삼백초 물 추출물과 유기용매 분획물의 항산화, 항염증 및 PMA에 의해 유도된 MMP-2 및 MMP-9활성 침윤 억제 효과 Effect of Anti-oxidant, Anti-inflammatory and Anti-invasive of PMA-induced Matrix Metalloproteinase (MMP-2) and MMP-9 Activities of Water Extract and Solvent Fractions of Saururus Chinensis원문보기
삼백초는 항산화 활성을 갖는 플라보노이드 화합물을 포함하고 있는 여러해살이 식물로 알려져 있다. 본 연구에서는 삼백초 물 추출물과 유기용매 분획물의 항산화 활성, 항염증 활성 및 PMA에 의해 유도된 MMP-2 및 MMP-9활성 억제 효과를 조사하였다. 시료들은 삼백초 물 추출을 헥산(hexane), 클로로포름(CHCl3), 에틸 아세테이트(Ethyl acetate), 부탄올(butanol) 및 물(water)과 같은 용매로 분획화하여 사용하였고, 물 분획물의 수득율이 9.25%로 가장 높았다. 항산화 활성은 DPPH assay, 세포 생존율 측정은 MTS assay, 항염증 활성은 마우스 대식세포 Raw 264.7세포에서NO 생성 그리고 MMP-2 및 MMP-9의 mRNA 발현 및 단백질 활성 억제는 인간구강편평세포암종 YD-10B 세포에서 RT-PCR과 zymography방법을 통해 측정하였다. 본 연구의 결과에 의하면 MMP-2/-9 활성은 PMA에 의해 YD-10B세포에서 증가하였다. PMA 처리된 YD-10B 세포에서, 에틸 아세테이트 분획물이 증가된 MMP-2/-9의 mRNA 발현 및 단백질 활성을 유의하게 억제하였다. 그리고 항산화 활성도 에틸아세트 분획물이 73.38%의 가장 높게 나타났다. 또한 세포 독성을 나타내지 않는 농도에서, 에틸아세트 분획물이 Raw 264.7세포에서 농도 의존적으로 유의하게 항염증 활성을 보였다. 그러므로 본 연구에서는 삼백초 물 추출의 에틸아세트 분획물이 구강암의 암 침윤을 억제할 수 있는 효과적인 암 예방 및 치료를 위한 항암제로서의 가능성을 암시하고 있다.
삼백초는 항산화 활성을 갖는 플라보노이드 화합물을 포함하고 있는 여러해살이 식물로 알려져 있다. 본 연구에서는 삼백초 물 추출물과 유기용매 분획물의 항산화 활성, 항염증 활성 및 PMA에 의해 유도된 MMP-2 및 MMP-9활성 억제 효과를 조사하였다. 시료들은 삼백초 물 추출을 헥산(hexane), 클로로포름(CHCl3), 에틸 아세테이트(Ethyl acetate), 부탄올(butanol) 및 물(water)과 같은 용매로 분획화하여 사용하였고, 물 분획물의 수득율이 9.25%로 가장 높았다. 항산화 활성은 DPPH assay, 세포 생존율 측정은 MTS assay, 항염증 활성은 마우스 대식세포 Raw 264.7세포에서NO 생성 그리고 MMP-2 및 MMP-9의 mRNA 발현 및 단백질 활성 억제는 인간구강편평세포암종 YD-10B 세포에서 RT-PCR과 zymography방법을 통해 측정하였다. 본 연구의 결과에 의하면 MMP-2/-9 활성은 PMA에 의해 YD-10B세포에서 증가하였다. PMA 처리된 YD-10B 세포에서, 에틸 아세테이트 분획물이 증가된 MMP-2/-9의 mRNA 발현 및 단백질 활성을 유의하게 억제하였다. 그리고 항산화 활성도 에틸아세트 분획물이 73.38%의 가장 높게 나타났다. 또한 세포 독성을 나타내지 않는 농도에서, 에틸아세트 분획물이 Raw 264.7세포에서 농도 의존적으로 유의하게 항염증 활성을 보였다. 그러므로 본 연구에서는 삼백초 물 추출의 에틸아세트 분획물이 구강암의 암 침윤을 억제할 수 있는 효과적인 암 예방 및 치료를 위한 항암제로서의 가능성을 암시하고 있다.
