이 연구는 수입을 포함한 국내 유통 축산물 중 spinetoram의 안전관리를 위한 공정시험법을 확립하기 위해 수행하였으며 시험법의 선택성, 검출한계 및 정량한계, 회수율에 대한 검증을 통하여 공정시험법으로의 유효성을 확인하였다. Spinetoram을 효과적으로 분석하기 위하여 LC-MS/MS를 분석기기로 사용하였고, acetonitrile으로 추출 후 PSA를 이용한 d-SPE정제법을 적용하여 시료의 불순물을 정제하였다. 개발된 spinetoram 시험법의 직선성은 농도 대비 피크면적과의 결정계수(r2)가 0.994 이상으로 우수하였으며, 검출한계 및 정량한계는 각각 0.002, 0.01 mg/kg으로 높은 감도를 나타내었다. 축산물 시료 중 모든 처리구에서 평균 회수율은 81.9-106.4 %였고, 분석오차는 10 % 이하로 정확성 및 재현성이 우수함을 확인할 수 있었다. 또한 광주청과의 실험실간 검증 결과에서도 평균 회수율 87.4-109.1 %를 나타내어 모두 CODEX 가이드라인(CAC/GL 40, 2003)의 기준을 부합하는 것을 확인하였다. 따라서 개발된 시험법은 낮은 검출한계 및 정량한계, 우수한 직선성, 회수율 시험을 통한 양호한 정밀성 및 재현성 등이 입증되어 축산물 중 spinetoram을 분석하기 위한 식품공전 공정시험법으로 활용하고자 한다.
이 연구는 수입을 포함한 국내 유통 축산물 중 spinetoram의 안전관리를 위한 공정시험법을 확립하기 위해 수행하였으며 시험법의 선택성, 검출한계 및 정량한계, 회수율에 대한 검증을 통하여 공정시험법으로의 유효성을 확인하였다. Spinetoram을 효과적으로 분석하기 위하여 LC-MS/MS를 분석기기로 사용하였고, acetonitrile으로 추출 후 PSA를 이용한 d-SPE정제법을 적용하여 시료의 불순물을 정제하였다. 개발된 spinetoram 시험법의 직선성은 농도 대비 피크면적과의 결정계수(r2)가 0.994 이상으로 우수하였으며, 검출한계 및 정량한계는 각각 0.002, 0.01 mg/kg으로 높은 감도를 나타내었다. 축산물 시료 중 모든 처리구에서 평균 회수율은 81.9-106.4 %였고, 분석오차는 10 % 이하로 정확성 및 재현성이 우수함을 확인할 수 있었다. 또한 광주청과의 실험실간 검증 결과에서도 평균 회수율 87.4-109.1 %를 나타내어 모두 CODEX 가이드라인(CAC/GL 40, 2003)의 기준을 부합하는 것을 확인하였다. 따라서 개발된 시험법은 낮은 검출한계 및 정량한계, 우수한 직선성, 회수율 시험을 통한 양호한 정밀성 및 재현성 등이 입증되어 축산물 중 spinetoram을 분석하기 위한 식품공전 공정시험법으로 활용하고자 한다.
An analytical method was developed to determine the amount of spinetoram (spinetoram J and spinetoram L) in livestock samples. The spinetoram was extracted with acetonitrile and purified through a primary secondary amine (PSA) sorbent. The spinetoram residues were then quantified and confirmed using...
An analytical method was developed to determine the amount of spinetoram (spinetoram J and spinetoram L) in livestock samples. The spinetoram was extracted with acetonitrile and purified through a primary secondary amine (PSA) sorbent. The spinetoram residues were then quantified and confirmed using a liquid chromatography–tandem mass spectrometer (LC-MS/MS) in the positive ion mode using multiple reactions monitoring (MRM). Matrix-matched calibration curves were linear over the calibration ranges (0.005-0.5 mg/kg) into a blank extract with r2 > 0.994. The limits of detection and quantification were 0.002 and 0.01 mg/kg, respectively. The recovery results of spinetram ranged between 81.9-106.4% at different concentration levels (LOQ, 10LOQ, 50LOQ, n=5) with relative standard deviations (RSDs) less than 10%. All values were consistent with the criteria ranges requested in the Codex guidelines (CAC/GL40, 2003). An interlaboratory study was conducted to validate the method. The proposed analytical method proved to be accurate, effective, and sensitive for spinetoram determination. The method will be used as an official analytical method in Korea.
