[논문]제초제 내성 유전자 변형 옥수수 중 PAT단백질에 특이한 단크론성 항체의 생산과 특성 확인

김솔아; 이정은; 심원보; 강성조; 정덕화

doi:10.13103/jfhs.2018.33.3.193

제초제 내성 유전자 변형 옥수수 중 PAT단백질에 특이한 단크론성 항체의 생산과 특성 확인
Production and Characterization of Monoclonal Antibodies Specific to PAT Protein Expressed in Genetically Modified Herbicide-Resistance Maize 원문보기

한국식품위생안전성학회지 = Journal of food hygiene and safety, v.33 no.3, 2018년, pp.193 - 199

김솔아 (경상대학교 응용생명과학부) , 이정은 (경상대학교 응용생명과학부) , 심원보 (경상대학교 농화학식품공학과) , 강성조 ((주)매디랩) , 정덕화 (경상대학교 농화학식품공학과)

초록
AI-Helper

본 연구에서는 유전자 변형 옥수수(GM 옥수수)에 특이한 단크론성 항체를 개발하고 이에 대한 특성을 확인하는 연구를 수행하고자 하였다. 먼저 형질전환 대장균으로부터 PAT 단백질을 발현시킬 수 있는 시스템을 확립하였고, 재조합 PAT 단백질을 대량 생산하여 항원으로 사용하였다. 준비된 항원을 면역한 결과 재조합 PAT 단백질의 항원성은 매우 높은 것으로 확인되었으며, 세포융합과 클로닝을 통해 12 종의 hybridoma를 확립하였고 western blot 결과 10 종의 hybridoma가 재조합 PAT 단백질과 강한 반응성을 나타내었다. 10종의 hybridoma가 생산하는 항체가 실제 GM 옥수수에 반응하는지를 추가의 western blot으로 분석한 결과 2종의 단크론성 항체(PATmAb-7 and PATmAb-12)가 재조합 PAT 단백질뿐만 아니라 실제 GM 옥수수 중 PAT와 반응하는 것으로 확인되었다. 항체를 대량 생산하고 정제한 후 2종의 항체는 SDS-PAGE 상에서 대표적인 항체의 분리패턴(heavy와 light chain)을 나타내었고, 전형적인 $IgG_1$과 ${\kappa}$ type으로 확인되었다. 정제된 단크론성 항체는 특성을 조사한 결과 다른 GMO에서 발현될 수 있는 재조합 단백질과 non-GM 옥수수 추출물에는 반응성이 없고 PAT 단백질에만 특이적으로 반응하는 것을 확인할 수 있었다. PATmAb-7 를 이용한 간접효소면역분석법의 검출한계는 0.3 ng/mL 수준으로 기준의 유전자변형 콩 면역분석법과 비교했을 때 높은 민감도를 나타내었다. 이상의 결과로 볼 때 개발된 2종의 항체(PATmAb-7 and PATmAb-12)는 GM 옥수수에서 발현되는 PAT 단백질에 특이적으로 반응하는 항체로 확인되었고, 2종의 항체를 이용한 면역분석법과 바이오센서의 개발 가능성을 제시할 수 있었다.

Abstract ▼ AI-Helper

In this study, PAT protein of genetically modified maize was prepared from the recombinant E. coli strain BL21 (DE3), and mice were immunized with the recombinant PAT protein. After cell fusion and cloning, two hybridoma cells (PATmAb-7 and PATmAb-12) were chosen since the monoclonal antibodies (Mabs) produced by them were confirmed to be specific to PAT protein in the indirect enzyme-linked immunsorbent assay (ELISA) and western blot tests. There were no cross-reactions of either Mabs to other GM proteins or to the extracts of non-GM maize. The ELISA based on the PATmAb-7 can sensitively detect 0.3 ng/g PAT protein in corn. These results indicate that the developed Mabs can be used as bio-receptors in the development of immunosensors and biosensors for the rapid and simple detection of GM corn adulterated in foods.