Saururus chinensis is a perennial plants, its flavonoid compound is known to exhibit anti-oxidative activity. This study was aimed to investigate the effect of Water Extract and Solvent Fractions of Saururus chinensis on antioxidant, anti-inflammatory and anti-invasive of Phorbol 12-myristate 13-ace...
Saururus chinensis is a perennial plants, its flavonoid compound is known to exhibit anti-oxidative activity. This study was aimed to investigate the effect of Water Extract and Solvent Fractions of Saururus chinensis on antioxidant, anti-inflammatory and anti-invasive of Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)-induced matrix metalloproteinase (MMP-2) and MMP-9 activities. Plant samples were fractionated into hexane, CHCl3, ethyl acetate, butanol, and water fractions, and each of these was assayed individually. The water fraction showed the highest extraction yield at 9.25%(w/w). Anti-oxidative activity was analyzed by DPPH assay. Cell viability was detected by the MTS assay. Anti-inflammatory activity was assayed by the nitric oxide (NO) production in mouse macrophage Raw 264.7 cells. The activity and mRNA expression of MMP-2 and MMP-9 in human oral squamous carcinoma YD-10B cells were examined by zymography and RT-PCR. As results, MMP-2/-9 activation was increased in PMA induced YD-10B cells. In PMA-treated YD-10B cells, the increased mRNA expression and protein activation of MMP-2/-9 were significantly inhibited in the ethyl acetate fraction. The ethyl acetate fraction showed the highest anti-oxidative activity at 73.38%. The ethyl acetate fraction at non-cytotoxic concentrations significantly exhibited the anti-inflammatory activity of Raw 264.7 cells in dose-dependent manner. In conclusion, these findings demonstrate that the ethyl acetate fraction obtained from a chinensis water extract potentiates a promising therapeutic anti-invasive agent and, therefore, as an anti-cancer drug for cancer prevention and therapy in oral cancer.
Saururus chinensis is a perennial plants, its flavonoid compound is known to exhibit anti-oxidative activity. This study was aimed to investigate the effect of Water Extract and Solvent Fractions of Saururus chinensis on antioxidant, anti-inflammatory and anti-invasive of Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)-induced matrix metalloproteinase (MMP-2) and MMP-9 activities. Plant samples were fractionated into hexane, CHCl3, ethyl acetate, butanol, and water fractions, and each of these was assayed individually. The water fraction showed the highest extraction yield at 9.25%(w/w). Anti-oxidative activity was analyzed by DPPH assay. Cell viability was detected by the MTS assay. Anti-inflammatory activity was assayed by the nitric oxide (NO) production in mouse macrophage Raw 264.7 cells. The activity and mRNA expression of MMP-2 and MMP-9 in human oral squamous carcinoma YD-10B cells were examined by zymography and RT-PCR. As results, MMP-2/-9 activation was increased in PMA induced YD-10B cells. In PMA-treated YD-10B cells, the increased mRNA expression and protein activation of MMP-2/-9 were significantly inhibited in the ethyl acetate fraction. The ethyl acetate fraction showed the highest anti-oxidative activity at 73.38%. The ethyl acetate fraction at non-cytotoxic concentrations significantly exhibited the anti-inflammatory activity of Raw 264.7 cells in dose-dependent manner. In conclusion, these findings demonstrate that the ethyl acetate fraction obtained from a chinensis water extract potentiates a promising therapeutic anti-invasive agent and, therefore, as an anti-cancer drug for cancer prevention and therapy in oral cancer.
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문제 정의
삼백초에 관한 연구를 통하여 항산화효과[11], 항염증효과[21], 항천식효과 [17] 및 항암효과[16] 등 다양한 약리 활성이 규명되고 있으나, 암 발생 또는 진행억제 약리작용 및 다양한 생리활성에 관한 기전 연구는 부족한 실정이다. 따라서 본 연구에서는 삼백초의 물 추출물 및 유기용매 분획물의 항산화 효과, 항염증 효과 및 인간구강암세포주에서의 MMP-2와 MMP-9의 발현 및 활성 억제에 의한 암 침윤 억제 효과를 조사하였다.
