Objectives : Inflammation is one of the self-protective abilities against tissue injury, and it has clinical symptoms like redness, heat, swelling, pain, and loss of function. The purpose of this study is to examine inhibitory effects of Naetakchunkeum-san (NTCKS) on nitric oxide (NO), Prostaglandin...
Objectives : Inflammation is one of the self-protective abilities against tissue injury, and it has clinical symptoms like redness, heat, swelling, pain, and loss of function. The purpose of this study is to examine inhibitory effects of Naetakchunkeum-san (NTCKS) on nitric oxide (NO), Prostaglandin E2 (PGE2), inducible NOS (iNOS), cyclooxygenase-2 (COX-2), and phosphorylation of extracellular signal-regulated kinase 1/2 (ERK1/2), which play a major role in inflammatory response. Methods : The experiment was performed using Raw 264.7 cells pretreated with NTCKS extracts. Cell viability was determined by MTT assay. To evaluate anti-inflammatory effects of NTCKS, we examined NO and $PGE_2$ production in LPS-induced macrophages. We also investigated effects of NTCKS on iNOS, Cox-2, and ERK1/2 expression using western blot. Results : In MTT assay, no cytotoxicity of NTCKS (50, 100, 150, $200{\mu}g/ml$) on RAW 264.7 cell was found. LPS-induced NO production was decreased after treatment with NTCKS (150, $200{\mu}g/ml$)(p<0.05). $PGE_2$ was decreased after treatment with NTCKS (150, $200{\mu}g/ml$)(p<0.05). NTCKS inhibited LPS-induced expressions of iNOS and COX-2 in a dose-dependent manner. Increased phosphorylation of ERK1/2 by LPS was decreased by NTCKS in a dose-dependent manner. Conclusions : According to above experiments, NTCKS may be applied to inflammatory diseases such as atopic dermatitis, rheumatoid arthritis, and inflammatory bowel disease.
Objectives : Inflammation is one of the self-protective abilities against tissue injury, and it has clinical symptoms like redness, heat, swelling, pain, and loss of function. The purpose of this study is to examine inhibitory effects of Naetakchunkeum-san (NTCKS) on nitric oxide (NO), Prostaglandin E2 (PGE2), inducible NOS (iNOS), cyclooxygenase-2 (COX-2), and phosphorylation of extracellular signal-regulated kinase 1/2 (ERK1/2), which play a major role in inflammatory response. Methods : The experiment was performed using Raw 264.7 cells pretreated with NTCKS extracts. Cell viability was determined by MTT assay. To evaluate anti-inflammatory effects of NTCKS, we examined NO and $PGE_2$ production in LPS-induced macrophages. We also investigated effects of NTCKS on iNOS, Cox-2, and ERK1/2 expression using western blot. Results : In MTT assay, no cytotoxicity of NTCKS (50, 100, 150, $200{\mu}g/ml$) on RAW 264.7 cell was found. LPS-induced NO production was decreased after treatment with NTCKS (150, $200{\mu}g/ml$)(p<0.05). $PGE_2$ was decreased after treatment with NTCKS (150, $200{\mu}g/ml$)(p<0.05). NTCKS inhibited LPS-induced expressions of iNOS and COX-2 in a dose-dependent manner. Increased phosphorylation of ERK1/2 by LPS was decreased by NTCKS in a dose-dependent manner. Conclusions : According to above experiments, NTCKS may be applied to inflammatory diseases such as atopic dermatitis, rheumatoid arthritis, and inflammatory bowel disease.
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문제 정의
등에 대한 연구가 진행되었다. 이에 본 연구에서는 內托千金散의 염증반응에 있어 주요한 역할을 하는 NO, PGE2, iNOS, COX-2, ERK1/2 인산화에 대한 억제 효과를 살펴보았다.
이에 저자는 內托千金散이 RAW 264.7 대식세포 주에서 세포독성, NO 생성, PGE2 생성, iNOS 및 COX-2 발현, ERK1/2 인산화 억제에 미치는 영향에 대하여 유의한 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
가설 설정
1. 內托千金散 추출물은 400㎍/㎖을 제외한 모든 농도에서 세포독성이 없었다.
제안 방법
內托千金散 열수 추출액이 마우스 대식세포의 NO 생성에 미치는 영향을 관찰하였다. 內托千金散 처리하지 않은 대조군에서는 NO 생성율이 85.
內托千金散이 ERK1/2 인산화 억제에 미치는 영향을 관찰하였다. LPS 처리에 의하여 증가된 ERK1/2의 발현은 內托千金散 처리한 실험군에서 농도 의존적으로 인산화가 억제되었다(Fig.
內托千金散이 RAW 264.7 대식세포주에서 세포독성, NO 생성, PGE2 생성, iNOS, COX-2 발현, 및 ERK1/2 인산화 억제에 미치는 영향에 대하여 다음과 같은 결과를 얻었다.
內托千金散이 iNOS 및 COX-2 발현에 미치는 영향을 관찰하였다. LPS 처리에 의하여 증가된 iNOS 및 COX-2의 발현은 內托千金散 처리한 실험군에서 농도 의존적으로 발현이 감소하였다(Fig.