주제어

AI 본문요약
AI-Helper

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문제 정의

따라서 본 연구에서는 제초제 저항성 GM 옥수수에서 발현되는 PAT 단백질을 형질전환 된 대장균으로부터 대량 생산하고, 생산된 PAT 단백질을 항원으로 사용하여 단 크론성 항체 개발과 그 특성을 확인하고자 하였다.
본 연구에서는 유전자 변형 옥수수(GM 옥수수)에 특이한 단크론성 항체를 개발하고 이에 대한특성을 확인하는 연구를 수행하고자 하였다.

제안 방법

GM 옥수수 중 PAT 단백질에 대한 단크론성 항체를 개발하기 위해 형질 전환된 E. coli strain BL21 (DE3)을 앞서 설명한 바와 같이 배양 IPTG를 첨가하여 단백질의 발현을 유도하였다. 발현이 유도된 단백질은 Ni-NTA resin을 이용하여 정제를 실시하였고, 정제도를 SDS-PAGE로 확인하였다.
GM 옥수수에 대한 항체를 확보하기 위해 PATmAb-7 and PATmAb-12 hybridoma cell을 대량으로 증식시킨 후 마우스에 주사하고 복수액을 생산한 후 ammonium sulfate법과 protein G column을 이용하여 정제를 수행하였고, 그 정제도를 SDS-PAGE로 확인하였다. Fig.
이후 blocking 처리된 막은 TBST를 이용하여 3회 세척한 후 hybridoma cell 배양액을 이용하여 37^oC에서 1시간 반응시키고 TBST로 4차례 세척 후 희석률 1:6000의 2차 항체인 goat anti-mouse alkaline phosphate conjugate (Bio-Rad)로 37^oC에서 1시간 반응시켰다. TBST로 5차례 세척 후, AP conjugate substrate kit (Bio-Rad)를 이용하여 발색시켜 PVDF membrane 상에서 확인하였다. 간접효소면역분석법은 정제된 단백질 및 옥수수 추출액을 96-well microplate (Nunc, Roskildeenmark)에 분주하고 1시간 동안 37^oC에서 코팅시킨 후 0.
각각의 tube로부터 일부 채취하여 SDSPAGE를 수행하여 원하는 단백질이 순수하게 분리되었는지 확인하였고 정제된 단백질은 정량을 한 후 냉동(−20oC)보관하면서 항원과 코팅항원으로 사용하였다.
개발된 항체의 교차반응성을 확인하기 위해 정제된 발현 PAT 단백질과 GM 옥수수에서 추출한 단백질(PAT), 유전자 재조합 농작물에서 주로 발현되는 CP4-EPSPS, MEPSPS, 2MEPSPS, PMI, mCry3A, Cry3Bb1, Cry34Ab1, Cry35Ab1 및 Cry2Ab2 단백질 등을 이용하여 western blot법과 간접효소면역분석법으로 확인하였다. 먼저, western blot은 Towbin 등²⁴⁾의 방법에 준하여 실시하였다.
PAT단백질에 대한 항체 및 면역분석법의 개발은 Xu 등²⁵⁾이 GM 유채에서 발현되는 PAT단백질을 검출하기 위한 면역분석법의 개발이 유일한 것으로 조사되었다. 그 연구에서는 다클론성 항체(polyclonal antibody)를 생산하여 효소면역분석법을 개발하였고 민감도는 20 ng/mL였다. 본 연구에서 개발된 효소면역분석법의 감도는 0.
