를 공급하였다. 본 실험에 사용한 실험동물은 적응기간이 종료된 후 난괴법으로 4마리를 선택하여 실험군으로 설정하였다.
- 250-300 g의 성숙한 Sprague-Dawley 흰쥐 16마리를 다물사이언스(한국)에서 분양받아 1주일간 사육실에서 적응시킨 후 항온항습(22±2℃, 65±2% RH) 환경에서 사육하였고, 사료는 시판하는 고형사료를 공급하였다. 본 실험에 사용한 실험동물은 적응기간이 종료된 후 난괴법으로 4마리를 선택하여 실험군으로 설정하였다.
성능/효과
- 본 실험에서 대릉에 주입된 CTB에 표지된 운동신경세포의 영역은 C8 척수분절에 가장 많이 표지되었고 척수 내 감각신경섬유의 표지영역은 층판 ⅠⅣ 영역에 표지되었다. 감각신경절 영역에서 CTB는 C7, C8, T2 영역에 주로 표지되었고 교감신경절 영역에서 CTB는 별신경절에 가장 많이 표지되었다. CGRP에 면역 염색된 척수 영역은 층판 ⅠⅢ의 dorsomedial region에 강하게 염색되었고 SP에 면역 염색된 척수 영역은 대체로 층판 Ⅰ영역과 ⅡⅣ 영역의 dorsomedial portion이었다.
- 대릉(PC7)을 포함하는 수궐음경근은 C8 척수분절의 신경지배를 가장 많이 받고 것을 알 수 있었다. 이 투사영역들이 여러 척수분절에 투사되는 것으로 보아 상지부의 각 경근의 지배는 여러 척수분절의 여러 신경의 협조 작용에 의해 이뤄짐을 알 수 있었다.
- 대릉(PC7)의 지배 운동신경 영역은 C5∼T1 척수분절이었고, 감각신경 영역은 C5∼T2 척수신경절이었다. 또한 교감신경절에 투사된 영역은 중간목신경절, 별신경절 및 T4 교감신경절이었다.
- 대릉(PC7)의 지배 운동신경 영역은 C5∼T1 척수분절이었고, 감각신경 영역은 C5∼T2 척수신경절이었다. 또한 교감신경절에 투사된 영역은 중간목신경절, 별신경절 및 T4 교감신경절이었다.
- 이 투사영역들이 여러 척수분절에 투사되는 것으로 보아 상지부의 각 경근의 지배는 여러 척수분절의 여러 신경의 협조 작용에 의해 이뤄짐을 알 수 있었다. 또한 교감신경절에도 투사되는 것으로 보아 이 경혈들을 이용한 침구치료가 근골격계 질환에 대한 치료 효과 이외에도 인체 내 자율신경 조절에 관여함으로써 인체의 항상성 유지에 도움을 줄 수 있다는 것을 알 수 있었다.
- 이상의 신경추적자를 이용하여 관찰한 실험결과를 토대로 하여 볼 때 대릉과 연관된 경근은 주로 C8 운동신경세포의 지배를 받고 주로 T3, T4 감각신경의 지배를 받음을 알 수 있었다. 또한 이중 염색된 부분들이 운동 및 감각 신경에 분포함과 아울러 교감신경절에도 투사되는 것으로 보아 이 경혈들이 근골격계 질환 뿐만 아니라 인체 내 자율신경을 조절하는 데에도 관여할 수 있음을 추정해 볼 수 있다. 다만 수궐음심포경의 경혈이 실험에서 진행된 경혈 외에도 많이 있으므로 각 경락에 속한 모든 경혈에 대한 신경추적자 주입을 통한 관찰이 수반된다면 수궐음경근 지배 신경원의 전체적인 파악이 가능하리라 사료된다.
- 본 실험에서 대릉에 주입된 CTB에 표지된 운동신경세포의 영역은 C8 척수분절에 가장 많이 표지되었고 척수 내 감각신경섬유의 표지영역은 층판 ⅠⅣ 영역에 표지되었다. 감각신경절 영역에서 CTB는 C7, C8, T2 영역에 주로 표지되었고 교감신경절 영역에서 CTB는 별신경절에 가장 많이 표지되었다.
- 대릉(PC7)을 포함하는 수궐음경근은 C8 척수분절의 신경지배를 가장 많이 받고 것을 알 수 있었다. 이 투사영역들이 여러 척수분절에 투사되는 것으로 보아 상지부의 각 경근의 지배는 여러 척수분절의 여러 신경의 협조 작용에 의해 이뤄짐을 알 수 있었다. 또한 교감신경절에도 투사되는 것으로 보아 이 경혈들을 이용한 침구치료가 근골격계 질환에 대한 치료 효과 이외에도 인체 내 자율신경 조절에 관여함으로써 인체의 항상성 유지에 도움을 줄 수 있다는 것을 알 수 있었다.
- 이상의 신경추적자를 이용하여 관찰한 실험결과를 토대로 하여 볼 때 대릉과 연관된 경근은 주로 C8 운동신경세포의 지배를 받고 주로 T3, T4 감각신경의 지배를 받음을 알 수 있었다. 또한 이중 염색된 부분들이 운동 및 감각 신경에 분포함과 아울러 교감신경절에도 투사되는 것으로 보아 이 경혈들이 근골격계 질환 뿐만 아니라 인체 내 자율신경을 조절하는 데에도 관여할 수 있음을 추정해 볼 수 있다.
후속연구
- 또한 이중 염색된 부분들이 운동 및 감각 신경에 분포함과 아울러 교감신경절에도 투사되는 것으로 보아 이 경혈들이 근골격계 질환 뿐만 아니라 인체 내 자율신경을 조절하는 데에도 관여할 수 있음을 추정해 볼 수 있다. 다만 수궐음심포경의 경혈이 실험에서 진행된 경혈 외에도 많이 있으므로 각 경락에 속한 모든 경혈에 대한 신경추적자 주입을 통한 관찰이 수반된다면 수궐음경근 지배 신경원의 전체적인 파악이 가능하리라 사료된다.
- 또한 주입부위의 신경핵내에 있는 신경세포들은 단일 장기만을 지배하기 위하여 독립적으로 할당된 것이 아니라 신체 여러 부위에 공급하는 다른 신경핵들과도 연결되어 있기 때문에 단일 장기만을 특이하게 지배하는 신경로를 규명하는 데 어려움이 있었다. 이러한 이유로 말단 장기에 1회 주입함으로써 중추신경계 내에서 연결된 신경로를 한꺼번에 관찰 할 수 있는 새로운 추적방법이 요구되었다. 최근에 이러한 요구를 충족할 수 있는 신경친화성 바이러스(neurotropic virus)가 신경로 연구에 이용하게 되었다.
- 그래서 경근요법, 경근추나 요법, 경근이완요법, 경근첩대요법, 경근자법, 경근전도, 경근무늬측정 등 근육 혹은 근막을 매개로 하는 진단 및 치료법에 경근이라는 용어가 다양하게 사용되고 있다. 하지만 이러한 상황에도 불구하고 경근이론은 진단 및 치료의 영역에서 체계적으로 응용되지 못하였으며 따라서 경근의 개념에 대한 재해석, 경근 이론의 체계화와 함께 진단 및 치료에 대해 보다 발전된 해석이 요구된다.
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