이와 같은 결과에서 물 추출물과 헥산 분획물은 고농도에서 50% 정도로 낮은 생존율과 함께 농도 의존적으로 유의하게 세포 성장이 억제됨을 알 수 있었고, 부탄올, 에틸 아세테이트 및 물 분획물은 모든 농도에서 70% 이상의 생존율을 보였다. 따라서 본 연구에서는 세포성장에 영향을 주지 않는 70% 이상의 생존율을 보이는 삼백초 추출물 및 분획물의 농도를 기준으로 항산화 및 항염증 효과를 관찰하였다.
본 연구에서는 삼백초 추출물 및 분획물들의 YD-10B 인간 구강암세포에서 PMA에 의한 암 침윤 및 MMP-2와 MMP-9 활성 증가에 미치는 효과를 조사하였다. 이를 위하여 100 ug/ ml 농도의 삼백초 추출물 및 분획물과 0.
따라서 최근에는 ROS를 제거하는 능력인 항산화 능력을 가진 천연 소재에 대한 연구가 활발히 증대되고 있다. 본 연구에서는 삼백초 추출물과 분획물을 가지고DPPH를 환원시키는 능력을 측정하여 항산화효과를 조사하였다. 전자 공여능에 이용되는 DPPH는 화학적으로 안정된 자유라디칼형태로서 본래는 자주색을 띄고 있으며 반응에 의해 자유라디칼이 제거됨에 따라 색이 옅어지는 정도를 측정하는 것으로 지질과산화반응의 억제 정도에 따른 항산화 활성 측정에도 적용되기 때문에 신뢰성이 높은 항산화 능력 측정법이다[2, 15].
제안 방법
, Carlsbad, CA, USA)을 사용하여 총 RNA를 추출하였다. 1 ug의 RNA를 가지고 ReverTra ACE PCR RT Master Mix Kit (TOYOBO Co., Osaka, Japan) 을 이용하여 PCR를 수행하였다. 본 실험에서는 MMP-2, MMP-9 및Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) primers (Table 2)을 사용하였고, Housekeeping 유전자인 GAPDH 유전자를 internal control로 사용하였다.
100 ug/ml 농도의 삼백초 추출물 및 분획물과 0.5 uM 농도의PMA을 단독 또는 동시에 처리된 혈청 없는 배지에서 YD-10B (5×105) 세포를 24시간 동안 배양한 후, 배지를 모아 Centriprep YM-10 (Millipore, Billerica, MA, USA)을 사용하여 농축하였다. 20 ug농도의 농축된 단백질은 non-reducing sample buffer (0.
이용하여 측정하였다. 96-well plate에 well (200 μl) 당 RAW 264.7 세포는 2×104개, YD-10B 세포는 5×103개의 수로 접종하여 12시간 동안 배양한 후, 추출물 및 분획물을 적정농도로 처리하였다. 그리고 추가적으로 37℃ 배양기에서 48시간 동안 반응시킨 후, CCK-8 용액을 세포배양액에 10 μl/ well 을 첨가하고 3시간 동안 37℃ 배양기에서 반응하였다.
02% NaN3)로 37℃에서 18시간 동안 반응하였다. Gele Coomassie Brilliant Blue (7% glacial acetic acid, 40% Methanol, 0.25% coomassie blue)로 1시간 동안 염색한 후, destaining solution (7% glacial acetic acid, 40% Methanol)으로 탈색하여 white band을 확인하였다.
YD-10B 세포에서 삼백초 추출물 및 분획물들의 세포독성효과를 조사하기 위해, 시료들을 다양한 농도로 함께 처리하여 48시간동안 반응하였다. 그 결과 대조군과 비교했을 때,
5 uM 농도의 PMA을단독 또는 동시에 처리하여 YD-10B 세포를 혈청 없는 배지에서 배양하였다. 그리고 24시간 동안 배양한 후, 배지의 상층액은 gelatin zymography법을 통해 MMP-2 및 MMP-9 단백질의 활성을 관찰하였고, 배양된 세포에서는 RT-PCR 법을 이용하여 MMP-2 및 MMP-9 mRNA 발현을 분석하였다. 그 결과는 Fig.