본 연구에서는 유전자 변형 옥수수(GM 옥수수)에 특이한 단크론성 항체를 개발하고 이에 대한특성을 확인하는 연구를 수행하고자 하였다. 먼저 형질전환 대장균으로부터 PAT 단백질을 발현시킬 수 있는 시스템을 확립하였고, 재조합 PAT 단백질을 대량 생산하여 항원으로 사용하였다. 준비된 항원을 면역한 결과 재조합 PAT 단백질의 항원성은 매우 높은 것으로 확인되었으며, 세포융합과 클로닝을 통해 12 종의 hybridoma를 확립하였고 western blot 결과 10 종의 hybridoma가 재조합 PAT 단백질과 강한 반응성을 나타내었다.
coli strain BL21 (DE3)을 앞서 설명한 바와 같이 배양 IPTG를 첨가하여 단백질의 발현을 유도하였다. 발현이 유도된 단백질은 Ni-NTA resin을 이용하여 정제를 실시하였고, 정제도를 SDS-PAGE로 확인하였다. 그 결과 Fig.
분획한 시료는 즉시 1 M Tris-HCl (pH 8.0)로 중화시키고 280 nm에서 흡광도를 확인한 후 PBS로 투석을 실시하였으며, 동결 건조시킨 후 −20oC에 보관하면서 실험에 사용하였다.
선정된 10종의 hybridoma의 배양상등액을 이용하여 western blot 상에서의 재조합 PAT 단백질과 실제 GM 옥수수 시료에 대한 반응성을 확인하였다. 그 결과 Fig.
선택된 hybridoma cell은 대량 배양한 후 mouse 복강에 200 μL를 주입하여 복수액을 생산하였으며, 1주일 후 생산된 복수액을 채취하여 ammonium sulfate 침전법23)으로 정제한 후, PBS를 이용하여 3일 동안 투석하였다.
0) 등을 사용하였으며, UV-spectrometer[Shimadzu (Japan)], 역위상차현미경 (Olympus, Japan)과 CO₂ 배양기(Forma Scientific, USA)를 사용하였다. 시료분석과 유전자증폭을 위해 원심분리기 (Hanil, Korea), ELISA reader (Bio-Rad, USA), PCR 기기 (Bio-Rad, USA)를 사용하였다.
식품의약품안전처로부터 제공받은 GM 옥수수 3종 DP004114-3, MON89034 XMON88017, Bt11XMIR604XTC1507X5307XGA21으로부터 PAT유전자를 추출하고 PCR과 cloning을 거쳐 PAT 유전자가 삽입된 pET-15b벡터를 전이시킨 형질전환 대장균을 확보하여 PAT 단백질의 생산과 정제를 수행하였다. 형질 전환된 E.
2에서와 같이 PAT단백질로 면역한 대부분의 마우스에서 106 배 이상의 희석배수에서도 항체 역가가 나타나 본 연구에서 확보한 재조합 PAT 단백질이 항원성이 높은 것으로 확인되었다. 역가가 높은 마우스를 마지막 4차 면역 후 비장세포(spleen cell)를 분리하여 골수종 세포(myeloma cell)와 세포융합 및 클로닝을 거쳐 단일클론 hybridoma 세포주를 개발하였다. 총 12종의 단일클론 세포주를 확보하였고 western blot으로 확인한 결과, Fig.
정제된 PAT단백질을 이용하여 BALB/C mouse에 2주 간격으로 3차 면역을 실시한 후 마우스 꼬리 정맥에서 채혈하고 간접효소면역분석법으로 항혈청 역가를 측정하여 재조합 PAT 단백질의 항원성을 확인하였다. 그 결과 Fig.
준비된 항원을 complete freund's adjuvant와 1:1(v/v)로 유화시켜 생후 6주된 암컷 BALB/C mouse에 마리당 200μL씩 복강에 주입하여 1차 면역을 실시하였고, 1차 면역 후 2주 간격으로 동일한 면역원을 incomplete freund's adjuvant와 동량 혼합하여 추가 면역을 2회 실시하였으며, 세포 융합 4일 전에 2배의 면역원만을 복강 내 주사하여 최종 면역 시켰다.

