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문제 정의
- 특히 기존에 항산화 활성 및 항암 활성이 잘 알려진 quercetin, genistein, resveratrol, epigallocatechin gallate (EGCG) 등의 polyphenol을 중심으로 한 adipogenesis 억제연구가 활발하게 이루어지고 있다. 기존의 연구에 따르면 상엽은 항당뇨 활성이 잘 알려진 1-deoxynojirimycin (1-DNJ) 이외에도 polyphenol인 quercetin-3-β-D-glucose, quercetin-3-O-glucose-6-acetate, quercetin, 그리고 rutin이 다량 존재하는 것으로 보고되었으며13), 이 성분들이 상엽의 항비만 활성에 기여할 수 있다는 가설로 본 연구에서는 상엽의 항비만 활성을 평가하고 그 분자생물학적 기전을 탐색하고자 하였다.
- 알았다. 따라서 MLE에 의해 3T3-L1 adipogenesis 에 특이적으로 발현되는 전사인자의 mRNA 수준을 분석하고 Wnt/βcatenin 저해제인 IWR-1이 어떠한 영향을 미치는지 알아보고자 하였다. 지방세포분화 day –2에서 day 7까지 MLE를 처리하였을 때 peroxisome proliferator-activated receptor γ(PPARγ) 및 fatty acid synthase (FAS)의 mRNA 발현이 현저하게 감소한 것을 관찰하였다.
- 또한 이러한 결과들을 바탕으로 상엽 추출물의 항비만 기능성 식품소재로의 활용방안에 대해 고찰하였다.
- 본 연구는 MLE 물 추출물이 비만의 예방 및 치료에 효과적으로 사용될 수 있음을 제시하며, MLE의 항비만 활성에 대한 분자생물학적 기전을 일부 밝혀냈다. 추후 동물실험 및 임상실험이 뒷받침된다면 MLE는 과체중 및 비만 환자에게 효과적인 처방 소재로 활용될 수 있을 것이라 생각한다.
- 본 연구에서 MLE를 처리하였을 때 PPARγ 및 FAS의 유전자 발현 수준이 현저하게 감소하는 것을 관찰하였다. 선행연구에 의하면 adipogenesis에서 초기 과정은 C/EBPβ와 C/EBPσ의 발현이 증가되며 이들에 의해 이후에 C/EBPα와 PPARγ의 발현 또한 증가됨으로서 진행되는 것으로 보고되었다16).
- 본 연구에서는 상엽 추출물의 세포독성을 MTT 분석법에 의해 확인한 후 3T3-L1 전 지방세포에서 지방세포의 분화 기간 동안 상엽 추출물에 의한 세포 내 지방축적 억제활성을 평가하였으며, 항비만 활성의 분자생물학적 기전을 탐색하고자 하였다. 또한 이러한 결과들을 바탕으로 상엽 추출물의 항비만 기능성 식품소재로의 활용방안에 대해 고찰하였다.
제안 방법
- inhibitor assay를 실시하였다. 3T3-L1 세포는 100과 200 ㎍/㎖의 MLE와 10 μM의 IWR-1에 day –2에서 day 7 까지 처리되었으며, day 7에 ORO 염색법을 실시하였다. Figure 3의 결과와 유사하게 100과 200 ㎍/㎖의 MLE를 처리하였을 때 3T3-L1 세포의 adipogenesis는 대조군 대비 각각 41.
- 3T3-L1 세포에서 MLE의 세포독성을 확인하고자 MTT assay를 실시하였다. 1, 10, 100, 200, 400, 800, 그리고 1, 000 ㎍/㎖의 MLE를 3T3-L1 전 지방세포에 24시간 동안 처리한 결과, MLE를 처리하지 않은 대조군 대비 97.
- 및 정량분석하였다. 3T3-L1 전 지방세포는 10, 100, 그리고 200 ㎍/㎖의 MLE에 -2일에서 7일까지 처리하였다. 지방세포분화는 위에 설명한 방법에 의하여 실시하였다.