, Osaka, Japan) 을 이용하여 PCR를 수행하였다. 본 실험에서는 MMP-2, MMP-9 및Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) primers (Table 2)을 사용하였고, Housekeeping 유전자인 GAPDH 유전자를 internal control로 사용하였다. 증폭된 PCR 생성물은 ethidium bromide가 포함된 1.
본 연구에서는 삼백초 추출물 및 분획물들의 항염증 효과을조사하기 위해, 마우스 대식세포주인 Raw 264.7세포에 1 ug/ ml농도의 LPS를 처리하여 대식세포를 활성화시켜 염증을 유발시킨 후, 다양한 농도의 시료들을 24시간 동안 처리하여 염증 정도의 지표인 NO생성능을 측정하였다. 그 결과, 에틸 아세테이트 분획물에서는 LPS를 함께 처리했을 때, 0.
농협으로부터 구입하여 사용하였다. 삼백초 일정량에 20 배(wt/vol)의 증류수를 가하고 환류 냉각시키면서 3시간 동안 가열 추출 후 흡입기를 이용하여 감압여과(Whattman, No. 1)하였다. 이 열수추출물을 같은 부피의 헥산(hexane), 클로로포름(CHCl3), 에틸 아세테이트(Ethyl acetate), 부탄올 (butanol)로 차례로 3번씩 추출 후 각각의 추출물을 농축 시키고, 마지막에 남은 물 층을 동결 건조하여 물 분획물을 얻었다.
삼백초 추출물 및 분획물의 마우스 대식세포주인 Raw 264.7세포에 대한 세포 독성 효과를 조사하기 위해, LPS 단독 그리고 LPS와 다양한 농도로 함께 처리하여 24시간 동안 반응하였다. 그 결과 대조군과 비교했을 때, 물 추출물, 부탄올 및 물 분획물은 100 ug/ml농도에서55.
삼백초 추출물에 따른 세포독성을 조사하기 위해 Cell Counting Kit-8 (CCK-8; Dojindo Laboratories, Kumamoto, Japan)을 이용하여 측정하였다. 96-well plate에 well (200 μl) 당 RAW 264.
삼백초의 물 추출물과 유기용매 분획물의 항산화 효과, 항염증 효과 및 인간구강암세포, YD-10B 세포에서의 MMP-2와 MMP-9의 발현 및 활성 억제에 의한 암 침윤 억제 효과를 확인하였다. 본 연구를 통하여 삼백초 추출 에틸 아세테이트 분획물은 가장 우수한 항산화 및 항염증 작용을 보였으며 또한 YD-10B 구강암세포에서 MMP-2 및 MMP-9의 발현과 활성을 억제함으로써 암 침윤을 억제하는 것으로 나타났다.
1)하였다. 이 열수추출물을 같은 부피의 헥산(hexane), 클로로포름(CHCl3), 에틸 아세테이트(Ethyl acetate), 부탄올 (butanol)로 차례로 3번씩 추출 후 각각의 추출물을 농축 시키고, 마지막에 남은 물 층을 동결 건조하여 물 분획물을 얻었다. 실험에 사용한 열수추출물 과 분획별 시료는 Dimethyl sulfoxide (DMSO; Sigma-Aldrich, St.
본 실험에서는 MMP-2, MMP-9 및Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) primers (Table 2)을 사용하였고, Housekeeping 유전자인 GAPDH 유전자를 internal control로 사용하였다. 증폭된 PCR 생성물은 ethidium bromide가 포함된 1.5% agarose gel 에 전기영동 하여 UV light상에서 확인하였다.