An analytical method was developed to determine the amount of spinetoram (spinetoram J and spinetoram L) in livestock samples. The spinetoram was extracted with acetonitrile and purified through a primary secondary amine (PSA) sorbent. The spinetoram residues were then quantified and confirmed using a liquid chromatography–tandem mass spectrometer (LC-MS/MS) in the positive ion mode using multiple reactions monitoring (MRM). Matrix-matched calibration curves were linear over the calibration ranges (0.005-0.5 mg/kg) into a blank extract with r2 > 0.994. The limits of detection and quantification were 0.002 and 0.01 mg/kg, respectively. The recovery results of spinetram ranged between 81.9-106.4% at different concentration levels (LOQ, 10LOQ, 50LOQ, n=5) with relative standard deviations (RSDs) less than 10%. All values were consistent with the criteria ranges requested in the Codex guidelines (CAC/GL40, 2003). An interlaboratory study was conducted to validate the method. The proposed analytical method proved to be accurate, effective, and sensitive for spinetoram determination. The method will be used as an official analytical method in Korea.
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제안 방법
126)에서는 HPLC-UVD (High Pressure Liquid Chromatograph-UV/Vis absorption detector)를 이용하여 246 nm 파장에서 분석하는 방법을 선택하였다.17 그러나 본 시험법에서는 현재 spinetoram에 대한 축산물에 설정된 MRL이 농산물에 비해 낮은 수준으로 고감도 분석이 요구되기 때문에 시료의 간섭물질에 영향을 받지 않아 선택성이 높고 감도가 우수한 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS, Liquid Chromatograph-Tandem Mass spectrometer)를 분석기기로 선정하였다. 기기 특성상 잔류시험법 개발 후 재확인을 위한 분석기기로 사용되므로 spinetoram 에 대한 잔류물의 정확성 및 신뢰성을 동시에 확보할 수 있었다.
또한 분석의 선택성과 검출강도를 극대화시키기 위하여 MS/ MS 분석 시 MRM(multiple reaction monitoring) mode 로 분석하였다. Collision cell에서 collision energy를 조절하여 최적의 precursor/product ion pair를 선정하였고, 가장 좋은 감도를 보이는 product ion을 정량이온(quantification ion)으로, 다음으로 크게 검출되는 product ion을 정성이온(qualification ion)으로 설정하여 확인하였다. 최적 기기분석 조건은 Table 2에 나타내었고, 분석조건에서 선정된 특성 이온과 머무름 시간은 Table 3에 나타내었다.
7 mg을 10 mL의 acetonitrile 에 용해하여 1,000 µg/mL의 표준원액을 조제하였다. Matrix-matched calibration을 위해 각 축산물 시료 의무처리 추출물 900 µL에 10 µg/mL 표준용액 100 µL 를 넣어 1.0 µg/mL의 matrix-matched 표준용액을 조제한 뒤 무처리 추출액을 이용하여 단계적으로 희석하여 0.005, 0.01, 0.02, 0.05, 0.1, 0.2, 및 0.5 µg/mL의 표준용액을 조제하였다. 표준원액과 표준용액은 모두 갈색 병에 담아 4 oC에 보관하여 실험에 사용하였다.
Spinetoram의 선택성(selectivity)은 표준용액, 무처리시료, 표준용액을 첨가한 회수율 시료의 크로마토그램을 비교 평가하였다. 무처리 시료와 표준용액을 첨가한 시료를 확립된 시험방법에 따라 분석한 결과, 무처리시료 중 spinetoram의 J형과 L형의 머무름 시간과 질량 대 전하비(m/z)가 같은 어떠한 간섭물질도 검출되지 않아 본 시험법의 높은 선택성을 확인할 수 있었다.
특히 알의 경우 회수율이 60% 미만으로 CODEX 가이드라인에 부합하지 않아 적용이 불가하였다(Table 5). 때문에 spinetoram의 손실 양은 최소화하고, 보다 우수한 정제효과를 얻기 위해 PSA(primary and secondary amine) 또는 C18 (octade- cysilane)을 흡착제로 사용하는 d-SPE(dispersive-solid phase extraction)정제방법을 적용 후 각각의 효율을 비교하였다(Table 6).