- 이용하여 분석하였다. 3T3-L1 전지방세포에 1, 10, 100, 200, 400, 800, 그리고 1,000 ㎍/㎖의 MLE를 24 시간 동안 처리한 후 phosphate buffered saline (PBS, pH 7.4)에 5 mg/㎖의 농도로 용해시킨 MTT 용액을 1시간 동안 처리하였다. 처리 후 DMEM 배지를 제거하고 37℃에 미리 데워진 1 mv의 PBS로 3T3-L1 전 지방세포를 1회 씻어주었다.
- 400 ㎕의 dimethxylsulfoxide (DMSO)를 이용하여 3T3-L1 전지방세포내의 MTT formazan을 녹인 후, DMSO 에 용해된 MTT formazan을 96-well plate에 200 ㎕/well 씩 옮겨 microplate reader (VersaMax; Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA)를 이용하여 570 nm에서 흡광도를 측정하였다. MLE를 처리하지 않은 3T3-L1 세포를 대조군으로 하여 세포생존률 (cell viability, % of control)을 계산하였다.
- ORO 정량분석은 염색된 12-well plate에 200 ㎕의 isopropanol을 가하여 세포 내 ORO를 녹인 후 96–well plate 50 ㎕/well 씩 옮겨 microplate reader (VersaMax; Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA)을 이용하여 490 nm에서 흡광도를 측정하였다. MLE를 처리하지 않은 분화된 지방세포를 대조군으로 하여 lipid accumulation (% of control)을 계산하였다.
- MLE에 의해 억제된 adipogenesis의 기전을 분석하기 위하여 inhibitor assay를 실시하였다. 3T3-L1 세포는 100과 200 ㎍/㎖의 MLE와 10 μM의 IWR-1에 day –2에서 day 7 까지 처리되었으며, day 7에 ORO 염색법을 실시하였다.
- MLE의 항비만 활성을 평가하기 위해서, 지방세포로 분화시킨 3T3-L1 세포의 지방축적량을 ORO 염색법을 통해 정성 및 정량분석하였다. 3T3-L1 전 지방세포는 10, 100, 그리고 200 ㎍/㎖의 MLE에 -2일에서 7일까지 처리하였다.
- 증류수를 이용해 3회 씻어 주었다. ORO 정량분석은 염색된 12-well plate에 200 ㎕의 isopropanol을 가하여 세포 내 ORO를 녹인 후 96–well plate 50 ㎕/well 씩 옮겨 microplate reader (VersaMax; Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA)을 이용하여 490 nm에서 흡광도를 측정하였다. MLE를 처리하지 않은 분화된 지방세포를 대조군으로 하여 lipid accumulation (% of control)을 계산하였다.
- 3T3-L1 전 지방세포는 100 ㎍/㎖의 MLE 또는 MLE+IWR-1에 day –2에서 day 0까지 처리되었다. 그리고 day 7에 위의 방법과 동일하게 ORO 염색법을 실시하여 IWR-1이 MLE 처리에 의해 억제된 3T3-L1 지방세포분화에 영향을 미치는지에 대한 분석을 실시하였다.
- 13%의 세포생존률을 나타냈다. 본 실험에 사용된 1, 10, 100, 200, 400, 800, 그리고 1,000 ㎍/㎖의 MLE 처리는 3T3-L1 세포의 세포생존률에 유의적으로 영향을 미치지 않았다(Fig. 2). 따라서 이후 실험에서는 200 ㎍/㎖ 이하의 MLE 를 선택적으로 사용하였다.
- 본 연구는 예로부터 당뇨 치료제로 널리 이용된 상엽의 물 추출물(MLE)을 제조하고 이의 항비만 활성을 3T3-L1 지방세포 분화 모델에서 평가하였다. 또한 더 나아가 inhibitor assay와 RT-PCR 분석을 통해 MLE의 항비만 활성이 Wnt/ β-catenin 신호전달체계와 밀접하게 관련되어 있음을 제시하였다.