대상 데이터

GM 옥수수 유전자 확보를 위해 옥수수 3종(DP-004114-3, MON89034 XMON88017, Bt11XMIR604XTC1507X53-07XGA21)를 식품의약품안전처로부터 분양 받았다. GM 옥수수에 대한 항원 준비를 위해 E.
GM 옥수수에 대한 항원 준비를 위해 E. coli strain BL21 (DE3), DNeasy Plant Mini Kit (Qiagen, USA), pET-15b (Novagen, USA), LB broth (Difco, USA), IPTG (Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside), Ni-NTA resin (Qiagen, USA)을 구입하여 사용하였다.
coli strain BL21 (DE3), DNeasy Plant Mini Kit (Qiagen, USA), pET-15b (Novagen, USA), LB broth (Difco, USA), IPTG (Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside), Ni-NTA resin (Qiagen, USA)을 구입하여 사용하였다. PAT단백질에 대한 단크론성 항체를 개발하기 위해 BALB/c mouse를 효창사이언스(Hyochang Science Inc., Korea)로부터 구입하여 사용하였고, SDSPAGE과 western blot는 Laemmli^19-20)등의 방법에 준하여 실시하였으며 그 외 필요한 시약 및 재료는 구입하여 사용하였다. 기타 사용된 시약은 50 mM carbonate buffer (pH 9.
역가가 높은 마우스를 마지막 4차 면역 후 비장세포(spleen cell)를 분리하여 골수종 세포(myeloma cell)와 세포융합 및 클로닝을 거쳐 단일클론 hybridoma 세포주를 개발하였다. 총 12종의 단일클론 세포주를 확보하였고 western blot으로 확인한 결과, Fig. 3에서 patMab 2와 5번 hybridoma가 생산하는 항체는 PAT 단백질에 반응성이 약한 것으로 판단되어 제외하고 최종 10종의 hybridoma 세포주를 이후의 실험에 사용하였다.

이론/모형

3차 면역 일주일 후 mouse의 꼬리 정맥에서 1 μL의 혈액을 채취하여 간접 효소면역분석법 (indirect enzyme-linked immunosorbent assay; iELISA)으로 항체의 역가를 측정하였다.
3차 면역 일주일 후 mouse의 꼬리 정맥에서 1 μL의 혈액을 채취하여 간접 효소면역분석법 (indirect enzyme-linked immunosorbent assay; iELISA)으로 항체의 역가를 측정하였다. 그 중 가장 높은 역가를 갖는 mouse로부터 spleen cell을 분리한 후 한국생명공학연구원으로부터 분양 받은 myeloma cell (SP₂)을 사용하여 Kohler and Milstein21)의 방법으로 세포융합을 실시하였고, Mckearn 등²²⁾의 무한대 희석법으로 cloning을 실시하여 단일클론의 hybridoma cell을 획득하였다.
개발된 항체의 교차반응성을 확인하기 위해 정제된 발현 PAT 단백질과 GM 옥수수에서 추출한 단백질(PAT), 유전자 재조합 농작물에서 주로 발현되는 CP4-EPSPS, MEPSPS, 2MEPSPS, PMI, mCry3A, Cry3Bb1, Cry34Ab1, Cry35Ab1 및 Cry2Ab2 단백질 등을 이용하여 western blot법과 간접효소면역분석법으로 확인하였다. 먼저, western blot은 Towbin 등²⁴⁾의 방법에 준하여 실시하였다. SDS-PAGE 후 단백질은 PVDF membrane (Millipore, USA)에 transfer buffer (25 mM tris, 192 mM glycine and 5% methanol)와 전사장치(Bio-Rad)를 이용하여 전사시킨 후 PVDF membrane은 TBST (0.
5~1 mM 되도록 첨가하여 다시 37^oC에서 4시간 추가 배양하여 단백질의 발현을 유도하였다. 배양이 끝난 후 3,500 rpm 에서 15분간 원심분리하여 균체를 회수하였고, 단백질을 분리 정제하기 위하여 native condition법으로 실시하였다. 즉, 균체를 binding buffer (10 mM imidazole, 500 mM NaCl, 10 mM Tris-Cl) 5 mL에 resuspending한 뒤 이를 ice상에서 sonication 한 후 원심분리 하여 상등액을 회수하였다.