Spinetoram (spinetoram J형, L형 혼합) 표준용액(1 µg/ mL)을 일정한 속도 (10 µL/min)로 질량검출기에 직접 주입하고 cone voltage의 변경(10-70 V)을 통해 45 V 에서 두 화합물 모두 각 분자의 [M+H]+ 이온의 peak 가 최대 강도를 나타내는 것을 확인하였다. 또한 분석의 선택성과 검출강도를 극대화시키기 위하여 MS/ MS 분석 시 MRM(multiple reaction monitoring) mode 로 분석하였다. Collision cell에서 collision energy를 조절하여 최적의 precursor/product ion pair를 선정하였고, 가장 좋은 감도를 보이는 product ion을 정량이온(quantification ion)으로, 다음으로 크게 검출되는 product ion을 정성이온(qualification ion)으로 설정하여 확인하였다.
처리농도는 대표축산물 5종에 대하여 정량한계, 정량한계의 10배, 정량한계의 50배에 해당하는 농도로 각 시료에 5반복으로 수행하였으며, 평균과 상대표준 편차(RSD, relative standard deviation)를 계산하여 시험법의 정확성과 정밀성 및 재현성을 평가하였다. 또한 서울지방식품의 약품안전청과 실험실간 검증을 실시하여 시험법의 유효성을 확인하였다.
기기 특성상 잔류시험법 개발 후 재확인을 위한 분석기기로 사용되므로 spinetoram 에 대한 잔류물의 정확성 및 신뢰성을 동시에 확보할 수 있었다. 분석용 칼럼은 분석대상 물질의 Log Pow 가 2.44-4.82(pH 5-9)로 pH 변화에 따라 중간 극성-비극성의 특성을 띄는 점을 고려하여 극성물질에서 비극성물질까지 폭넓게 분리 가능한 C18칼럼을 이용하였고 2 mM ammonium acetate in methanol/acetonitrile (50/50, v/v)과 2 mM ammonium acetate in water를 이동상으로 사용하는 기울기 용리 방식으로 분석하였다. 이동상에 사용한 ammonium acetate는 protonation enhancer로서 spinetoram 분자의 dimethylamine기에서 protonation을 용이하게 하여 [M+H]+ 이온을 생성하도록 하였다.
시험법의 유효성 입증을 위해 광주지방식품의 약품안전청 유해물질분석과와 실험실간 검증을 수행하였다. 개발한 시험법을 광주지방식품의약품안전청에 제공하고 동일한 방법으로 분석을 수행한 후 회수율 및 표준편차를 비교하였다.
또한, 검출한계와 정량한계는 크로마토그램 상에서 신호 대 잡음비(S/N ratio) 각각 3, 10 이상으로 하였다. 시험법의 정확성 및 재현성을 평가하기 위하여 각 시료의 무처리 시료에 spinetoram 표준용액을 첨가한 후 분석하여 회수율을 구하였다. 처리농도는 대표축산물 5종에 대하여 정량한계, 정량한계의 10배, 정량한계의 50배에 해당하는 농도로 각 시료에 5반복으로 수행하였으며, 평균과 상대표준 편차(RSD, relative standard deviation)를 계산하여 시험법의 정확성과 정밀성 및 재현성을 평가하였다.
시험법의 정확성을 평가하기 위하여 5종의 축산물 시료에 정량한계, 정량한계의 10배, 정량한계의 50배 수준인 0.01, 0.1과 0.5 ㎎/㎏의 농도로 회수율 실험을 5회 반복하여 수행하였다. 시험 결과 각 농도에서 spinetoram의 평균 회수율은 81.
이동상에 사용한 ammonium acetate는 protonation enhancer로서 spinetoram 분자의 dimethylamine기에서 protonation을 용이하게 하여 [M+H]+ 이온을 생성하도록 하였다. 이때 spinetoram J형과 L형은 각각의 최적 분석조건을 설정하여 분석하였는데, total ion chromatogram (TIC)과 mass spectrum을 통해 selected-ion monitoring (SIM) 분석을 위한 최적 특성이온을 선정하였다. Spinetoram (spinetoram J형, L형 혼합) 표준용액(1 µg/ mL)을 일정한 속도 (10 µL/min)로 질량검출기에 직접 주입하고 cone voltage의 변경(10-70 V)을 통해 45 V 에서 두 화합물 모두 각 분자의 [M+H]+ 이온의 peak 가 최대 강도를 나타내는 것을 확인하였다.