內托千金散이 마우스 대식세포의 PGE2 생성에 미치는 영향을 관찰하였다. 內托千金散을 처치하지 않은 대조군의 PGE2 생성은 821.
대상 데이터
본 실험에 사용한 內托千金散은 東醫寶鑑에 근거하여 구성 약물을 ㈜HMAX에서 구입하여 사용하였다(Table 1).
실험에 사용된 mouse 대식세포는 RAW 264.7 cell line (ATCC, USA)을 분양받아 사용하였다. RAW 264.
데이터처리
실험결과는 SPSS Window program (Ver. 12.0) 을 이용하였으며, 모든 측정값은 mean ± SD로 나타내었고, 대조군과 각 실험군과의 평균차이는 Student's t-test로 분석하여 p-value가 0.05 미만일 때 통계학적으로 유의한 차이가 있는 것으로 판정하였다.
이론/모형
內托千金散 열수 추출액의 농도가 세포 내에서 독성을 일으키는지 확인하기 위해 MTT assay를 이용하여 측정하였다. 內托千金散 열수 추출액의 대조군 생존율을 100 ± 8.
內托千金散 열수 추출액의 농도가 세포 내에서 독성을 일으키는지 확인하기 위해 MTT assay를 이용하여 측정하였다. 內托千金散 열수 추출액의 대조군 생존율을 100 ± 8.
용해한 시료는 동결, 해동 과정을 3회 반복하고 1800 rpm으로 20분간 원심분리하여 상층액만 사용하였다. 단백질 농도는 Bradford assay법을 이용하여 정량하였다. 각 시료는 SDS sample buffer를 첨가하여 5분간 열처리하였다.
세포독성 유발 효과를 알아보기 위하여 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay 방법을 사용하여 측정하였다. 96 well plate에 1 x 105 cells/well의 cell을 100㎕ 씩 넣고 37℃, 5% CO2가 공급되는 배양기에서 24시간 동안 배양한 후 배지를 버리고 배양세포 표면을 1x PBS 용액으로 씻어주었다.
성능/효과
2. 內托千金散 추출물은 150 및 200㎍/㎖ 농도에서 NO 생성을 통계적으로 유의하게 감소시켰다.
체내에서 소량 생성되는 NO는 혈관 확장, 신경전달, 병원체에 대한 세포파괴 등과 같은 정상적인 생리기능을 담당하지만, 대식세포에서 iNOS에 의해 과다 생성된 NO는 염증반응과 관련되어 있으며1), 과다 생성된 NO의 파생물인 peroxynitrite와 nitrogen dioxide 또한 염증반응에 주요한 역할을 한다21). 內托千金散 열수 추출액이 마우스 대식세포의 NO 생성에 미치는 영향을 관찰하기 위하여 LPS만 처리한 대조군과 內托千金散을 농도별로 처리한 실험군을 비교한 결과, 內托千金散 150 및 200㎍/ ㎖ 농도로 처리한 실험군에서 대조군에 비해 NO 생성이 통계적으로 유의하게 감소하였다(Table 3).
이상으로 본 연구에서는 內托千金散이 RAW 264.7 대식세포주에서 LPS 처리에서 생성된 NO, PGE2, iNOS 및 COX-2에 대한 억제효과와 ERK1/2의 인산화 억제효과가 있다는 결과를 얻을 수 있었다.
후속연구
이 매개체들은 서로 발생의 선후가 있기는 하지만, 그 매개체들을 각각 논의하기는 어렵다29). 이런 측면에서 염증반응의 주요한 매개체들에 대해 억제 효과를 보인 內托千金散은 향후 아토피 피부염, 류마티스 관절염, 염증성 장질환30) 등의 각종 염증성 질환에 있어 효과적인 치료 처방으로 활용될 수 있을 것으로 사료된다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
內托千金散 열수 추출액의 농도가 세포내에서 독성을 일으키는지 확인하기 위해 MTT assay를 이용하여 측정하였을 때 그 결과는?
內托千金散 열수 추출액의 농도가 세포내에서 독성을 일으키는지 확인하기 위해 MTT assay를 이용하여 측정하였다. 內托千金散 열수 추출액은 400㎍/㎖ 을 제외한 모든 농도에서 90％ 이상의 세포생존율을 확인할 수 있었다(Table 2).
염증이란?
염증(Inflammation)은 상처를 줄 수 있는 자극에 대한 생체의 방어반응으로, 임상적으로는 발적, 발열, 종창, 동통, 기능장애의 5가지 증상이 나타난다1). 대식세포는 nitric oxide (NO)와 prostaglandins (PGs)을 생산하며2), 이로 인해 숙주방어기전에 중요한 역할을 하는 동시에3) 염증반응과 밀접한 상관관계를 가진다.
염증의 증상 5가지는 무엇인가?
염증(Inflammation)은 상처를 줄 수 있는 자극에 대한 생체의 방어반응으로, 임상적으로는 발적, 발열, 종창, 동통, 기능장애의 5가지 증상이 나타난다1). 대식세포는 nitric oxide (NO)와 prostaglandins (PGs)을 생산하며2), 이로 인해 숙주방어기전에 중요한 역할을 하는 동시에3) 염증반응과 밀접한 상관관계를 가진다.
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