대상 데이터
, Grand Island, New York, USA)배지에 10% FBS (Gibco-BRL), 1% penicillin/streptomycin (Gibco-BRL)을첨가하여 37℃, 5% CO2 조건의 배양기에서 계대 배양하였다. 1, 1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH), Griess reagent, Lipopolysaccharides (LPS) 및 Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)는 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)에서 구입하여사용하였다.
RAW 264.7 마우스대식세포와 YD-10B 인간 구강암세포는 한국세포주은행(Korea Cell Line Bank [KCLB], Seoul, Korea) 에서 분양 받아 사용하였다. 세포는 DMEM (Gibco-BRL, Life technologies Inc.
본 실험에서 사용한 삼백초(Saururus chinensis)는 국내산으로 농협으로부터 구입하여 사용하였다. 삼백초 일정량에 20 배(wt/vol)의 증류수를 가하고 환류 냉각시키면서 3시간 동안 가열 추출 후 흡입기를 이용하여 감압여과(Whattman, No.
7 마우스대식세포와 YD-10B 인간 구강암세포는 한국세포주은행(Korea Cell Line Bank [KCLB], Seoul, Korea) 에서 분양 받아 사용하였다. 세포는 DMEM (Gibco-BRL, Life technologies Inc., Grand Island, New York, USA)배지에 10% FBS (Gibco-BRL), 1% penicillin/streptomycin (Gibco-BRL)을첨가하여 37℃, 5% CO2 조건의 배양기에서 계대 배양하였다. 1, 1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH), Griess reagent, Lipopolysaccharides (LPS) 및 Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)는 (Sigma-Aldrich, St.
세포로부터 TRIzol 시약(Invitrogen Co., Carlsbad, CA, USA)을 사용하여 총 RNA를 추출하였다. 1 ug의 RNA를 가지고 ReverTra ACE PCR RT Master Mix Kit (TOYOBO Co.
이 열수추출물을 같은 부피의 헥산(hexane), 클로로포름(CHCl3), 에틸 아세테이트(Ethyl acetate), 부탄올 (butanol)로 차례로 3번씩 추출 후 각각의 추출물을 농축 시키고, 마지막에 남은 물 층을 동결 건조하여 물 분획물을 얻었다. 실험에 사용한 열수추출물 과 분획별 시료는 Dimethyl sulfoxide (DMSO; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)와 증류수에 1 mg/ml로 준비하여 항산화활성 측정에 사용하였고, 항염증 및 암 침윤억제 측정에는 100 mg/ml 농도로 사용하였다.
데이터처리
3회 반복 실험을 통하여 얻은 결과는 mean ± SD로 나타내었으며, 각 실험군 간의 통계학적 분석은 Student t-test를 실시하여 유의한 결과를 얻었다.
성능/효과
100 ug/ml 농도 처리에서 물 추출물, 에틸 아세테이트, 부탄올및 물 분획물은 82.82%, 70.67%, 82.13% 및 85.43%로 모두 70% 이상의 생존율을 보였으며, 헥산과 클로로포름 분획물은 61.80%와 68.89%로 낮은 생존율을 나타냈다(Fig. 3). 이와 같은 결과를 바탕으로 물 추출물, 에틸 아세테이트, 부탄올 및 물 분획물은 YD-10B 세포의 생존율에 영향을 미치지 않음을 알 수 있었고, 헥산과 클로로포름 분획물은 YD-10B 세포의 증식억제 효과를 보임을 알 수 있었다.
7세포에 대한 세포 독성 효과를 조사하기 위해, LPS 단독 그리고 LPS와 다양한 농도로 함께 처리하여 24시간 동안 반응하였다. 그 결과 대조군과 비교했을 때, 물 추출물, 부탄올 및 물 분획물은 100 ug/ml농도에서55.28%, 74.7% 및 71.47%, 10 ug/ml농도에서는 77.80%, 75.35% 및 71.81%의 생존율을 보였으며 그리고 헥산, 클로로포름, 에틸 아세테이트 분획물은 10 ug/ml농도에서 51.22%, 64.86% 및 77.48%, 0.1 ug/ml 농도에서는 77.24%, 71.30% 및85.88%의 생존율을 나타냈다(Fig. 1). 이와 같은 결과에서 물 추출물과 헥산 분획물은 고농도에서 50% 정도로 낮은 생존율과 함께 농도 의존적으로 유의하게 세포 성장이 억제됨을 알 수 있었고, 부탄올, 에틸 아세테이트 및 물 분획물은 모든 농도에서 70% 이상의 생존율을 보였다.