성능/효과

준비된 항원을 면역한 결과 재조합 PAT 단백질의 항원성은 매우 높은 것으로 확인되었으며, 세포융합과 클로닝을 통해 12 종의 hybridoma를 확립하였고 western blot 결과 10 종의 hybridoma가 재조합 PAT 단백질과 강한 반응성을 나타내었다. 10종의 hybridoma가 생산하는 항체가 실제 GM 옥수수에 반응하는지를 추가의 western blot으로 분석한 결과 2종의 단크론성 항체(PATmAb-7 and PATmAb12)가 재조합 PAT 단백질뿐만 아니라 실제 GM 옥수수 중 PAT와 반응하는 것으로 확인되었다. 항체를 대량 생산하고 정제한 후 2종의 항체는 SDS-PAGE 상에서 대표적인 항체의 분리패턴(heavy와 light chain)을 나타내었고, 전형적인 IgG₁과 κ type으로 확인되었다.
GM 옥수수에 대한 항체를 확보하기 위해 PATmAb-7 and PATmAb-12 hybridoma cell을 대량으로 증식시킨 후 마우스에 주사하고 복수액을 생산한 후 ammonium sulfate법과 protein G column을 이용하여 정제를 수행하였고, 그 정제도를 SDS-PAGE로 확인하였다. Fig. 5에서 보는 바와 같이 PATmAb-7과 PATmAb-12 두 항체 모두 대표적인 항체패턴인 heavy chain과 light chain을 나타내었고 면역글로불린(immunoglobulin)임을 확인할 수 있었다. 정제된 항체 2종에 대해 isotype을 확인한 결과 2종 모두 heavy chain과 light chain이 각각 IgG₁과 κ type으로 확인되었다(data 미제시).
정제된 단크론성 항체는 특성을 조사한 결과 다른 GMO에서 발현될 수 있는 재조합 단백질과 non-GM 옥수수 추출물에는 반응성이 없고 PAT 단백질에만 특이적으로 반응하는 것을 확인할 수 있었다. PATmAb-7 를 이용한 간접효소면역분석법의 검출한계는 0.3 ng/mL 수준으로 기준의 유전자변형 콩 면역분석법과 비교했을 때 높은 민감도를 나타내었다. 이상의 결과로 볼 때 개발된 2종의 항체(PATmAb-7 and PATmAb12)는 GM 옥수수에서 발현되는 PAT 단백질에 특이적으로 반응하는 항체로 확인되었고, 2종의 항체를 이용한 면역분석법과 바이오센서의 개발 가능성을 제시할 수 있었다.
정제된 PAT단백질을 이용하여 BALB/C mouse에 2주 간격으로 3차 면역을 실시한 후 마우스 꼬리 정맥에서 채혈하고 간접효소면역분석법으로 항혈청 역가를 측정하여 재조합 PAT 단백질의 항원성을 확인하였다. 그 결과 Fig. 2에서와 같이 PAT단백질로 면역한 대부분의 마우스에서 106 배 이상의 희석배수에서도 항체 역가가 나타나 본 연구에서 확보한 재조합 PAT 단백질이 항원성이 높은 것으로 확인되었다. 역가가 높은 마우스를 마지막 4차 면역 후 비장세포(spleen cell)를 분리하여 골수종 세포(myeloma cell)와 세포융합 및 클로닝을 거쳐 단일클론 hybridoma 세포주를 개발하였다.
선정된 10종의 hybridoma의 배양상등액을 이용하여 western blot 상에서의 재조합 PAT 단백질과 실제 GM 옥수수 시료에 대한 반응성을 확인하였다. 그 결과 Fig. 4에서와 같이 PAT는 PATmAb7과 mAb12 2종의 항체만 GM 옥수수 추출물과 반응하는 것을 확인할 수 있었다. 나머지 8종의 항체는 재조합 PAT 단백질에 반응성이 높고 GM 옥수수 추출물에는 반응성이 약한 것으로 확인되었다(data 미제시).
반면에 단크론성 항체는 확보한 hybridoma를 이용하여 일정한 수준의 특성을 가지는 항체를 꾸준히 생산할 수 있다. 따라서 최근의 면역센서 또는 바이오센서 개발 분야에서는 다클론성 항체에 비해 본 연구에서 개발된 단크론성 항체가 더 적합한 것으로 판단된다.