유효성(availability)을 검증하였다. 직선성의 확인을 위하여 spinetoram을 각 무처리 시료 시험용액으로 희석하여 조제한 표준용액 0.005-0.5 µg/mL의 농도 범위에 대한 각각의 peak 면적을 이용하여 검량 선을 작성하였고, 검량선의 결정계수(coefficient of correlation, r2)를 구하였다. 또한, 검출한계와 정량한계는 크로마토그램 상에서 신호 대 잡음비(S/N ratio) 각각 3, 10 이상으로 하였다.
시험법의 정확성 및 재현성을 평가하기 위하여 각 시료의 무처리 시료에 spinetoram 표준용액을 첨가한 후 분석하여 회수율을 구하였다. 처리농도는 대표축산물 5종에 대하여 정량한계, 정량한계의 10배, 정량한계의 50배에 해당하는 농도로 각 시료에 5반복으로 수행하였으며, 평균과 상대표준 편차(RSD, relative standard deviation)를 계산하여 시험법의 정확성과 정밀성 및 재현성을 평가하였다. 또한 서울지방식품의 약품안전청과 실험실간 검증을 실시하여 시험법의 유효성을 확인하였다.
축산물 시료 중 spinetoram 잔류분석을 위하여 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS, Liquid Chroma- tograph-Tandem Mass Spectrometer)를 사용하였고, 역상(C18) 칼럼을 선택하였으며 이동상으로 2 mM ammonium acetate in methanol/acetonitrile (50/50, v/v) 과 2 mM ammonium acetate in water를 사용하여 최적화된 기울기 용리방식을 적용하였다. 대상성분의 이온 화법은 ESI(electro-spray ionization)법의 positive- ion mode를 사용하였다.
확립된 spinetoram 시험법의 직선성(linearity), 검출한계(LOD, limit of detection), 정량한계(LOQ, limit of quantification), 회수율(recovery), 재현성(reproducibility)에 대해 유효성(availability)을 검증하였다. 직선성의 확인을 위하여 spinetoram을 각 무처리 시료 시험용액으로 희석하여 조제한 표준용액 0.
대상 데이터
축산물 시료의 경우 농산물에 비해 시료의 성분이 복잡하고 30% 내외의 지방 및 단백질을 포함하고 있어 추출 및 정제에 어려움이 있다. Acetonitrilee 비극성 간섭물질의 추출률이 비교적 낮고, 단백질을 변형 시켜 침전물의 형태로 제거할 수 있는 장점이 있어18 acetonitrile을 추출용매로 선정하였다. 그러나 acetonitrile로 1회 추출하였을 때 추출효율은 58.
Spinetoram(96.71%) 표준품은 Dow Agrosicence (Indiana, USA)에서 제공받아 분석물질로 사용하였고 (Table 1), acetonitrile (ACN), methanol 등은 HPLC 등급으로 Merck (Darmstadt, Germany)에서 구입하여 사용하였다. 또한 ammonium acetate는 Sigma-Aldrich(St.
Louis, MO, USA)에서, PSA(primary secondary amine)는 Agilent Technologies(CA, USA)에서 구입하였다. 검체는 식품의약품안전처에서 축산물 중 잔류농약 시험법 개발 시 고려하는 대표축산물 5종인 소고기(등심), 돼지고기(목살), 닭고기(닭가슴살), 알(전란)을 시중에서 구입하여 균질화한 후 밀봉된 용기에 담아 -50 oC에 보관하여 실험에 사용하였고, 우유는 구입 후 실험에 바로 사용하였다.
71%) 표준품은 Dow Agrosicence (Indiana, USA)에서 제공받아 분석물질로 사용하였고 (Table 1), acetonitrile (ACN), methanol 등은 HPLC 등급으로 Merck (Darmstadt, Germany)에서 구입하여 사용하였다. 또한 ammonium acetate는 Sigma-Aldrich(St. Louis, MO, USA)에서, PSA(primary secondary amine)는 Agilent Technologies(CA, USA)에서 구입하였다. 검체는 식품의약품안전처에서 축산물 중 잔류농약 시험법 개발 시 고려하는 대표축산물 5종인 소고기(등심), 돼지고기(목살), 닭고기(닭가슴살), 알(전란)을 시중에서 구입하여 균질화한 후 밀봉된 용기에 담아 -50 oC에 보관하여 실험에 사용하였고, 우유는 구입 후 실험에 바로 사용하였다.
데이터처리
개발한 시험법을 광주지방식품의약품안전청에 제공하고 동일한 방법으로 분석을 수행한 후 회수율 및 표준편차를 비교하였다. 검증 결과 각 농도별 spinetoram의 평균 회수율은 84.