7세포에 1 ug/ ml농도의 LPS를 처리하여 대식세포를 활성화시켜 염증을 유발시킨 후, 다양한 농도의 시료들을 24시간 동안 처리하여 염증 정도의 지표인 NO생성능을 측정하였다. 그 결과, 에틸 아세테이트 분획물에서는 LPS를 함께 처리했을 때, 0.1, 1 및 10 ug/ml의 모든 농도에서 양성대조군인 LPS 단독 처리군에 비해 1.6, 2.0 및 2.2배의 높은 NO 생성 억제를 보였으며, 클로로포름 분획물에서는 0.1 ug/ml 농도에서 1.5배의 NO 생성 억제, 헥산 분획물에서는 0.1 ug/ml 농도에서 1.5배의 NO 생성억제, 부탄올 분획물에서는 1, 10 및 100 ug/ml 농도에서 2.0, 2.2 및 2.5배의 NO 생성 억제, 물 분획물에서는 1, 10 및 100 ug/ml 농도에서 1.5, 2.2 및 2.0배의 NO 생성 억제, 그리 고물 추출물에서는 1, 10 ug/ml 농도에서 2.1, 2.1배의 NO 생성이 억제됨을 확인하였다. 이와 같은 결과들을 바탕으로 LPS 단독 처리군은 대조군에 비해 NO생성은 5배 정도 현저히 증가하였고, 각각의 추출물 및 분획물은 세포 성장에 영향을 주지 않는 농도에서LPS 단독 처리군에 비해 유의하게 낮은 NO 생성능을 보였다(Fig.
이와 같은 결과를 바탕으로 물 추출물, 에틸 아세테이트, 부탄올 및 물 분획물은 YD-10B 세포의 생존율에 영향을 미치지 않음을 알 수 있었고, 헥산과 클로로포름 분획물은 YD-10B 세포의 증식억제 효과를 보임을 알 수 있었다. 그러므로 삼백초 추출물 및 분획물들 중에서 물 추출물, 에팉아세트, 부탄올 및 물 분획물들이 YD-10B 구강암세포를 이용한 암 침윤성과 연관된 MMP-2와 MMP-9에 미치는 효능 연구를 위한 유효한 물질임을 알 수 있었다.
4에서 나타난 것처럼, PMA를 단독 처리한 세포에서는 아무것도 처리하지 않은 세포에 비해 MMP-2 및 MMP-9의 단백질 활성 및 mRNA 발현이 모두 뚜렷하게 증가하였으며, 이는 기존의 PMA에 의한 암세포에서의 MMP-2/-9에 대한 연구와 유사한 결과이다[4, 9]. 본 연구 결과에서는 PMA와 삼백초 추출물 및 분획물을 동시 처리한 세포에서 에틸 아세테이트 분획물이 PMA에 의해 유도된 MMP-2 및 MMP-9의 단백질 활성 및 mRNA 발현 모두에서 가장 뚜렷하게 억제하였고, 그 다음으로는 물 추출물이 유의하게 억제함을 알 수 있었다.
본 연구를 통하여 삼백초 추출 에틸 아세테이트 분획물은 가장 우수한 항산화 및 항염증 작용을 보였으며 또한 YD-10B 구강암세포에서 MMP-2 및 MMP-9의 발현과 활성을 억제함으로써 암 침윤을 억제하는 것으로 나타났다. 이와 같은 본 연구 결과는 구강 암의 예방 및 치료를 위한 항암제로서의 가능성을 암시하고 있다.
삼백초 300 g을 이용하여 얻은 열수추출물을 여러가지 용매로 분획화하고 분획물의 수득율을 확인한 결과, n-hexane 추출물 0.04%, CHCl3 추출물 0.29%, ethyl acetate 추출물 0.78 %, n-butanol 추출물 2.25%, H2O 추출물 9.25%로, 물 분획물의수득율이 가장 높았다.