- 3T3-L1 전 지방세포가 confluent된 상태 (day -2)가 된 2일 후 (day 0) 분화유도 배지(Differentiation medium; DM)로 교체하였다. 분화유도 배지는 DMEM 배지에 10%(v/v) FBS와 100 unit/㎖ 의 penicillin-streptomycin을 포함시킨 후 500 μM의 IBMX, 5.2 μM의 DEX, 167 nM의 insulin을 추가하였으며 day 0에서 day 2까지 48시간 동안 사용하였다. 분화유도 후배지 (Post-differentiation medium; Post-DM)는 DMEM 배지에 10%(v/v) FBS와 100 unit/㎖의 penicillinstreptomycin을 포함시킨 후 167 nM의 insulin만 추가하여 2일에서 4일까지 사용하였다.
- 분화유도 후배지 (Post-differentiation medium; Post-DM)는 DMEM 배지에 10%(v/v) FBS와 100 unit/㎖의 penicillinstreptomycin을 포함시킨 후 167 nM의 insulin만 추가하여 2일에서 4일까지 사용하였다. 이후 DMEM 배지에 10%(v/v) FBS와 100 unit/㎖의 penicillin-streptomycin을 포함시킨후 4일에서 7일까지 사용하였으며 7일째 지방세포분화를 종료하였다.
- 지방세포분화는 위와 동일한 방법에 의하여 실시하였으며 day 7에 200 ㎕ 의 TRIzol®을 이용하여 RNA를 추출하였다. 추출된 total RNA에 100 ㎕의 chloroform을 넣고 15분 동안 상온에 정치한 뒤 14, 000rpm에서 15분간 원심분리하여 상층액을 분리하였다.
대상 데이터
- Trizol®은 Life Technologies, Inc.(Grand Island, NY, USA)에서 구입하여 사용하였다. AccuPower® Cycle Script RT PreMix와 각각의 primer들은 Bioneer (Daejeon, Korea)에서 구입하였으며, PCR PreMix (i-Taq)는 iNtRON (Seongnam, Korea)에서 구입하여 사용하였다.
- 3T3-L1 전 지방세포는 American Type Culture Collection (ATCC; Rockville, MD USA)에서 분양받아 사용하였다. 3T3-L1 전지방세포는 10%(v/v) BCS과 100 unit/㎖의 penicillin-streptomycin이 포함된 DMEM 배지를 사용하여 37℃, 5% CO2 환경에서 2일 주기로 배지를 교체해주면서 배양되었다.
- (Grand Island, NY, USA)에서 구입하여 사용하였다. AccuPower® Cycle Script RT PreMix와 각각의 primer들은 Bioneer (Daejeon, Korea)에서 구입하였으며, PCR PreMix (i-Taq)는 iNtRON (Seongnam, Korea)에서 구입하여 사용하였다.
- 사용하였다. Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM), penicillinstreptomycin, phosphate-buffered saline (PBS), bovine calf serum (BCS) 는 Welgene Inc. (Daegu, Korea)에서 구입하였다. Fetal bovine serum (FBS) 은 GE Healthcare Bio-Sciences Co.
- (Daegu, Korea)에서 구입하였다. Fetal bovine serum (FBS) 은 GE Healthcare Bio-Sciences Co. (Piscataway, NJ, USA)에서 구입하여사용하였다. Oil Red O (ORO), 3-isobutyl-1-methylxanthine (IBMX), dexamethasone, insulin, 3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide (MTT), 11-diphenyl-2-picryl-hydrazyl (DPPH), 그리고 chloroforme Sigma-Aldrich Co.
- Louis, MO, USA)에서 구입하여사용하였다. Formaldehyde는 Bio Basic Inc. (Markham, ON, Canada)에서 구입하였으며, dimethyl sulfoxide (DMSO), isopropanole Junsei (Tokyo, Japan)에서 구입하여 사용하였다. Trizol®은 Life Technologies, Inc.