이론/모형
Matrix effect를 최소화하기 위하여 유지를 비롯한 비극성 간섭물질의 정제는 n-hexane과 acetonitrile을 이용한 분배법을 적용하였다. 100% n-hexane과, 미리 acetonitrile로 포화시킨 n-hexane을 이용하여 spinetoram 에 대한 분배효율을 비교한 결과, 미리 acetonitrile로포화된 n-hexane으로 분배하는 것이 100% n-hexane 을 이용하는 것보다 효과적임을 확인할 수 있었으나 분배과정 중 손실되는 spinetoram의 양이 많아 일부 시료에서 회수율이 저조하였다.
기울기 용리방식을 적용하였다. 대상성분의 이온 화법은 ESI(electro-spray ionization)법의 positive- ion mode를 사용하였다. LC-MS/MS 분석조건은 Table 2와 같다.
최적 기기분석 조건은 Table 2에 나타내었고, 분석조건에서 선정된 특성 이온과 머무름 시간은 Table 3에 나타내었다. 또한 LC-MS/ MS 분석 시에는 검체 중 추출성분에 의하여 대상 성분의 이온화 억압 또는 증강현상이 나타날 수 있으므로 검체별로 matrix-matched calibration법에 준하여 정량하였다.
성능/효과
분배법을 적용하였다. 100% n-hexane과, 미리 acetonitrile로 포화시킨 n-hexane을 이용하여 spinetoram 에 대한 분배효율을 비교한 결과, 미리 acetonitrile로포화된 n-hexane으로 분배하는 것이 100% n-hexane 을 이용하는 것보다 효과적임을 확인할 수 있었으나 분배과정 중 손실되는 spinetoram의 양이 많아 일부 시료에서 회수율이 저조하였다. 특히 알의 경우 회수율이 60% 미만으로 CODEX 가이드라인에 부합하지 않아 적용이 불가하였다(Table 5).
이때 spinetoram J형과 L형은 각각의 최적 분석조건을 설정하여 분석하였는데, total ion chromatogram (TIC)과 mass spectrum을 통해 selected-ion monitoring (SIM) 분석을 위한 최적 특성이온을 선정하였다. Spinetoram (spinetoram J형, L형 혼합) 표준용액(1 µg/ mL)을 일정한 속도 (10 µL/min)로 질량검출기에 직접 주입하고 cone voltage의 변경(10-70 V)을 통해 45 V 에서 두 화합물 모두 각 분자의 [M+H]+ 이온의 peak 가 최대 강도를 나타내는 것을 확인하였다. 또한 분석의 선택성과 검출강도를 극대화시키기 위하여 MS/ MS 분석 시 MRM(multiple reaction monitoring) mode 로 분석하였다.
개발한 시험법을 광주지방식품의약품안전청에 제공하고 동일한 방법으로 분석을 수행한 후 회수율 및 표준편차를 비교하였다. 검증 결과 각 농도별 spinetoram의 평균 회수율은 84.1-115.2%이고 표준편차는 9.3% 미만으로 측정되었다. 두 실험실간 회수율 결과에 따른 평균값은 87.
그 결과, PSA를 이용할 경우 82.3-98.4%로 양호한 회수율을 보였고, 재현성이 우수한 반면 C18을 이용할 경우에는 58.9-68.0%로 상대적으로 낮은 회수율을 보였다. 이는 spinetoram의 Log Pow가 중성-약염기성(pH 7-9) 상태일 때 4.
17 그러나 본 시험법에서는 현재 spinetoram에 대한 축산물에 설정된 MRL이 농산물에 비해 낮은 수준으로 고감도 분석이 요구되기 때문에 시료의 간섭물질에 영향을 받지 않아 선택성이 높고 감도가 우수한 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS, Liquid Chromatograph-Tandem Mass spectrometer)를 분석기기로 선정하였다. 기기 특성상 잔류시험법 개발 후 재확인을 위한 분석기기로 사용되므로 spinetoram 에 대한 잔류물의 정확성 및 신뢰성을 동시에 확보할 수 있었다. 분석용 칼럼은 분석대상 물질의 Log Pow 가 2.
3% 미만으로 측정되었다. 두 실험실간 회수율 결과에 따른 평균값은 87.4-109.1%, 변이계수(CV%) 또한 17% 미만으로 모든 처리구에서 CODEX 가이드 라인에서 제시한 기준 처리농도 >1 µg/kg, ≤0.01 ㎎/㎏의 45%, >0.01 ㎎/㎏, ≤0.1 ㎎/㎏의 32%를 모두 만족하는 것으로 확인되었다(Table 8).