1배의 NO 생성이 억제됨을 확인하였다. 이와 같은 결과들을 바탕으로 LPS 단독 처리군은 대조군에 비해 NO생성은 5배 정도 현저히 증가하였고, 각각의 추출물 및 분획물은 세포 성장에 영향을 주지 않는 농도에서LPS 단독 처리군에 비해 유의하게 낮은 NO 생성능을 보였다(Fig. 2).
3). 이와 같은 결과를 바탕으로 물 추출물, 에틸 아세테이트, 부탄올 및 물 분획물은 YD-10B 세포의 생존율에 영향을 미치지 않음을 알 수 있었고, 헥산과 클로로포름 분획물은 YD-10B 세포의 증식억제 효과를 보임을 알 수 있었다. 그러므로 삼백초 추출물 및 분획물들 중에서 물 추출물, 에팉아세트, 부탄올 및 물 분획물들이 YD-10B 구강암세포를 이용한 암 침윤성과 연관된 MMP-2와 MMP-9에 미치는 효능 연구를 위한 유효한 물질임을 알 수 있었다.
48%의 높은 항산화 효과을 나타냈다(Table 1). 이와 같은 결과를 바탕으로 본 연구에서는 삼백초의 물 추출에 의한 에틸 아세테이트 분획물과 부탄올 분획물에서 항산화 물질이 다량 함유되어 있음을 확인할 수 있었다. 이는 삼백초 추출 에틸 아세테이트 분획이 가장 높은 항산화 활성을 보인다는 Kang등의 기존 보고[10]를 뒷받침하고 있다.
1). 이와 같은 결과에서 물 추출물과 헥산 분획물은 고농도에서 50% 정도로 낮은 생존율과 함께 농도 의존적으로 유의하게 세포 성장이 억제됨을 알 수 있었고, 부탄올, 에틸 아세테이트 및 물 분획물은 모든 농도에서 70% 이상의 생존율을 보였다. 따라서 본 연구에서는 세포성장에 영향을 주지 않는 70% 이상의 생존율을 보이는 삼백초 추출물 및 분획물의 농도를 기준으로 항산화 및 항염증 효과를 관찰하였다.
측정결과 에틸 아세테이트 분획물이 73.38%의 가장 높은 항산화 효과를 함유하고 있었으며, 그 다음으로는 부탄올 분획물이 69.48%의 높은 항산화 효과을 나타냈다(Table 1). 이와 같은 결과를 바탕으로 본 연구에서는 삼백초의 물 추출에 의한 에틸 아세테이트 분획물과 부탄올 분획물에서 항산화 물질이 다량 함유되어 있음을 확인할 수 있었다.
후속연구
이와 같은 본 연구 결과는 구강 암의 예방 및 치료를 위한 항암제로서의 가능성을 암시하고 있다. 하지만 향후 다양한 암세포주와 in vivo에서의 항암작용과 이들에 대한 기전 연구가 추가적으로 더 필요할 것으로 사료된다.
참고문헌 (28)
Back, M., Ketelhuth, D. F. and Agewall, S. 2010. Matrix metalloproteinases in atherothrombosis. Prog. Cardiovasc. Dis. 52, 410-428.
Chernov, A. V. and Strongin, A. Y. 2011. Epigenetic regulation of matrix metalloproteinases and their collagen substrates in cancer. Biomol. Concepts 2, 135-147.
Choi, Y. H. and Kim, S. O. 2012. Grnistein suppresses TPA-induced matrix metalloproteinases activity and cell invasion in human breast adenocarcinoma cells. J. Life Sci. 22, 964-969.
Hadler-Olsen, E., Fadnes, B., Sylte, I., Uhlin-Hansen, L. and Winberg, J. O. 2011. Regulation of matrix metalloproteinases in health and disease. FEBS J. 278, 28-45.
Hwang, Y. S., Park, K. K. and Chung, W. Y. 2012. Kalopanaxsaponin a inhibits the invasion of human oral squamous cell carcinoma by reducing metalloproteinase-9 mRNA stability and protein trafficking. Biol. Pharm. Bull. 35, 289-300.
