[국내논문]마우스 정모세포주에서 스티렌에 대한 삼백초 에탄올 추출물의 보호 효과 Protective Effect of Saururus chinensis Ethanol Extract against Styrene in Mouse Spermatocyte Cell Line원문보기
Background: This study was performed to evaluate the protective effect of Saururus chinensis ethanol extract (SCE) against styrene toxicity in mouse spermatocyte cells [GC-2spd (ts) cell line]. Methods and Results: Cytotoxicity in mouse spermatocyte cells was measured using 3-(4,5-dimethylthiazol-2-...
Background: This study was performed to evaluate the protective effect of Saururus chinensis ethanol extract (SCE) against styrene toxicity in mouse spermatocyte cells [GC-2spd (ts) cell line]. Methods and Results: Cytotoxicity in mouse spermatocyte cells was measured using 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay. Generation of reactive oxygen species (ROS) was determined using 2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCF-DA) assay. Semi-quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and western blotting were performed to quantify the mRNA and protein expression levels, resepectiviely, of stress or apoptosis-related genes including p21, p53, heat shock protein 70 (Hsp70), heat shock protein 90 (Hsp90), Bax, Bcl-2, and caspase-3. The results of the MTT assay showed that $50 {\mu}g/m{\ell}$ SCE did not affect cell viability. ROS generation in mouse spermatocyte cells increased by treatment with $100{\mu}M$ styrene, and decreased by co-treatment with SCE. SCE repressed the mRNA expression of stress-related genes, which increased by styrene treatment. In addition, SCE inhibited the apoptosis of mouse spermatocyte cells by ameliorating mRNA and protein levels of apoptotic genes that were altered by styrene treatment. Conclusions: These results suggest that SCE may alleviate styrene toxicity in mouse spermatocyte cells by reducing ROS stress and regulating genes related to styrene toxicity.
Background: This study was performed to evaluate the protective effect of Saururus chinensis ethanol extract (SCE) against styrene toxicity in mouse spermatocyte cells [GC-2spd (ts) cell line]. Methods and Results: Cytotoxicity in mouse spermatocyte cells was measured using 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay. Generation of reactive oxygen species (ROS) was determined using 2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCF-DA) assay. Semi-quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and western blotting were performed to quantify the mRNA and protein expression levels, resepectiviely, of stress or apoptosis-related genes including p21, p53, heat shock protein 70 (Hsp70), heat shock protein 90 (Hsp90), Bax, Bcl-2, and caspase-3. The results of the MTT assay showed that $50 {\mu}g/m{\ell}$ SCE did not affect cell viability. ROS generation in mouse spermatocyte cells increased by treatment with $100{\mu}M$ styrene, and decreased by co-treatment with SCE. SCE repressed the mRNA expression of stress-related genes, which increased by styrene treatment. In addition, SCE inhibited the apoptosis of mouse spermatocyte cells by ameliorating mRNA and protein levels of apoptotic genes that were altered by styrene treatment. Conclusions: These results suggest that SCE may alleviate styrene toxicity in mouse spermatocyte cells by reducing ROS stress and regulating genes related to styrene toxicity.
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문제 정의
또한 삼백초 에탄올 추출물이 p53 유전자 발현에는 영향을 주지 않았으므로 p53와 독립적인 경로로p21 유전자의 발현에 영향을 미치는 것으로 생각할 수 있다.그와 함께 대표적인 스트레스 관련 유전자인 Hsp70, Hsp90유전자의 발현 변화도 확인해보았다. 열충격 단백질 (heatshock protein, HSP)은 온도가 갑자기 상승했을 때 세포에서 합성되어지는 단백질로 생각되었으나, 고온 이외에도 여러 가지 다양한 자극, 스트레스에 의해 발현이 증가하여 세포사멸의 여러 기작에 광범위하게 관여하여 억제하는 것으로 알려져 있다 (Wang et al.
, 2007; Lindbohm, 1993; Teramotoand Horiguchi, 1981), 이런 독성을 개선해줄 수 있는 물질에 대한 연구는 많이 미흡한 실정이다. 따라서 본 연구는 마우스의 수컷 정모세포주를 가지고, 스티렌이 생식세포에 미치는 영향과 그에 대한 삼백초의 생식세포 보호 효과를 밝히고자 시행하였다.