무처리 시료와 표준용액을 첨가한 시료를 확립된 시험방법에 따라 분석한 결과, 무처리시료 중 spinetoram의 J형과 L형의 머무름 시간과 질량 대 전하비(m/z)가 같은 어떠한 간섭물질도 검출되지 않아 본 시험법의 높은 선택성을 확인할 수 있었다. 또한, 직선성(linearity)을 확인하기 위하여 표준원액을 각 무처리 추출물로 희석하여 0.005, 0.01, 0.02, 0.05, 0.1, 0.2 그리고 0.5 µg/mL 5 µL를 LC-MS/MS에 주입하여 분석한 결과 결정계수(r2)가 0.994 이상으로 높은 직선성을 보였다(Fig. 1).
비교 평가하였다. 무처리 시료와 표준용액을 첨가한 시료를 확립된 시험방법에 따라 분석한 결과, 무처리시료 중 spinetoram의 J형과 L형의 머무름 시간과 질량 대 전하비(m/z)가 같은 어떠한 간섭물질도 검출되지 않아 본 시험법의 높은 선택성을 확인할 수 있었다. 또한, 직선성(linearity)을 확인하기 위하여 표준원액을 각 무처리 추출물로 희석하여 0.
5 ㎎/㎏의 농도로 회수율 실험을 5회 반복하여 수행하였다. 시험 결과 각 농도에서 spinetoram의 평균 회수율은 81.9-106.4% 이었고, 이때 상대표준편차는 9.7% 미만으로 조사되어 잔류물 분석에 관한 CODEX 가이드라인 (CAC/GL 40, 2003)19의 잔류농약 분석 기준에서 상대표준 편차가 처리농도 >0.001 ㎎/㎏ ≤0.01 ㎎/㎏의 30%, >0.01 ㎎/㎏ ≤0.1 ㎎/㎏의 20%, >0.1 ㎎/㎏ ≤1 ㎎/㎏의 15%보다 낮아 기준에 부합하므로 모든 분석물질에 대한 높은 정확성, 재현성, 효율성 확인 및 잔류농약 분석 기준에 적합함을 확인할 수 있었다(Table 7). LC-MS/MS를 이용하여 분석한 spinetoram의 회수율 크로마토그램은 Fig.
2%로 증가하였으나 재현성이 낮았다(Table 4). 이는 유지에 대한 용해성이 상대적으로 낮은 acetonitrile을 추출용매로 사용할 경우 1회 추출로는 효과적인 추출효율을 얻을 수 없었고, 2회 추출하였을 때 추출효율이 높아지는 것으로 확인하였다. 다만, 1회 추출보다 2회 추출하였을 때 재현성이 낮았는데 이는 추출효율이 높아짐에 따라 시료 내 간섭물질의 양도 증가하여 matrix effect가 크게 나타나는 것으로 보여 acetonitrile로 2회 추출 후 추가적인 정제과정이 요구되었다.
82인 비극성 화합물이므로 비극성을 띄는 C18에 일부가 흡착하여 회수율이 낮게 나타나는 것으로 보이며, PSA를 사용할 때에는 spinetoram의 구조상 PSA와 결합할 수 있는 작용기가 포함되어 있지 않아 회수율에는 영향을 미치지 않고 PSA가 갖는 두 개의 아미노(-NH2) 그룹이 카복실(-COOH) 그룹을 갖는 축산물 시료 내 유기산 및 지방산 등과 강한 수소결합을 하여 효과적인 제거가 가능한 것으로 보인다. 이러한 과정으로 인해 matrix effect와 분석대상 물질의 손실을 최소화 하여 높은 회수율과 우수한 재현성을 얻을 수 있었다.
후속연구
이는 유지에 대한 용해성이 상대적으로 낮은 acetonitrile을 추출용매로 사용할 경우 1회 추출로는 효과적인 추출효율을 얻을 수 없었고, 2회 추출하였을 때 추출효율이 높아지는 것으로 확인하였다. 다만, 1회 추출보다 2회 추출하였을 때 재현성이 낮았는데 이는 추출효율이 높아짐에 따라 시료 내 간섭물질의 양도 증가하여 matrix effect가 크게 나타나는 것으로 보여 acetonitrile로 2회 추출 후 추가적인 정제과정이 요구되었다.
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