그 연구에서는 다클론성 항체(polyclonal antibody)를 생산하여 효소면역분석법을 개발하였고 민감도는 20 ng/mL였다. 본 연구에서 개발된 효소면역분석법의 감도는 0.3 ng/mL로 Xu 등²⁵⁾이 보고한 효소면역분석법보다 매우 높은 감도를 가지는 것으로 확인되었다. 추가로 다클론성항체의 경우 민감도 및 특이성이 실험에 사용된 동물에 따른 차이가 크고, 1회성 생산이라는 단점이 있다.
6과 같이 PAT 단백질에만 특이적으로 각각 반응하였고, 일반 콩 및 옥수수 추출물들 및 다른 GMO 작물에 도입된 특이 단백질과 non-GM 옥수수의 추출물에는 교차반응을 보이지 않았다. 이상의 결과로 볼 때 개발된 2종의 항체(PATmAb-7 and PATmAb-12)는 GM 옥수수에서 발현되는 PAT 단백질에 특이적으로 반응하는 항체로 확인되었고, 2종의 항체를 이용한 면역분석법과 바이오센서의 개발 가능성을 제시할 수 있었다.
6과 같이 PAT 단백질에만 특이적으로 각각 반응하였고, 일반 콩 및 옥수수 추출물들 및 다른 GMO 작물에 도입된 특이 단백질과 non-GM 옥수수의 추출물에는 교차반응을 보이지 않았다. 이상의 결과로 볼 때 개발된 2종의 항체(PATmAb-7 and PATmAb-12)는 GM 옥수수에서 발현되는 PAT 단백질에 특이적으로 반응하는 항체로 확인되었고, 2종의 항체를 이용한 면역분석법과 바이오센서의 개발 가능성을 제시할 수 있었다.
정제된 PATmAb-7 and PATmAb-12 항체에 대해 다른 GMO 작물에 도입된 특이 단백질인 MEPSPS, 2MEPSPS, PMI, mCry3A, Cry3Bb1, Cry34Ab1, Cry35Ab1 및 Cry2Ab2와 non-GM 옥수수의 추출물에 대한 교차반응성을 확인한 결과 Fig. 6과 같이 PAT 단백질에만 특이적으로 각각 반응하였고, 일반 콩 및 옥수수 추출물들 및 다른 GMO 작물에 도입된 특이 단백질과 non-GM 옥수수의 추출물에는 교차반응을 보이지 않았다. 이상의 결과로 볼 때 개발된 2종의 항체(PATmAb-7 and PATmAb-12)는 GM 옥수수에서 발현되는 PAT 단백질에 특이적으로 반응하는 항체로 확인되었고, 2종의 항체를 이용한 면역분석법과 바이오센서의 개발 가능성을 제시할 수 있었다.
항체를 대량 생산하고 정제한 후 2종의 항체는 SDS-PAGE 상에서 대표적인 항체의 분리패턴(heavy와 light chain)을 나타내었고, 전형적인 IgG₁과 κ type으로 확인되었다. 정제된 단크론성 항체는 특성을 조사한 결과 다른 GMO에서 발현될 수 있는 재조합 단백질과 non-GM 옥수수 추출물에는 반응성이 없고 PAT 단백질에만 특이적으로 반응하는 것을 확인할 수 있었다. PATmAb-7 를 이용한 간접효소면역분석법의 검출한계는 0.
정제된 항체 2종에 대해 isotype을 확인한 결과 2종 모두 heavy chain과 light chain이 각각 IgG1과 κ type으로 확인되었다(data 미제시).
먼저 형질전환 대장균으로부터 PAT 단백질을 발현시킬 수 있는 시스템을 확립하였고, 재조합 PAT 단백질을 대량 생산하여 항원으로 사용하였다. 준비된 항원을 면역한 결과 재조합 PAT 단백질의 항원성은 매우 높은 것으로 확인되었으며, 세포융합과 클로닝을 통해 12 종의 hybridoma를 확립하였고 western blot 결과 10 종의 hybridoma가 재조합 PAT 단백질과 강한 반응성을 나타내었다. 10종의 hybridoma가 생산하는 항체가 실제 GM 옥수수에 반응하는지를 추가의 western blot으로 분석한 결과 2종의 단크론성 항체(PATmAb-7 and PATmAb12)가 재조합 PAT 단백질뿐만 아니라 실제 GM 옥수수 중 PAT와 반응하는 것으로 확인되었다.
항체를 대량 생산하고 정제한 후 2종의 항체는 SDS-PAGE 상에서 대표적인 항체의 분리패턴(heavy와 light chain)을 나타내었고, 전형적인 IgG1과 κ type으로 확인되었다.