본 연구에서는 GC-2spd (ts) 세포에서 스티렌에 의한 활성산소종 (ROS) 증가에 삼백초 에탄올 추출물이 미치는 영향을 확인하기 위해 DCF-DA assay를 실시하였다. 그 결과, 스티렌100 µM를 처리한 처리구에서는 대조구 대비 약 2배 이상 증가한 DCF formation을 보였지만, 스티렌 100 µM와 삼백초 에탄올 추출물을 농도별로 처리하였을 때는 농도 의존적으로ROS가 감소하는 것을 확인할 수 있었다.
이에 따라 본 연구에서는 단백질 수준에서 세포사멸 관련단백질 (Bax, Bcl-2, caspase-3)의 증감을 확인하고자 westernblotting을 진행하였다. 그 결과, GC-2spd (ts) 세포에 스티렌100 µM 처리 시, Bax의 발현은 증진되고 Bcl-2의 발현은 억제되어 Bax/Bcl-2 비율이 증가하고, 삼백초 에탄올 추출물을 처리하면 농도 의존적으로 Bax의 발현은 억제되고 Bcl-2의 발현은 증진되어 Bax/Bcl-2 비율이 감소하는 것을 확인하였다(Fig.
지금까지 스티렌이 사람 및 실험동물의 생식기관에 미치는 영향에 대한 연구들은 있었지만 (Han et al., 2007; Lindbohm,1993; Teramoto and Horiguchi, 1981), 이런 독성을 개선해줄 수 있는 물질에 대한 연구는 전무한 실정이므로 본 연구에서는 스티렌이 마우스 수컷 정모세포에 미치는 영향과 그에 대한 삼백초의 정모세포 보호 효과를 확인하였다. 마우스 정모세포에서 스티렌은 ROS를 증가시켜 산화 스트레스를 유발하며, 세포노화 또는 세포사멸 기작을 활성화시킨다는 결과를 관련 유전자들의 mRNA, 단백질 발현 변화를 통해 확인하였다.
제안 방법
유전자 증폭을 위한 primersequences를 Table 1에 나타내었다. 1% agarose gel에서 전기영동하고, ethidium bromide (Et-Br) 로 염색한 뒤 UV 상에서 관찰하여 분석하였다.
3. 세포 생존율 측정마우스 정모세포주 GC-2spd (ts)에서 시료에 의한 세포생존율 변화를 측정하기 위하여 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) 분석법을 이용하였고, 실험방법은 Mosmann (1983)과 Han 등 (2016)의 방법을 변형하여 사용하였다. 96-well plate에 37℃, 5% CO2 조건에서 배양한 세포를 5 × 103 cells/well의 농도로 분주하였다.
GC-2spd (ts) 세포에서 스티렌과 삼백초 에탄올 추출물의 처리농도를 결정하기 위해 MTT assay를 수행하였다. MTTassay는 MTT 물질이 살아있는 세포의 미토콘드리아에 존재하는 succinate dehydrogenase와 반응하여 나타나는 색의 변화로서 미토콘드리아의 활성을 통해 세포 생존율을 측정할 수 있는 방법이다 (Elingold et al.
, 1998). 따라서 스티렌으로 유도된 GC-2spd (ts) 세포에서 삼백초 에탄올 추출물에 의한 Bcl-2과 Bax 유전자 발현 양상 변화를 확인 하였다.그 결과, 삼백초 에탄올 추출물은 스티렌에 의해 늘어난 Bax유전자 발현을 농도 의존적으로 억제하였으며 스티렌에 의해 줄어든 Bcl-2 유전자 발현은 농도 의존적으로 촉진시켰다(Fig.
또한 주로 p21 유전자는 p53에 의해서 발현이 유도되지만, p53과는 독립적인 활성경로도 보고되고 있다. 따라서 스티렌이 처리된 GC-2spd (ts) 세포에서 삼백초 에탄올 추출물에 의한 p21과 p53 유전자 발현 양상 변화를 확인하였다. 그 결과,p53 유전자의 발현 양상은 삼백초 에탄올 추출물의 농도증가에 따라 큰 차이를 보이지 않았다 (Fig.