- MLE의 항비만 기전 탐색을 위해 Wnt/β-catenin 특이적 저해제인 10 μM IWR-1을 사용하였다. 3T3-L1 전 지방세포는 100 ㎍/㎖의 MLE 또는 MLE+IWR-1에 day –2에서 day 0까지 처리되었다.
- (Piscataway, NJ, USA)에서 구입하여사용하였다. Oil Red O (ORO), 3-isobutyl-1-methylxanthine (IBMX), dexamethasone, insulin, 3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide (MTT), 11-diphenyl-2-picryl-hydrazyl (DPPH), 그리고 chloroforme Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA)에서 구입하여사용하였다. Formaldehyde는 Bio Basic Inc.
- 않았다. 따라서 세포독성이 나타나지 않은 MLE를 200 ㎍/㎖의 농도까지 본 실험에 이용하였다. 3T3-L1 세포에 MLE를 농도별로 처리한 결과, MLE는 농도 의존적이며 유의하게 3T3-L1의 adipogenesis를 억제하였다.
- 2). 따라서 이후 실험에서는 200 ㎍/㎖ 이하의 MLE 를 선택적으로 사용하였다.
- 본 실험에 사용된 상엽은 대한민국 부안에서 재배된 것으로 ㈜비아이지 (Daejeon, Korea)에서 제공받아 사용하였다. Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM), penicillinstreptomycin, phosphate-buffered saline (PBS), bovine calf serum (BCS) 는 Welgene Inc.
- 2 μM의 DEX, 167 nM의 insulin을 추가하였으며 day 0에서 day 2까지 48시간 동안 사용하였다. 분화유도 후배지 (Post-differentiation medium; Post-DM)는 DMEM 배지에 10%(v/v) FBS와 100 unit/㎖의 penicillinstreptomycin을 포함시킨 후 167 nM의 insulin만 추가하여 2일에서 4일까지 사용하였다. 이후 DMEM 배지에 10%(v/v) FBS와 100 unit/㎖의 penicillin-streptomycin을 포함시킨후 4일에서 7일까지 사용하였으며 7일째 지방세포분화를 종료하였다.
데이터처리
- (B) 3T3-L1 cells were then subjected to quantitative analysis of ORO stained intracellular lipid droplets. Significant differences were analyzed by one-way ANOVA followed by t-test (**<0.01, and ***<0.001). Pre: preadipocytes; Adi: Mature adipocytes at day 7.
- The mature adipocytes were stained with ORO at day 7. Significant differences were analyzed by one-way ANOVA followed by t-test (*<0.05, **<0.01, and ***<0.001 vs Adi, ##<0.01 vs IWR-1 treatment). Adi: Mature adipocytes at day 7.
- 05에서 평균값들에 대한 유의성을 검증하였다. 각 항목은 일원 배치 분산분석(one-way ANOVA)을 시행하였으며, Student t-test 방법에 의하여 각 구간의 유의성 차이를 검증하였다 (*<0.05, **<0.01, 그리고 ***<0.001).
- 모든 데이터는 평균±표준편차로 표현하였으며, 데이터의 통계처리는 Statistical Package for Social Science (SPSS, Chicago, USA)을 이용하여 분석하였다. 신뢰수준 p<.
- USA)을 이용하여 분석하였다. 신뢰수준 p<.05에서 평균값들에 대한 유의성을 검증하였다. 각 항목은 일원 배치 분산분석(one-way ANOVA)을 시행하였으며, Student t-test 방법에 의하여 각 구간의 유의성 차이를 검증하였다 (*<0.
이론/모형
- 3T3-L1 전 지방세포에 대한 MLE의 세포독성은 MTT assay를 이용하여 분석하였다. 3T3-L1 전지방세포에 1, 10, 100, 200, 400, 800, 그리고 1,000 ㎍/㎖의 MLE를 24 시간 동안 처리한 후 phosphate buffered saline (PBS, pH 7.