후속연구

PAT 단백질에 대한 항체는 중국의 Xu 등²⁵⁾이 보고한 것이 이외에는 외국에서도 보고되고 있지 않으며 국내에서도 유전자 변형 콩에 대한 면역분석법 개발에 관한 연구는 보고되고 있으나, GM 옥수수에 대한 연구는 보고되고 있지 않은 것으로 확인되었다. 그러므로 개발된 PAT 항체는 GM 옥수수를 신속하게 검출할 수 있는 면역분석법 및 바이오센서의 개발에 바이오리셉터로서 활용가능성이 높을 것으로 예상된다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	GMO란 무엇인가?	‘유전자변형생물체’ 또는 ‘유전자변형식품’이라고 불리는 genetically modified organism (GMO)은 생물체의 유전자 중 유용한 유전자를 취하여 그 유전자를 갖고 있지 않은 생물체에 삽입하여 유용한 성질을 나타나게 한 것이다. 이와 같은 유전자재조합기술을 활용하여 재배·육성된 농산물·축산물·수산물·미생물 및 이를 원료로 하여 제조·가공한 식품(건강기능식품을 포함) 중 정부가 안전성을 평가하여 입증된 경우에만 식품으로 사용할 수 있으며, 이를 유전자변형식품이라 한다1,2).
	GMO작물에 대한 PCR 분석방법은 어느 면에서 단점이 있는가?	GMO를 검출하기 위해 주로 사용되는 방법으로는 유전학적 방법과 면역화학적 방법이 이용되고 있는데 주로 GMO 작물 검사에 사용되는 방법으로는 유전학적 방법인 PCR이 국제 표준분석법으로 추천되고 있으며, 상업화된 여러 GMO 작물에 대하여 PCR을 이용한 분석방법이 정립되어 분석법으로 활용되고 있다. 그러나 PCR은 범용성, 비용 및 분석시간 면에서 단점을 가지고 있어 중소규모의 생산현장에서 손쉽게 적용 가능한 현장 검사법의 보급이 필요하다12-14). 국외의 경우 PCR법의 단점을 해결하기 위해 다양한 면역분석법을 개발해 오고 있으며, Envirologix사, Romerlabs사, Neogen사 등은 단백질 분석용 ELISA kit나 lateral flow test kit등을 제조하여 판매하고 있다.
	유전자 변형 옥수수에 반응하는 단크론성 항체 2종(PATmAb-7 and PATmAb12)의 다른 작물에서 반응 특성은?	항체를 대량 생산하고 정제한 후 2종의 항체는 SDS-PAGE 상에서 대표적인 항체의 분리패턴(heavy와 light chain)을 나타내었고, 전형적인 IgG1과 κ type으로 확인되었다. 정제된 단크론성 항체는 특성을 조사한 결과 다른 GMO에서 발현될 수 있는 재조합 단백질과 non-GM 옥수수 추출물에는 반응성이 없고 PAT 단백질에만 특이적으로 반응하는 것을 확인할 수 있었다. PATmAb-7 를 이용한 간접효소면역분석법의 검출한계는 0.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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