마우스 정모세포 유전자들의 발현 정도를 조사하기 위해 스티렌 (100 µM), 삼백초 에탄올 추출물 (10, 25, 50 ㎍/㎖)을30분 동안 처리하여 배양한 세포로부터 Trizol reagent를 처리하여 total RNA를 추출하고 역전사 kit (Mbi Fermentas,Hanover, MD, USA)를 이용하여 cDNA를 제조한 다음, 동량의 cDNA를 PCR로 증폭시켰다.
, 2007; Lindbohm,1993; Teramoto and Horiguchi, 1981), 이런 독성을 개선해줄 수 있는 물질에 대한 연구는 전무한 실정이므로 본 연구에서는 스티렌이 마우스 수컷 정모세포에 미치는 영향과 그에 대한 삼백초의 정모세포 보호 효과를 확인하였다. 마우스 정모세포에서 스티렌은 ROS를 증가시켜 산화 스트레스를 유발하며, 세포노화 또는 세포사멸 기작을 활성화시킨다는 결과를 관련 유전자들의 mRNA, 단백질 발현 변화를 통해 확인하였다. 이와 같은 실험결과는 다른 내분비 장애물질인 비스페놀A에 의한 이전 연구내용과 일치하였다 (Kim et al.
마우스 정모세포주 GC-2spd (ts)의 세포내 산화적 손상 보호 효과를 측정하기 위하여 2’,7’-dichlorohydrofluoresceindiacetate (DCF-DA, Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO,USA) assay를 하였다.
세포를 배양기에서 24시간 동안 안정화시킨 후 스티렌 (100 µM)과삼백초 에탄올 추출물 (10, 25, 50, 100 ㎍/㎖)을 처리하였고, 추출물 용매 처리구 (vehicle)에는 DMSO를 0.05%로 처리하였다.
세포사멸 관련 인자들의 유전자 발현 변화도 확인하였다. 세포사멸 유도는 Bax (세포사멸유도인자)와 Bcl-2 (세포사멸억제인자)의 비율 (Bax/Bcl-2) 증가로 인해 이들 사이의 균형이 깨어지게 되어 세포사멸이 유발되는 것으로 알려져 있다(Donovan and Cotter, 2004; Rossé et al.
스티렌 (100 µM), 삼백초 에탄올 추출물 (10, 25, 50 ㎍/㎖)을 24시간 동안 처리하여 배양한 세포를 RIPA cell lysisbuffer을 이용하여 용해시키고, 13,000 rpm으로 4℃에서 20분간 원심 분리하여 단백질만 포함하고 있는 상층액을 얻었다.
스티렌 (100 µM), 삼백초 에탄올 추출물 (10, 25,50 ㎍/㎖), vitamin C (100 µM) 및 추출물 용매 (vehicle,DMSO 0.025%)를 각각 전처리하고 24시간 배양 후 serumfree media에 20 µM DCF-DA와 0.25 mM probenecid를 혼합하여 5% CO2, 37℃ incubator에서 40분간 처리하고, KrebsHenseleit buffer (KHB)로 교체하여 incubator에서 1시간 동안 반응시킨 뒤 microplate reader (BIO-TEK, Winooski, VT, USA)를 이용하여 형광도 (exitation 485 ㎚ / emission 535 ㎚)를 측정하였다.
스티렌에 의해 유발되는 세포 독성에 삼백초 에탄올 추출물이 미치는 영향을 확인하기 위해, 스트레스 또는 세포사멸 관련 유전자들의 발현을 semi-quantitative RT-PCR (reversetranscription polymerase chain reaction)로 확인하였다. Semiquantitative RT-PCR은 RNA로 역전사 효소를 이용하여cDNA를 만들고, 만들어진 cDNA를 중합효소연쇄반응으로 증폭하여 유전자 발현을 확인할 수 있는 방법이다.
정량한 단백질 20 ㎍을 10% SDS-PAGE에 전기 영동시킨 후polyvinylidene difluoride (PVDF) membrane으로 옮겨 Bax,Bcl-2, caspase-3, β-actin에 대한 1차 항체와 반응시킨 후 2차 항체인 horseradish peroxidase-conjugated anti-rabbit 또는anti-mouse IgG를 반응시키고 enhanced chemiluminescence(ECL) detection reagents (West-Zol Plus, iNtRON, Seoul,Korea)를 사용하여 단백질의 발현정도를 확인하였다.