- MLE의 항비만 활성을 평가하기 위하여 3T3-L1 지방세포분화모델을 이용하였으며, 지방세포분화 유도가 끝난 후 ORO 염색법을 실시하였다. 본 실험에서 MLE는 3T3-L1 세포에 day –2에서 day 7까지 처리되었으며, day 7에 ORO 염색법을 실시한 결과 MLE를 처리하지 않고 분화유도만 시킨대조군은 다량의 지방이 축적된 것을 알 수 있었다.
성능/효과
- 실시하였다. 1, 10, 100, 200, 400, 800, 그리고 1, 000 ㎍/㎖의 MLE를 3T3-L1 전 지방세포에 24시간 동안 처리한 결과, MLE를 처리하지 않은 대조군 대비 97.81%, 99.55%, 95.86%, 98.86%, 99.76%, 100.69%, 그리고 98.13%의 세포생존률을 나타냈다. 본 실험에 사용된 1, 10, 100, 200, 400, 800, 그리고 1,000 ㎍/㎖의 MLE 처리는 3T3-L1 세포의 세포생존률에 유의적으로 영향을 미치지 않았다(Fig.
- 1. 3T3-L1 세포에서 MLE를 24시간 처리하였을 때 1, 000 ㎍/㎖의 농도까지 유의적인 세포독성이 관찰되지 않았다.
- 2. 세포독성이 나타나지 않은 농도 범위의 MLE를 3T3-L1 세포에 day -2에서 day 7까지 처리하고, MLE 처리는 유의적이며 농도 의존적으로 3T3-L1 지방세포분화를 억제하였다.
- 3. MLE 처리에 의해 감소되었던 3T3-L1 지방세포분화는 Wnt/β-catenin 특이적 저해제인 IWR-1 처리에 의해 증가되었으며, 이는 MLE의 항비만 활성이 Wnt/ β-catenin 신호전달을 통해 이뤄짐을 추측할 수 있다.
- 따라서 세포독성이 나타나지 않은 MLE를 200 ㎍/㎖의 농도까지 본 실험에 이용하였다. 3T3-L1 세포에 MLE를 농도별로 처리한 결과, MLE는 농도 의존적이며 유의하게 3T3-L1의 adipogenesis를 억제하였다. 또한 본 연구에서 Wnt/β-cateinin 특이적 저해제인 IWR-1 처리는 MLE 에 의해 저해된 3T3-L1 adipogenesis가 Wnt/β-catenin 신호전달을 통해 이뤄지고 있음을 밝혀냈다.
- 4. 지방분화를 개시하고 유도하는 대표적 전사인자인 PPARγ 및 FAS의 발현이 MLE에 의해 현저하게 감소한 반면, MLE와 IWR-1 병행 처리는 감소되었던 PPARγ의발현을 증가시켰다. 이는 MLE의 항비만 활성이 Wnt/ β-catein 신호전달체계를 통한 PPARγ의 조절을 통해 이뤄짐을 알 수 있다.
- 21%로 MLE에 의해 억제되었던 adipogenesis가 IWR-1 처리에 의해 항비만 활성이 감소하였다. 따라서, 본 결과는 MLE에 의한 adipogenesis 억제는 Wnt/β-catenin 신호전달체계를 통해 이뤄진다는 것을 알 수 있다.
- 분화 모델에서 평가하였다. 또한 더 나아가 inhibitor assay와 RT-PCR 분석을 통해 MLE의 항비만 활성이 Wnt/ β-catenin 신호전달체계와 밀접하게 관련되어 있음을 제시하였다. 동물실험 및 임상실험을 통해 MLE의 항비만 활성 및 그 기전에 추가적으로 확인되어야 하며, MLE가 adipogenesis 기간 중 어느 시기에 특이적으로 작용하는지에 대한 분석이추가적으로 요구된다.