Kang, C. S., Lee, M. J., Park, C. B. and Bang, I. S. 2012. Study on the antioxidative and physiological activities of Saururus chinensis. J. Life Sci. 22, 807-814.
Kang, T. H., Cho, H., Oh, H., Sohn, D. H. and Kim, Y. C. 2005. Flavonol glycosides with free radical scavenging activity of Saururus chinensis. Fitoterapia 76, 115-117.
Kim, E. J., Che, Z. M., Park, Y. J., Hwang, Y. S., Kim, K. Y., Jung, D. W., Jeon, N. K., Choi, Y. W., Lee, E. J. and Kim, J. 2009. Morphogenesis and biological significance of spindle cell transformation in a spindle cell carcinoma. Cancer Lett. 275, 61-71.
Kim, S. K., Ban, S. Y., Kim, J. S. and Chung, S. K. 2005. Change of antioxidant activity and antioxidant compounds in Saururus chinensis by extraction conditions. J. Kor. Soc. Appl. Biol. Chem. 48, 89-92.
Kim, Y. J., Kim, C. K. and Kwon, Y. J. 1997. Isolation of antioxidative components of Perillae semen. Kor. J. Food Sci. Technol. 29, 38-43.
Lee, A. Y., Han, Y. A., Kim, J. E., Hong, S. H., Park, E. J. and Cho, M. H. 2015. Saururus chinensis Baill induces apoptosis through endoplasmic reticulum stress in HepG2 hepatocellular carcinoma cells. Food Chem. Toxicol. 83, 183- 192.
Lee, E., Haa, K., Yook, J. M., Jin, M. H., Seo, C. S., Son, K. H., Kim, H. P., Bas, K. H., Kan, S. S., Son, J. K. and Chang, H. W. 2006. Anti-asthmatic activity of an ethanol extract from Saururus chinensis. Biol. Pharm. Bull. 29, 211-215.
Lee, E. J., Kim, J., Lee, S. A., Kim, E. J., Chun, Y. C., Ryu, M. H. and Yook, J. I. 2005. Characterization of newly established oral cancer cell lines derived from six squmous cell carcinoma and two epidermoid carcinoma cells. Exp. Mol. Med. 37, 379-390.
Mook, O. R., Frederiks, W. M. and Van Noorden, C. J. 2004. The role of gelatinases in colorectal cancer progession and metastasis. Biochem. Biophys. Acta 1705, 69-89.
Park, H. C., Be, H. B., Jeong, C. W., Lee, S. H., Jeung, H. J. and Kwak, S. H. 2012. Effect of manassantin B, a lignin isolated from Saururus chinensis on lipopolysaccharide-induced interleukin-1β in RAW 264.7 cells. Kor. J. Anesthesiol. 62, 161-165.
Reuter, S., Gupta, S. C., Chaturvedi, M. M. and Aggarwal, B. B. 2010. Oxidative stress, inflammation, and cancer. Free Radic. Biol. Med. 49, 1603-1616.
Salagami, H., Kobayashi, M., Chien, C. H., Kanegae, H. and Kavase, M. 2007. Selective toxicityand type of cell death induced by various natural and synthetic compounds in oral squamous cell carcinoma. In Vivo 21, 311-320.
Shin, H. K., Kim, J., Lee, E. J. and Kim, S. H. 2010. Inhibitory effect of curcumin on motility of human oral squamous carcinoma YD-10B cells via suppression of ERK and NF-kB activations. Phototherapy Res. 24, 577-582.
Shouval, R. S. and Elazar, Z. 2007. ROS, mitochondria and the regulation of autophagy. Trends Cell Biol. 17, 422-427.
Wink, D. A., Hines, H. B., Cheng, R. Y. S., Swizer, C. H., Santana, W. F., Vitek, M. P., Ridnour, L. A. and Colton, C. A. 2011. Nitric oxide and redox mechanism in the immune response. Free Radic. Biol. Med. 89, 873-891.
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