GC-2spd (ts) 세포에 스티렌100 µM과 함께 삼백초 에탄올 추출물을 농도별로 처리한 결과, 10, 25, 50 ㎍/㎖까지는 스티렌만을 처리한 대조군과 세포생존율에 큰 차이를 보이지 않았다. 하지만 100 ㎍/㎖의 삼백초 에탄올 추출물을 처리했을 때 대조군에 비해 약 30%의 세포사멸율을 나타내어 50 ㎍/㎖을 삼백초 에탄올 추출물의 최대 처리농도로 설정하였다.
대상 데이터
) Baill]시료는 한국생약협회에서 구입하였다. 구입한 시료는 1 ㎤ 크기로 절단하고 70% ethanol에 담가 80℃ 조건에서 3번 환류추출 후 농축하고 동결 건조하여 분말화하고, DMSO/PBS을50/50로 혼합한 용액에 100 ㎎/㎖ 농도로 용해하여 실험에 사용하였다.
본 연구에 사용한 마우스 정모세포주 (spermatocyte cellline) GC-2spd (ts)는 American Type Culture Collection(ATCC, Rockvile, MD, USA)에서 구입하였다. 세포주는10% fetal bovine serum (FBS, HyClone Laboratories Inc.
실험에 사용된 삼백초 [Saururus chinensis (Lour.) Baill]시료는 한국생약협회에서 구입하였다. 구입한 시료는 1 ㎤ 크기로 절단하고 70% ethanol에 담가 80℃ 조건에서 3번 환류추출 후 농축하고 동결 건조하여 분말화하고, DMSO/PBS을50/50로 혼합한 용액에 100 ㎎/㎖ 농도로 용해하여 실험에 사용하였다.
데이터처리
모든 실험은 3번 이상 반복 측정하여 평균 ± 표준편차(means ± SD)로 표기하였으며, 처리간 유의성은 StatisticalPackage for Social Science 통계 패키지 프로그램 (18.0,SPSS Inc., Chicago, IL, USA)으로 Student’s t-test로 검정하여 p-value 값이 0.05 미만일 때 통계적으로 유의하다고 판정하였다.
이론/모형
Western blotting을 이용하여 마우스 정모세포의 세포사멸 관련 단백질 (Bax, Bcl-2, caspase-3)의 발현 정도를 확인하였다. 스티렌 (100 µM), 삼백초 에탄올 추출물 (10, 25, 50 ㎍/㎖)을 24시간 동안 처리하여 배양한 세포를 RIPA cell lysisbuffer을 이용하여 용해시키고, 13,000 rpm으로 4℃에서 20분간 원심 분리하여 단백질만 포함하고 있는 상층액을 얻었다.
성능/효과
GC-2spd (ts) 세포에 스티렌100 µM과 함께 삼백초 에탄올 추출물을 농도별로 처리한 결과, 10, 25, 50 ㎍/㎖까지는 스티렌만을 처리한 대조군과 세포생존율에 큰 차이를 보이지 않았다.
Hsp90 유전자는 스티렌 처리군 대비 삼백초 10 ㎍/㎖ 농도부터 농도 의존적으로 유의한 감소를 보였으며, 마찬가지로Hsp70 유전자도 10 ㎍/㎖ 농도부터 감소했지만 50 ㎍/㎖에서 유의적인 차이를 보였다 (Fig. 3C, 3D). 이와 같은 결과는GC-2spd (ts) 세포에서 삼백초 에탄올 추출물이 스티렌으로 유도된 스트레스를 줄여주는데 효과가 있음을 의미한다고 할 수 있다.
특히 스티렌에 의해 증가된 Bax/Bcl-2 비율과 caspase-3를 삼백초 에탄올 추출물이 감소시켜 세포사멸을 억제하였다. 결과적으로 삼백초 에탄올 추출물은 스티렌에 의한 세포 독성을 억제하여 마우스 정모세포를 보호하는 효과를 보였다. 좀 더 심도 있는 연구를 위해서는 스티렌에 대해 정모세포 보호 활성을 가지는 삼백초 유래 물질을 탐색하고, 그물질의 세포사멸 억제 기작 작용점을 찾는 연구와 함께 invivo 연구도 중요하다고 하겠다.