- 3T3-L1 세포에 MLE를 농도별로 처리한 결과, MLE는 농도 의존적이며 유의하게 3T3-L1의 adipogenesis를 억제하였다. 또한 본 연구에서 Wnt/β-cateinin 특이적 저해제인 IWR-1 처리는 MLE 에 의해 저해된 3T3-L1 adipogenesis가 Wnt/β-catenin 신호전달을 통해 이뤄지고 있음을 밝혀냈다. Wnt 단백질은 세포의 성장 및 분화에 밀접하게 관련하고 있는 것으로 알려져 있다14).
- 염색법을 실시하였다. 본 실험에서 MLE는 3T3-L1 세포에 day –2에서 day 7까지 처리되었으며, day 7에 ORO 염색법을 실시한 결과 MLE를 처리하지 않고 분화유도만 시킨대조군은 다량의 지방이 축적된 것을 알 수 있었다. 반면 MLE 처리는 농도 의존적으로 3T3-L1 세포의 지방분화를 억제하였다 (Fig.
- 본 연구에서 Wnt/β-catenin 특이적 저해제인 IWR-1은 MLE에 의해 감소되었던 PPARγ의 발현수준은 증가시켰지만, FAS의 발현에는 영향을 미치지 않았다. 이전 연구에서 PPARγ는 비교적 adipogenesis 중기이전에 발현되지만, FAS는 adipogenesis 후기에 발현되는 것으로 알려져 있다16).
- 본 연구에서는 상엽 물 추출물 MLE를 3T3-L1에 24시간 동안 1-1,000 ㎍/㎖의 농도로 처리한 결과 유의한 세포독성은 관찰되지 않았다. 따라서 세포독성이 나타나지 않은 MLE를 200 ㎍/㎖의 농도까지 본 실험에 이용하였다.
- 3A). 세포염색 시약을O 염색시약을 isopropanol 로 용해하여 정량분석한 결과, 대조군과 비교하여 10, 100, 그리고 200 ㎍/㎖의 MLE 처리는 각각 60.42%, 38.24%, 그리고 5.97%로 지방세포분화를 농도 의존적이며 유의적으로 억제하였다 (Fig. 3B).
- 위의 결과로부터 MLE에 의해 억제되었던 3T3-L1 adipogenesis는 Wnt/β-catenin 신호전달을 통해 이뤄지고 있음을 알았다. 따라서 MLE에 의해 3T3-L1 adipogenesis 에 특이적으로 발현되는 전사인자의 mRNA 수준을 분석하고 Wnt/βcatenin 저해제인 IWR-1이 어떠한 영향을 미치는지 알아보고자 하였다.
- 또한 다양한 polyphenol 성분들이 adipogenesis를 억제할 수 있다는 가능성이 보고되었는데, 국화에 존재하는 luteolin, apigenin, 그리고 cumambrin 등의 생리활성 물질이 PPARγ의 조절을 통해 adipogenesis를 억제하는 것으로 보고 되었으며17), 엉겅퀴와 그의 주요 생리활성 성분인 apigenine 3T3-L1 세포의 PPARγ와 C/EBPα의 하향조절을 통해 항비만 활성을 나타내는 것으로 보고되었다18). 이상의 결과를 볼 때 MLE에 존재하는 quercetin-3-β -D-glucose, quercetin-3-O-glucose-6-acetate, quercetin, 그리고 rutin 등의 polyphenol 성분들이 MLE의 항비만 활성에 기여하였을 것으로 추측된다. 향후 MLE에 존재하는 생리활성 성분들을 체계적으로 분석하여 이들 중 어떠한 성분이 MLE의 항비만 활성에 기여하였는지 밝히는 연구가 추가적으로 요구된다.
- 따라서 MLE에 의해 3T3-L1 adipogenesis 에 특이적으로 발현되는 전사인자의 mRNA 수준을 분석하고 Wnt/βcatenin 저해제인 IWR-1이 어떠한 영향을 미치는지 알아보고자 하였다. 지방세포분화 day –2에서 day 7까지 MLE를 처리하였을 때 peroxisome proliferator-activated receptor γ(PPARγ) 및 fatty acid synthase (FAS)의 mRNA 발현이 현저하게 감소한 것을 관찰하였다. MLE에 현저하게 감소되었던 PPARγ의 mRNA 발현 수준은 IWR-1 처리에 의해 다시 증가되었다.
후속연구
- MLE에 현저하게 감소되었던 PPARγ의 mRNA 발현 수준은 IWR-1 처리에 의해 다시 증가되었다. 그러나 adipogenesis 후기에 발현되는 것으로 잘 알려진 FAS의 발현은 MLE 처리에 의해 감소하였지만 IWR-1 처리에 의해 유의적으로 증가하지는 않았으며, 이 부분에 대한 추가적인 연구가 요구된다.
- 향후 MLE에 존재하는 생리활성 성분들을 체계적으로 분석하여 이들 중 어떠한 성분이 MLE의 항비만 활성에 기여하였는지 밝히는 연구가 추가적으로 요구된다. 또한 향후 MLE 처리를 통해 지방세포에 특이적으로 발현되는 C/EBPα, adipocyte Protein 2 (aP2, fatty acid binding protein), 그리고 LPL의 발현 및 활성에 미치는 영향에 대한 분석이 요구된다.
- 동물실험 및 임상실험을 통해 MLE의 항비만 활성 및 그 기전에 추가적으로 확인되어야 하며, MLE가 adipogenesis 기간 중 어느 시기에 특이적으로 작용하는지에 대한 분석이추가적으로 요구된다. 본 연구는 기존에 당뇨 환자를 위한 처방에 이용되어온 상엽의 항비만 소재로서의 가능성에 대해 탐색하였으며, 추후 체계적인 과학적 근거가 뒷받침 된다면 MLE는 향후 비만 환자를 대상으로 한 처방 및 기능성 식품의 소재로 충분히 활용될 수 있을 것이라 생각한다.
- 이상의 연구 결과는 상엽 추출물이 세포 내 지방축적 억제를 통한 항비만 소재로서 활용될 수 있다는 가능성을 보여주었으며 향후 이를 활용한 처방, 의약품, 보조제 및 기능성 식품 개발에 기초자료로서 유용히 사용될 수 있을 것으로 사료된다.
- 분자생물학적 기전을 일부 밝혀냈다. 추후 동물실험 및 임상실험이 뒷받침된다면 MLE는 과체중 및 비만 환자에게 효과적인 처방 소재로 활용될 수 있을 것이라 생각한다.
- Adipogenesis 초기에 작용을 하는 항비만 소재들은 비만의 예방 측면에서 활용이 가능할 것으로 여겨지며, 후기에 작용하는 항비만 소재들은 비만의 치료적 측면에서 접근이 가능할 것으로 생각된다. 추후 연구에서는 MLE를 adipogenesis 분화시기별로 처리하여 MLE가 adipogenesis의 초기, 중기, 후기 중 특이적으로 어느 시기에 작용하는지 탐색하는 과정이 필요할 것으로 생각된다.
- 이상의 결과를 볼 때 MLE에 존재하는 quercetin-3-β -D-glucose, quercetin-3-O-glucose-6-acetate, quercetin, 그리고 rutin 등의 polyphenol 성분들이 MLE의 항비만 활성에 기여하였을 것으로 추측된다. 향후 MLE에 존재하는 생리활성 성분들을 체계적으로 분석하여 이들 중 어떠한 성분이 MLE의 항비만 활성에 기여하였는지 밝히는 연구가 추가적으로 요구된다. 또한 향후 MLE 처리를 통해 지방세포에 특이적으로 발현되는 C/EBPα, adipocyte Protein 2 (aP2, fatty acid binding protein), 그리고 LPL의 발현 및 활성에 미치는 영향에 대한 분석이 요구된다.
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