그 결과, GC-2spd (ts) 세포에 스티렌100 µM 처리 시, Bax의 발현은 증진되고 Bcl-2의 발현은 억제되어 Bax/Bcl-2 비율이 증가하고, 삼백초 에탄올 추출물을 처리하면 농도 의존적으로 Bax의 발현은 억제되고 Bcl-2의 발현은 증진되어 Bax/Bcl-2 비율이 감소하는 것을 확인하였다(Fig. 4A).
따라서 스티렌으로 유도된 GC-2spd (ts) 세포에서 삼백초 에탄올 추출물에 의한 Bcl-2과 Bax 유전자 발현 양상 변화를 확인 하였다.그 결과, 삼백초 에탄올 추출물은 스티렌에 의해 늘어난 Bax유전자 발현을 농도 의존적으로 억제하였으며 스티렌에 의해 줄어든 Bcl-2 유전자 발현은 농도 의존적으로 촉진시켰다(Fig. 3E, 3F). 스티렌에 의한 Bcl-2 유전자 발현 변화가 Bax만큼 크지 않은 것으로 보아 스티렌이 초기에는 Bcl-2 유전자보다는 Bax 유전자에 크게 영향을 미치는 것을 알 수 있었다.
그 결과, 스티렌100 µM를 처리한 처리구에서는 대조구 대비 약 2배 이상 증가한 DCF formation을 보였지만, 스티렌 100 µM와 삼백초 에탄올 추출물을 농도별로 처리하였을 때는 농도 의존적으로ROS가 감소하는 것을 확인할 수 있었다.
따라서 스티렌이 처리된 GC-2spd (ts) 세포에서 삼백초 에탄올 추출물에 의한 p21과 p53 유전자 발현 양상 변화를 확인하였다. 그 결과,p53 유전자의 발현 양상은 삼백초 에탄올 추출물의 농도증가에 따라 큰 차이를 보이지 않았다 (Fig. 3B). 하지만 p21 유전자의 발현은 삼백초 에탄올 추출물의 농도증가에 따라 유의한 감소를 보였다 (Fig.
, 2015). 그리고 삼백초 에탄올 추출물은 스티렌에 의해 증가된 ROS를 농도 의존적으로 감소시켰으며, 스티렌에 의한 유전자들의 발현 변화를 저해하였다. 특히 스티렌에 의해 증가된 Bax/Bcl-2 비율과 caspase-3를 삼백초 에탄올 추출물이 감소시켜 세포사멸을 억제하였다.
이러한 결과는 스티렌과 삼백초 에탄올 추출물이 Bcl-2유전자보다는 Bax 유전자에 주로 영향을 미치기 때문이라고 판단할 수 있다. 또한 스티렌 처리에 의해 caspase-3가 증가하지만, 삼백초 에탄올 추출물을 농도별로 처리하면 25 ㎍/㎖ 이상에서 농도 의존적으로 caspase-3가 감소하는 것을 확인하였다. 특히 50 ㎍/㎖ 농도 이상에서 caspase-3가 현저히 감소하였다 (Fig.
3E, 3F). 스티렌에 의한 Bcl-2 유전자 발현 변화가 Bax만큼 크지 않은 것으로 보아 스티렌이 초기에는 Bcl-2 유전자보다는 Bax 유전자에 크게 영향을 미치는 것을 알 수 있었다.이러한 결과는 스티렌에 의해 유도된 세포사멸이 삼백초 에탄올 추출물에 의해 억제됨을 의미한다고 할 수 있다.
스티렌이 처리된 GC-2spd (ts) 세포에서 삼백초 에탄올추출물에 의한 Hsp70과 Hsp90 유전자 발현 양상 변화를 확인해 본 결과, Hsp70, Hsp90 유전자 모두 스티렌 100 µM처리시 대조군에 비해 발현이 급격히 증가하였으며 이에 삼백초 에탄올 추출물을 농도별 (10, 25, 50 ㎍/㎖)로 처리하자 점차적으로 발현이 감소했다.
실험결과를 종합해보면 GC-2spd (ts) 세포에서 스티렌100 µM 처리시 Bax 발현의 증진과 Bcl-2 발현의 감소로Bax/Bcl-2 비율이 증가되고, 그로 인해 caspase-3가 증가하여 세포사멸이 유도되며, 삼백초 에탄올 추출물은 스티렌에 의한Bax와 Bcl-2의 발현 변화를 저해하여 Bax/Bcl-2 비율을 감소시키고, 그로 인해 caspase-3가 감소되어 세포사멸을 억제하는 것으로 판단된다.
Semiquantitative RT-PCR은 RNA로 역전사 효소를 이용하여cDNA를 만들고, 만들어진 cDNA를 중합효소연쇄반응으로 증폭하여 유전자 발현을 확인할 수 있는 방법이다. 앞선 실험에서 스티렌은 GC-2spd (ts) 세포 내 ROS를 증가시키고, 그 증가폭을 삼백초 에탄올 추출물이 농도 의존적으로 감소시킨다는 것을 확인하였다.
예비실험을 통해 GC2spd (ts) 세포에서 스티렌은 100 µM까지 세포생존율에 영향을 미치지 않음을 확인하였다.
그 결과, 스티렌100 µM를 처리한 처리구에서는 대조구 대비 약 2배 이상 증가한 DCF formation을 보였지만, 스티렌 100 µM와 삼백초 에탄올 추출물을 농도별로 처리하였을 때는 농도 의존적으로ROS가 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 특히, 스티렌과 천연항산화 물질인 vitamin C를 동시에 처리한 처리구에서는 약30% 정도의 ROS 감소 효과를 보였는데, 삼백초 에탄올 추출물 50 ㎍/㎖ 처리구에서는 vitamin C 처리구보다 높은 ROS감소 결과를 나타내었다. 이에 따라 삼백초 에탄올 추출물은 우수한 ROS 생성 억제 효과를 가지는 것으로 보여진다 (Fig.
후속연구
결과적으로 삼백초 에탄올 추출물은 스티렌에 의한 세포 독성을 억제하여 마우스 정모세포를 보호하는 효과를 보였다. 좀 더 심도 있는 연구를 위해서는 스티렌에 대해 정모세포 보호 활성을 가지는 삼백초 유래 물질을 탐색하고, 그물질의 세포사멸 억제 기작 작용점을 찾는 연구와 함께 invivo 연구도 중요하다고 하겠다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
내분비 장애물질은 인체에 어떤 영향을 미치는가?
일명 환경호르몬이라고 불리는 내분비 장애물질 (endocrinedisrupting chemicals, EDCs)은 화학구조가 생체호르몬과 유사하여 내분비계를 가진 모든 생물에서 호르몬의 합성, 분비, 체내수송, 결합, 작용 또는 분해에 개입하여 생식기능의 이상, 성비균형의 파괴, 호르몬 분비의 불균형, 면역기능 저해, 신경계마비, 간독성, 폐 기능 저하, 유방암 및 전립선암 증가 등의 다양한 질환을 초래하는 것으로 알려져 있다 (Degen and Bolt,2000; Guillette et al., 1995; Kim et al.
스티렌은 주로 어떤 곳에 사용되는가?
, 2005). 그 중 스티렌 (styrene)은 투명한 용기로 주로 사용되며, 폴리스티렌에 거품을 넣은 스티로폼은 컵라면 용기를 비롯한 보온용기나 충격흡수용으로 광범위하게 사용되고 있다. 새집증후군의 주된 원인의 하나로 지목되고 있기도 한 스티렌은 합성수지, 합성고무, 섬유 강화 플라스틱 제조 등 너무나 다양한 용도로 사용되고 있기 때문에 지속적인 노출 감시와 방지 등 다양한 예방대책과 더불어 스티렌의 사용을 줄이고 노출에 대항하여 인체를 보호해 줄 방어물질 탐색 연구가 필요한 실정이다.
마우스 정모세포주에서 스티렌 처리에 의해 증가된 세포사멸 관련단백질 caspase-3는 삼백초 에탄올 추출물 처리 농도에 따라 어떻게 달라지는가?
이러한 결과는 스티렌과 삼백초 에탄올 추출물이 Bcl-2유전자보다는 Bax 유전자에 주로 영향을 미치기 때문이라고 판단할 수 있다. 또한 스티렌 처리에 의해 caspase-3가 증가하지만, 삼백초 에탄올 추출물을 농도별로 처리하면 25 ㎍/㎖ 이상에서 농도 의존적으로 caspase-3가 감소하는 것을 확인하였다. 특히 50 ㎍/㎖ 농도 이상에서 caspase-3가 현저히 감소하였다 (Fig. 4B).
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